專利名稱：一種金屬配合物核酸熒光探針的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種核酸熒光探針，可以用于核酸等磷酸衍生物的熒光檢測，屬于生物檢測技術領域。
背景技術：
核酸是生命的遺傳物質，在生命活動中起重要作用。核酸的檢測在疾病診斷、環境微生物鑒定、適配體等領域有重要應用。因此，發展核酸的熒光檢測探針意義重大。傳統的核酸熒光探針有EB、YOYO, Τ0Τ0、Sybr Green、DAPI及Hoechst染料，用于雙鏈的DNA的檢測，靈敏度很高，但是對于單鏈DNA，特別是短鏈單鏈DNA的檢測效果很差。目前文獻中有一些單鏈DNA熒光探針的報道，主要是帶有季銨鹽基團的分子，這類分子通過靜電作用結合DNA，從而使熒光增強。這類分子有兩個主要不足:首先靜電作用是比較弱的分子間作用，這直接導致探針的靈敏度很低，難以與傳統雙鏈探針相比；其次，探針分子容易受其他電解質的干擾，例如帶負電荷的蛋白質也可以以靜電作用結合探針，從而干擾了 DNA的檢測。這兩個缺點限制了這些探針分子的實際應用，因而目前對于單鏈DNA還沒有足夠靈敏的熒光染料以取代熒光標記或同位素標記的DNA探針，特別是在核酸電泳的應用中，熒光標記或者同位素標記的核酸探針成本高，操作復雜，而傳統的核酸熒光染料難以有效對單鏈核酸顯色，因而發展單鏈核酸的熒光染料可以大大降低核酸的檢測成本，意義重大。
發明內容
本發明要解決的問題在于針對現有技術的不足，提供一類高靈敏度的核酸探針，無論是對雙鏈DNA，還是單鏈DNA都有較好的熒光響應。本發明設計的探針分子，以配位鍵結合單鏈核酸，結合后使探針分子的構象錨定在核酸上，進而引起熒光增強，從而起到檢測的作用。由于核酸是磷酸二酯聚合物，每個單元含有一個磷氧四面體的結構，所以我們選擇能夠跟其以配位方式結合的基團:二(2-吡啶甲基)胺基-鋅(II)(簡稱DPA-Zn (II))，我們將這個基團接在一些熒光分子上，通過與DNA特異配位，限制分子的構象，抑制分子的非輻射躍遷，從而使發色團的熒光增強。本發明所提供的核酸熒光探針，這類化合物的結構通式如下所示:
權利要求
1.一類化合物，結構式如下:
2.根據權利要求1所述的化合物，其特征在于，其結構是:
3.根據權利要求1所述的化合物，其特征在于，其結構是:
4.根據權利要求1所述的化合物，其特征在于，其結構是:
5.權利要求1所述的化合物用作磷酸及磷酸衍生物的檢測試劑。
6.權利要求1所述的化合物用作核酸的檢測試劑。
7.權利要求1所述的化合物用作核酸凝膠電泳或細胞成像的顯色劑。
8.權利要求1所述的化合物的中間體，結構式如下:
全文摘要
本發明公開了一種新型核酸熒光探針，結構為將DPA或DPA-Zn(II)基團與四苯乙烯相連。DPA-Zn(II)在溶液中可以與核酸等磷酸衍生物結合，抑制分子的非輻射躍遷，從而發熒光。該熒光探針可用于核酸的檢測，無論是對雙鏈DNA，還是單鏈DNA檢測都有較高靈敏度。將此類探針應用于凝膠電泳或生物樣品中核酸的檢測和顯色具有較好的應用前景。
文檔編號C12Q1/68GK103214501SQ20131012717
公開日2013年7月24日 申請日期2013年4月12日 優先權日2013年4月12日
發明者楊楚羅, 朱策澤 申請人:武漢大學