專利名稱：接種法提高茯磚茶發花率制備工藝的制作方法
技術領域：
本發明涉及農產品加工技術領域，具體涉及一種接種法提高茯磚茶發花率制備工藝，其發花所述的花即冠突散囊菌(及woiia cristarum (Raper & Fennell) Malloch &Cain),俗稱金花。
背景技術：
茯磚茶是邊疆少數民族不可缺少的重要飲料。金花普遍茂盛、色澤鮮艷金黃、顆粒肥大歷來是優質茯磚茶的最重要品質特征。金花是在茯磚茶加工過程中發花階段形成的。過去，對茯磚茶發花技術研究只停留在自然狀態下控制溫度、濕度發花工藝上，發花率較低，因而亟待研制一種提高茯磚茶發花率的具體工藝。
發明內容
本發明所要解決的技術問題是:解決上述現有技術存在的問題，在不改變現有茯磚茶生產線條件下而提供一種接種法提高茯磚茶發花率制備工藝，能在7-15天短期內實現發花，而且金花普遍茂盛，色澤鮮艷金黃，顆粒肥大，用不同黑毛茶原料其發花率均能達到 100%O本發明采用的技術方案是:
一種接種法提高茯磚茶發花率制備工藝，具體步驟如下:
①冠突散囊菌的純化分離；
②一定老化度冠突散囊菌孢子懸液制備與濃度確定；
③黑毛茶樣品的處理；
④添加冠突散囊菌孢子懸液；
⑤壓制；
⑥發花；
⑦干燥和保存。上述技術方案中，所述的冠突散囊菌的純化分離為:用添加10%茯磚茶茶汁的PDA瓊脂固體培養基平板梯度稀釋分離；所述的一定老化度冠突散囊菌孢子懸液制備與濃度確定為:挑取純化的金花菌落，接種至添加10%茯磚茶茶汁、20%蔗糖和10%NaCl的PDA液體培養基培養，28°C靜置培養2天，然后升高溫度至30-32°C培養12-28天，震蕩分散孢子，無菌水稀釋孢子懸液濃度控制在IO7-1O8個/mL ;所述的黑毛茶樣品的處理為:將黑毛茶按照傳統處理方式分篩、拼配、渥堆、發酵處理；所述的添加冠突散囊菌孢子懸液:添加量為0.25mL/100g，添加時機為壓制前；所述的壓制、發花、干燥及發花后保存條件均按照傳統處理方式。PDA 指 Potato Dextrose Agar 的簡稱。PDA瓊脂固體培養基指將馬鈴薯洗凈去皮，稱取200g，切成小塊放入燒杯中，加適量蒸餾水，煮沸I小時，稍冷后用雙層紗布過濾，在濾液中加入15g瓊脂，加熱熔化，最后加入蔗糖20g，混勻，用量筒定容至IOOOmL,趁熱分裝在三角瓶中，在1.1 kg/cm2 (121°C)中保持20分鐘滅囷。PDA液體培養基指上述培養基配制過程操作，但不添加瓊脂。PDA瓊脂固體培養基平板指上述培養基滅菌結束后冷卻至50°C左右，在超凈工作臺上將培養基倒入事先已經滅菌并干燥的培養皿中，待冷卻即為制得的PDA瓊脂固體培養基平板。添加10%茯磚茶茶汁的PDA固體培養基指將馬鈴薯洗凈去皮，稱取200g，切成小塊放入燒杯中，加適量蒸餾水，煮沸I小時，稍冷后用雙層紗布過濾，在濾液中加IOOmL制備好的茯磚茶茶汁，然后加入15g瓊脂，加熱熔化，最后加入蔗糖20g混勻，用量筒定容至IOOOmL,趁熱分裝在三角瓶中，在1.lkg/cm2(12rC )中保持20分鐘滅菌。滅菌結束后冷卻至50°C左右，在超凈工作臺上將10%茯磚茶茶汁的PDA瓊脂固體培養基倒入事先已經滅菌并干燥的培養皿中，待冷卻即為制得的10%茯磚茶茶汁的PDA瓊脂固體培養基平板。10%茯磚茶茶汁的PDA液體培養基與上述操作過程相同，但不添加瓊脂。平板梯度稀釋法為:
將成品茯磚樣本用植物微型粉碎機將樣品粉碎，200目過篩、65°C干燥2小時后稱取Ig樣品，定容IOmL,即配成I X 10 — i/mL的獲磚樣本溶液,從上述溶液中取I mL定容10 mL配成I X 10 — 'g/mL的茯磚樣本溶液，依次配制成濃度I X 10 —3、I X 10 —4、I X 10 — 5g/mL的茯磚茶樣本溶液各10 mL備用。取1X10 —3、IX 10 —4、1X10 —5g/mL的茯磚樣本溶液各0.5mL，用涂布器涂布到冠狀散囊菌快速分離培養基平板上，超凈臺上吹干15分鐘左右，倒置平皿，28°C培養，3 — 4天后挑取優勢菌——金花同樣條件培養直至純化。畫線接種指用滅菌的接種針在超凈臺上將已經生長好的菌落挑取，在新的固體培養基平皿畫線分離相應微生物。金花菌落指金花菌在10%茯磚茶茶汁PDA固體培養基平板上生長到一定時候形成的一個菌落集合體，菌落是指聚集在一起的微生物團。茯磚茶茶汁的具體制備方法:按照Ig茯磚茶樣本比30mL蒸餾水的比例稱取20g茯磚茶，加入600mL蒸餾水，100°C水浴2小時，待稍冷卻后用量筒定容至600mL即為制備好的茶汁。配成10'10'10'10'1(Γ5是指濃度，單位為g/mL。孢子懸液濃度IO7-1O8個/ml中的“個”是指單個的金花菌的子囊孢子。計數方法為用梯度稀釋法涂布在添加10%茶汁的PDA瓊脂固體培養基平板上生長計數或用722型分光光度計測量其OD值，控制在0.6左右，使金花孢子懸液濃度控制在每毫升IO7-1O8個金花孢子。本發明提供了一種在不改變現有茯磚茶生產線條件下，能在7 — 15天的短期內實現發花，而且金花普遍茂盛、色澤鮮艷金黃、顆粒肥大，茯磚茶發花率達到100%，極大地提高茯磚茶的發花率。
圖1為本發明培養7天分離純化的冠突散囊菌落照片；
圖2為本發明冠突散囊菌的孢子懸液15天培養結果照片；
圖3為極品茯磚茶、一品茯磚茶、百姓茯磚茶發花結果照片；圖4為益陽茶廠極品茯磚、一品茯磚、百姓茯磚發花率的驗證表。
具體實施例方式1.金花的分離、純化:
冠突散囊菌即金花從益陽茶廠成品湘益牌茯磚樣本中分離。具體分離和純化過程為:將成品湘益牌茯磚樣本粉碎，用平板梯度稀釋法在添加10%茯磚茶茶汁的PDA瓊脂固體培養基平板上28 °C培養直至純化。2.金花的孢子懸液制備與濃度確定:
挑取純化的金花菌落，接種至添加10%茯磚茶茶汁、20%蔗糖和10%NaCl的PDA液體培養基培養，28°C靜置培養2天，然后升高溫度至30-32°C培養12-28天，震蕩分散孢子，無菌水稀釋孢子懸液濃度控制在IO7-1O8個/mL。3.黑毛茶樣品的處理:
將黑毛茶按照按照傳統處理方式分篩、拼配、渥堆、發酵處理。4.添加金花孢子懸液:
按照每IOOg茶添加0.25mL金花孢子懸液的比例，以噴霧的形式在壓制前添加，混勻。5.壓制:
按照傳統處理方式壓制。6.發花:
控制濕度和溫度發花條件為按照傳統處理條件。7.干燥和保存:
按照傳統處理條件。實施例1:金花的分離、純化:
將成品湘益牌茯磚樣本用植物微型粉碎機粉碎，200目過篩、65°C干燥2小時后稱取Ig 樣品，定容 10mL，配成 ΙΟ'ΙΟ'ΙΟ'ΙΟ—4、10_5 各 10mL，取 10' 10_4、10_5 三個梯度各
0.5mL涂布添加10%茯磚茶茶汁的PDA瓊脂固體培養基平板，超凈臺上吹干，28°C培養3天，挑取金黃色優勢菌落，畫線至添加10%茯磚茶茶汁的PDA平板上，同樣條件繼續培養直至純化。分離純化的金花菌落見附圖1。實施例2:金花的孢子懸液制備:
挑取純化的金花菌落，接種至添加10%茯磚茶茶汁、20%蔗糖和10%NaCl的PDA液體培養基培養，28°C靜置培養2天，然后升高溫度至30-32°C培養12-28天，震蕩分散分生孢子，用雙層無菌紗布過濾，再后280rpm振蕩培養分散分生孢子，無菌水稀釋孢子懸液至OD值為
0.6，即為可用的金花孢子懸液。上述升高溫度至30— 32°C培養12 — 28天，實例:升高溫度至30°C，培養28天；或升高溫度至32°C，培養12天；或升高溫度至31°C，培養20天。金花的孢子懸液培養結果見附圖2。實施例3:益陽茶廠極品茯磚、一品茯磚、百姓茯磚的黑毛茶發花率提高的驗證 分別取益陽茶廠極品茯磚、一品茯磚 、百姓茯磚的黑毛茶各20Kg，以不接種作為對照，
按照具體實施方式
中1-7步在益陽茶廠進行發花實驗(其中第3、5、6、7步為益陽茶廠處理方法)，三種茯磚發花率均能達到100%。黑毛茶發花結果見附圖3。圖中左為極品茯磚發花，中為一品茯磚發花，右為百姓茯磚發花。其發花效率統計見圖4的驗證表。
權利要求
1.一種接種法提高茯磚茶發花率制備工藝，其特征在于:具體步驟如下: ①冠突散囊菌的純化分離； ②一定老化度冠突散囊菌孢子懸液制備與濃度確定； ③黑毛茶樣品的處理； ④添加冠突散囊菌孢子懸液； ⑤壓制； ⑥發花； ⑦干燥和保存。
2.根據權利要求1所述的接種法提高茯磚茶發花率制備工藝，其特征在于:所述的冠突散囊菌的純化分離為:用添加10%茯磚茶茶汁的PDA瓊脂固體培養基平板梯度稀釋分離；所述的一定老化度冠突散囊菌孢子懸液制備與濃度確定為:挑取純化的金花菌落，接種至添加10%茯磚茶茶汁、20%蔗糖和10%NaCl的PDA液體培養基培養，28°C靜置培養2天，然后升高溫度至30-32°C培養12-28天，震蕩分散孢子，無菌水稀釋孢子懸液濃度控制在IO7-1O8個/mL ;所述的黑毛茶樣品的處理為:將黑毛茶按照傳統處理方式分篩、拼配、渥堆、發酵處理；所述的添加冠突散囊菌孢子懸液:添加量為0.25 mL/100g，添加時機為壓制前；所述的壓制、發花、干燥及發花后保存條件均按照傳統處理方式。
全文摘要
一種接種法提高茯磚茶發花率制備工藝，具體步驟如下①冠突散囊菌的純化分離；②一定老化度冠突散囊菌孢子懸液制備與濃度確定；③黑毛茶樣品的處理；④添加冠突散囊菌孢子懸液；⑤壓制；⑥發花；⑦干燥和保存。本發明研制成功了接種法提高茯磚茶發花率制備工藝條件，使之能在7-15天短期內實現發花，而且金花普遍茂盛，色澤鮮艷金黃，顆粒肥大，用不同黑毛茶原料其發花率均能達到100%。
文檔編號A23F3/06GK103168866SQ20131011222
公開日2013年6月26日 申請日期2013年4月2日 優先權日2013年4月2日
發明者劉石泉, 趙運林, 龍立平, 徐迪軍, 劉杏益 申請人:益陽茶廠有限公司, 湖南城市學院