專利名稱：一種紫色紅曲霉及其用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及生物技術領域，具體來說涉及一種紫色紅曲霉，同時還涉及該紫色紅曲霉在產香脂液中的用途。
背景技術：
眾所 周知，中國濃香型白酒釀制傳統工藝是在窖池內進行的，酒窖愈老酒質愈好，同時，濃香型白酒是是中國白酒品種中產量最大、市場占有率最廣的一類白酒，在人們日常生活中扮演著十分重要的角色。但是，就目前而言優質濃香型白酒在生產時還面對著諸如生產周期長、優質頻率低和生產成本較高等亟待解決的問題。己酸乙酯，作為濃香型白酒的主要香味成分之一，其含量高低直接決定了濃香型白酒的優質品率。研究發現，細菌、酵母、霉菌都可以用于酯香液的生產，這類微生物被稱作酯化微生物，但是廣泛用于香酯液生產的微生物并不多。
發明內容
本發明的目的在于克服上述問題而提供的一種對己酸乙酯的酯化力高，對自然環境條件的適應范圍廣，對不良環境的耐受力強，容易培養和保存及工業化生產，生產成本低，不污染環境的紫色紅曲霉。本發明的另一目的在于提供該紫色紅曲霉在產香脂液中的用途。一種腐霉屬菌種，其形態特征:該菌株在MEA平板上，3rC，7d，菌落直徑67 70mm,菌落平坦，稀疏至中度密集，有時具有少量而且短的氣生菌絲，然而通常叢卷毛狀，菌絲體初為白色，隨菌落成熟而變成橙色；而在CA培養基平板上，菌落直徑27 30mm，菌落隆起，稀疏，表面質地呈叢毛狀，菌絲體白色，背面呈淡色或橙紅色。該囷種已于2012年10月28保減在中國典型培養物保減中心(地址:中國武漢武漢大學)，保藏號:CCTCC NO: M2012436，名稱為:紫色紅曲霉200855 (Monascuspurpureus 200855)
(一)對紫色紅曲霉200855 (.Monascus purpureus 200855)的分離步驟:
稱取25g大曲及糟醅樣品放入盛225ml無菌水并帶有玻璃珠的三角燒瓶中，振蕩約20min。取Iml樣品懸液進行10倍梯度稀釋分別由10_3、10_4、10_5稀釋度的樣品懸液中各取0.1ml涂布于分離培養基上，30°C靜止培養7d，挑取具有透明圈的單菌落進一步篩選，選擇透明圈大的菌落反復劃線分離純化菌株接種到斜面培養基上保藏.(二)培養基:
保藏培養基:麩皮浸出液培養基，麩皮250g/L，葡萄糖20g/L，酵母粉5g/L，瓊脂15g/L，pH自然。固體發酵培養基:麩皮培養基。
鑒定培養基:查氏培養基(CA)，馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基(PDA)，麥芽汁瓊脂培養基(MEA )，麩皮浸出液培養基。(三)菌種的保種和傳代:
麩皮浸出液培養基，麩皮250g/L，葡萄糖20g/L，酵母粉5g/L，瓊脂15g/L，pH自然。保存方法有3種:
(1)每周一次，從已長滿的平板上切取一塊帶菌絲的瓊脂培養基塊轉種到新的平板上。(2)用15X200mm的試管，盛瓊脂培養基5ml，做成斜面，接種真菌，25°C培養2 3天，倒IOml左右滅菌石蠟油覆蓋其上，置25°C保存。3個月轉種一次。(3)水保存法。用IOXlOOmm帶蓋試管，加蒸餾水3ml，亞麻籽3粒，高溫消毒，冷卻，無菌條件下取2帶菌絲的瓊脂塊(約50 mm2)加于其中，加蓋,置25°C,半年轉種一次。(四)菌種的生態特征:
該菌形成的菌落在MEA平板上，31°C，培養7d，菌落直徑67 70 mm，菌落平坦，稀疏至中度密集，有時具有少量而且短的氣生菌絲，然而通常叢卷毛狀，菌絲體初為白色，菌絲有隔膜，分生孢子單生，呈倒梨型8 12Χ8 11μπι;閉囊殼單身在似柄的菌絲上，直徑(2545飛O Γ70 ; ) μ m，成熟子囊果直徑在60 μ m左右，發育中的閉囊殼和分生孢子極多隨菌落成熟而變成橙色。(五)菌種的培養特性
Cl)培養溫度20°C 34°C ，最適溫度30°C 34°C ；
(2).培養pH5 12 ;最佳范圍為9 11。菌絲有隔膜，分生孢子單生，呈倒梨型8 12Χ8 11μπι;閉囊殼單身在似柄的菌絲上，直徑(25 )45飛O Γ70; ) μ m，成熟子囊果直徑在60 μ m左右，發育中的閉囊殼和分生孢子極多，根據根據真菌鑒定手冊描述，鑒定該菌株屬于紅曲屬iMonascus、,將這一菌株記為紫色紅曲霉 200855 (.Monascus purpureus 200855)。本發明與現有技術相比，具有明顯的有益效果，從以上技術方案可知:本發明的紫色紅曲霉200855對己酸乙酯的酯化力高，對溫度、pH等自然環境條件的適應范圍廣，對不良環境的耐受力強，容易培養和保存及工業化生產，生產成本低，不污染環境，不破壞生態平衡。
具體實施例方式本發明的紫色紅曲霉200855 (.Monascus purpureus 200855)分離方法:從貴州省黔東南苗族侗族自治州鎮遠縣青溪鎮五里牌貴州某酒廠酒曲中，稱取25g大曲及糟醅樣品放入盛225ml無菌水并帶有玻璃珠的三角燒瓶中，振蕩約20min。取Iml樣品懸液進行10倍梯度稀釋分別由10-3、10-4、10-5稀釋度的樣品懸液中各取0.1ml涂布于分離培養基上，30°C靜止培養7d，挑取具有透明圈的單菌落進一步篩選，選擇透明圈大的菌落反復劃線分離純化菌株接種到斜面培養基上保藏.該菌形成的菌落在MEA平板上，31°C，培養7d，菌落直徑67 70 mm，菌落平坦，稀疏至中度密集，有時具有少量而 且短的氣生菌絲，然而通常叢卷毛狀，菌絲體初為白色，菌絲有隔膜，分生孢子單生，呈倒梨型8 12Χ8 11μπι;閉囊殼單身在似柄的菌絲上，直徑(2545飛O Γ70 ;)μπι，成熟子囊果直徑在60μπι左右，發育中的閉囊殼和分生孢子極多隨菌落成熟而變成橙色。產酯能力測定:吸取50ml餾出液，加2滴5g/L酚酞指示劑，用0.lmol/L NaOH標準溶液滴定至微紅。再準確加入0.lmol/L NaOH標準溶液25ml，于沸水浴中回流皂化30min，冷卻后用0.lmol/L硫酸(1/2H2S04)標準溶液滴定到酚酞粉紅色消失為終點。根據下式計算，酯化力 mg/g= (clVl- c2V2) X144X100/50Xl/m，式中，cl，Vl 為 NaOH 標準溶液濃度與加入體積；c2，V2為硫酸(1/2 H2SO4)標準溶液的濃度于消耗體積；144為消耗Iml Imol/LNaOH標準溶液相當于己酸乙酯的質量，mg/mmol ；50為吸取餾出液體積；100為餾出液體積；5為麩曲質量，g。酯化力是以Ig干曲在3(T32°C反應IOOh所產生的己酸乙酯的毫克(mg)數表示。該菌株對己酸乙酯的酯化力達62.79mg/g,作為己酸乙酯脂肪酶產生菌有著較大的潛力。結論:從濃香大曲中得到一株產己酸乙酯脂肪酶的菌株，綜合形態特征及18rRNA系統發育分析，將菌株200855鑒定為紫色紅曲霉200855 CMonascus purpureus200855)。并且對該菌株進行了生理生化能力的研究，經測定，該菌的己酸乙酯酯化力在以見報道的文獻中處于較高水平·，可作為己酸乙酯香酯液產生菌用于工業生產。
權利要求
1.一種紫色紅曲霉200855.Monascus purpureus 200855),其特征在于所述菌種的保藏號為 CCTCC NO: M 2012436。
2.如權利要求1所述的紫色紅曲霉200855在產香脂液中的用途。
全文摘要
本發明公開了一種紫色紅曲霉及其用途，其形態特征該菌株在MEA平板上，31℃，7d，菌落直徑67～70mm，菌落平坦，稀疏至中度密集，有時具有少量而且短的氣生菌絲，然而通常叢卷毛狀，菌絲體初為白色，隨菌落成熟而變成橙色；而在CA培養基平板上，菌落直徑27～30mm，菌落隆起，稀疏，表面質地呈叢毛狀，菌絲體白色，背面呈淡色或橙紅色。本紫色紅曲霉200855對己酸乙酯的酯化力高，對自然環境條件的適應范圍廣，對不良環境的耐受力強，容易培養和保存及工業化生產，生產成本低，不污染環境。
文檔編號C12G3/02GK103146585SQ20131006338
公開日2013年6月12日 申請日期2013年2月28日 優先權日2013年2月28日
發明者邱樹毅, 胥思霞, 王曉丹, 吳海, 胡靖 申請人:貴州大學, 貴州青酒集團有限責任公司