奶粉類及其制造方法

奶粉類及其制造方法
【專利摘要】本發明解決提供安全和新的奶粉類的問題，當按日攝取時，其用于預防和治療各種骨疾病例如骨質疏松、骨折、風濕癥和關節炎。奶粉類包含1.4～24mg/15g的血管生成素和/或血管生成素的水解產物，以及相對于血管生成素和/或血管生成素水解產物的質量比為0.03～1.3的抑半胱氨酸蛋白酶蛋白和/或抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的水解產物。通過攝取所述奶粉類可強化骨并預防或治療各種骨疾病例如骨質疏松、骨折、風濕癥和關節炎。
【專利說明】奶粉類及其制造方法

【技術領域】
[0001] 本發明涉及新的奶粉類及其制造方法。奶粉類包含特定的乳成分，并且可用于預 防和治療各種骨疾病例如骨質疏松、骨折、風濕癥和關節炎。

【背景技術】
[0002] 近年來，在全球范圍內伴隨著社會老齡化等，各種骨疾病，例如骨質疏松、骨折和 腰疼增加，并且已變為嚴重的社會問題。這些疾病由鈣攝入不足，鈣吸收能力下降，閉經 期后激素失衡等引起。據認為，從生命早期開始通過活化成骨細胞和骨形成盡可能地增加 體內骨量，并且增加最大骨量和骨強度（骨密度+骨質）在預防各種骨疾病，例如骨質疏 松、骨折和腰疼方面是有效的。注意術語"骨質"涉及骨顯微結構、代謝更新（metabolic turnover)、微裂紋和鈣化。據稱各種骨疾病，例如骨質疏松、骨折和腰疼可通過抑制破骨細 胞的骨吸收來預防。骨始終以平衡的方式反復吸收和形成（重塑）。然而，當由于閉經期 后激素平衡變化等引起骨吸收超過骨形成時，可發生各種骨疾病，例如骨質疏松、骨折和腰 疼。因此，通過抑制破骨細胞的骨吸收和維持骨強度在恒定水平可使骨得到強化。
[0003] 考慮到上述情形，為了強化骨，已攝取了單獨添加鈣鹽，例如碳酸鈣、磷酸鈣或乳 酸鈣的鈣鹽或者天然鈣制品，例如乳清鈣、牛骨粉或雞蛋殼的藥物、飲食品或飼料等。還使 用包含此類鈣制品以及具有鈣吸收促進效果的物質，例如酪蛋白磷肽或寡聚多糖的藥物、 飲食品或飼料等來強化骨。然而，當攝取包含鈣鹽或天然鈣制品的飲食品時鈣吸收率為 50%以下，并且攝取的大部分鈣可能排出體外而沒有被吸收。另外，即使鈣被吸收入體內， 由于對骨的親和性可根據其形式或同時攝取的營養成分的類型而不同，也未必顯示骨代謝 改善效果或骨強化效果。作為用于治療骨質疏松或強化骨的藥物已知雌激素制品、活性維 生素仏制品、維生素1( 2制品、雙膦酸鹽制品和降鈣素制品等，并且還開發了新型藥物例如抗 RANKL抗體。然而，這些藥物可具有副作用例如耳鳴、頭痛或食欲不振。另外，從安全和成本 等觀點，目前上述物質處于不能將其添加到飲食品的狀況。因此，已需要開發根據各種骨疾 病例如骨質疏松、骨折和腰疼的性質，可長期經口攝取，通過促進骨形成和抑制骨吸收來增 加骨強度，并且可期望具有預防或治療各種骨疾病的效果的此類飲食品。
[0004] 現有技術文獻
[0005] 專利文獻
[0006] [專利文獻 1]JP-A-H〇8_l5l33l
[0007] [專利文獻 2]JP-A-H10_7585
[0008] [專利文獻 3]JP-A-2〇00_28l587


【發明內容】

[0009] 發明要解決的問題
[0010] 本發明的目的是提供可用于預防和治療各種骨疾病例如骨質疏松、骨折、風濕癥 和關節炎的奶粉類。
[0011]用于解決問題的方案
[0012] 本發明人已發現通過攝取包含血管生成素和/或血管生成素的水解產物，并相對 于血管生成素和/或血管生成素的水解產物以特定的質量比包含抑半胱氨酸蛋白酶蛋白 (cystatin)和/或抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的水解產物的奶粉類可有效地增加骨密度。該發 現導致發明的完成。
[0013] 具體地，本發明包括以下方面：
[0014] (1) -種奶粉類，其包含1. 4?24mg/15g的量的血管生成素和/或血管生成素的 水解產物，和與血管生成素和/或血管生成素的水解產物的質量比為〇. 03?1. 3的抑半胱 氨酸蛋白酶蛋白和/或抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的水解產物。
[0015] (2) -種預防骨疾病的方法，其包括以15g/天以上的量攝取根據⑴所述的奶粉 類。
[0016] (3)根據（1)所述的奶粉類的制造方法，其包括將血管生成素和/或血管生成素的 水解產物以及抑半胱氨酸蛋白酶蛋白和/或抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的水解產物與乳原料 均勻地混合。
[0017] (4)根據（1)所述的奶粉類的制造方法，其包括將血管生成素和/或血管生成素的 水解產物以及抑半胱氨酸蛋白酶蛋白和/或抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的水解產物與乳原料 混合，和造粒。
[0018]發明的效果
[0019] 本發明的奶粉類顯示骨強化效果，并且可用于預防和治療各種骨疾病例如骨質疏 松、骨折、風濕癥和關節炎。

【具體實施方式】
[0020] 本發明的奶粉類的特征在于奶粉類以特定量包含血管生成素和/或血管生成素 的水解產物，并且相對于血管生成素和/或血管生成素的水解產物以特定質量比進一步包 含抑半胱氨酸蛋白酶蛋白和/或抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的水解產物。
[0021] 奶粉類一般包含約22. 5?90 y g/g(0. 34?1. 35mg/15g)的量的血管生成素和/ 或血管生成素的水解產物，和約45?113 y g/g(0. 68?1. 70mg/15g)的量的抑半胱氨酸蛋 白酶蛋白和/或抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的水解產物。
[0022] 相反，發明的奶粉類添加有血管生成素和/或血管生成素的水解產物以及抑半胱 氨酸蛋白酶蛋白和/或抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的水解產物，并且所述奶粉類包含1. 4? 24mg/15g的量的血管生成素和/或血管生成素的水解產物，和相對于血管生成素和/或血 管生成素的水解產物的質量比為0. 03?1. 3的抑半胱氨酸蛋白酶蛋白和/或抑半胱氨酸 蛋白酶蛋白的水解產物。
[0023] 作為本發明的奶粉類中包含的血管生成素和/或血管生成素的水解產物以及抑 半胱氨酸蛋白酶蛋白和/或抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的水解產物，可使用由哺乳動物，例如 人、奶牛（cow)、水牛（buffalo)、山羊或綿羊的乳制備的包含血管生成素和/或血管生成素 的水解產物的級分；由哺乳動物，例如人、奶牛、水牛、山羊或綿羊制備的包含抑半胱氨酸蛋 白酶蛋白和/或抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的水解產物的級分；由基因工程制造的包含血管生 成素和/或血管生成素的水解產物的級分；從血液或器官純化的血管生成素和/或血管生 成素的水解產物；從血液或器官純化的抑半胱氨酸蛋白酶蛋白和/或抑半胱氨酸蛋白酶蛋 白的水解產物等。還可使用商購可得的純化的血管生成素或抑半胱氨酸蛋白酶蛋白試劑。
[0024] 本發明的奶粉類可包含通過使用一種或多種蛋白酶消化包含血管生成素的級分、 血管生成素試劑、包含抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的級分、抑半胱氨酸蛋白酶蛋白試劑等獲得 的血管生成素的水解產物或抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的水解產物。
[0025] 本發明的奶粉類可包含通過直接從乳或來源于乳的材料，例如脫脂乳或乳清提取 包含血管生成素和/或血管生成素的水解產物以及抑半胱氨酸蛋白酶蛋白和/或抑半胱氨 酸蛋白酶蛋白的水解產物的級分制備的蛋白材料。例如，該蛋白材料可如下制備。具體地， 使乳或來源于乳的材料與陽離子交換樹脂接觸，并以〇. 1?2. 0M的鹽濃度洗脫吸附到樹脂 的乳來源的蛋白，使用反滲透膜、電滲析膜、超濾膜或微濾膜等脫鹽和濃縮，并任選地使用 蛋白酶，例如胰蛋白酶、胰酶、胰凝乳蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、激肽釋放酶、組織蛋白 酶、嗜熱菌蛋白酶或V8蛋白酶進行蛋白水解至分子量為8000以下。當使用蛋白酶進行蛋 白水解時，分子量的下限優選為500以上。由此獲得的蛋白材料可通過冷凍干燥或噴霧干 燥等干燥，并且干燥產物可并入奶粉類中。
[0026] 本發明的奶粉類通過將血管生成素和/或血管生成素的水解產物以及抑半胱氨 酸蛋白酶蛋白和/或抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的水解產物、包含血管生成素和/或血管生成 素的水解產物以及抑半胱氨酸蛋白酶蛋白和/或抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的水解產物的蛋 白材料等添加到乳原料，以使奶粉類包含1. 4?24mg/15g的量的血管生成素和/或血管生 成素的水解產物，并且相對于血管生成素和/或血管生成素的水解產物以〇. 03?1. 3的質 量比包含抑半胱氨酸蛋白酶蛋白和/或抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的水解產物。
[0027] 如下述試驗例中所示，當如上所述奶粉類包含血管生成素和/或血管生成素的水 解產物以及抑半胱氨酸蛋白酶蛋白和/或抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的水解產物時，可獲得與 單獨攝取血管生成素和/或血管生成素的水解產物或抑半胱氨酸蛋白酶蛋白和/或抑半胱 氨酸蛋白酶蛋白的水解產物的情況相比更加有效的骨強化效果。
[0028] 本發明的奶粉類可以常規方式來制造，只要奶粉類以各自特定的量包含血管生 成素和/或血管生成素的水解產物以及抑半胱氨酸蛋白酶蛋白和/或抑半胱氨酸蛋白酶 蛋白的水解產物即可。根據本發明制造的奶粉類可包含所有奶粉類，例如，脫脂奶粉、部 分脫脂奶粉、奶油粉（creampowder)、全脂奶粉、乳清粉、乳礦物濃縮物（milkmineral concentrate)、干酪粉、WPI、WPC、調制奶粉（modifiedmilkpowder)、特殊奶粉（special milkpowder)等。
[0029] 例如，本發明的奶粉類通過將血管生成素和/或血管生成素的水解產物添加到乳 原料以使奶粉類包含特定量的血管生成素和/或血管生成素的水解產物，將抑半胱氨酸蛋 白酶蛋白和/或抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的水解產物添加到混合物以使抑半胱氨酸蛋白酶 蛋白和/或抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的水解產物與血管生成素和/或血管生成素的水解產物 的質量比在上述特定范圍內，并且均勻地混合所得混合物來制造。乳原料的實例包括脫脂 乳、脫脂奶粉、部分脫脂乳、部分脫脂奶粉、奶油、奶油粉、牛乳、全脂奶粉、脫脂濃縮乳、乳清 粉、乳礦物濃縮物、干酪粉、酪蛋白、WPI、WPC、調制奶粉、特殊奶粉等。
[0030] 本發明的奶粉類還可通過以特定量混合血管生成素和/或血管生成素的水解產 物和抑半胱氨酸蛋白酶蛋白和/或抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的水解產物與乳原料，均勻地混 合所得混合物，并以常規方式，例如，通過噴霧干燥、冷凍干燥、真空干燥等濃縮或干燥混合 物從混合物除去水來制造。
[0031] 在該情況下，可以調節奶粉類中的乳脂含量和乳蛋白含量至每非脂固體 (non-fat-solid)的乳蛋白含量為34%以下，并且通過濃縮和干燥使奶粉類中的含水量為 5%以下。可將造粒步驟等并入本發明中以便改善奶粉類的溶解性。
[0032] 除了血管生成素和/或血管生成素的水解產物、抑半胱氨酸蛋白酶蛋白和/或抑 半胱氨酸蛋白酶蛋白的水解產物外，在上述乳原料之外，本發明的奶粉類可添加有通常用 于飲食品的原料等，例如糖類、脂質、蛋白、維生素、礦物質、香料、穩定劑、pH調節劑、抗結劑 等，并且還可添加有其它骨強化成分例如鈣、維生素D、維生素K、異黃酮等。
[0033] 如下述動物試驗中所示，當以每kg體重15g以上的量經口攝取時本發明的奶粉類 可強化骨。由于實驗動物的攝入相當于根據血液藥物濃度的成人攝入（參見Mitsuyoshi Nakajima(1993)，"YakkouHyokaVol.8"，Hirokawa-ShotenLtd?，第 2-18 頁），所以期望 可強化骨，并且特別地可通過以每個成人15g/天以上的量攝食本發明的奶粉類可預防或 治療各種骨疾病，例如骨質疏松、骨折、風濕癥和關節炎。
[0034] 以下通過參考例、實施例和試驗例更詳細地進一步描述本發明。注意以下實施例 僅用于說明性目的，不應解釋為限制本發明。
[0035] 參考例1
[0036] 血管牛成素級分的制各（1)
[0037] 用去離子水徹底洗絳填充有30kg陽離子交換樹脂（磺化Chitopearl;由Fuji SpinningCo.，Ltd.制造）的柱，然后將1000升未殺菌的脫脂乳（pH6. 7)施加到柱。在 用去離子水徹底洗滌柱之后，用0. 1?2. 0M線性梯度的氯化鈉洗脫吸附的蛋白。使用 S-Sepharose陽離子交換色譜（由AmershamBioscientific制造）分級包含血管生成素的 洗脫級分，并在90°C下熱處理所得包含血管生成素的級分10分鐘，并離心除去沉淀物。將 包含血管生成素的級分進一步進行凝膠過濾色譜（柱：Superose12)。使用反向滲透膜使 獲得的洗脫物脫鹽，并冷凍干燥脫鹽的洗脫物以獲得16. 5g血管生成素級分，其血管生成 素純度為90%。重復這些連續操作30次。
[0038] 參考例2
[0039] 血管牛成素級分的制各（2)
[0040] 用去離子水徹底洗絳填充有10kg肝素Sepharose(由GEHealthcare制造）的 柱，然后將500升未殺菌的脫脂乳（pH6. 7)施加到柱。在用0. 5M氯化鈉溶液徹底洗滌柱 之后，用1.5M氯化鈉溶液洗脫吸附的蛋白。使用反滲透膜使洗脫物脫鹽，并冷凍干燥脫鹽 的洗脫物以獲得18g血管生成素級分，其血管生成素純度為5%。重復上述連續操作50次。
[0041] 參考例3
[0042] 抑半胱氨酸蛋白酶蛋白級分的制各
[0043] 在90°C下熱處理十萬升（100, 000升）5%乳清蛋白溶液，并通過離心除去沉淀物。 用通過將羧甲基化的木瓜蛋白酶結合至Tresyl-Toyopearl(由TosohCorporation制造） 制備的載體填充柱。用0.5M氯化鈉溶液平衡化后，將上述乳清蛋白溶液施加到柱。然后用 0. 5M氯化鈉溶液和包含TWeen20 (0. 1 % )的0. 5M氯化鈉溶液順序洗滌柱。之后，用20mM 乙酸-0. 5M氯化鈉溶液洗脫包含抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的級分。用1M氫氧化鈉溶液立即 中和洗脫物。然后使用反滲透膜使洗脫物脫鹽，并冷凍干燥脫鹽的洗脫物以獲得9. 6g抑半 胱氨酸蛋白酶蛋白級分，其抑半胱氨酸蛋白酶蛋白純度為90%。重復上述連續操作20次。
[0044] 包含于奶粉類中的血管牛成素和抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的測量
[0045] 根據更改的JP-A-2008-164511中所述的方法測量奶粉類中包含的血管生成素、 血管生成素的水解產物、抑半胱氨酸蛋白酶蛋白和抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的水解產物的含 量。具體地，將二十五毫克（25mg)奶粉類添加到5ml超純水，并將1/1000當量的甲酸添加 到混合物以制備樣品溶液。干燥十微升（10y1)樣品溶液，并溶解于20y1含8M脲和ImM 三（羧乙基）膦（TCEP)的0. 1M碳酸氫銨中。在56°C下加熱溶液30分鐘。在溶液回到室 溫后，將5y1 100mM碘乙酰胺溶液添加到溶液，并在暗處使混合物反應30分鐘。在添加 54y1超純水后，將10y1的0. 1yg/ml胰蛋白酶和10y1的0. 1yg/ml賴氨酰基肽鏈內切 酶添加到混合物。在37°C下使混合物反應16小時。然后通過添加3y1甲酸終止反應，并用 作測量用的樣品肽溶液。用包含〇. 1%甲酸、0.02%三氟乙酸（TFA)和2%乙腈的lOfmol/ u1內標肽溶液稀釋樣品溶液6倍，并將2. 5y1稀釋的溶液進行LC/MS/MS分析。
[0046] 通過使用HPLC系統梯度洗脫分離肽。更具體地，使用在MAGIC2002HPLC系統上的 配備有5y1肽捕獲（trap)的柱（MAGICC18, 0? 2mm(ID)X50mm)以2y1/分鐘的流速分離 肽。使用溶液A(2 %乙腈-0? 05 %甲酸）和溶液B(90 %乙腈-0? 05 %甲酸）作為HPLC洗脫 液。在2至65%溶液B的洗脫條件下經20分鐘實施梯度洗脫。
[0047] 作為測量抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的對象離子，母體離子（parention)為 NH2-QWSGMNYFLDVELGR-C00H(m/z914.4)，和 MS/MS 靶離子為 NH2-FLDVELGR-COOH(m/ z948. 7)。作為測量血管生成素的對象離子，母體離子為NH2-YIHFLTQHYDAK-C00H (m/ z768. 8)，和 MS/MS 靶離子為 NH2-FLTQHYDAK-C00H(m/zll22. 8)。關于內標肽，母體離子 為 NH2-EITVFENLPEK-COOH(其中，P 標記有 13C 和 15N) (m/z656. 9)，和 MS/MS 靶離子為 NH2-FENLPEK-C00H(其中，P 標記有 13C 和 15N) (m/z882. 4)。
[0048] 將系統"LCQ Advantage"用于MS。各蛋白的峰面積由所得色譜計算，并且由相對 于內標肽的比計算濃度。
[0049] 實施例1
[0050] 將十五克（15g)脫脂奶粉溶解于熱水（50°C)中。接下來，將26mg參考例1中獲 得的血管生成素級分和0. 05mg參考例3中獲得的抑半胱氨酸蛋白酶蛋白級分與溶液均勻 混合，并噴霧干燥混合物以獲得奶粉類（實施例制品1)。獲得的奶粉類以24mg/15g的量包 含血管生成素和/或血管生成素的水解產物，并且奶粉類中抑半胱氨酸蛋白酶蛋白和/或 抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的水解產物與血管生成素和/或血管生成素的水解產物的質量比 為 0.03。
[0051] 實施例2
[0052] 將十五克（15g)脫脂奶粉溶解于熱水（50°C)中。接下來，將20mg參考例2中獲 得的血管生成素級分和1. 2mg參考例3中獲得的抑半胱氨酸蛋白酶蛋白級分與溶液均勻混 合，并噴霧干燥混合物以獲得奶粉類（實施例制品2)。獲得的奶粉類以1. 4mg/15g的量包 含血管生成素和/或血管生成素的水解產物，并且奶粉類中抑半胱氨酸蛋白酶蛋白和/或 抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的水解產物與血管生成素和/或血管生成素的水解產物的質量比 為 1. 3〇
[0053] 實施例3
[0054] 將十五克（15g)脫脂奶粉溶解于熱水（50°C)中。接下來，將20mg參考例1中獲 得的血管生成素級分和1. 2mg參考例3中獲得的抑半胱氨酸蛋白酶蛋白級分與溶液均勻混 合，并噴霧干燥混合物以獲得奶粉類（實施例制品3)。獲得的奶粉類以18mg/15g的量包含 血管生成素和/或血管生成素的水解產物，并且奶粉類中抑半胱氨酸蛋白酶蛋白和/或抑 半胱氨酸蛋白酶蛋白的水解產物與血管生成素和/或血管生成素的水解產物的質量比為 0? 1〇
[0055] 比較例1
[0056] 將十五克（15g)脫脂奶粉溶解于熱水（50°C)中。接下來，將18mg參考例2中獲 得的血管生成素級分和3. 2mg參考例3中獲得的抑半胱氨酸蛋白酶蛋白級分與溶液均勻混 合，并噴霧干燥混合物以獲得奶粉類（比較例制品1)。獲得的奶粉類以1. 3mg/15g的量包 含血管生成素和/或血管生成素的水解產物，并且奶粉類中抑半胱氨酸蛋白酶蛋白和/或 抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的水解產物與血管生成素和/或血管生成素的水解產物的質量比 為 2. 8〇
[0057] 比較例2
[0058] 將十五克（15g)脫脂奶粉溶解于熱水（50°C)中。接下來，將30mg參考例1中獲 得的血管生成素級分和0. 02mg參考例3中獲得的抑半胱氨酸蛋白酶蛋白級分與溶液均勻 混合，并噴霧干燥混合物以獲得奶粉類（比較例制品2)。獲得的奶粉類以27mg/15g的量包 含血管生成素和/或血管生成素的水解產物，并且奶粉類中抑半胱氨酸蛋白酶蛋白和/或 抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的水解產物與血管生成素和/或血管生成素的水解產物的質量比 為 0? 025。
[0059] 試驗例1
[0060] 通過動物試驗測定實施例制品1至3以及比較例制品1和2的骨強化效果。將 C3H/HeJ小鼠（5周齡，雄性）用于動物試驗。將實施例制品1至3以及比較例制品1和2 的每一種添加到熱水（50°C)以使奶粉類的含量為30%，并且均勻地攪拌混合物。1周馴 化后，將小鼠分為六組（10只小鼠/組）。使用管以每lkg小鼠重量15g/天的量、一天一 次2周向小鼠經口投與實施例制品1至3以及比較例制品1和2。對照組不投與任何實施 例制品1至3以及比較例制品1和2。投與完成后（第二周），使用micro-CT(由Rigaku Corporation制造）測量各小鼠右脛骨的骨密度。結果示于表1中。如表1所示，經口投與 實施例制品1至3的組與對照組和經口投與比較例制品1或2的比較例組相比顯示骨密度 顯著增加。
[0061] 表 1

【權利要求】
1. 一種奶粉類，其包含1. 4?24mg/15g的量的血管生成素和/或血管生成素的水解產 物，和與血管生成素和/或血管生成素的水解產物的質量比為0. 03?1. 3的抑半胱氨酸蛋 白酶蛋白和/或抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的水解產物。
2. -種預防骨疾病的方法，其包括以15g/天以上的量攝取根據權利要求1所述的奶粉 類。
3. 根據權利要求1所述的奶粉類的制造方法，其包括將血管生成素和/或血管生成素 的水解產物以及抑半胱氨酸蛋白酶蛋白和/或抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的水解產物與乳原 料均勻地混合。
4. 根據權利要求1所述的奶粉類的制造方法，其包括將血管生成素和/或血管生成素 的水解產物以及抑半胱氨酸蛋白酶蛋白和/或抑半胱氨酸蛋白酶蛋白的水解產物與乳原 料混合，和將所述混合物造粒。
【文檔編號】A23C9/152GK104507321SQ201280074987
【公開日】2015年4月8日 申請日期:2012年7月31日 優先權日:2012年7月31日
【發明者】大町愛子, 松山博昭, 森田如一, 石田祐子, 奈良貴幸, 加藤健, 芹澤篤, 上野宏, 浦園浩司 申請人:雪印惠乳業株式會社