一株納豆芽孢桿菌及其應用的制作方法
【專利摘要】本發明公開了一株納豆芽抱桿菌。該納豆芽抱桿菌為納豆芽抱桿菌(Bacillusnatto)W-0923，菌種保藏號為CCTCC：M2012496。它可以用作溶解人體血栓的保健品。本發明通過試驗表明：納豆芽抱桿菌為納豆芽抱桿菌W-0923(菌種保藏號為CCTCC：M2012496)體外溶解血栓效果顯著。
【專利說明】一株納豆芽孢桿菌及其應用
【技術領域】
[0001]本發明涉及一株納豆芽孢桿菌及其應用，屬于微生物及醫藥應用領域。 【背景技術】
[0002]當今，人類健康最大的“殺手”是心腦血管疾病，血栓是心腦血管疾病最突出的表現形式之一。血栓原本只是老年人的易發疾病，但如今亦開始呈現年輕化的趨勢。因此，開發一種治療血栓的藥物具有深遠的社會價值和廣闊的市場空間。
[0003]納豆是一種功能性風味產品，具有溶血栓的作用，從中分離出一種新的納豆芽孢桿菌，對其進行發酵培養生產具有抗血栓作用的酶制劑，能夠起到較好的針對血栓的預防、保健和治療的作用。
[0004]納豆芽孢桿菌為好氧菌，廣泛分布在水、空氣和土壤中，其在孢子狀態下穩定性良好，能耐壓、耐高溫、耐酸堿，能夠在胃酸環境下保持活性。因此，能夠廣泛應用在微生物發酵醫藥領域。本品是一種益生菌，具有無毒、無副作用、安全高效的特點，因而可以做為發酵生產抗血栓酶制劑的菌種。
【發明內容】
[0005]本發明納豆芽抱桿菌(Bacillus natto)ff-0923是從湖北恩施地區苗圃土壤中采用土壤稀釋分離法分離獲得到的，已于2012年12月4日保藏于中國典型培養物保藏中心(簡稱 CCTCC，保藏號為 CCTCC:M2012496)。
[0006]本發明納豆芽抱桿菌(Bacillus natto)具有以下微生物學特性:菌落近似圓形、菌落邊緣樹杈狀參差不齊、表面褶皺干燥、灰白色、不透明、菌體桿狀、單生或成短鏈，周生鞭毛、革蘭氏陽性、具芽孢。
[0007]本發明納豆芽抱桿菌(Bacillus natto)的培養方法或繁殖方法:菌種活化保藏培養基采用LB培養基，配方:胰蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L，Nacl 10g/L，水1000ml，PH7.0 ;種子液培養基；發酵培養基。
[0008]該納豆芽抱桿菌(Bacillus natto)可以用作血栓溶解制劑，起到溶解血栓的作用。
【具體實施方式】
[0009]實施例1:
1、納豆芽抱桿菌(Bacillus natto)的分離與純化
(1)湖北恩施地區苗圃土壤表層到15cm處取樣200g，每個地點采幾個樣本，混合過粗篩，取25g作分離用；
(2)培養基平板制備:將上述LB平板在配方胰蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L，Nacl10g/L基礎上加瓊脂15g，水1000ml，PH7.0，121°C滅菌15min，倒平板，冷卻；
(3)將(I)中的納豆粉碎，稱取lg，與無菌生理鹽水混合于試管中，在85°C水浴中加熱IOmin,后震蕩混勻，制成納豆粉懸液,靜置Imin,取上清液梯度稀釋至10〃 ；
(4)取(3)中10_7懸液200μ L，加入到LB平板上，用涂布棒涂勻，放入37°C培養箱倒置培養24h ；
(5)取上述平板菌落中較大較好的菌落,進行平板劃線,連續三代,達到純培養,最后菌種保藏。
[0010]2、菌株鑒定
(I)微生物學特性:菌落近似圓形、菌落邊緣樹杈狀參差不齊、表面褶皺干燥、灰白色、不透明、菌體桿狀、單生或成短鏈、周生鞭毛、革蘭氏陽性、具芽孢。
[0011](2)生化特性如表1所示:
【權利要求】
1.納豆芽抱桿菌{Bacillusnatto) W-0923，保藏號 CCTCC:M 2012496 ； 權利要求1所述的納豆芽抱桿菌(Bacillus natto) ff-0923 (保藏號CCTCC:M2012496)的發酵方法: 1)納豆芽抱桿菌(Bacillusnatto) ff-0923 (保藏號 CCTCC:M 2012496)菌種活化:將斜面上保存的菌種接種到LB試管斜面上面，于37°C培養24h，所述LB培養基配方為蛋白陳10 g，牛肉膏5g，NaCI 5g，瓊脂15 g，蒸餾水1000 mL ； 2)納豆芽抱桿菌(Bacillusnatto) ff-0923 (保藏號CCTCC:M 2012496)種子液的制備:從斜面上挑一環菌接種到裝有LB培養液的三角瓶中，置于恒溫振蕩培養箱中，振蕩培養，37°C，200r/min培養8h即可獲得種子液，所述的LB培養基配方為:蛋白陳10g，牛肉膏5g,氯化鈉5g,蒸懼水IL ； 3)納豆芽抱桿菌(Bacillusnatto) ff-0923 (保藏號 CCTCC:M 2012496)發酵培養:將搖床發酵的菌液接種到裝有100L培養基的200L種子發酵罐，初始pH7.5，溫度37°C，通風體積比1:0.8，從菌種接種后12h菌體生長處于指數生長中期，轉入2000L的發酵罐，以70%的罐裝量，pH7.5，溫度為37°C，前期通風體積比為1:0.8，后期通風體積比為1:1發酵，所述大量發酵培養配方為:豆粉1.8%，淀粉0.5%，碳酸鈣0.3%，硫酸鎂0.01%,磷酸二氫鉀0.2%，其余為水，pH 7.0，所述的百分數為重量百分數。
2.權利要求1所述的納豆芽抱桿菌(Bacillusnatto) ff-0923 (保藏號CCTCC:M2012496)在開發溶解人體血栓產品方面的應用。
【文檔編號】C12R1/07GK103966116SQ201310036945
【公開日】2014年8月6日 申請日期:2013年1月31日 優先權日:2013年1月31日
【發明者】張云峰, 田璨熙 申請人:湖北國力生物技術開發有限公司