VirB蛋白的核心結構域及其編碼基因和應用的制作方法

VirB蛋白的核心結構域及其編碼基因和應用的制作方法
【專利摘要】本發明公開了VirB蛋白的核心結構域及其編碼基因和應用。本發明提供了VirB?core片段或具有所述VirB?core片段的融合蛋白；所述VirB?core片段為如下（a）或（b）：（a）由序列表中序列1自N末端第22至143位氨基酸殘基組成的蛋白質；（b）將（a）經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有與DNA結合的活性的由其衍生的蛋白質。本發明還保護所述VirB?core片段或所述融合蛋白在制備用于結合DNA的產品中的應用、在制備用于識別DNA的產品中的應用。本發明提供了VirB蛋白的核心結構域，并在分子水平上揭示了VirB蛋白的工作原理，將為結構導向性藥物設計提供精確和全方位的結構生物學信息。
【專利說明】VirB蛋白的核心結構域及其編碼基因和應用
【技術領域】
[0001]本發明涉及VirB蛋白的核心結構域及其編碼基因和應用。
【背景技術】
[0002]志賀氏菌屬(Shigella)又稱痢疾桿菌，是一種具有高度傳染性和嚴重危害的革蘭氏陰性兼性厭氧桿菌。據WH02009年統計世界有I億左右人患病，死亡人數達到100萬。其中大約99%的病例發生在發展中國家。在一些衛生條件和水源差的地方更容易大規模發生腸道疾病。
[0003]痢疾桿菌可導致傳染性極強的細菌性痢疾。福氏痢疾桿菌可在10-100個細菌接種量下引發疾病。細菌性痢疾在我國及其他發展中國家廣泛流行，依舊是全世界范圍內公眾衛生的首要威脅之一。細菌性痢疾每年造成數十萬人死亡，尤其對兒童的威脅最大。痢疾桿菌主要通過入侵小腸上皮細胞并釋放細菌毒素引發疾病。痢疾桿菌能粘附于腸道的上皮細胞表面，繼而在一系列侵襲蛋白協助下穿入小腸上皮細胞。痢疾桿菌分泌的內毒素可引起發熱，神志障礙，甚至中毒性休克。福氏痢疾桿菌是引起細菌性痢疾的主要病原體之一。我國流行的痢疾桿菌優勢株為福氏2a301株。2002年，我國科學家在率先破譯了福氏痢疾桿菌的基因組全序列，成為我國首個自主完成的微生物基因組計劃。痢疾桿菌基因組的破譯為進行痢疾致病機制、毒力基因進化、耐藥性機理，疫苗和藥物等多方面的研究提供論文重要的遺傳學背景資料。福氏痢疾桿菌的基因組研究揭示了其侵襲性和毒力來源于該菌所特有的約230kb的侵襲性大質粒。一系列毒力及侵襲性相關基因集中排列于侵襲性大質粒上約31kb的“entry region”，聚集了一大批通過水平轉移獲得的毒力。這些毒力基因包括了三類:(l)ipa類基因，編碼了各種外毒素，可導致巨噬細胞凋亡及腸道上皮細胞的破壞；
(2)mxi基因和spa基因等編碼了一個巨`大而復雜的III型分泌系統，由數十種不同蛋白組成，是各種外毒素進行分泌的蛋白質分子機械；(3)icsA，icsB及virA基因產物參與致病菌進行細胞到細胞傳播的過程。由此可見，痢疾桿菌對腸道上皮細胞的侵襲需要進行多種蛋白的大量物合成，對細菌的代謝過程造成很大的負擔。因此，痢疾桿菌侵襲腸道上皮細胞的激活過程顯然需要嚴格的控制。只有在特定的環境信號的刺激下(如中性的PH值和生理溫度等)，侵襲過程才能夠啟動。在環境溫度不適宜的條件下，痢疾毒力基因的轉錄受到染色體編碼的H-NS蛋白的抑制。H-NS蛋白屬于痢疾桿菌全局的轉錄負調控因子。HN-S可結合啟動子上游A+T富集DNA區段但并不識別特異DNA堿基序列。當細菌檢測到適宜的環境信號，如生理溫度(37°C)和生理pH (7.4)，位于毒力大質粒的VirF基因被激活，其蛋白產物VirF蛋白繼而激活virB基因的表達。VirB蛋白可解除H-NS介導的轉錄抑制,從而激活大質粒上其他毒力基因的轉錄和表達，引發痢疾桿菌的侵襲。
[0004]VirB基因編碼一個較小的堿性蛋白(35kDa)。其氨基酸序列同源比對分析表明VirB蛋白與所有已知的轉錄調控因子具有很小的同源性，但與質粒分割蛋白ParB，SopB蛋白具有明顯的同源性。然而，質粒分割蛋白和轉錄調控因子在生物學功能上截然不同，VirB蛋白并不參與質粒分割過程，VirB蛋白是如何完成毒力基因的轉錄激活成為了科學界多年研究的熱點。

【發明內容】

[0005]本發明的目的是提供VirB蛋白的核心結構域及其編碼基因和應用。
[0006]本發明提供了 VirB core片段或具有所述VirB core片段的融合蛋白；所述VirBcore片段為如下(a)或(b): Ca)由序列表中序列I自N末端第22至143位氨基酸殘基組成的蛋白質；(b)將(a)經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有與DNA結合的活性的由其衍生的蛋白質。
[0007]所述融合蛋白可為如下(C)或(d): (C)由序列表中序列I所示的氨基酸序列組成的蛋白質；(d)將(C)經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有與DNA結合的活性的由其衍生的蛋白質。
[0008]編碼所述VirB core片段的基因也屬于本發明的保護范圍。所述基因可為如下
(I)或(2)或(3)或(4)所述的DNA分子:(I)序列表的序列2自5’末端第64至429位核苷酸所示的DNA分子；(2)序列表的序列2自5’末端第64至432位核苷酸所示的DNA分子；(3)在嚴格條件下與(I)或(2)限定的DNA序列雜交且編碼具有與DNA結合的活性的蛋白的DNA分子；(4)與(I)或(2)限定的DNA序列至少具有90%以上同源性且編碼具有與DNA結合的活性的蛋白的DNA分子。上述嚴格條件可為在6XSSC，0.5%SDS的溶液中，在65°C下雜交，然后用2XSSC、0.1%SDS和1XSSC、0.1%SDS各洗膜一次。
[0009]編碼所述融合蛋白的基因也屬于本發明的保護范圍。所述基因可為如下(5)或
(6)或(7)或(8)所述的DNA分子:(5)序列表的序列2自5’末端第I至429位核苷酸所不的DNA分子；(6)序列表的序 列2所不的DNA分子；(7)在嚴格條件下與(5)或(6)限定的DNA序列雜交且編碼具有與DNA結合的活性的蛋白的DNA分子；(8)與(5)或(6)限定的DNA序列至少具有90%以上同源性且編碼具有與DNA結合的活性的蛋白的DNA分子。上述嚴格條件可為在6XSSC，0.5%SDS的溶液中，在65°C下雜交，然后用2XSSC、0.1%SDS和I X SSC、0.1%SDS 各洗膜一次。
[0010]含有編碼所述VirB core片段的基因的表達盒、重組載體、轉基因細胞系或重組菌均屬于本發明的保護范圍。
[0011]含有編碼所述融合蛋白的基因的表達盒、重組載體、轉基因細胞系或重組菌均屬于本發明的保護范圍。
[0012]本發明還保護所述VirB core片段或所述融合蛋白在制備用于結合DNA的產品中的應用。所述DNA具體可為實施例4的步驟一中的三種雙鏈DNA分子。
[0013]本發明還保護一種用于結合DNA的產品，其活性成分為所述VirB core片段或所述融合蛋白。所述DNA具體可為實施例4的步驟一中的三種雙鏈DNA分子。
[0014]本發明還保護所述VirB core片段或所述融合蛋白在制備用于識別DNA的產品中的應用。所述DNA具體可為實施例4的步驟一中的三種雙鏈DNA分子。
[0015]本發明還保護一種用于識別DNA的產品，其活性成分為所述VirB core片段或所述融合蛋白。所述DNA具體可為實施例4的步驟一中的三種雙鏈DNA分子。
[0016]實施例4的步驟一中的三種雙鏈DNA分子為單鏈DNA分子icsB-for_26和單鏈DNA分子icsB-rev-26組成的雙鏈DNA分子icsB，單鏈DNA分子micsB-for_26和單鏈DNA分子micsB-rev-26組成的雙鏈DNA分子micsB或單鏈DNA分子A-for-26和單鏈DNA分子A-rev-26組成的雙鏈DNA分子A。
[0017]icsB-for-26:5’ -AAA CTCGTTTCATCATGAAATCCCAC-3’ ；
[0018]icsB-rev-26:3， -GAGCAAAGTAGTACTTTAGGGTG TTT-5，。
[0019]micsB-for-26:5’ -AAA CTCGTTTCATCGCTGGGCCCCAC-3’ ；
[0020]micsB-rev-26:3’ -GAGCAAAGTAGCGACCCGGGGTG TTT-5，。
[0021]A-for-26:5， -AAA AAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA-3，；
[0022]A-rev-26:3’ _τττττττττττττττττττττττ χχχ TTT-5’。
[0023]在細菌性痢疾的廣泛流行過程中，痢疾桿菌已經出現了耐藥性。然而目前尚缺乏疫苗和藥物設計的新思路。VirB是激活痢疾桿菌毒力的關鍵轉錄調控因子，因此該蛋白可能成為理想的藥物設計的靶位。VirB蛋白識別DNA的分子基礎不明，嚴重制約的這一重要的轉錄調控蛋白的工作原理以及毒力蛋白激活的分子機制的研究進展。因此，解析VirB蛋白與DNA復合物的晶體結構將有助于解決這一科學問題，基于晶體結構的藥物篩選和藥物設計將有助于開發和應用治療細菌性腹瀉的藥物。本發明提供了 VirB蛋白的核心結構域，并在分子水平上揭示了 VirB蛋白的工作原理，將為結構導向性藥物設計提供精確和全方位的結構生物學信息。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0024]圖1為分子篩層析圖譜。
`[0025]圖2為VirB core片段溶液的SDS-PAGE電泳圖。
[0026]圖3為硒代VirB core/BrU-1csB晶體的Rikagu衍射結果。
[0027]圖4為天然VirB core/icsB晶體與VirB core/BrU-1csB晶體的晶體結構照片。
[0028]圖5為天然VirB core/icsB晶體的晶格排列方式。
[0029]圖6為VirB Core與icsB復合物的結構。
[0030]圖7為顯示VirB Core蛋白結合Box2模序的圖片。
[0031]圖8為天然VirB core/icsB晶體中，顯示HTH模序與DNA磷酸骨架結合的圖片。
[0032]圖9為天然VirB core/icsB晶體中，高分辨率清晰的定位出的52個核苷酸。
[0033]圖10為大溝和小溝寬度的變化。
[0034]圖11為實施例4中的電泳圖。
【具體實施方式】
[0035]以下的實施例便于更好地理解本發明，但并不限定本發明。下述實施例中的實驗方法，如無特殊說明，均為常規方法。下述實施例中所用的試驗材料，如無特殊說明，均為自常規生化試劑商店購買得到的。以下實施例中的定量試驗，均設置三次重復實驗，結果取平均值。
[0036]本發明的發明人基于大量實驗和驗證工作，發現了 VirB蛋白的核心結構域及其編碼基因以及它們的特性。VirB蛋白的核心結構域又稱VirB core片段或VirB core蛋白，如序列表的序列I自N末端第22至143位氨基酸殘基所示。VirB蛋白的核心結構域的編碼基因，又稱VirB core基因，如序列表的序列2自5’末端第64至429位核苷酸所示。[0037]質粒pET_28a(+):Novagen:69864-3。大腸桿菌 Rosseta:Novagen:71402-4。
[0038]實施例l、VirB core片段的制備
[0039]一、重組質粒的構建
[0040]將序列表的序列2自5’末端第64至429位核苷酸所示的雙鏈DNA分子插入質粒pET-28a(+)的Ndel和Xhol酶切位點之間，得到重組質粒pET28a_VirB core。重組質粒pET28a-VirB core中，外源基因與質粒pET_28a (+)中的部分核苷酸形成序列表的序列2所示的融合基因，表達序列表的序列I所示的融合蛋白(序列I中，自N末端第5至10位氨基酸殘基組成His標簽，第22至143位氨基酸殘基組成VirB core片段)
[0041]二、VirB core 片段的制備
[0042]1、將步驟一得到的重組質粒pET28a_VirB core導入大腸桿菌Rosseta的感受態細胞，得到重組菌。
[0043]2、將步驟I得到的重組菌的單克隆接種至20ml含50mg/L卡那霉素和50mg/L氯霉素的LB液體培養基，37°C、220rpm振蕩培養過夜。
[0044]3、取20ml步驟2得到的菌液，以1:50的體積比接種至IL含50mg/L卡那霉素和50mg/L氯霉素的LB液體培養基，37°C、180rpm培養至OD6citlnm=L 2后放置冰上；冰上放置半小時后加入IPTG并使其濃度為0.5mmol/L, 18°C、180rpm振蕩培養12小時。
[0045]4、取完成步驟3的培養體系，4000rpm離心15min，收集菌體，用100ml高鹽裂解液(溶劑為pH7.5、50mM的Tris-HCl緩沖液，含2M NaClU2mM咪唑、0.1%β -巰基乙醇和ImMPMSF)重懸，然后在冰上進 行超聲波破碎(功率600W，作用5s，間隔5s，99次)，然后15000rpm離心30min，取上清液，用0.45 μ m濾膜過濾并收集濾液。
[0046]5、將步驟4得到的濾液上樣于鎳柱，先用10倍柱體積的除雜液(溶劑為水，含150mMNaCl、50mM Tris、12mM咪唑，pH7.5)洗脫以去除雜蛋白，再用洗脫液(溶劑為水，含75mM NaCl、50mM Tris、250mM咪唑、0.1%β -巰基乙醇，pH7.5)洗脫以收集目的蛋白，取過柱后的洗脫液，用0.45 μ m濾膜過濾并收集濾液。
[0047]6、將步驟5得到的濾液上樣并進行陽離子交換層析。
[0048]陽離子交換層析采用Hitrap SP HP層析柱，柱子型號為L 6X2.5cm ;用洗脫液(溶劑為PH7.0、50mM的tris緩沖液，含IM NaCl)進行洗脫(5，)，流速為1.5ml/min,收集保留體積為54mL-88mL之間的過柱后洗脫液。
[0049]7、取步驟6得到的過柱后洗脫液，采用截留分子量為10KD的超濾濃縮管進行超濾濃縮，得到Iml左右的濃縮液。
[0050]8、將步驟7得到的濃縮液上樣并進行分子篩層析。
[0051]分子篩層析采用Superose6層析柱,柱子型號為Superose6, 10/300GL ;用洗脫液(溶劑為PH7.5、20mM的tris緩沖液，含150mM NaCl)進行洗脫，流速為0.5ml/min,收集保留體積為16.5mL-22.5mL之間的過柱后洗脫液。層析圖譜見圖1。
[0052]9、取步驟8得到的過柱后溶液，采用截留分子量為10KD的超濾濃縮管進行超濾濃縮，得到約ImL的溶液(蛋白濃度約為13mg/ml )，將其命名為VirB core片段溶液。VirBcore片段溶液的SDS-PAGE電泳圖見圖2。
[0053]實施例2、硒代VirB core片段的制備
[0054]1、將實施例1的步驟一得到的重組質粒pET28a_VirB core轉化大腸桿菌B834,得到重組菌。
[0055]2、將步驟I得到的重組菌的單克隆接種至3ml含50 μ g/ μ L卡那霉素的LB液體培養基，37°C、250rpm振蕩培養過夜。
[0056]3、取步驟2得到的菌液，接種至200mL含50 μ g/ μ L卡那霉素的LB液體培養基，37°C、250rpm培養12小時，離心收集菌體沉淀。
[0057]4、制備硒代甲硫氨酸培養基:(I)從試劑套裝(Molecular dimensions公司，貨號MD12-501B)中稱取86.4克medium base，溶解于4L超純水，121 °C高壓滅菌15分鐘，冷卻后4°C保存；(2)從試劑套裝中稱取 20.4 克 nutrient mix (Molecular dimensions 公司，貨號MD12-502)，溶解于200ml超純水，0.22 μ m濾膜抽濾除菌，4°C保存；(3)使用前，將步驟
(I)和步驟(2)的培養基分別恢復至室溫,按照每IL medium base培養基加50ml nutrientmix培養基的配比混合。
[0058]5、在通風櫥中配制硒代甲硫氨酸儲液,方法如下:用Iml超純水溶解IOOmg硒代甲硫氨酸，加入50 μ I濃鹽酸幫助溶解。
[0059]6、用4L步驟4得到的培養基重懸步驟3得到的菌體沉淀，按照每升培養體系加入500 μ I硒代甲硫氨酸儲液的配比加入硒代甲硫氨酸儲液,振蕩混勻，于37°C、180rpm振蕩培養至OD6citlnm=L 2 ;加入IPTG并使其濃度為500 μ mol/L, 16°C、180rpm振蕩培養12小時。
[0060]然后依次進行實施例1的步驟二的4至9，得到蛋白濃度約為13mg/ml的蛋白溶液，將其命名為硒代VirB core片段溶液。
[0061]用硒原子取代蛋白質分子中甲硫氨酸的硫原子可以產生便于利用的X-射線異常衍射，用于推定蛋白質晶體的相位。
[0062]實施例3、VirB core片段與DNA分子形成的復合物的晶體解析
[0063]一、復合物的組裝
[0064]1、分別合成單鏈DNA分子甲和單鏈分子乙，將每種單鏈DNA分子分別溶解在PH8.5、IOOmM的Tris緩沖液中并使其濃度為100 μ Μ，然后將兩種單鏈DNA分子溶液等體積混合，95°C孵育10分鐘，自然冷卻至4°C，得到雙鏈DNA分子溶液(icsB溶液)。
[0065]單鏈DNA 分子甲:5’ -AAA CTCGTTTCATCATGAAATCCCAC-3’ ；
[0066]單鏈DNA 分子乙:3’ -GAGCAAAGTAGTACTTTAGGGTG TTT-5，。
[0067]2、將實施例1得到的VirB core片段溶液和步驟I得到的雙鏈DNA分子溶液按照蛋白和DNA等摩爾的配比混合，冰上孵育3個小時。
[0068]3、分別合成單鏈DNA分子丙和單鏈分子丁，將每種單鏈DNA分子分別溶解在PH8.5、IOOmM的Tris緩沖液中并使其濃度為100 μ Μ，然后將兩種單鏈DNA分子溶液等體積混合，95°C孵育10分鐘，自然冷卻至4°C，得到雙鏈DNA分子溶液(BrU_icsB溶液)。
[0069]單鏈DNA 分子丙:5’ -AAA CbrUCGITTCATCATGAAAbrUCCCAC-3’ ；
[0070]單鏈DNA 分子丁:3’ -G AGCAAAGTAGTACTTT AGGGTG TTT-5’。
[0071 ] 4、將實施例2得到的硒代VirB core片段溶液和步驟3得到的雙鏈DNA分子溶液按照蛋白和DNA等摩爾的配比混合，冰上孵育3個小時。
[0072]5、分別取步驟2的產物和步驟4的產物，在優化條件(即0.1M MgCl2, 0.1M醋酸鈉，PH4.6，28%PEG400)下獲得其晶體結構。硒代VirB core/BrU-1csB晶體在瑞士 PSIX06DA線站收集。數據處理與整合使用XDS軟件包(Kabsch，ff.Xds.[J].ActaCrystallogr D Biol Crystallogr.201066，125-32)。砸代 VirB core/BrU-1csB 晶體經過數據處理定義空間群分別為P21212。在每個非對稱單元中，一個蛋白分子對應一個DNA分子。使用SHLEX C/D/E計算重原子的位置(在砸代VirB core/BrU-1csB晶體中定位到一個砸原子和2個溴原子)并推導計算相位(Sheldrick，G.M.Experimental phasingwith SHELXC/D/E: combining chain tracing with density modification.[J]ActaCrystallogr D Biol Crystallogr.2010，479-85.)。最后產生完整的電子密度云圖。使用 Coot (Emsleyj P.&Cowtan, K.Coot:model-building tools for molecular graphics.[J].Acta Crystallogr D Biol Crystallogr.2004.60，2126-32.)進行手動建模。天然VirB core/icsB晶體通過分子置換(以砸代蛋白和溴代DNA作為最初的模型)解析結構(Phaser, CCP4package) (McCoy, A.J.et al.Phaser crystallographic software.[J].JAppl Crystallogr.2007.40，658-674)。最后通過 PHENIX (Adams，P.D.et al.PHENIX:acomprehensive Python-based system for macromoIecuIar structure solution.[J].Acta Crystallogr D BiolCrystallogr.2010.66，213-21)來優化整個結構。
[0073]砸代VirB core/BrU-1csB晶體的Rikagu衍射結果見圖3和表1。晶體結構照片見圖4。砸代蛋白和漠代DNA重復出了與天然蛋白同樣大小和1?質量的晶體。
[0074]表1晶體數據
[0075]
【權利要求】
1.VirB core片段或具有所述VirB core片段的融合蛋白；所述VirB core片段為如下(a)或(b):(a)由序列表中序列I自N末端第22至143位氨基酸殘基組成的蛋白質；(b)將(a)經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有與DNA結合的活性的由其衍生的蛋白質。
2.如權利要求1所述的融合蛋白，其特征在于:所述融合蛋白為如下(c)或(d):(c)由序列表中序列I所示的氨基酸序列組成的蛋白質；(d)將(c)經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有與DNA結合的活性的由其衍生的蛋白質。
3.編碼權利要求1所述VirBcore片段的基因或編碼權利要求1所述融合蛋白的基因。
4.如權利要求3所述的基因，其特征在于:所述基因為如下(I)或(2)或(3)所述的DNA分子:(I)序列表的序列2自5’末端第64至429位核苷酸所示的DNA分子；(2)序列表的序列2自5’末端第64至432位核苷酸所示的DNA分子；(3)在嚴格條件下與(I)或(2)限定的DNA序列雜交且編碼具有與DNA結合的活性的蛋白的DNA分子；(4 )與(I)或(2 )限定的DNA序列至少具有90%以上同源性且編碼具有與DNA結合的活性的蛋白的DNA分子。
5.如權利要求3所述的基因，其特征在于:所述基因為如下(5)或(6)或(7)或(8)所述的DNA分子:(5)序列表的序列2自5’末端第I至429位核苷酸所示的DNA分子；(6)序列表的序列2所示的DNA分子；(7)在嚴格條件下與(5)或(6)限定的DNA序列雜交且編碼具有與DNA結合的活性的蛋白的DNA分子；(8)與(5)或(6)限定的DNA序列至少具有90%以上同源性且編碼具有與DNA結合的活性的蛋白的DNA分子。
6.含有權利要求3或4或5所述基因的表達盒、重組載體、轉基因細胞系或重組菌。
7.VirB core片段或具有所述VirB core片段的融合蛋白在制備用于結合DNA的產品中的應用；所述VirB core片段為如下(a)或(b): (a)由序列表中序列I自N末端第22至143位氨基酸殘基組成的蛋白質；(b)將(a)經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有與DNA結合的活性的由其衍生的蛋白質。
8.一種用于結合DNA的產品，其活性成分為VirB core片段或具有所述VirB core片段的融合蛋白；所述VirB core片段為如下(a)或(b): (a)由序列表中序列I自N末端第22至143位氨基酸殘基組成的蛋白質；(b)將(a)經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有與DNA結合的活性的由其衍生的蛋白質。
9.VirB core片段或具有所述VirB core片段的融合蛋白在制備用于識別DNA的產品中的應用；所述VirB core片段為如下(a)或(b): (a)由序列表中序列I自N末端第22至143位氨基酸殘基組成的蛋白質；(b)將(a)經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有與DNA結合的活性的由其衍生的蛋白質。
10.一種用于識別DNA的產品，其活性成分為VirB core片段或具有所述VirB core片段的融合蛋白；所述VirB core片段為如下(a)或(b):(a)由序列表中序列I自N末端第22至143位氨基酸殘基組成的蛋白質；(b)將(a)經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有與DNA結合的活性的由其衍生的蛋白質。
【文檔編號】C12N5/10GK103483429SQ201310311252
【公開日】2014年1月1日 申請日期:2013年7月23日 優先權日:2013年7月23日
【發明者】崔勝 , 高小攀, 鄒婷婷, 牟志霞, 秦博 申請人:中國醫學科學院病原生物學研究所