一種解淀粉芽孢桿菌及其在防治植物果腐病中的應用的制作方法
【專利摘要】本發明公開了一種解淀粉芽孢桿菌，其分類命名為解淀粉芽孢桿菌（Bacillus?amyloliquefaciens）JSNL1312，在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，保藏編號為CGMCC?No.7740，保藏日期為2013年6月13日。本發明還公開了上述解淀粉芽孢桿菌在防治無花果、鐵皮石斛等植物果腐病中的應用。本發明解淀粉芽孢桿菌JSNL1312對無花果果實、鐵皮石斛果實上的多種病原真菌具有抑制作用；且能夠人工培養，繁殖速度快，便于進行規模化生產，具有良好的開發應用前景。
【專利說明】一種解淀粉芽孢桿菌及其在防治植物果腐病中的應用
【技術領域】
[0001]本發明屬于微生物【技術領域】，具體涉及一種解淀粉芽孢桿菌及其在防治植物果腐病的應用。
【背景技術】
[0002]無花果(Ficuscarica Linn)屬桑科(Moraceae)無花果屬(Ficus L.)植物,原產于亞洲西南部和地中海東部地區，是古老的漿果樹種，肉質松軟，風味甘甜，現在廣泛種植于地中海的大多數國家和加利福尼亞，具有很高的營養價值和藥用價值。近年來，江蘇省的無花果產品市場發展很快，尤其蘇南地區，無花果果脯、果茶、果酒等產品供不應求，無花果產業面臨難得的市場機遇。但是無花果果實病害已成為限制無花果采后貯藏期和貨架期長短的重要因素，主要包括黑粉病、黑斑病、無花果內腐病和酸腐病等，不僅影響無花果果實的質量，而且嚴重影響無花果采后的貯藏和銷售。其中，疫霉引起的無花果內腐病危害較為嚴重。
[0003]鐵皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)為多年生附生草本,是一種集栽培和觀賞于一體的植物，為珍稀名貴的中藥材，一直與靈芝、人參、冬蟲夏草等被列為上品中藥，被譽為“中華九大仙草”之首。鐵皮石斛具有滋陰清熱、養胃生津、潤肺止咳等功效，其所含的多糖成分具有增強人體免疫功能，現代醫學證明，鐵皮石斛還具有抗腫瘤、抗衰老、增強機體免疫力和有效減輕肝損傷等作用。由于鐵皮石斛喜濕度大的環境，莢果腐爛病的發生較為嚴重，對其繁殖后代產生較大影響。
[0004]因此，尋找一種經濟、安全、有效的防治措施是當務之急，生物防治不失為重要的輔助手段，其中生防細菌在植物病害生物防治中起到非常重要的作用，具有危害小、使用安全等優點，可以用于防治各種植物病害，其主要優勢在于:
[0005](I)種類和數量眾多，在植物體內外大量存在；
[0006](2)對病原菌的作用方式多樣化，包括競爭、拮抗、寄生、誘導植物抗性產生等；
[0007](3)繁殖速度快；
[0008](4)大多細菌在植物體內外定殖力強；
[0009](5)能夠人工培養，易于操作，便于生產應用；
[0010](6)有些細菌菌株不僅能夠防治病害而且可以促進植物的生長，增加作物的產量。
[0011]目前對各種植物病害的防治尚無非常理想的生防藥劑，如果能使用生物農藥或盡量少的使用農藥對植物病害進行有效防治，將在一定程度上降低農藥殘留，大大提高其食用安全性。從保護生態環境和食品安全的角度出發，鐵皮石斛、無花果果實均為可食性植物，其生產過程需要低毒、低污染，以達到安全食用的目的，這也符合農業的可持續發展戰略。尤其是進入21世紀以來，各國政府和民眾更加重視生物農藥的開發和應用，生物農藥產業被認為是未來經濟中具有發展潛力的新增長點之一。
【發明內容】
[0012]本發明所要解決的技術問題是提供一種對鐵皮石斛、無花果果腐病具有生物防治作用的解淀粉芽孢桿菌。
[0013]本發明還要解決的技術問題是提供上述解淀粉芽孢桿菌在防治鐵皮石斛、無花果果腐病中的應用。
[0014]為解決上述技術問題，本發明采用的技術方案如下:
[0015]高效防治鐵皮石斛、無花果果腐病的解淀粉芽孢桿菌，其分類命名為解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens) JSNL1312,是2011年10月在江蘇省句容市無花果栽植區內感病植株上分離獲得的，該菌株對鐵皮石斛、無花果果腐病具有顯著的拮抗作用，目前該菌株已保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCCN0.7740，保藏日期為2013年6月13日。保藏地址為北京市朝陽區北辰西路I號院3號中國科學院微生物研究所，郵編100101。
[0016]解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens) JSNL1312的生理活性特征如下:
[0017]解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens) JSNL1312在牛肉膏蛋白胨培養基平板上菌落較小，淡黃色，直徑一般3~5mm，圓形，邊緣不整齊，光滑濕潤，產淡黃色色素，菌體桿狀，大小為0.8X (I~2) ym，頂生一根或三根鞭毛。革蘭氏染色表現為陰性；葡萄糖氧化發酵反應(0/F反應)結果為氧化產酸、好氧；氧化酶反應為弱陽性。其16sRNA序列如SEQ ID No:1所示。
[0018]上述解淀粉芽孢桿菌在防治植物果腐中的應用，所述的植物為鐵皮石斛或無花果。
[0019]將解淀粉芽抱桿菌(Bacillus amyloliquefaciens) JSNL1312接種于發酵培養基中，在28°C _35°C下發酵培養48-60小時，得到的發酵液作為防治鐵皮石斛、無花果果腐病的菌劑。
[0020]本發明中所述發酵培養基的配方為:1000mL蒸餾水，牛肉膏2_5g，蛋白胨5-10g，氯化鈉 4-5g，pH6.5-8.0。
[0021]有益效果:與現有技術相比，本發明的優點是:
[0022](I)解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens) JSNL1312 對多種植物病原菌具有抑制作用，在拮抗細菌對植物病害生物防治中起到非常重要的作用，便于生產應用，尤其是對真菌引起的鐵皮石斛、無花果果腐病的防治具有重要意義，也是保證食用安全的重要手段。
[0023](2)解淀粉芽抱桿菌(Bacillus amyloliquefaciens) JSNL1312 培養條件簡單、容易保存，易于工業化生產，具有良好的開發應用前景。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0024]圖1為解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens) JSNL1312對無花果果腐病病原菌木賊鐮刀菌(Fusarium equiseti)的室內平板對峙效果。其中A是解淀粉芽孢桿菌對病原菌的室內平板對峙圖病原菌單接種圖片(CK)，以下同。
[0025]圖2為解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens) JSNL1312對鐵皮石斛果腐病病原菌龍眼焦腐病菌(Lasiodiplodia theobromae)的室內平板對峙效果。【具體實施方式】
[0026]根據下述實施例，可以更好地理解本發明。然而，本領域的技術人員容易理解，實施例所描述的內容僅用于說明本發明，而不應當也不會限制權利要求書中所詳細描述的本發明。
[0027]實施例1:
[0028]解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)JSNL1312對鐵皮石斛、無花果果腐病病原菌的平板抑菌作用。
[0029]將用LB 斜面活化的解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens) JSNL1312菌株對稱接種于PDA平板的兩側，再將鐵皮石斛、無花果果腐病病原菌的PDA平板培養物用直徑5mm的打孔器打取同質同量的菌餅，接種于平板中央。27±1°C培養10天觀察抑菌效果，并拍照記錄，實驗效果如圖1-圖2、表1所示。結果表明，解淀粉芽孢桿菌Bacillusamyloliquefaciens JSNL1312對2種病原菌均有明顯的拮抗作用。用單接病原菌的PDA平板作為對照。
[0030]表1JSNL1312對2種病原菌的抑制效果
【權利要求】
1.一種解淀粉芽孢桿菌，其分類命名為解淀粉芽孢桿菌(Bacillusamyloliquefaciens) JSNL1312,現已保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC N0.7740，保藏日期為2013年6月13日。
2.權利要求1所述的解淀粉芽孢桿菌在防治植物果腐病中的應用，所述的植物為鐵皮石斛或無花果。
3.根據權利要求2所述的應用，其特征在于，將解淀粉芽孢桿菌(Bacillusamyloliquefaciens)JSNL1312接種于發酵培養基中，在28°C_35°C下發酵培養48-60小時，得到的發酵液作為防治鐵皮石斛、無花果果腐病的菌劑。
4.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，所述的發酵培養基的配方為:1000mL蒸餾水，牛肉膏2-5g，蛋白胨5-10g，氯化鈉4-5g，pH6.5-8.0。
【文檔編號】C12N1/20GK103602606SQ201310253591
【公開日】2014年2月26日 申請日期:2013年6月24日 優先權日:2013年6月24日
【發明者】徐超, 白玉梅, 席剛俊, 張紅巖, 楊鶴同 申請人:江蘇農林職業技術學院