一種用于生豬養殖保健的復合微生態制劑的制作方法
【專利摘要】本發明提供一種用于生豬養殖保健的復合微生態制劑，將冷凍保藏管中的嗜酸乳桿菌、雙歧桿菌、枯草芽孢桿菌、釀酒酵母分別在斜面中活化，之后純化得各斜面菌種，備用；利用各斜面菌種制備相應的原菌液；將各原菌液按2：2：2：1的菌量比接種于已滅菌的發酵培養基Ⅰ中進行培養，得復合微生態制劑的一級種子；將一級種子按5%的接種量接種于已滅菌的發酵培養基Ⅱ中培養得復合微生態制劑的二級種子；最后將二級種子按5%的接種量接種至已滅菌的發酵培養基Ⅲ培養以獲得復合微生態制劑的成品。生豬通過服用或飲用該復合微生態制劑，能夠增強生豬機體的抵抗力，起到明顯的保健效果；另外，其還具保存簡單、使用方便、及成本低的優點。
【專利說明】—種用于生豬養殖保健的復合微生態制劑
【【技術領域】】
[0001]本發明涉及一種養殖領域用的復合微生態菌劑，尤其涉及一種用于生豬養殖保健的復合微生態制劑。
【【背景技術】】
[0002]1950年底美國FDA批準抗生素用作飼料添加劑以來，抗生素在畜牧生產和動物保健中，對促進生長、疫病防治、提高肉蛋奶等產量及生活水平發揮了重要作用，但由于它們的長期廣泛使用及濫用，其弊病日益被人們所廣泛認識，諸如破壞動物體內正常微生物群，導致微生態平衡失調；促進耐藥菌株數量的增加和耐藥性的增強，導致機體的外源性和內源性感染；降低了動物免疫力和機體免疫力；且在動物產品(肉、蛋、奶)中的殘留嚴重威脅著人類健康。因此，近年來世界各國均在研究減少或不用抗生素的養殖方法(即無抗養殖)，可以說，無抗養殖已成為今后畜牧養殖業發展的一個重要方向。
【
【發明內容】
】
[0003]本發明所要解決的技術問題在于提供一種用于生豬保健的復合微生態制劑，能夠增強生豬機體的抵抗力，減少抗生素藥物的使用。
[0004]本發明是通過以下技術方案解決上述技術問題的:一種用于生豬保健的復合微生態制劑，其制備方法的具體步驟如下:
[0005](I)原菌種斜面培養:將冷凍保藏管中的嗜酸乳桿菌、雙歧桿菌、枯草芽孢桿菌、釀酒酵母分別在斜面中活化，之后分別置于90_培養皿中進行純化，得嗜酸乳桿菌斜面菌種、雙歧桿菌斜面菌種、枯草芽孢桿菌斜面菌種、及釀酒酵母斜面菌種，備用；
[0006](2)原菌種液體培 養:將嗜酸乳桿菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養基I中，之后置于37°C下厭氧培養1-2天得嗜酸乳桿菌原菌液；將雙歧桿菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養基II中，接著于37°C下厭氧培養3天得雙歧桿菌原菌液；將枯草芽孢桿菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養基III中，接著于30°C好氧培養1-2天得枯草芽孢桿菌原菌液;將釀酒酵母斜面菌種接種于已滅菌的液體培養基IV中，之后于28°C -30°C下好氧培養3天得釀酒酵母原菌液；
[0007](3)—級種子培養:將嗜酸乳桿菌原菌液、雙歧桿菌原菌液、枯草芽孢桿菌原菌液、及釀酒酵母原菌液按2:2:2:1的菌量比接種于已滅菌的發酵培養基I中進行培養，具體地:先接種枯草芽孢桿菌原菌液與釀酒酵母原菌液，并于30°C下好氧培養3天，然后再接種嗜酸乳桿菌原菌液與雙歧桿菌原菌液，于37°C下厭氧培養3天，得復合微生態制劑的一級種子；
[0008](4)二級種子培養:將所得的一級種子按5%的接種量接種于已滅菌的發酵培養基II中，并于30°C下先好氧培養3-5天再厭氧培養3-5天，得復合微生態制劑的二級種子；
[0009](5)成品培養:將所得的二級種子按5%的接種量接種至已滅菌的發酵培養基III中，并于30°C下先好氧3-5天再厭氧培養3-5天，獲得復合微生態制劑的成品。[0010]進一步地，所述步驟(I)中嗜酸乳桿菌在斜面中活化的具體操作為:用接種環將嗜酸乳桿菌接種于已滅菌的斜面培養基I上，之后于37°c下厭氧培養1-2天；所述斜面培養基I的滅菌溫度為121°C、滅菌時間為20min ;且該斜面培養基I的組分:蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸鈉5克、檸檬酸二胺2克、吐溫801克、磷酸氫二鉀2克、硫酸鎂0.2克、硫酸錳0.05克、碳酸鈣20克、瓊脂15克、水1000ml、PH6.8。
[0011]進一步地，所述步驟(I)中雙歧桿菌在斜面中活化的具體操作為:用接種環將雙歧桿菌接種于已滅菌的斜面培養基I上，之后于37°c下厭氧培養1-2天；所述斜面培養基II的滅菌溫度為121°C、滅菌時間為20min ；;所述斜面培養基II的組分:蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸鈉5克、檸檬酸二胺2克、吐溫801克、磷酸氫二鉀2克、硫酸鎂0.05克、硫酸錳0.025克、碳酸鈣20克、瓊脂15克、水1000ml、PH6.8。
[0012]進一步地，所述步驟(I)中枯草芽孢桿菌在斜面中活化的具體操作為:用接種環將枯草芽孢桿菌接種于已滅菌的斜面培養基III上，之后于30°C下好氧培養1-2天；所述斜面培養基III的滅菌溫度為121°C、滅菌時間為20min ;且該斜面培養基III的組分:蛋白胨30克、葡萄糖I克、牛肉膏5克、氯化鈉5克、瓊脂15克、水1000ml、PH7.2。
[0013]進一步地，所述步驟(I)中釀酒酵母在斜面中活化的具體操作為:用接種環將釀酒酵母接種于已滅菌的斜面培養基IV上，之后于28-30°C下好氧培養3天；所述斜面培養基IV的滅菌溫度為121°C、滅菌時間為30min ;且該斜面培養基IV的組分:馬鈴薯200克、蔗糖20克、瓊脂15-20克、水1000ml、PH自然。
[0014]進一步地，所述步驟(2)中液體培養基I的組分:蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸鈉5克、檸檬酸二胺2克、吐溫801克、磷酸氫二鉀2克、硫酸鎂0.2克、硫酸錳0.05克、碳酸鈣20克、水IOOOml ;液體培養基II的組分:蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸鈉5克、檸檬酸二胺2克、吐溫801克、磷酸氫二鉀2克、硫酸鎂0.05克、·硫酸錳0.025克、碳酸鈣20克、水1000ml、PH6.8 ;液體培養基III的組分:蛋白胨30克、葡萄糖I克、牛肉膏5克、氯化鈉5克、水1000ml、PH7.2 ;液體培養基IV的組分:馬鈴薯200克、蔗糖20克、7jC 1000ml、PH自然。
[0015]進一步地，所述步驟(3)中發酵培養基I的組分:糖蜜5%、酵母粉0.5%、蛋白胨1%、氯化銨0.1%、氯化鈉0.05%、磷酸二氫鉀0.1%、硫酸鎂0.05%、硫酸鋅0.025%、硫酸亞鐵0.025%，余量為水。
[0016]進一步地，所述步驟(4)中發酵培養基II的組分:糖蜜5%、酵母粉0.1%、蛋白胨0.1%、氯化銨0.1%、氯化鈉0.05%、磷酸二氫鉀0.1%、硫酸鎂0.05%、硫酸鋅0.025%、硫酸亞鐵0.025%，余量為水。
[0017]進一步地，所述步驟(5)中發酵培養基III的組分:糖蜜5%、氯化銨0.2%、、磷酸二氫鉀0.1%、氯化鈉0.05%、硫酸鎂0.05%、硫酸鋅0.025%、硫酸亞鐵0.025%，余量為水。
[0018]本發明一種用于生豬保健的復合微生態制劑的有益效果在于:生豬通過服用或飲用該復合微生態制劑，能夠增強機體的抵抗力，起到明顯的保健效果；且該復合微生態制劑還具有無副作用、無耐藥性、無殘留的特點，是抗生素藥物保健品的理想替代品，能夠為無抗養殖提供輔助作用；另外，其還具有保存簡單、使用方便、及成本低的優點。
【【具體實施方式】】[0019]本發明一種用于生豬保健的復合微生態制劑，其制備方法的具體步驟如下:
[0020](I)原菌種斜面培養:將冷凍保藏管中的嗜酸乳桿菌、雙歧桿菌、枯草芽孢桿菌、釀酒酵母分別在斜面中活化，之后分別置于90_培養皿中進行純化，得嗜酸乳桿菌斜面菌種、雙歧桿菌斜面菌種、枯草芽孢桿菌斜面菌種、及釀酒酵母斜面菌種，備用；
[0021](2)原菌種液體培養:將嗜酸乳桿菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養基I中，之后置于37°C下厭氧培養1-2天得嗜酸乳桿菌原菌液；將雙歧桿菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養基II中，接著于37°C下厭氧培養3天得雙歧桿菌原菌液；將枯草芽孢桿菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養基III中，接著于30°C好氧培養1-2天得枯草芽孢桿菌原菌液;將釀酒酵母斜面菌種接種于已滅菌的液體培養基IV中，之后于28°C -30°C下好氧培養3天得釀酒酵母原菌液；
[0022](3)—級種子培養:將嗜酸乳桿菌原菌液、雙歧桿菌原菌液、枯草芽孢桿菌原菌液、及釀酒酵母原菌液按2:2:2:1的菌量比接種于已滅菌的發酵培養基I中進行培養，具體地:先接種枯草芽孢桿菌原菌液與釀酒酵母原菌液，并于30°C下好氧培養3天，然后再接種嗜酸乳桿菌原菌液與雙歧桿菌原菌液，于37°C下厭氧培養3天，得復合微生態制劑的一級種子；
[0023](4)二級種子培養:將所得的一級種子按5%的接種量接種于已滅菌的發酵培養基II中，并于30°C下先好氧培養3-5天再厭氧培養3-5天，得復合微生態制劑的二級種子；
[0024](5)成品培養:將所得的二級種子按5%的接種量接種至已滅菌的發酵培養基III中，并于30°C下先好氧3-5天再厭氧培養3-5天，獲得復合微生態制劑的成品。
[0025]其中:步驟(I)中嗜酸乳桿菌在斜面中活化的具體操作為:用接種環將嗜酸乳桿菌接種于已滅菌的斜面培養基I上，之后于37°c下厭氧培養1-2天；所述斜面培養基I的滅菌溫度為121°C、滅菌時間為20min ;且該斜面培養基I的組分:蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖 5克、乙酸鈉5克、檸檬酸二胺2克、吐溫801克、磷酸氫二鉀2克、硫酸鎂0.2克、硫酸錳0.05克、碳酸鈣20克、瓊脂15克、水1000ml、PH6.8。步驟(I)中雙歧桿菌在斜面中活化的具體操作為:用接種環將雙歧桿菌接種于已滅菌的斜面培養基I上，之后于37°C下厭氧培養1-2天；所述斜面培養基II的滅菌溫度為121°C、滅菌時間為20min ；；所述斜面培養基II的組分:蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸鈉5克、檸檬酸二胺2克、吐溫801克、磷酸氫二鉀2克、硫酸鎂0.05克、硫酸錳0.025克、碳酸鈣20克、瓊脂15克、水1000ml、PH6.8。步驟(I)中枯草芽孢桿菌在斜面中活化的具體操作為:用接種環將枯草芽孢桿菌接種于已滅菌的斜面培養基III上，之后于30°C下好氧培養1-2天；所述斜面培養基III的滅菌溫度為121°C、滅菌時間為20min ;且該斜面培養基III的組分:蛋白胨30克、葡萄糖I克、牛肉膏5克、氯化鈉5克、瓊脂15克、水1000ml、PH7.2。步驟(I)中釀酒酵母在斜面中活化的具體操作為:用接種環將釀酒酵母接種于已滅菌的斜面培養基IV上，之后于28-30°C下好氧培養3天；所述斜面培養基IV的滅菌溫度為121°C、滅菌時間為30min ;且該斜面培養基IV的組分:馬鈴薯200克、蔗糖20克、瓊脂15-20克、水1000ml、PH 自然。
[0026]步驟(2)中液體培養基I的組分:蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸鈉5克、檸檬酸二胺2克、吐溫801克、磷酸氫二鉀2克、硫酸鎂0.2克、硫酸錳0.05克、碳酸鈣20克、水IOOOml ;液體培養基II的組分:蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸鈉5克、檸檬酸二胺2克、吐溫801克、磷酸氫二鉀2克、硫酸鎂0.05克、硫酸錳0.025克、碳酸鈣20克、水1000ml、PH6.8 ;液體培養基III的組分:蛋白胨30克、葡萄糖I克、牛肉膏5克、氯化鈉5克、水1000ml、PH7.2 ;液體培養基IV的組分:馬鈴薯200克、蔗糖20克、水1000ml、PH自然。
[0027]步驟(3)中發酵培養基I的組分:糖蜜5%、酵母粉0.5%、蛋白胨1%、氯化銨0.1%、氯化鈉0.05%、磷酸二氫鉀0.1%、硫酸鎂0.05%、硫酸鋅0.025%、硫酸亞鐵0.025%，余量為水。步驟(4)中發酵培養基II的組分:糖蜜5%、酵母粉0.1%、蛋白胨0.1%、氯化銨0.1%、氯化鈉
0.05%、磷酸二氫鉀0.1%、硫酸鎂0.05%、硫酸鋅0.025%、硫酸亞鐵0.025%,余量為水。步驟
(5)中發酵培養基III的組分:糖蜜5%、氯化銨0.2%、、磷酸二氫鉀0.1%、氯化鈉0.05%、硫酸鎂0.05%、硫酸鋅0.025%、硫酸亞鐵0.025%，余量為水。
[0028]需要說明的是，本發明中各培養基的百分比均為質量百分比。
[0029]本發明復合微生態菌制劑用于對生豬養殖進行保健，以提高生豬的免疫力和抗病性， 申請人:以該復合微生態制劑應用于一生豬養殖場為例進行闡述說明，具體地:
[0030]在福建龍巖某某養豬場，選取30頭仔豬隨機平均分為兩組，一組為實驗組，一組為對照組，實驗組灌服所述復合微生態制劑10-20ml頭/天，連服7天，對照組按常規藥物防治；結果表明:實驗組的仔豬死亡率為8.1%，仔豬黃痢發病率為3.7% ;而對照組的仔豬死亡率為12.1 %，仔豬黃痢發病率為10.7%;因此，所述復合微生態制劑對仔豬能夠起到明顯的保健效果。
[0031]綜上，生豬通過服用或飲用該復合微生態制劑，能夠增強機體的抵抗力，起到明顯的保健效果；且該復合微生態制劑還具有無副作用、無耐藥性、無殘留的特點，是抗生素藥物保健品的理想替代品，能夠為無抗養殖提供輔助作用；另外，其還具有保存簡單、使用方便、及成本低的優點。`
【權利要求】
1.一種用于生豬養殖保健的復合微生態制劑，其特征在于:其制備方法的具體步驟如下:(1)原菌種斜面培養:將冷凍保藏管中的嗜酸乳桿菌、雙歧桿菌、枯草芽孢桿菌、釀酒酵母分別在斜面中活化，之后分別置于90_培養皿中進行純化，得嗜酸乳桿菌斜面菌種、雙歧桿菌斜面菌種、枯草芽孢桿菌斜面菌種、及釀酒酵母斜面菌種，備用；(2)原菌種液體培養:將嗜酸乳桿菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養基I中，之后置于37°C下厭氧培養1-2天得嗜酸乳桿菌原菌液；將雙歧桿菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養基II中，接著于37°C下厭氧培養3天得雙歧桿菌原菌液；將枯草芽孢桿菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養基III中，接著于30°C好氧培養1-2天得枯草芽孢桿菌原菌液；將釀酒酵母斜面菌種接種于已滅菌的液體培養基IV中，之后于28°C -30°C下好氧培養3天得釀酒酵母原菌液；(3)—級種子培養:將嗜酸乳桿菌原菌液、雙歧桿菌原菌液、枯草芽孢桿菌原菌液、及釀酒酵母原菌液按2:2:2:1的菌量比接種于已滅菌的發酵培養基I中進行培養，具體地:先接種枯草芽孢桿菌原菌液與釀酒酵母原菌液，并于30°C下好氧培養3天，然后再接種嗜酸乳桿菌原菌液與雙歧桿菌原菌液，于37°C下厭氧培養3天，得復合微生態制劑的一級種子；(4)二級種子培養:將所得的一級種子按5%的接種量接種于已滅菌的發酵培養基II中，并于30°C下先好氧培養3-5天再厭氧培養3-5天，得復合微生態制劑的二級種子；(5)成品培養:將所得的二級種子按5%的接種量接種至已滅菌的發酵培養基III中，并于30°C下先好氧3-5天再厭氧培養3-5天，獲得復合微生態制劑的成品。
2.根據權利要求1所述.的一種用于生豬養殖保健的復合微生態制劑，其特征在于:所述步驟(I)中嗜酸乳桿菌在斜面中活化的具體操作為:用接種環將嗜酸乳桿菌接種于已滅菌的斜面培養基I上，之后于37°C下厭氧培養1-2天；所述斜面培養基I的滅菌溫度為121°C、滅菌時間為20min ;且該斜面培養基I的組分:蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸鈉5克、檸檬酸二胺2克、吐溫801克、磷酸氫二鉀2克、硫酸鎂0.2克、硫酸錳0.05克、碳酸鈣20克、瓊脂15克、水1000ml、PH6.8。
3.根據權利要求1所述的一種用于生豬養殖保健的復合微生態制劑，其特征在于:所述步驟(I)中雙歧桿菌在斜面中活化的具體操作為:用接種環將雙歧桿菌接種于已滅菌的斜面培養基I上，之后于37°c下厭氧培養1-2天；所述斜面培養基II的滅菌溫度為121°C、滅菌時間為20min ；;所述斜面培養基II的組分:蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸鈉5克、檸檬酸二胺2克、吐溫801克、磷酸氫二鉀2克、硫酸鎂0.05克、硫酸錳0.025克、碳酸鈣20克、瓊脂15克、水1000ml、PH6.8。
4.根據權利要求1所述的一種用于生豬養殖保健的復合微生態制劑，其特征在于:所述步驟(I)中枯草芽孢桿菌在斜面中活化的具體操作為:用接種環將枯草芽孢桿菌接種于已滅菌的斜面培養基III上，之后于30°C下好氧培養1-2天；所述斜面培養基III的滅菌溫度為121°C、滅菌時間為20min ;且該斜面培養基III的組分:蛋白胨30克、葡萄糖I克、牛肉膏5克、氯化鈉5克、瓊脂15克、水1000ml、PH7.2。
5.根據權利要求1所述的一種用于生豬養殖保健的復合微生態制劑，其特征在于:所述步驟(I)中釀酒酵母在斜面中活化的具體操作為:用接種環將釀酒酵母接種于已滅菌的斜面培養基IV上，之后于28-30°C下好氧培養3天；所述斜面培養基IV的滅菌溫度為121°C、滅菌時間為30min ;且該斜面培養基IV的組分:馬鈴薯200克、蔗糖20克、瓊脂15-20克、水1000ml、PH 自然。
6.根據權利要求1所述的一種用于生豬養殖保健的復合微生態制劑，其特征在于:所述步驟(2 )中液體培養基I的組分:蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸鈉5克、檸檬酸二胺2克、吐溫801克、磷酸氫二鉀2克、硫酸鎂0.2克、硫酸錳0.05克、碳酸鈣20克、水IOOOml ;液體培養基II的組分:蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸鈉5克、檸檬酸二胺2克、吐溫801克、磷酸氫二鉀2克、硫酸鎂0.05克、硫酸錳0.025克、碳酸鈣20克、水1000ml、PH6.8 ;液體培養基III的組分:蛋白胨30克、葡萄糖I克、牛肉膏5克、氯化鈉5克、水1000ml、PH7.2 ;液體培養基IV的組分:馬鈴薯200克、蔗糖20克、水1000ml、PH自然。
7.根據權利要求1所述的一種用于生豬養殖保健的復合微生態制劑，其特征在于:所述步驟(3)中發酵培養基I的組分:糖蜜5%、酵母粉0.5%、蛋白胨1%、氯化銨0.1%、氯化鈉0.05%、磷酸二氫鉀0.1%、硫酸鎂0.05%、硫酸鋅0.025%、硫酸亞鐵0.025%，余量為水。
8.根據權利要求1所述的一種用于生豬養殖保健的復合微生態制劑，其特征在于:所述步驟(4)中發酵培養基II的組分:糖蜜5%、酵母粉0.1%、蛋白胨0.1%、氯化銨0.1%、氯化鈉0.05%、磷酸二氫鉀0.1%、硫酸鎂0.05%、硫酸鋅0.025%、硫酸亞鐵0.025%，余量為水。
9.根據權利要求1所述的一種用于生豬養殖保健的復合微生態制劑，其特征在于:所述步驟(5)中發酵培養基III的組分:糖蜜5%、氯化銨0.2%、、磷酸二氫鉀0.1%、氯化鈉`0.05%、硫酸鎂0.05%、硫酸鋅0.`025%、硫酸亞鐵0.025%，余量為水。
【文檔編號】C12R1/23GK103436473SQ201310374524
【公開日】2013年12月11日 申請日期:2013年8月23日 優先權日:2013年8月23日
【發明者】陳琳, 莫艷華, 秦火保, 周世須 申請人:福州大用生物應用科技有限公司