弗氏鏈霉菌發(fā)酵生產(chǎn)泰樂菌素的培養(yǎng)基及發(fā)酵方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種弗氏鏈霉菌發(fā)酵生產(chǎn)泰樂菌素的培養(yǎng)基和發(fā)酵方法，其搖瓶種子培養(yǎng)基、一級(jí)種子培養(yǎng)基、二級(jí)種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基中均含有啤酒酵母干渣和蚯蚓粉。本發(fā)明通過優(yōu)化其培養(yǎng)基配方，從而解決了原輔料的成本問題，并且最大限度的降低原輔料來源不受環(huán)境影響，保證其供應(yīng)充足，實(shí)現(xiàn)泰樂菌素穩(wěn)定、高效的生產(chǎn)。同時(shí)利用該培養(yǎng)基可提高發(fā)酵單位、縮短發(fā)酵周期、減少一級(jí)種子接種量、提高泰樂菌素A組分。
【專利說明】弗氏鏈霉菌發(fā)酵生產(chǎn)泰樂菌素的培養(yǎng)基及發(fā)酵方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于發(fā)酵【技術(shù)領(lǐng)域】，特別是涉及一種弗氏鏈霉菌發(fā)酵生產(chǎn)泰樂菌素的培養(yǎng)基及發(fā)酵方法。
【背景技術(shù)】
[0002]泰樂菌素是由放線菌屬弗氏鏈霉菌經(jīng)發(fā)酵提取而得到的一種大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，主要作為動(dòng)物專用抗生素。
[0003]目前，國(guó)內(nèi)生產(chǎn)泰樂菌素的方法主要是三級(jí)發(fā)酵模式，采用弗氏鏈霉菌作為菌種，傳統(tǒng)培養(yǎng)基中氮源主要有2種模式:一種是以魚粉、玉米漿、花生餅粉和酵母粉組成的動(dòng)物性氮源，一種是以花生餅粉、棉籽餅粉、玉米漿和酵母粉組成的植物性氮源。上述培養(yǎng)基存在的主要問題是:
[0004]I泰樂菌素種子、發(fā)酵培養(yǎng)基中有機(jī)氮源的組成成分有4種，增加了企業(yè)的采購成本。
[0005]2 一級(jí)種子接種量較多。常規(guī)的一級(jí)種子培養(yǎng)的接種量為5~10L/m3，增加了菌種研究人員的工作強(qiáng)度。
[0006]3泰樂菌素的種子培養(yǎng)和發(fā)酵周期較長(zhǎng)，兩次種子培養(yǎng)的周期超過了 60h，發(fā)酵周期超過了 160h。
[0007]4動(dòng)物性氮源魚粉的質(zhì)量影響發(fā)酵液質(zhì)量和發(fā)酵效果。目前，國(guó)內(nèi)生產(chǎn)的魚粉都是混合魚粉，魚粉中含有動(dòng)物骨粉、羽毛粉等，影響了發(fā)酵液的質(zhì)量和發(fā)酵效果。另外，購買純魚粉的價(jià)格較高，而且容易受到休漁期的影響，增加采購成本和生產(chǎn)成本。
[0008]5泰樂菌素發(fā)酵單位低，關(guān)鍵組分泰樂菌素A含量低。
[0009]6泰樂菌素的生產(chǎn)成本較高，其中氮源的成本占到發(fā)酵成本的20%左右。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0010]本發(fā)明目的就在于克服上述現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種有效提高發(fā)酵單位，縮短發(fā)酵周期，同時(shí)最大限度的降低原輔料用量，降低生產(chǎn)成本，且原輔料來源不受環(huán)境影響，保證其供應(yīng)充足，實(shí)現(xiàn)泰樂菌素穩(wěn)定、高效地生產(chǎn)的弗氏鏈霉菌發(fā)酵生產(chǎn)泰樂菌素的培養(yǎng)基。
[0011]本發(fā)明的另一目的是提供利用上述培養(yǎng)基生產(chǎn)泰樂菌素的發(fā)酵方法。
[0012]為實(shí)現(xiàn)上述目的所采取的技術(shù)方案為:
[0013]—種弗氏鏈霉菌發(fā)酵生產(chǎn)泰樂菌素的培養(yǎng)基，包括搖瓶種子培養(yǎng)基、一級(jí)種子培養(yǎng)基、二級(jí)種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于上述搖瓶種子培養(yǎng)基、一級(jí)種子培養(yǎng)基、二級(jí)種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基中均含有啤酒酵母菌渣和蚯蚓粉。
[0014]上述搖瓶種子培養(yǎng)基組成為:豆油或玉米油3~6ml/L、啤酒酵母菌渣5~IOg/L、蟲丘蝴粉4~8g/L、玉米衆(zhòng)干粉2~5g/L、硫酸鎂2~3g/L、硫酸鐵I~3g/L、輕質(zhì)碳酸鈣2~4g/L、硫酸銨2~4g/L。[0015]上述一級(jí)種子培養(yǎng)基的組成為:豆油或玉米油20~30ml/L、啤酒酵母干渣25~35g/L、蟲丘蟲引粉15~20g/L、玉米衆(zhòng)3~6g/L、磷酸二氫鉀0.3~0.4g/L、輕質(zhì)碳酸?丐2~4g/L、硫酸銨3~6g/L。
[0016]上述二級(jí)種子培養(yǎng)基的組成為:豆油或玉米油25~35ml/L、啤酒酵母干渣30~40g/L、蟲丘蟲引粉20~25g/L、玉米衆(zhòng)5~10g/L、磷酸二氫鉀0.5~0.8g/L、輕質(zhì)碳酸?丐3~5g/L、硫酸銨3~5g/L。
[0017]上述發(fā)酵培養(yǎng)基的組成為:豆油或玉米油30~40ml/L、啤酒酵母干渣35~45g/L、蟲丘蝴粉30~35g/L、玉米衆(zhòng)10~15g/L、磷酸二氫鉀0.8~1.2g/L、輕質(zhì)碳酸鈣6~8g/L、硫酸銨5~8g/L、氯化鈉4~6g/L、硫酸鎂4~6g/L、硫酸鐵3~5g/L、復(fù)合型甜菜堿20 ~30g/L。
[0018]所述啤酒酵母干渣質(zhì)量要求為:
[0019]蛋白質(zhì)含量≥45% ;磷含量≥60ug/ml ;水分≤5% ;灰分≤5% ;碳水化合物≥12% ；干渣顆粒通過60目篩的數(shù)量≥80%。
[0020]所述蚯蚓粉質(zhì)量要求為:蛋白質(zhì)含量≥60% ;水分≤10% ;粒度能通過80目篩。
[0021]一種弗氏鏈霉菌利用上述培養(yǎng)基發(fā)酵生產(chǎn)泰樂菌素的發(fā)酵方法，其工藝步驟包括:首先將已制備好的斜面孢子接入搖瓶培養(yǎng)基中進(jìn)行搖瓶培養(yǎng)，至菌體濃度10~15%、pH值6~8時(shí)按照I~2L/m3接種量接入一級(jí)種子培養(yǎng)基中進(jìn)行一級(jí)種子培養(yǎng)，至菌體濃度15~25%、pH值6~8時(shí)轉(zhuǎn)移入二級(jí)種子培養(yǎng)基中進(jìn)行二級(jí)種子培養(yǎng)，至菌體濃度30~40%、pH值6~8時(shí)轉(zhuǎn)移至發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，待發(fā)酵單位在15000u/ml以上且每6~8h檢測(cè)時(shí)前、后檢測(cè)的發(fā)酵單位相差在300u/ml以內(nèi)、菌體濃度30~40%、pH值6~
7、周期25~30h時(shí)終止發(fā)酵。
[0022]所述搖瓶培養(yǎng)的條件為:將種子瓶置于200~240r/min搖瓶機(jī)上振蕩培養(yǎng)40~48h，培養(yǎng)溫度28~30°C，相對(duì)濕度35~45%。
[0023]所述一級(jí)種子培養(yǎng)條件為:
[0024]I)罐壓:控制在 0.04 ~0.06MPa,
[0025]2)罐溫:發(fā)酵前5h，罐溫控制在30~31°C ；6h至一級(jí)種子培養(yǎng)結(jié)束，罐溫控制在29 ~30?，
[0026]3)空氣流量:0~5h，5~IOmVh ；6h至一級(jí)種子培養(yǎng)結(jié)束:15~20m3/h，
[0027]4) pH 控制在 7 ~8，
[0028]5)攪拌轉(zhuǎn)速:0~5h,采用氣流攪拌；6h至一級(jí)種子培養(yǎng)結(jié)束:采用機(jī)械攪拌，轉(zhuǎn)速控制在60r/min,
[0029]6) 一級(jí)種子培養(yǎng)時(shí)間15~20h。
[0030]所述二級(jí)種子培養(yǎng)條件為:
[0031 ] I)罐壓控制在 0.04 ~0.06MPa,
[0032]2)罐溫:發(fā)酵前5h，罐溫控制在30~31°C ；6h至二級(jí)種子培養(yǎng)結(jié)束，罐溫控制在29 ~30?，
[0033]3)空氣流量:0~5h，20~25m3/h ；6h至二級(jí)種子培養(yǎng)結(jié)束:30~40m3/h，
[0034]4) pH 控制在 7 ~8，
[0035]5)攪拌轉(zhuǎn)速:0~5h,采用氣流攪拌代替機(jī)械攪拌；6h至一級(jí)種子培養(yǎng)結(jié)束:啟動(dòng)機(jī)械攪拌，轉(zhuǎn)速控制在80r/min,
[0036]6) 二級(jí)種子培養(yǎng)時(shí)間:20~25h。
[0037]所述發(fā)酵培養(yǎng)條件為:
[0038]a脂肪控制:發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌后脂肪控制在3~5% ；
[0039]b發(fā)酵開始~組分轉(zhuǎn)化前:培養(yǎng)溫度30~31°C、攪拌轉(zhuǎn)速100r/min ；
[0040]c組分轉(zhuǎn)化開始~發(fā)酵結(jié)束:溫度36~38°C、轉(zhuǎn)速150r/min ；
[0041]d發(fā)酵周期:培養(yǎng)時(shí)間130~150h ；
[0042]6壓力控制:罐壓0.05~0.0610^;
[0043]f pH控制:發(fā)酵過程中pH6.0~7.5 ;
[0044]g無菌檢查:發(fā)酵過程中進(jìn)行菌檢，要求無其它雜菌；
[0045]h空氣流量:0h~組份開始轉(zhuǎn)化前:150~200m3/h ;組份轉(zhuǎn)化開始~發(fā)酵結(jié)束:300 ~500m3/h。
[0046]在發(fā)酵過程中進(jìn)行補(bǔ)料，包括補(bǔ)油、補(bǔ)水、補(bǔ)酸或堿和補(bǔ)氮源，其中
[0047]a補(bǔ)油控制:采用流加法補(bǔ)豆油或玉米油，
[0048]發(fā)酵前35h不用進(jìn)行補(bǔ)油，
[0049]36h~IOOh:如果脂肪含量低于2.5%，補(bǔ)入油；如果脂肪含量超過3%，則停止補(bǔ)油，
[0050]IOlh至組份轉(zhuǎn)化開始:如果脂肪含量低于0.8%，補(bǔ)入油；如果脂肪含量超過1.5%，則停止補(bǔ)油，
[0051]組分轉(zhuǎn)化~發(fā)酵結(jié)束，每隔4~6h檢測(cè)發(fā)酵液脂肪含量，當(dāng)發(fā)酵液脂肪含量
<0.3%，進(jìn)行補(bǔ)油，肪含量超過0.5%停止補(bǔ)油；
[0052]b 補(bǔ)水:
[0053]發(fā)酵前30h不用進(jìn)行補(bǔ)水，
[0054]30h~80h:當(dāng)發(fā)酵液菌體濃度< 40%，控制菌體濃度40~50%，
[0055]81h至發(fā)酵結(jié)束:當(dāng)發(fā)酵液菌體濃度< 30%，采用流加法補(bǔ)水，控制菌體濃度30~40% ；
[0056]c補(bǔ)酸或堿:
[0057]發(fā)酵前25h，pH不進(jìn)行控制，
[0058]用酸或堿控制發(fā)酵26h至組份開始轉(zhuǎn)化前的pH6~7.5，組份轉(zhuǎn)化期間~發(fā)酵結(jié)束PH6~7，所述酸為質(zhì)量濃度為20~30%的硫酸銨溶液，堿為質(zhì)量濃度為20%的氫氧化鈉溶液；
[0059]d補(bǔ)入氮源:在發(fā)酵周期分別在40h、60h、80h和IOOh時(shí)補(bǔ)入氮源，其補(bǔ)入量為發(fā)酵液體積的I~1.5%，所述氮源為20%的啤酒酵母菌渣和15%的蚯蚓粉的混合水溶液。
[0060]本發(fā)明的技術(shù)優(yōu)勢(shì)為:
[0061]1)發(fā)酵成本低。首先啤酒酵母干渣、蚯蚓粉由于產(chǎn)量較大，市場(chǎng)價(jià)格較低，便于采購，其次使用啤酒酵母干渣、蚯蚓粉代替了常規(guī)種子培養(yǎng)基、發(fā)酵培養(yǎng)基中的氮源，減少氮源的種類和用量，降低了 20%以上的生產(chǎn)成本，減少因氮源質(zhì)量影響種子液和發(fā)酵液質(zhì)量的不利因素。
[0062]2)縮短泰樂菌素發(fā)酵生產(chǎn)周期。本發(fā)明的發(fā)酵工藝的生產(chǎn)周期控制在(包括種子培養(yǎng)周期和發(fā)酵周期)200h以內(nèi)，同常規(guī)工藝相比，生產(chǎn)周期縮短了 10%以上。
[0063]3)減少一級(jí)種子培養(yǎng)的接種量。使用一級(jí)種子培養(yǎng)基的新配方，其接種量為IL/m3，而常規(guī)工藝的接種量在5L以上，接種量減少了 60%以上。
[0064]4)本發(fā)明泰樂菌素發(fā)酵液中的氨基酸含量較高。試驗(yàn)過程中，發(fā)現(xiàn)泰樂菌素發(fā)酵所需的前體物質(zhì)主要是谷氨酸、苯丙氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、蛋氨酸和纈氨酸。根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，泰樂菌素發(fā)酵過程中，蛋白質(zhì)和氨基酸對(duì)其產(chǎn)量和組分影響較大，本發(fā)明培養(yǎng)基中的蛋白質(zhì)含量達(dá)到55%以上，氨基酸含量明顯高于常規(guī)種子培養(yǎng)基配方，有利于改善弗氏鏈霉菌菌絲形態(tài)；提高種子培養(yǎng)和發(fā)酵液的質(zhì)量。
[0065]不同原輔料的氨基氮含量對(duì)比表
[0066]
【權(quán)利要求】
1.一種弗氏鏈霉菌發(fā)酵生產(chǎn)泰樂菌素的培養(yǎng)基，包括搖瓶種子培養(yǎng)基、一級(jí)種子培養(yǎng)基、二級(jí)種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于上述搖瓶種子培養(yǎng)基、一級(jí)種子培養(yǎng)基、二級(jí)種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基中均含有啤酒酵母菌渣和蚯蚓粉。
2.按照權(quán)利要求1所述的弗氏鏈霉菌發(fā)酵生產(chǎn)泰樂菌素的培養(yǎng)基，其特征在于上述搖瓶種子培養(yǎng)基組成為:豆油或玉米油3~6ml/L、啤酒酵母菌洛5~lOg/U丘蝴粉4~8g/L、玉米楽；干粉2~5g/L、硫酸鎂2~3g/L、硫酸鐵I~3g/L、輕質(zhì)碳酸韓2~4g/L、硫酸銨2~4g/L。
3.按照權(quán)利要求1所述的弗氏鏈霉菌發(fā)酵生產(chǎn)泰樂菌素的培養(yǎng)基，其特征在于上述一級(jí)種子培養(yǎng)基的組成為:豆油或玉米油20~30ml/L、啤酒酵母干渣25~35g/L、蚯蚓粉15~20g/L、玉米衆(zhòng)3~6g/L、磷酸二氫鉀0.3~0.4g/L、輕質(zhì)碳酸?丐2~4g/L、硫酸銨3~6g/L。
4.按照權(quán)利要求1所述的弗氏鏈霉菌發(fā)酵生產(chǎn)泰樂菌素的培養(yǎng)基，其特征在于上述二級(jí)種子培養(yǎng)基的組成為:豆油或玉米油25~35ml/L、啤酒酵母干渣30~40g/L、蚯蚓粉20~25g/L、玉米衆(zhòng)5~10g/L、磷酸二氫鉀0.5~0.8g/L、輕質(zhì)碳酸|丐3~5g/L、硫酸銨3~5g/L。
5.按照權(quán)利要求1所述的弗氏鏈霉菌發(fā)酵生產(chǎn)泰樂菌素的培養(yǎng)基，其特征在于上述發(fā)酵培養(yǎng)基的組成為:豆油或玉米油30~40ml/L、啤酒酵母干渣35~45g/L、蚯蚓粉30~35g/L、玉米衆(zhòng)10~15g/L、磷酸二氫鉀0.8~1.2g/L、輕質(zhì)碳酸鈣6~8g/L、硫酸銨5~8g/L、氯化鈉4~6g/L、硫酸鎂4~6g/L、硫酸鐵3~5g/L、復(fù)合型甜菜堿20~30g/L。
6.按照權(quán)利要求1、2、3、4或5所述的弗氏鏈霉菌發(fā)酵生產(chǎn)泰樂菌素的培養(yǎng)基，其特征在于所述啤酒酵母干渣質(zhì)量 要求為: 蛋白質(zhì)含量≥45% ;磷含量≥60ug/ml ;水分< 5% ;灰分< 5% ;碳水化合物≥12% ;干渣顆粒通過60目篩的數(shù)量>80%。
7.按照權(quán)利要求1、2、3、4或5所述的弗氏鏈霉菌發(fā)酵生產(chǎn)泰樂菌素的培養(yǎng)基，其特征在于所述蚯蚓粉質(zhì)量要求為:蛋白質(zhì)含量> 60% ;水分< 10% ;粒度能通過80目篩。
8.一種弗氏鏈霉菌利用權(quán)利要求2至5任意一項(xiàng)培養(yǎng)基發(fā)酵生產(chǎn)泰樂菌素的發(fā)酵方法，其工藝步驟包括:首先將已制備好的斜面孢子接入搖瓶培養(yǎng)基中進(jìn)行搖瓶培養(yǎng)，至菌體濃度10~15%、pH值6~8時(shí)按照I~2L/m3接種量接入一級(jí)種子培養(yǎng)基中進(jìn)行一級(jí)種子培養(yǎng)，至菌體濃度15~25%、pH值6~8時(shí)轉(zhuǎn)移入二級(jí)種子培養(yǎng)基中進(jìn)行二級(jí)種子培養(yǎng)，至菌體濃度30~40%、pH值6~8時(shí)轉(zhuǎn)移至發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，待發(fā)酵單位在15000u/ml以上且每6~8h檢測(cè)時(shí)前、后檢測(cè)的發(fā)酵單位相差在300u/ml以內(nèi)、菌體濃度30~40%、周期25~30h時(shí)終止發(fā)酵。
9.按照權(quán)利要求8所述的發(fā)酵方法，其特征在于所述搖瓶培養(yǎng)的條件為:將種子瓶置于200~240r/min搖瓶機(jī)上振蕩培養(yǎng)40~48h，培養(yǎng)溫度28~30°C，相對(duì)濕度35~45%。
10.按照權(quán)利要求8所述的發(fā)酵方法，其特征在于所述一級(jí)種子培養(yǎng)條件為: 1)罐壓:控制在0.04~0.06MPa, 2)罐溫:發(fā)酵前5h，罐溫控制在30~31°C;6h至一級(jí)種子培養(yǎng)結(jié)束，罐溫控制在29~30。。， 3)空氣流量:0~5h，5~10m3/h；6h至一級(jí)種子培養(yǎng)結(jié)束:15~20m3/h，4)pH控制在7~8， 5)攪拌轉(zhuǎn)速:0~5h,采用氣流攪拌；6h至一級(jí)種子培養(yǎng)結(jié)束:采用機(jī)械攪拌，轉(zhuǎn)速控制在 60r/min,
6)一級(jí)種子培養(yǎng)時(shí)間15~20h。
11.按照權(quán)利要求8所述的發(fā)酵方法，其特征在于所述二級(jí)種子培養(yǎng)條件為: 1)罐壓控制在0.04~0.06MPa， 2)iig溫:發(fā)酵如5h, iig溫控制在30~31 C ；6h至二級(jí)種子培養(yǎng)結(jié)束，溫控制在29~30。。， 3)空氣流量:0~5h，20~25m3/h；6h至二級(jí)種子培養(yǎng)結(jié)束:30~40m3/h， 4)pH控制在7~8， 5)攪拌轉(zhuǎn)速:0~5h,采用氣流攪拌代替機(jī)械攪拌；6h至一級(jí)種子培養(yǎng)結(jié)束:啟動(dòng)機(jī)械攪拌，轉(zhuǎn)速控制在80r/min,
6)二級(jí)種子培養(yǎng)時(shí)間:20~25h。
12.按照權(quán)利要求8所述的發(fā)酵方法，其特征在于所述發(fā)酵培養(yǎng)條件為: a脂肪控制:發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌后脂肪控制在3~5% ； b發(fā)酵開始~組分轉(zhuǎn)化前:培養(yǎng)溫度30~31°C、攪拌轉(zhuǎn)速100r/min ； c組分轉(zhuǎn)化開始~發(fā)酵結(jié)束:溫度36~38°C、轉(zhuǎn)速150r/min ； d發(fā)酵周期:培養(yǎng)時(shí)間130~150h ； e壓力控制:罐壓0.05~0.06MPa ； f pH控制:發(fā)酵過程中ρΗ6.0~7.5 ; g無菌檢查:發(fā)酵過程中進(jìn)行菌檢，要求無其它雜菌； h空氣流量:0h~組份開始轉(zhuǎn)化前:150~200mVh ;組份轉(zhuǎn)化開始~發(fā)酵結(jié)束:300~500m3/h。
13.按照權(quán)利要求8所述的發(fā)酵方法，其特征在于在發(fā)酵過程中進(jìn)行補(bǔ)料，包括補(bǔ)油、補(bǔ)水、補(bǔ)酸或堿和補(bǔ)氮源，其中 a補(bǔ)油控制:采用流加法補(bǔ)豆油或玉米油， 發(fā)酵前35h不用進(jìn)行補(bǔ)油， 36h~IOOh:如果脂肪含量低于2.5%，補(bǔ)入油；如果脂肪含量超過3%，則停止補(bǔ)油，IOlh至組份轉(zhuǎn)化開始:如果脂肪含量低于0.8%，補(bǔ)入油；如果脂肪含量超過1.5%，則停止補(bǔ)油， 組分轉(zhuǎn)化~發(fā)酵結(jié)束，每隔4~6h檢測(cè)發(fā)酵液脂肪含量，當(dāng)發(fā)酵液脂肪含量< 0.3%，進(jìn)行補(bǔ)油，肪含量超過0.5%停止補(bǔ)油；b補(bǔ)水: 發(fā)酵前35h不用進(jìn)行補(bǔ)水， 36h~80h:當(dāng)發(fā)酵液菌體濃度< 40%，控制菌體濃度40~50%， 81h至發(fā)酵結(jié)束:當(dāng)發(fā)酵液菌體濃度< 30%，采用流加法補(bǔ)水，控制菌體濃度30~40% ； c補(bǔ)酸或堿: 發(fā)酵前25h，pH不進(jìn)行控制， 用酸或堿控制發(fā)酵26h至組份開始轉(zhuǎn)化前的pH 6~7.5，組份轉(zhuǎn)化期間~發(fā)酵結(jié)束pH`6~7，所述酸為質(zhì)量濃度為20~30%的硫酸銨溶液，堿為質(zhì)量濃度為20%的氫氧化鈉溶液； d補(bǔ)入氮源:在發(fā)酵周期分別在40h、60h、80h和IOOh時(shí)補(bǔ)入氮源，其補(bǔ)入量為發(fā)酵液體積的I~1.5%，所述氮源為20%的啤酒酵母菌渣和15%的蚯蚓粉的混合水溶液。
【文檔編號(hào)】C12P19/62GK103484514SQ201310440355
【公開日】2014年1月1日 申請(qǐng)日期:2013年9月25日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月25日
【發(fā)明者】任勇, 王 義, 奇乃, 董媛, 李小萍 申請(qǐng)人:寧夏泰瑞制藥股份有限公司