用于認(rèn)知功能發(fā)育的羅伊氏乳桿菌dsm17938的制作方法

用于認(rèn)知功能發(fā)育的羅伊氏乳桿菌dsm17938的制作方法【專利摘要】本發(fā)明涉及用于促進(jìn)幼年哺乳動物中健康和正常的認(rèn)知功能的建立的羅伊氏乳桿菌DSM17938。特別地，本發(fā)明涉及羅伊氏乳桿菌DSM17938的用途，其用于促進(jìn)對認(rèn)知功能負(fù)責(zé)的腦結(jié)構(gòu)(例如，皮層和海馬)以及它們相關(guān)的神經(jīng)途徑的發(fā)育，和/或逆轉(zhuǎn)停滯，和/或防止認(rèn)知功能建立的停滯。人類或動物，特別是胎兒、早產(chǎn)或足月嬰兒、學(xué)步兒或兒童或青年可以受益于本發(fā)明。【專利說明】用于認(rèn)知功能發(fā)育的羅伊氏乳桿菌DSM17938【
技術(shù)領(lǐng)域：
】[0001]本發(fā)明一般涉及神經(jīng)元健康、神經(jīng)元保護(hù)和神經(jīng)元發(fā)育的領(lǐng)域。本發(fā)明具體地涉及在嬰兒特別是早產(chǎn)的、低、非常低和極低出生體重嬰兒中施用能夠促進(jìn)認(rèn)知功能的健康建立的益生菌?！?br>背景技術(shù)：
】[0002]神經(jīng)系統(tǒng)是由神經(jīng)元細(xì)胞和膠質(zhì)細(xì)胞組成的高度復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)。它存在于所有哺乳動物物種中，由中樞神經(jīng)系統(tǒng)（腦和脊髓）以及外周神經(jīng)系統(tǒng)（體細(xì)胞的、自主的和腸神經(jīng)系統(tǒng)）組成。[0003]中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS)特別是腦，驅(qū)動認(rèn)知功能。腦皮層是哺乳動物腦的腦最外的一層神經(jīng)組織，在注意力、知覺、思想、語言、高級認(rèn)知（執(zhí)行功能）和信息整合感官輸入方面起到關(guān)鍵作用。它由達(dá)到六個(gè)水平層構(gòu)成，就神經(jīng)元和連通性而言每一層具有不同的組成。人類腦皮層厚度2-4mm(0.08-0.16英寸）。[0004]新皮質(zhì)（也稱為同形皮質(zhì)）是腦皮層的系統(tǒng)發(fā)生上最新近的部分，分化成六個(gè)水平層；腦的更為古代的部分，海馬（也稱為原腦皮質(zhì)）具有最多三個(gè)細(xì)胞層，被分為子區(qū)域。各個(gè)層中的神經(jīng)元垂直地連接形成小的位通路，稱為柱。不同的新皮質(zhì)構(gòu)造域區(qū)別在于這些層的深度、它們的優(yōu)勢細(xì)胞類型和其他因素例如神經(jīng)化學(xué)標(biāo)志物上不同。[Kandel，E.R.,etal.(2000)；PrinciplesofNeuralScienceFourthEdition,McGraw-Hi11,USA,ISBN0-8385-7701-6,p.324]。[0005]與外周神經(jīng)系統(tǒng)一起，CNS在行為控制中具有基礎(chǔ)性的作用。體神經(jīng)系統(tǒng)負(fù)責(zé)身體運(yùn)動（處于有意識控制下）的協(xié)調(diào)。自主神經(jīng)系統(tǒng)在沒有意識控制的情況下（心率，等等）維持身體活動的穩(wěn)態(tài)。[0006]中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育和成熟是高度復(fù)雜的生命現(xiàn)象，其涉及許多生理學(xué)過程，包括，例如，神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞生長和分化、神經(jīng)元尋路和分枝，以及通過軸突生長和神經(jīng)遞質(zhì)釋放的內(nèi)部神經(jīng)元通信（神經(jīng)信號）的建立。此外，雖然不是所有軸突都是有髓鞘的，髓鞘形成（膠質(zhì)細(xì)胞的重要功能）是使軸突傳遞的電信號絕緣所必需的，從而確保高效的信號傳輸，以及阻止鄰近神經(jīng)之間的串?dāng)_。[Baumann,N.andPham-Dinh,D.(2001)；BiologyofOligodendrocyteandMyelinintheMammalianCentralNervousSystem,PhysiologicalReviews,81(2):871-927]；[Deoni,S.C.etal.(2011)；Mappinginfantbrainmyelinationwithmagneticresonanceimaging,J.Neurosci.,31(2):784-91].Thisprocessbeginsduringpregnancyandcontinuesupuntilandduringadolescence/earlyadulthood(until20yearsold)[Baumann,N.andPham-Dinh,D.(2001)]；[Benton,D.(2010)；Neurodevelopmentandneurodegeneration：aretherecriticalstagesfornutritionalintervention?,Nutr.Rev.,68Suppl.I:S6_10]。[0007]神經(jīng)元可塑性被定義為腦對于變化的要求連續(xù)地調(diào)整它的功能和結(jié)構(gòu)組織的倉泛力[Nava,E.andRoder,B.(2011)!Adaptationandmaladaptationinsightsfrombrainplasticity,Prog.BrainRes.,191:177-94]。在神經(jīng)系統(tǒng)成熟方面，回顧是重要的。它對于腦的正確發(fā)揮功能是必不可少的，對于認(rèn)知、學(xué)習(xí)和記憶是必需的。這些生理學(xué)過程所需的，或至少與之相關(guān)的一些神經(jīng)元標(biāo)志物，包括蛋白質(zhì)和神經(jīng)營養(yǎng)因子已經(jīng)在文獻(xiàn)中被鑒定和被研究[Huang,E.J.andReichardt,L.F.(2001)；Neurotrophins：RolesinNeuronalDevelopmentandFunction,Annu.Rev.Neurosci.,24:677-736]；[Denny,J.B.(2006)；MolecularMechanisms,BiologicalActions,andNeuropharmacologyoftheGrowth-AssociatedProteinGAP43,CurrentNeuropharmacology,4:293-304]；[Baumann,N.andPham-Dinh,D.(2001)]；.[Musumeci,G.andMinichiello,L.(2011)；BDNF-TrkBsignallinginfearlearning：fromgeneticstoneuralnetworks,Rev.Neurosci.,22(3):303-15]；[Xiao,J.etal.(2009)；Theroleofneurotrophinsintheregulationofmyelindevelopment,Neurosignals,17:265-276]and[VonBohlenandHalbach,0.(2011)；Immunohistologicalmarkersforproliferativeevents,gliogenesis,andneurogenesiswithintheadulthippocampus,CellTissueRes.,345(I):1-19]。中樞神經(jīng)系統(tǒng)在妊娠期間發(fā)育，然后在出生后的時(shí)間精煉為成熟的、有功能的網(wǎng)絡(luò)。[0008]人類的腦發(fā)育在卵子授精之后不久開始。腦從外胚層發(fā)育。在第一個(gè)步驟中，神經(jīng)管形成。它的隆起產(chǎn)生皮層、丘腦和下丘腦，中腦、小腦和延髓[Kaufmann，L.etal.(2007)]；[Johnson,Μ.(2005)；KognitiveEntwicklungsneuropsychoIogie,DevelopmentalCognitiveNeuroscience,Gottingen：Hogrefe；(2ed.)Oxford：BlackwellPublishing]。腦干是腦的后部，通過顱神經(jīng)提供了對面部和頸部的主動動作和感覺的神經(jīng)支配。它包括延髓（末腦）、橋腦（后腦的部分）和中腦（中腦）。[0009]在人類胎兒中，大腦皮層發(fā)育得相當(dāng)晚。在神經(jīng)發(fā)生之后，神經(jīng)元從內(nèi)部部分（室性和亞室性區(qū)域）遷移到腦的特定區(qū)域（未來的皮層）。膠質(zhì)細(xì)胞的網(wǎng)絡(luò)生長，支持了這種細(xì)胞遷移。[0010]早熟的嬰兒顯示了在大腦皮層的認(rèn)知觸覺、視覺和聽覺的初級感覺區(qū)域中、以及在大腦皮層的初級運(yùn)動區(qū)域中非?；A(chǔ)的電活性。在后三個(gè)月，胎兒能夠簡單形式的學(xué)習(xí)，如習(xí)慣（降低它們的驚嚇反應(yīng)）重復(fù)的聽覺刺激，例如在緊挨母親腹部大聲鼓掌。不考慮這些相當(dāng)深奧的能力，嬰兒帶著仍然原始的大腦皮層來到這個(gè)世界，腦的這個(gè)復(fù)雜部分逐漸成熟，這解釋了它們在生命第一年情緒和認(rèn)知的成熟的大部分。[Lubsen，J.etal.(2011)；Microstructuralandfunctionalconnectivityinthedevelopingpretermbrain,SeminarsinPerinatology,35,34-43]。[0011]因而，CNS的不成熟或延遲成熟導(dǎo)致其調(diào)節(jié)的重要生物學(xué)功能的建立延遲和不充分發(fā)揮功能。因而，大腦皮層的不成熟或延遲成熟可能引起延遲的和/或受損的學(xué)習(xí)能力，高級推理的損失或不良發(fā)展，注意力困難，語言發(fā)展的延遲，記憶和執(zhí)行功能問題，降低的智力，以及因此不良的心智表現(xiàn)。也可能產(chǎn)生其他失調(diào)，例如，情緒失調(diào)，以及與不能正常溝通和社會化相關(guān)的失調(diào)（例如,孤獨(dú)癥,包括Aspergei^s綜合征）的結(jié)果。[0012]這可以在以下嬰兒中觀察到，例如：[0013]-早產(chǎn)嬰兒，低出生體重（<2500g)，非常低和極低出生體重嬰兒（<1500g)和小于胎齡嬰兒[Allen,M.C.(2008)；Neurodevelopmentaloutcomesofpreterminfants,Curr.OpinNeurol.,21(2)：123-8]?[0014]-經(jīng)歷了在妊娠期間任何有害事件（母親吸煙、母親用藥、低胎盤質(zhì)量、胎盤位置異常、母親和胎兒的營養(yǎng)不良、母親的過大壓力/焦慮，等）之后發(fā)生的胎兒宮內(nèi)生長遲緩（IUGR)的早熟或足月嬰兒；[Gregory,A.etal.(2008)；IntrauterineGrowthRestrictionAffectsthePretermInfant'sHippocampus,PediatricResearch,63(4):438-443]。[0015]-在例如出生時(shí)低氧血癥-缺血或任何其他有害事件之后顯示神經(jīng)系統(tǒng)生長停滯的任何新生兒和幼兒[Barrett,R.D.etal.(2007)!Destructionandreconstruction：hypoxiaandthedevelopingbrain,BirthDefectsRes.C.EmbryoToday,81:163-76]。[0016]因而，如果胎兒、新生兒或嬰兒經(jīng)歷了中樞神經(jīng)系統(tǒng)生長停滯，希望的是這種停滯被快速逆轉(zhuǎn)，如果可能，或阻止更進(jìn)一步的停滯，從而中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育“追上”正常水平，在之后的生活中生長中的胎兒或嬰兒經(jīng)歷盡可能少的認(rèn)知功能損傷。[0017]已知的是，營養(yǎng)在腦的神經(jīng)元成熟中起到重要作用（在[Huppi，P.S.(2008)；NutritionfortheBrain,PediatricResearch,63(3):229-231]中綜述）。具體的，臨床研究顯示了必需的脂肪酸對于確保胎兒期和出生后的腦發(fā)育是關(guān)鍵的[Chang，C.Y.etal.(2009)；Essentialfattyacidsandhumanbrain,ActaNeurol.Taiwan,18(4):231-41]；[Alessandri,J.M.etal.(2004)；Polyunsaturatedfattyacidsinthecentralnervoussystem：evolutionofconceptsandnutritionalimplicationsthroughoutlife,Reprod.Nutr.Dev.,44(6):509-38]。[0018]早期的母乳喂養(yǎng)和更高的蛋白質(zhì)攝取也顯示了有益于嬰兒的神經(jīng)元成熟（綜述見[Huppi,P.S.(2008)])。[0019]營養(yǎng)不良的結(jié)果可能是不可逆的，可能包括不良的認(rèn)知發(fā)展、可教育性和將來的經(jīng)濟(jì)生產(chǎn)率。[Horton,R；(2008)TheLancet,Vol.371,Issue9608,pagel79；[Laus’M.F.etal.(2011)；Earlypostnatalprotein-caloriemalnutritionandcognition：areviewofhumanandanimalstudies,Int.J.Environ.Res.PublicHealth.,8(2):590-612]。[0020]因而，口服介入是積極影響神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育的適當(dāng)途徑，以確保早產(chǎn)和足月新生兒、嬰兒、學(xué)步兒、兒童或青年，或幼年動物的認(rèn)知功能和心智表現(xiàn)的正常發(fā)育。[0021]由于神經(jīng)元成熟開始于子宮內(nèi)，圍產(chǎn)期和產(chǎn)后介入符合有前景的方法，來確保對認(rèn)知功能負(fù)責(zé)的腦部分，特別是大腦皮層和海馬的健康發(fā)育和成熟。與針對兒童的介入相t匕，在妊娠/哺乳期間的介入在方便性和順應(yīng)性方面具有相當(dāng)大的優(yōu)勢。[0022]在妊娠期間以及在新生兒生命的早期階段，需要盡可能早的促進(jìn)和支持認(rèn)知功能的健康建立，和/或逆轉(zhuǎn)停滯，和/或阻止認(rèn)知功能建立的進(jìn)一步延遲，此時(shí)神經(jīng)系統(tǒng)正在快速成熟。中樞神經(jīng)系統(tǒng)，特別是皮層的部分，發(fā)育直到青春期（15歲），中樞神經(jīng)系統(tǒng)在一生中適應(yīng)，特別是皮層和海馬[Baumann,N.andPham-Dinh,D.(2001)]；[Nosarti,C.etal.(2010)；Neurodevelopmentaloutcomesofpretermbirth,Cambridge：CambridgeUniversityPress]。由于在一生中腦的可塑性，需要在整個(gè)生命期的適當(dāng)?shù)臓I養(yǎng)支持[Benton,D.(2010)；Neurodevelopmentandneurodegeneration：aretherecriticalstagesfornutritionalintervention?,Nutr.Rev.,68Suppll:S6_10]。[0023]科學(xué)文獻(xiàn)報(bào)道了使用益生菌來積極地影響新生兒和嬰兒的健康狀態(tài)，特別是，對于降低炎癥，對抗感染，以及積極地影響大便習(xí)慣和胃腸運(yùn)動性。近期的一般性綜述參見[Dobrogosz,W.J.，Peacock，T.J.andHassan，Η.M.(2010)；EvolutionoftheprobioticConcept：FromConceptiontoValidationandacceptanceinMedicalScience，AdvancesinAppliedmicrobiology，72:1-41]。[0024]人類衍生的羅伊氏乳桿菌被認(rèn)為是人類胃腸道的內(nèi)源生物體，存在于胃體、胃竇、十二指腸和回腸的粘膜上[Reuter,G.(2001)；TheLactobacillusandBifidobacteriummicrofloraofthehumanintestine!compositionandsuccession，Curr.IssuesIntest.Microbiol,2:43-53]和[Valeur，N.etal.(2004)；ColonizationandimmunomodulationbyLactobacillusreuteriATCC55730inthehumangastrointestinaltract,Appl.Environ.Microbiol.,70:1176-1181]。有許多關(guān)于羅伊氏乳桿菌作為對許多不同的狀況有前景的療法的報(bào)道，包括痢疾疾病[Saavedra，J.(2000)；Am.J.Gastroenterol，95:S16_S18]、嬰兒急腹痛[Savino，F(xiàn).etal.(2007)；Lactobacillusreuteri(AmericanTypeCultureCollectionStrain55730)versussimethiconeinthetreatmentofinfantilecolic：aprospectiverandomizedstudy,Pediatrics，119:el24_el30]、濕疹[Abrahamsson，T.R.etal.(2007)；ProbioticsinpreventionofIgE—associatedeczema：adouble—blind，randomized,placebo-controlledtrial,J.AllergyClin.Immunol.,119:1174-1180]以及幽門螺桿菌感染[Imase，K.etal.(2007)；LactobacillusreuteritabletssuppressHelicobacterpyloriinfection_adouble-blindrandomisedplacebo-controlledcrossoverclinicalstudy，KansenshogakuZasshi，81:387-393]?對四種羅伊氏乳桿菌菌株DSM17938、ATCCPTA4659、ATCCPTA5289和ATCCPTA6475的新研究展現(xiàn)了這些菌株在小腸上皮細(xì)胞中和在新生小鼠的回腸中差異性地調(diào)節(jié)脂多糖誘導(dǎo)的炎癥。[0025]在2008年報(bào)道的對三十名早產(chǎn)新生兒進(jìn)行的雙盲隨機(jī)研究中[Indrio，F(xiàn).etal.(2008)；Theeffectsofprobioticsonfeedingtolerance，bowelhabits，andgastrointestinalmotilityinpretermnewborns,J.Pediatr.,152(6):801_6]，接受羅伊氏乳桿菌ATCC55730的新生兒顯示了與給與安慰劑的相比，顯著降低反流和平均每日的哭鬧時(shí)間，以及更多次數(shù)的大便。[0026]在對249名早產(chǎn)新生兒的更新的臨床研究中[Romeo,M.G.etal,(2011)；RoleofprobioticsinthepreventionoftheentericcolonizationbyCandidainpretermnewborns：incidenceoflateonsetsepsisandneurologicaloutcome,J.Perinatology，31:63-69]喂食羅伊氏乳桿菌ATCC55730的嬰兒(施用6周)顯示了念珠菌屬物種的胃腸定殖的顯著降低。對于接受益生菌補(bǔ)充的兒童，根據(jù)Ha_ersmith嬰兒神經(jīng)病學(xué)指南（HammersmithInfantNeurologicalExamination，HINE)所衡量的，胺毒癥事件數(shù)量的顯著降低也伴隨著更低發(fā)生率的異常神經(jīng)病學(xué)結(jié)局。HINE衡量了嬰兒的基礎(chǔ)腦結(jié)構(gòu)——小腦和腦干的反射和功能。這項(xiàng)研究中進(jìn)行的測量是腦神經(jīng)功能（面部表現(xiàn)、目艮睛表現(xiàn)、聽覺和視覺反應(yīng)、呼吸和吞咽)、運(yùn)動、話音、運(yùn)動里程碑以及意識狀態(tài)、興奮狀態(tài)和社會取向）。該測試是一種檢測對基礎(chǔ)腦功能的損害（例如，腦性麻痹所觀察到的）的篩選方法。它不測量嬰兒的注意力、學(xué)習(xí)、記憶或高級認(rèn)知。[0027]迄今為止，還沒有關(guān)于益生菌對腦認(rèn)知功能發(fā)育的影響的報(bào)道。在生理學(xué)水平上，這轉(zhuǎn)變?yōu)榇竽X皮層和其相關(guān)神經(jīng)途徑的健康發(fā)育和成熟，所述神經(jīng)途徑容許信息的有效傳輸以及在腦內(nèi)對這些信息的處理。[0028]因而，需要在益生菌施用的領(lǐng)域的進(jìn)一步發(fā)展，作為一種方法來改善幼年哺乳動物，包括早產(chǎn)和足月嬰兒、嬰兒、學(xué)步兒和兒童的健康狀態(tài)。[0029]特別是，需要在幼年哺乳動物，特別包括早產(chǎn)和足月嬰兒、嬰兒、兒童和青年中支持正常認(rèn)知功能的健康建立。[0030]需要支持幼小哺乳動物，特別包括早產(chǎn)和足月嬰兒、嬰兒和幼童中學(xué)習(xí)和記憶、注意力、知覺、思維、情緒和推理的健康發(fā)育。[0031]需要防止或最小化幼年哺乳動物中認(rèn)知損傷的嚴(yán)重度。這種認(rèn)知損傷可能是延遲和/或受損的學(xué)習(xí)能力、推理喪失、記憶功能障礙、注意力困難（包括注意力短缺失調(diào)）、低智力和因此不良的心智表現(xiàn)的形式。這種認(rèn)知損傷還可能是與不能正常溝通和社會化相關(guān)的失調(diào)的形式，例如，孤獨(dú)癥，包括Asperger's綜合征。[0032]需要積極影響幼年哺乳動物的腦中的神經(jīng)元成熟，特別是，與認(rèn)知功能相關(guān)的腦的結(jié)構(gòu)。具體的，需要積極影響神經(jīng)元生長、存活、可塑性和分化。[0033]需要通過支持髓鞘形成來積極影響腦中的信號傳輸。[0034]本發(fā)明應(yīng)用于所有哺乳動物，包括動物和人類?！?br/>發(fā)明內(nèi)容】[0035]本發(fā)明涉及用于促進(jìn)幼年哺乳動物中健康和正常的認(rèn)知功能的建立的羅伊氏乳桿菌DSMl7938。特別地，本發(fā)明涉及羅伊氏乳桿菌DSMl7938的用途，羅伊氏乳桿菌DSM17938用于促進(jìn)對認(rèn)知功能負(fù)責(zé)的腦結(jié)構(gòu)（例如，皮層和海馬）以及它們相關(guān)的神經(jīng)途徑的發(fā)育，和/或逆轉(zhuǎn)停滯，和/或防止認(rèn)知功能建立的停滯。人類或動物，特別是胎兒、早產(chǎn)或足月嬰兒、學(xué)步兒或兒童或青年可以受益于本發(fā)明。[0036]本發(fā)明特別有益于在子宮內(nèi)、或在出生期間或出生之后經(jīng)歷了IUGR，或具有低、非常低或極低出生體重，小于胎齡，和/或遭受認(rèn)知功能損傷，例如，受損的學(xué)習(xí)和記憶、缺少好奇心、不良的注意廣度，和因此不良的心智表現(xiàn)，中樞神經(jīng)系統(tǒng)生長停滯的那些嬰兒。[0037]本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)羅伊氏乳桿菌DSM17938的施用促進(jìn)幼年哺乳動物中的神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)發(fā)育。它確保了健康的神經(jīng)元生長、存活、分化和可塑性，以及促進(jìn)軸突髓鞘形成。施用羅伊氏乳桿菌DSM17938可以提高幼年哺乳動物的皮層和/或海馬中生長相關(guān)蛋白質(zhì)43(GAP43)、腦衍生的神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF)、神經(jīng)膠質(zhì)纖絲酸性蛋白（GFAP)或髓磷脂堿性蛋白（MBP)的表達(dá)水平。[0038]羅伊氏乳桿菌DSM17938可以通過懷孕母親施用給在子宮內(nèi)的胎兒。[0039]羅伊氏乳桿菌DSM17938以它的純的形式，或稀釋在水或母乳中，在食品增補(bǔ)劑中，或在奶補(bǔ)強(qiáng)劑或在任何腸內(nèi)的喂養(yǎng)，包括奶支持物中，在營養(yǎng)喂養(yǎng)期間，在嬰兒配制食品中，或在基于奶的飲料中直接施用給嬰兒或?qū)W步兒童。[0040]羅伊氏乳桿菌DSM17938可以以IXIO3到IX1012，優(yōu)選的IXIO7到IX10ncfu(cfu=菌落形成單位）的日劑量施用給嬰兒、學(xué)步兒童或兒童。[0041]羅伊氏乳桿菌DSM17938可以施用給胎兒或嬰兒持續(xù)至少一周，優(yōu)選的兩周，更優(yōu)選的至少一個(gè)月。向?qū)W步兒或幼童施用可以是至少4周，優(yōu)選的2-12個(gè)月，更優(yōu)選的至少18個(gè)月。向更大的兒童或青年施用可以直到15歲或甚至20歲。[0042]本發(fā)明還涉及包含羅伊氏乳桿菌DSM17938的組合物，用于促進(jìn)幼年哺乳動物的腦中健康和正常的認(rèn)知功能的建立。本發(fā)明對于遭遇IUGR的那些幼年哺乳動物是特別有用的。[0043]附圖簡要描述[0044]圖I在補(bǔ)充羅伊氏乳桿菌DSM17938的蛋白質(zhì)限制的大鼠幼仔中Pro和成熟的腦衍生神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF)蛋白質(zhì)水平。[0045]A、B:海馬[0046]CTRL_w、PR_w和PR-L.reuteri幼仔在處死時(shí)（PND14)海馬中的Pro(A)和成熟的(B)BDNF蛋白質(zhì)水平。結(jié)果以任意單位表示，是中值土中值標(biāo)準(zhǔn)誤差，η=6。在每個(gè)圖中，不帶共同的字母的中值是不同的，P<O.05。[0047]C、D:皮層[0048]CTRL-w、PR_w和PR-Lreuteri幼仔在處死時(shí)（PND14)皮層中的Pro(C)和成熟的(D)BDNF蛋白質(zhì)水平。結(jié)果以任意單位表示，是中值土中值標(biāo)準(zhǔn)誤差，η=6。在每個(gè)圖中，不帶共同的字母的中值是不同的，P<O.05。[0049]圖2在補(bǔ)充羅伊氏乳桿菌DSM17938的蛋白質(zhì)限制的大鼠幼仔中生長相關(guān)蛋白43(GAP43)蛋白質(zhì)水平。[0050]CTRL-w,PR-w和PR-L.reuteri幼仔在處死時(shí)（PND14)海馬⑷和皮層⑶中的GAP43蛋白質(zhì)水平。結(jié)果以任意單位表示，是中值土中值標(biāo)準(zhǔn)誤差，η=6。在每個(gè)圖中，不帶共同的字母的中值是不同的，P<O.05。[0051]圖3在補(bǔ)充羅伊氏乳桿菌DSM17938的蛋白質(zhì)限制的大鼠幼仔中神經(jīng)膠質(zhì)纖絲酸性蛋白（GFAP)蛋白質(zhì)水平。[0052]CTRL-w,PR-w和PR-L.reuteri幼仔在處死時(shí)（PND14)海馬⑷和皮層⑶中測量GFAP水平。結(jié)果以任意單位表示，是中值土中值標(biāo)準(zhǔn)誤差，η=6。在每個(gè)圖中，不帶共同的字母的中值是不同的，P<O.05。[0053]圖4在補(bǔ)充羅伊氏乳桿菌DSM17938的蛋白質(zhì)限制的大鼠幼仔中髓磷脂堿性蛋白(MBP)蛋白質(zhì)水平。[0054]CTRL-w、PR_w和PR-L.reuteri幼仔在處死時(shí)皮層中的MBP蛋白質(zhì)水平。結(jié)果以任意單位表示，是中值土中值標(biāo)準(zhǔn)誤差，η=6。不帶共同的字母的中值是不同的，P<O.05。[0055]發(fā)明詳細(xì)說明[0056]定義：[0057]在本說明書中，以下術(shù)語具有以下含義：[0058]“益生菌”是指具有對宿主的健康或安寧的有益效果的微生物細(xì)胞制品或微生物細(xì)胞的成分[Salminen,S.etal.(1999)；Probiotics：howshouldtheybedefined,TrendsFoodSci.Technol.10:107-10]。益生菌的定義一般是公認(rèn)的并且符合WHO定義。益生菌可以包括微生物的唯一菌株、各種菌株的混合物和/或各種細(xì)菌種和屬的混合物。在混合物的情況下，單數(shù)的術(shù)語“益生菌”可以仍然用于指代益生菌混合物或制品。對于本發(fā)明來說，乳桿菌屬的微生物被認(rèn)為是益生菌。[0059]“益生元（Prebiotic)”一般是指不易消化的食物成分，其通過選擇性地刺激宿主的腸中存在的微生物的生長和/或活性來有益地影響宿主，由此試圖改善宿主健康狀態(tài)。[0060]“早產(chǎn)嬰兒”是指在37周妊娠之前出生的嬰兒。[0061]“足月嬰兒”是指在37周妊娠之后出生的嬰兒。[0062]“學(xué)步兒”是指可以走路直到三歲的兒童。[0063]“幼童（Youngchild)”是指從三歲到十歲的兒童。[0064]“兒童”意味著小于十八歲。[0065]“認(rèn)知功能”是指人覺察、認(rèn)識或理解思想的智力過程。它涉及知覺、思維、推理和記憶的所有方面。它不同于精神病學(xué)的運(yùn)動功能，其與反射和話音模式相關(guān)。[0066]羅伊氏乳桿菌（Lactobaccilusreuteri)DSM17938在全文中稱為羅伊氏乳桿菌，是BiogaiaAB,Sweden所有的羅伊氏乳桿菌菌株，具有科學(xué)的菌株名稱DSM17938，之前為羅伊氏乳桿菌ATCC55730。DSM標(biāo)記是指DSMZ德國微生物和細(xì)胞保藏所(DeutscheSammlungvonMikroorganismenundZellkulturen)GmbHInhoffenstr.7b,D_38124Braunschweig,Germany0DSM17938.DeutscheSammlungvonMikroorganismenundZellkulturenGmbHInhoffenstr.7bD_38124Braunschweig-Germany0[0067]本發(fā)明提供了益生菌羅伊氏乳桿菌DSM17938，用于促進(jìn)幼年哺乳動物中有效認(rèn)知功能的健康建立。[0068]益生菌的施用可以通過母親施用給胎兒。還可以直接地或通過母乳施用給早產(chǎn)或足月嬰兒。也可以施用給一般低于十歲的幼童，或達(dá)到十五歲的更大的兒童，或相當(dāng)年齡的動物。[0069]羅伊氏乳桿菌施用給幼年哺乳動物，其可以是人類（胎兒、嬰兒、學(xué)步兒童、或幼童）或動物，對認(rèn)知功能的健康建立具有積極效果，容許與這些功能相關(guān)的神經(jīng)系統(tǒng)正常成熟和發(fā)育。這種效果對于經(jīng)歷了例如，子宮內(nèi)生長停滯（IUGR)的那些人是特別有益的，其可能在妊娠期間的任何有害事件之后發(fā)生（例如，母親的主動或被動吸煙、母親的服藥，低胎盤質(zhì)量，胎盤位置異常，母親和/或胎兒的營養(yǎng)不良，等等）。[0070]本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的羅伊氏乳桿菌和/或含有羅伊氏乳桿菌的組合物可以用于促進(jìn)神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞生長、存活、可塑性和分化。本發(fā)明的羅伊氏乳桿菌和/或含有羅伊氏乳桿菌的組合物促進(jìn)軸突髓鞘形成和神經(jīng)元可塑性。因而本發(fā)明的羅伊氏乳桿菌和/或含有羅伊氏乳桿菌的組合物的施用促進(jìn)有效認(rèn)知功能的建立，有效認(rèn)知功能包括學(xué)習(xí)和記憶，以及因此的心智表現(xiàn)。這些效果已經(jīng)在測量與這些生物過程相關(guān)的蛋白質(zhì)表達(dá)水平的動物模型中展現(xiàn)了。[0071]因而，施用羅伊氏乳桿菌和/或含有羅伊氏乳桿菌的組合物對于經(jīng)歷了異常認(rèn)知功能（認(rèn)知功能損傷）的哺乳動物也具有效果。認(rèn)知功能損傷可能跟隨著，例如，任何應(yīng)激情況，如，影響胎兒（子宮內(nèi)）的那些，例如上述的IUGR，或影響新生兒的那些（出生時(shí)的低氧血癥-缺血，氧氣療法和氧過多，炎癥，胃腸外支持物的需要，等等），或引起氧化壓力的任何原因。[0072]在嬰兒中，本發(fā)明的羅伊氏乳桿菌和/或含有羅伊氏乳桿菌的組合物可以用于保護(hù)中樞神經(jīng)系統(tǒng)，特別是與有效認(rèn)知功能的建立相關(guān)的腦的結(jié)構(gòu)，即大腦皮層和它相關(guān)的神經(jīng)途徑，來對抗任何應(yīng)激，例如，在神經(jīng)元發(fā)育期期間發(fā)生的，因此來限制和/或防止應(yīng)激誘導(dǎo)的神經(jīng)元生長停滯和相關(guān)的認(rèn)知功能損傷。[0073]因而，在本發(fā)明的情境中，當(dāng)已經(jīng)觀察到CNS特別是腦的發(fā)育中的延遲時(shí)，可以施用羅伊氏乳桿菌。另外，在尚未觀察到這種延遲時(shí)，可以預(yù)防性地施用羅伊氏乳桿菌。[0074]通過施用根據(jù)本發(fā)明的羅伊氏乳桿菌，被治療的受試者的腦，特別包括大腦皮層和它相關(guān)的神經(jīng)途徑健康地發(fā)育。更具體地，與軸突髓鞘形成、神經(jīng)元生長和可塑性相關(guān)的許多蛋白質(zhì)（所有這些對于學(xué)習(xí)和記憶是必不可少的）的表達(dá)被上調(diào)。因而，施用對于學(xué)習(xí)和記憶以及由此的心智表現(xiàn)具有積極影響。這樣治療的嬰兒或?qū)W步兒或幼童或青年在出生后遭遇與認(rèn)知功能損傷相關(guān)的病理的風(fēng)險(xiǎn)被降低了。這種損傷包括延遲和/或受損的學(xué)習(xí)能力、高級推理的喪失、無學(xué)習(xí)能力、注意力困難、低智力，和因此的不良心智表現(xiàn)。還可能產(chǎn)生與不能正常溝通和社會化相關(guān)的其他失調(diào)（例如，孤獨(dú)癥）。[0075]在以下段落中詳細(xì)說明了就認(rèn)知功能的有效建立而言，羅伊氏乳桿菌對哺乳動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)的健康發(fā)育的有益效果。[0076]益生菌的劑量：[0077]益生菌可以作為日劑量或以組合物的形式施用。施用給懷孕的或授乳母親的羅伊氏乳桿菌的H劑量是IXIO6到IXIO12Cfu,優(yōu)選地IXIO8到IXIO11Cfu(cfu=菌落形成單位）。適合于新生嬰兒的日劑量從IXIO3至IjIX1012，優(yōu)選地IXIO7到IxiO11Cfu0[0078]因而，羅伊氏乳桿菌可以在組合物中以大范圍的百分比存在，以提供其傳遞所描述的有益效果。然而，優(yōu)選地，羅伊氏乳桿菌在組合物中以相當(dāng)于IXIO3到IX1012cfu/g干組合物的數(shù)量存在。優(yōu)選地或?qū)τ谙驊言谢虿溉槟赣H或青年的施用或益生菌以相當(dāng)于1父104到1\1011(^11/^的干組合物之間的數(shù)量存在。用于向新生兒、學(xué)步兒、和兒童施用的每克干組合物中益生菌的數(shù)量可以是低于，優(yōu)選的，IXIO6到IXIO9,當(dāng)然地，要遵循上述每日劑量。[0079]上述劑量包括所述細(xì)菌是活的、滅活的或死亡的，或甚至作為碎片例如DNA或細(xì)胞壁材料存在的可能性。換句話說，配方含有的細(xì)菌的數(shù)量以該細(xì)菌數(shù)量的菌落形成能力來表示，如同所有的細(xì)菌都是活的，而不管它們實(shí)際上是活的、滅活的或死亡的、碎片的還是任意或所有這些狀態(tài)的混合。[0080]施用方法：[0081](i)向懷孕母親施用：[0082]組合物可以通過各種途徑施用給懷孕母親，只要它誘導(dǎo)組合物與女性的胃腸道之間的聯(lián)系。優(yōu)選地，所述組合物作為懷孕母親的食物、飲料或食物增補(bǔ)劑的部分口服施用。組合物還可以在藥物組合物中施用。優(yōu)選地，施用是口服的。然而，在病理學(xué)的狀況下或在使用腸內(nèi)喂養(yǎng)時(shí)，組合物的施用可以添加在腸內(nèi)喂養(yǎng)中。[0083](ii)向新生兒子代施用：[0084]羅伊氏乳桿菌還可以作為增補(bǔ)劑（例如，作為人乳補(bǔ)強(qiáng)劑增補(bǔ)劑），或作為藥物或營養(yǎng)組合物，或作為嬰兒配方奶中的成分，直接向單獨(dú)的子代口服施用（純的，或稀釋在例如水或母乳中）。如果子代是早產(chǎn)或具有低出生體重，這樣的配方可以是嬰兒"早產(chǎn)配方"，可以是〃初始配方（starterformula)”或"后續(xù)配方（follow-onformula)”。配方還可以是低過敏原性（HA)配方，其中牛乳蛋白質(zhì)是水解的。在實(shí)施例2中給出了這樣的初始配方的實(shí)例。[0085](iii)向?qū)W步兒童、幼童和更大兒童，直到達(dá)約15歲，以及達(dá)到約20歲的青年施用：[0086]羅伊氏乳桿菌還可以以藥物或營養(yǎng)組合物、成長奶（growing-upmilk)、基于奶的飲料、食品增補(bǔ)劑、基于奶的酸乳酪、甜品和布丁、餅干和谷物棒、基于谷物和水果的飲料的形式，向?qū)W步兒童、幼童和青年施用。[0087](iv)向動物施用：[0088]羅伊氏乳桿菌還可以在水中，或以食品增補(bǔ)劑、藥物或營養(yǎng)組合物、奶或?qū)櫸锸澄锏男问较騿为?dú)的動物口服施用。[0089]與其他化合物一起施用：[0090]羅伊氏乳桿菌可以單獨(dú)施用（純的，或稀釋在水或奶中，包括例如母乳），或在與其他化合物的混合物中施用（例如，食物增補(bǔ)劑、營養(yǎng)增補(bǔ)劑、藥物、載體、調(diào)味品、易消化的或不易消化的成分）。維生素和礦物質(zhì)是典型的食物增補(bǔ)劑的實(shí)例。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，羅伊氏乳桿菌在組合物例如嬰兒配制食品中與增強(qiáng)對幼年哺乳動物的所述有益作用的其他化合物一起施用。這類協(xié)同性化合物可以是載體或基質(zhì)，其促進(jìn)羅伊氏乳桿菌遞送至腸道，或者它們可以另外增強(qiáng)組合物對后代的腸神經(jīng)系統(tǒng)的作用。這類化合物可以是協(xié)同地或單獨(dú)地影響嬰兒腸神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育，和/或強(qiáng)化益生菌的作用的其他活性化合物。這類協(xié)同性化合物的實(shí)例是麥芽糊精。麥芽糊精的作用之一是提供益生菌的載體，增強(qiáng)其作用，以及防止聚集。[0091]本發(fā)明的可以包括在組合物特別是嬰兒配制食品中的協(xié)同性化合物的其他實(shí)例是益生元化合物。益生元是不易消化的食物成分，其通過選擇性地刺激結(jié)腸中一種或有限種的細(xì)菌的生長和/或活性來有益地影響宿主，從而改善宿主健康狀態(tài)。這類成分在胃或小腸中不易被分解和吸收，因而完整通過到達(dá)結(jié)腸，在此它們被有益細(xì)菌選擇性地發(fā)酵，在此意義上它們是不可消化的。益生元的實(shí)例包括某些低聚糖，例如，低聚果糖（FOS)、牛乳低聚糖（CMOS)和低聚半乳糖（GOS)。可以使用益生元的組合，例如，90%GOS和10%短鏈低聚果糖，例如，以商標(biāo)Raftilose?銷售的產(chǎn)品，或10%菊粉，例如以商標(biāo)Raftiline?銷售的產(chǎn)品?？梢杂糜诒景l(fā)明的情境的益生元的其他實(shí)例包括獲自奶或其他來源的低聚糖的組，任選地含有唾液酸、果糖、巖藻糖、半乳糖或甘露糖。優(yōu)選的益生元有：低聚唾液糖（sos)、低聚果糖（FOS)、低聚半乳糖（GOS)、低聚異麥芽糖（IMO)、低聚木糖（XOS)、低聚阿拉伯木聚糖（AXOS)、低聚甘露聚糖（MOS)、大豆低聚糖、葡糖基蔗糖（glycosylsucrose，GS)、乳蔗糖(lactosucrose,LS)、唾液基乳糖（SL)、巖藻糖基乳糖（FL)、乳糖-N-四糖（LNNT)、乳果糖(LA)、低聚異麥芽酮糖（PAO)、低聚麥芽糖、樹膠和/或其水解產(chǎn)物、果膠、淀粉，和/或其水解產(chǎn)物。根據(jù)本發(fā)明的嬰兒配制食品優(yōu)選地進(jìn)一步含有按照干組合物總重量的0.3到10%的數(shù)量的至少一種益生元。[0092]與羅伊氏乳桿菌一起施用的碳水化物和所有其他化合物的每日劑量應(yīng)當(dāng)始終遵循公開的安全指南和管理要求。這對于向新生嬰兒，特別是低出生體重、非常低或極其低出生體重的那些嬰兒施用是特別重要的。[0093]含有羅伊氏乳桿菌的組合物例如嬰兒配制食品，可以含有數(shù)量不超過4.0,3.O或2.0g/100kcal,優(yōu)選的I.8到2.0g/100kcal的蛋白質(zhì)源。蛋白質(zhì)的類型對于本發(fā)明不是關(guān)鍵的，只要滿足了必需氨基酸含量的最低要求以及確保滿意的生長，然而優(yōu)選的是按蛋白質(zhì)源重量的超過50%是乳清。在一個(gè)實(shí)施方式中，蛋白質(zhì)含量在30%到80%乳清蛋白之間。因而，可以使用基于乳清、酪蛋白和其混合物的蛋白質(zhì)源，以及基于大豆的蛋白質(zhì)源。對于所涉及的乳清蛋白，蛋白質(zhì)源可以基于酸乳清或甜乳清或其混合物，可以包括按照任何期望比例的alpha-乳白蛋白和beta-乳球蛋白。[0094]蛋白質(zhì)可以是完整的或水解的，或完整的和水解的蛋白質(zhì)的混合物。人們可能希望的是提供部分地水解的蛋白質(zhì)（水解度在2到20%之間），例如，對于被認(rèn)為處于發(fā)生牛奶過敏的風(fēng)險(xiǎn)中的嬰兒。如果水解的蛋白質(zhì)是期望的，水解過程可以按期望的和按照本領(lǐng)域已知的來進(jìn)行。例如，可以通過在一個(gè)或更多個(gè)步驟中酶水解乳清來制備乳清蛋白水解產(chǎn)物。如果用作起始材料的乳清部分是基本上沒有乳糖的，發(fā)現(xiàn)的是在水解過程期間蛋白質(zhì)遭遇更少得多的賴氨酸阻斷。這允許賴氨酸阻斷的程度從按總賴氨酸重量的約15%降低到按賴氨酸重量的低于約10%;例如，按賴氨酸重量的約7%，其大大改善了蛋白質(zhì)源的營養(yǎng)質(zhì)量。[0095]組合物還可以包含碳水化物源和/或脂肪源。嬰兒配制食品可以含有脂質(zhì)源。脂質(zhì)源可以是適合于在嬰兒配制食品中使用的任何脂質(zhì)或脂肪。優(yōu)選的脂肪源包括棕櫚油精、高油酸葵花油和高油酸紅花油。必需的脂肪酸、亞油酸和α-亞麻酸也可以添加，作為含有高數(shù)量預(yù)先形成的花生四烯酸和二十二碳六烯酸的少量的油，例如魚油或微生物油。總起來，例如，脂肪含量優(yōu)選地貢獻(xiàn)配方的總能量的30到55%之間。脂肪源優(yōu)選地具有約5：I到約15：1，例如約8：I到約10:I的η-6比η_3的脂肪酸比例。[0096]其他來源的碳水化物可以添加到營養(yǎng)組合物中。其優(yōu)選地提供營養(yǎng)組合物的能量的約40%到約80%?？梢允褂萌魏芜m合的碳水化物，例如，蔗糖、乳糖、葡萄糖、果糖、淀粉糖漿干粉、麥芽糊精或其混合物。[0097]如果希望，可以添加額外的膳食纖維。如果添加，它優(yōu)選地包含達(dá)到營養(yǎng)組合物的能量的約5%。膳食纖維可以來自任何適合的來源，包括，例如，大豆、豌豆、燕麥、果膠、瓜耳豆膠、阿拉伯樹膠、低聚果糖或其混合物。適合的維生素和礦物質(zhì)可以以符合適當(dāng)指南的數(shù)量被包括在營養(yǎng)組合物中。[0098]可選地存在于嬰兒配制食品中的礦物質(zhì)、維生素和其他營養(yǎng)物的實(shí)例包括維生素Α、維生素BI、維生素Β2、維生素Β6、維生素Β12、維生素Ε、維生素K、維生素C、維生素D、葉酸肌醇、煙酸、生物素、泛酸、膽堿、?丐、磷、碘、鐵鎂、銅、鋅、猛、氯化物、鉀、鈉、硒、鉻、鑰、?；撬岷蚅-肉毒堿。礦物質(zhì)通常以鹽形式添加。特定礦物質(zhì)和其他維生素的存在和數(shù)量將根據(jù)預(yù)期的嬰兒群體而變化。[0099]嬰兒配制食品可以任選地含有可能具有有益效果的其他物質(zhì)，例如，纖維、乳鐵蛋白、核苷酸、核苷，等等。[0100]一種或更多種必需的長鏈脂肪酸（LC-PUFA)可以被包括在組合物中。可以添加的LC-PUFA的實(shí)例有二十二碳六烯酸（DHA)和花生四烯酸（AA)。LC-PUFA可以以一定濃度添力口，從而它們構(gòu)成在組合物中存在的大于O.01%的脂肪酸。[0101]如果需要，一種或更多種食品級乳化劑可以被包括在營養(yǎng)組合物中；例如，單甘油酯和雙甘油酯的二乙酰酒石酸酯、卵磷脂和單甘油酯或雙甘油酯，或其混合物。類似地，可以包括適合的鹽和/或穩(wěn)定劑。調(diào)味劑可以添加到組合物中。[0102]施用周期：[0103]施用的持續(xù)時(shí)間可以變化。雖然以相對短的施用持續(xù)時(shí)間預(yù)期了積極的效果（例如，對于新生兒在一到兩周期間每天施用），更長的持續(xù)時(shí)間被認(rèn)為提供了增強(qiáng)的效果，或至少，在更大的嬰兒（例如，三、五、八或十二個(gè)月）或在幼童（例如，達(dá)到4或6歲或甚至10歲的持續(xù)時(shí)間）中維持效果。施用可以繼續(xù)直到兒童約十五歲或甚至約二十歲。對于向動物施用，適用相應(yīng)的持續(xù)時(shí)間。[0104]一旦知道了懷孕，懷孕母親可以開始服用羅伊氏乳桿菌。然而，施用持續(xù)時(shí)間也可以在妊娠開始之前開始，例如，如果該女性試圖懷孕前開始。施用可以在妊娠開始后的任何時(shí)間開始。對于人類妊娠來說，可以在妊娠的相對晚期開始，優(yōu)選的，在妊娠的第3、4、5、6、7、8或9個(gè)月開始，或?qū)τ谄渌溉閯游镌谙鄳?yīng)的時(shí)期，或者在預(yù)產(chǎn)期前兩周。[0105]施用的時(shí)間可以是連續(xù)的（例如，直到和包括哺乳期直到斷乳）或是不連續(xù)的。對于更為持續(xù)的效果，連續(xù)施用是優(yōu)選的。然而，推測的是，不連續(xù)的模式（例如，在每個(gè)月的一周內(nèi)，或在間隔的周數(shù)期間每天施用）可以對后代誘導(dǎo)積極的效果。[0106]施用可以覆蓋妊娠期的至少一部分，或哺乳期的至少一部分，如果新生兒喝母乳，或在新生兒不喝母乳的情況下的相應(yīng)時(shí)間。優(yōu)選地，對懷孕母親的施用持續(xù)時(shí)間基本上覆蓋整個(gè)妊娠期，當(dāng)然也可以更短。類似地，對哺乳母親的施用持續(xù)時(shí)間優(yōu)選地基本上覆蓋整個(gè)哺乳期，當(dāng)然這個(gè)時(shí)期也可以更短。[0107]優(yōu)選地，對母親的施用是每日服用（每日服用一次或兩次），或每周服用（每周服用一次或兩次）。[0108]羅伊氏乳桿菌可以直接施用給嬰兒。特別是如果母親不母乳喂養(yǎng)或在她停止母乳喂養(yǎng)之后。然而，被母乳喂養(yǎng)的嬰兒也可以通過直接施用來接受羅伊氏乳桿菌。[0109]優(yōu)選地，向嬰兒的施用是通過每日服用。例如，如果羅伊氏乳桿菌作為嬰兒配制食品來施用，施用可以與每次喂食一起，即，對小于一歲的嬰兒每天約四次到約六次，喂食的次數(shù)隨年齡降低。對于超過一歲的嬰兒，施用可以更少，每天一次或兩次。對于學(xué)步兒和幼童，施用可以是每天的或每周的（每周服用一次或兩次）。[0110]經(jīng)由母乳喂養(yǎng)、或通過直接施用、或兩種方法向嬰兒施用可以持續(xù)直到六月齡，或甚至一歲或更大。因而，如果進(jìn)行哺乳，羅伊氏乳桿菌可以在哺乳期間施用，或在部分或完全斷乳之后施用。施用可以從嬰兒持續(xù)到學(xué)步兒童期，甚至直到二十歲。[0111]羅伊氏乳桿菌施用的效果：[0112]施用給新生兒的羅伊氏乳桿菌促進(jìn)有效認(rèn)知功能的建立。在實(shí)施例I中詳述的大鼠模型實(shí)驗(yàn)中，評估了羅伊氏乳桿菌施用對神經(jīng)元成熟，具體是與高級認(rèn)知功能相關(guān)的結(jié)構(gòu)大腦皮層和海馬中的神經(jīng)元成熟的影響。[0113]在這個(gè)實(shí)驗(yàn)中，經(jīng)歷了母親的飲食誘導(dǎo)的子宮內(nèi)生長停滯的幼仔（PR組），以及沒有經(jīng)歷IUGR的幼仔（CTRL)從出生后2天起補(bǔ)充水（對照：S卩，CTRL-w和PR-w)或羅伊氏乳桿菌(PR_L.reuteri)。[0114]出生后2周，在處死時(shí)，通過皮層和海馬中神經(jīng)元標(biāo)志物和神經(jīng)營養(yǎng)因子的水平評估腦中的神經(jīng)元發(fā)育。[0115]腦衍生的神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF)的提高的表達(dá)：[0116]腦衍生的神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF)是支持神經(jīng)元的存活、生長和分化的神經(jīng)營養(yǎng)因子[Huang,E.J.andReichardt,L.F.(2001)]。文獻(xiàn)中有許多報(bào)道將BDNF與學(xué)習(xí)和記憶聯(lián)系起來[Aguiar,A.S.Jr.,etal.(2011)；Shortboutsofmild-intensityphysicalexerciseimprovespatiallearningandmemoryinagingrats!InvolvementofhippocampalplasticityviaAKT,CREBandBDNFsignaling,Mech.AgeingDev.，[付印前電子公開]];[0117]評估處死時(shí)在幼仔的海馬和皮層中BDNF(前體蛋白（PR0)，其隨后蛋白水解裂解得到成熟形式（成熟的））的水平。結(jié)果在圖I中顯示。[0118]在PR-w幼仔中，在海馬中，pro和成熟BDNF的水平維持在CTRL-w水平（圖1A、B)，而與CTRL-w相比，在PR-w幼仔的皮層中成熟BDNF的水平稍微提高（圖2B)。[0119]從PND2到PND14補(bǔ)充羅伊氏乳桿菌伴隨著海馬和皮層中pro和成熟BDNF的水平的顯著提高。[0120]已經(jīng)報(bào)道的是，在大鼠中學(xué)習(xí)和記憶功能障礙的藥物誘發(fā)的改善與提高的BDNF表達(dá)水平相關(guān)[Dai，M.H.，etal.(2011)；Effectofvenlafaxineoncognitivefunctionandhippocampalbrain-derivedneurotrophicfactorexpressioninratswithpost-strokedepression，ZhejiangDaXueXueBaoYiXueBan,40(5):527-34]。[0121]此外，已經(jīng)報(bào)道的是，BDNF在海馬塑性方面是重要的，其對學(xué)習(xí)和記憶有直接影響。[Aguiar,A.S.Jr.,etal.(2011)]0[0122]BDNF表達(dá)水平在情緒方面也是重要的。[Hashimoto，K.(2010)；Brain-derivedneurotrophicfactorasabiomarkerformooddisorders：anhistoricaloverviewandfuturedirections,PsychiatryClin.Neurosci.,64(4):341-57].Review.Erratumin!PsychiatryClinNeurosci.20100ct；64(5):590。[0123]考慮這些數(shù)據(jù)和BDNF在神經(jīng)元存活、生長和分化過程中的已知的作用，在當(dāng)前動物模型中觀察到的提高的表達(dá)水平可能會轉(zhuǎn)化為在產(chǎn)后發(fā)育期間的生物學(xué)和認(rèn)知益處和神經(jīng)保護(hù)。[0124]生長相關(guān)蛋白43(GAP43)的提1?的表達(dá)：[0125]生長相關(guān)蛋白（GAP43)是在發(fā)育期間在神經(jīng)元生長錐中高度表達(dá)的生長和可塑性蛋白[Mercken，M.etal.(1992)；Immunocytochemicaldetectionofthegrowth-associatedproteinB~50bynewlycharacterizedmonoclonalantibodiesinhumanbrainandmuscle，J.Neurobiol.，23(3):309-21]。它是神經(jīng)兀發(fā)育的標(biāo)志物。[Dermy，J.B.(2006)]。蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)域所說明的各種相互作用被認(rèn)為是它在突觸可塑性、神經(jīng)發(fā)生期間參與膜延伸、神經(jīng)遞質(zhì)釋放和長期增強(qiáng)作用方面起作用的基石出[Oestreicher,A.B.，etal.(1997);B_50，thegrowthassociatedprotein-43：modulationofcellmorphologyandcommunicationinthenervoussystem,Prog.Neurobiol.,53(6):627-86]。[0126]此外，已經(jīng)顯示了GAP43對于記憶是重要的[Rekart，J.L.etal.(2005)；Hippocampal-dependentmemoryisimpairedinheterozygousGAP43knockoutmice，Hippocampus，15(I):1_7]0[0127]近來報(bào)道的是，在妊娠期間的異氟烷暴露可能導(dǎo)致后代大鼠中出生后的空間記憶和學(xué)習(xí)損傷，這可以部分地由海馬區(qū)中GAP43的下調(diào)所解釋[Kong，F(xiàn).J.etal.(2011)；Effectsofisofluraneexposureduringpregnancyonpostnatalmemoryandlearninginoffspringrats,Mol.Biol.Rep.,[Epubaheadofprint]]。[0128]在實(shí)施例I的動物模型中測量了GAP43的蛋白質(zhì)表達(dá)水平，結(jié)果在圖2中顯示。在海馬（圖2A)和皮層（圖2B)中測量了蛋白質(zhì)水平。與CTRL-w相比，在PR-w幼仔的海馬中GAP43的蛋白質(zhì)水平顯著地降低（P=O.04)(圖2A)，而在皮層中統(tǒng)計(jì)學(xué)上沒有受影響(附圖2B)。這反應(yīng)了與對照相比，在PR-w幼仔的海馬中降低的神經(jīng)發(fā)生。[0129]從PND2到PND14補(bǔ)充羅伊氏乳桿菌顯著地提高了兩種腦部分中的GAP43蛋白質(zhì)水平。這表明在神經(jīng)元發(fā)育期間羅伊氏乳桿菌促進(jìn)這些組織中神經(jīng)發(fā)生的可能性，這可能在后續(xù)的生活期間轉(zhuǎn)化為認(rèn)知效益。具體的，根據(jù)這些結(jié)果，以及我們所了解的關(guān)于GAP43在神經(jīng)元成熟中的作用，我們可以確定，向幼年哺乳動物施用羅伊氏乳桿菌有助于海馬和皮層中的神經(jīng)元生長、存活、分化和可塑性，從而有助于學(xué)習(xí)和記憶，以及由此的心智表現(xiàn)。[0130]GAP43對情緒調(diào)節(jié)也是重要的。近來，報(bào)道的是，在非人類靈長類中早期的親代剝奪，在不存在隨后的刺激的情況下，對有關(guān)突觸功能和可塑性的基因的海馬表達(dá)有長期影響。在狨猴模型中觀察到的GAP43和血清素IA受體表達(dá)水平的降低與情緒失調(diào)中發(fā)現(xiàn)的是可比較的。據(jù)作者所說，這支持了這種可能性，后一種情緒失調(diào)反映了早期發(fā)育對疾病易感性的貢獻(xiàn)[Law,A.J.etal.(2009)Earlyparentaldeprivationinthemarmosetmonkeyproduceslong-termchangesinhippocampalexpressionofgenesinvolvedinsynapticplasticityandimplicatedinmooddisorder，Neuropsychopharmacology,May；34(6):1381-94]。[0131]有趣地，GAP43的缺陷已經(jīng)與孤獨(dú)行為相聯(lián)系[Zaccaria，K.J.，etal.(2010)；Resistancetochangeandvulnerabilitytostress:autistic_likefeaturesofGAP43_deficientmice，GenesBrainBehav.,9(8):985-96]。[0132]因而，根據(jù)這一數(shù)據(jù)，人們可能猜測，根據(jù)本發(fā)明施用羅伊氏乳桿菌還可以幫助防止和/或減弱與GAP43相關(guān)的行為失調(diào)，例如孤獨(dú)癥和情緒失調(diào)。[0133]GFAP(神經(jīng)膠質(zhì)纖絲酸性蛋白）和MBP(髓磷脂堿性蛋白）的提高的表達(dá)：[0134]在實(shí)施例I的動物模型中測量了神經(jīng)膠質(zhì)纖絲酸性蛋白（GFAP)和髓磷脂堿性蛋白（MBP)的表達(dá)水平。結(jié)果在圖3(GFAP，A為海馬，B為皮層）和圖4(MPB皮層）中顯示。[0135]神經(jīng)膠質(zhì)纖絲酸性蛋白（GFAP)是對于髓鞘形成、結(jié)構(gòu)和維持，以及對于血腦屏障的適當(dāng)功能重要的中間纖維蛋白[Eng,L.F.etal.(2000)；Glialfibrillaryacidicprotein：GFAP-thirty-oneyears(1969-2000),Neurochem.Res.,25(9-10):1439-51]。新近的報(bào)告顯示，GFAP表達(dá)在出生后發(fā)育的早期階段急劇提高[Kim，J.S.，etal.(2011)；Differentialpatternsofnestinandglialfibrillaryacidicproteinexpressioninmousehippocampusduringpostnataldevelopment,J.Vet.Sci.,12(I):l-6]。[0136]髓磷脂堿性蛋白（MBP)是在神經(jīng)的髓鞘形成過程中重要的蛋白質(zhì)。[0137]在海馬或在皮層中，GFAP的蛋白質(zhì)水平不受蛋白質(zhì)限制的影響（圖3)。然而，通過羅伊氏乳桿菌補(bǔ)充，在兩種腦部分中它顯著提高了。這表明施用羅伊氏乳桿菌具有有益效果，與海馬和皮層中GFAP的提高的表達(dá)水平相關(guān)，從而確保了髓鞘形成過程，維持神經(jīng)元結(jié)構(gòu)，以及血腦屏障的適當(dāng)功能。[0138]髓鞘形成在人腦的發(fā)育期中起到關(guān)鍵作用，在完成之前，在出生后持續(xù)至少10到12年[Baumann,N.andPham-Dinh7D.(2001)]。因而,髓鞘形成的發(fā)育速度決定了相關(guān)的腦功能的發(fā)育速度。[0139]髓鞘形成過程對于傳遞快速的神經(jīng)信號傳播是重要的，容許不同的腦區(qū)域內(nèi)有效的組織連通性，改善對于認(rèn)知、感覺和運(yùn)動功能所需的連接獨(dú)立的腦區(qū)的神經(jīng)途徑。[0140]因而，羅伊氏乳桿菌是新的營養(yǎng)解決方案，來在新生兒期促進(jìn)腦的髓鞘形成發(fā)育過程。[0141]羅伊氏乳桿菌對髓鞘形成過程的這種效果通過MBP的提高的表達(dá)所證實(shí)，MBP是涉及神經(jīng)的髓鞘形成過程的另一種蛋白質(zhì)（圖4)。[0142]實(shí)施例I中描述的實(shí)驗(yàn)的結(jié)果展現(xiàn)了，施用羅伊氏乳桿菌促進(jìn)了皮層和海馬中的神經(jīng)元生長、存活、分化、可塑性。通過促進(jìn)髓鞘形成和神經(jīng)元可塑性，確保了正確的神經(jīng)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。因而，羅伊氏乳桿菌施用支持了認(rèn)知功能的建立，特別是學(xué)習(xí)和記憶，以及由此的心智表現(xiàn)。[0143]羅伊氏乳桿菌的施用幫助阻止和/或降低認(rèn)知功能損傷和/情緒反常/擾動的嚴(yán)重度。[0144]羅伊氏乳桿菌菌株是從母乳喂養(yǎng)的兒童的糞便微生物群中分離的益生菌。因而，對于嘗試盡可能緊密地模擬母乳喂養(yǎng)兒童的微生物群的健康促進(jìn)策略，施用羅伊氏乳桿菌，特別是向非母奶喂養(yǎng)兒童施用，可以提供與不在母乳喂養(yǎng)兒童中發(fā)現(xiàn)的其他菌株相比的優(yōu)點(diǎn)。[0145]實(shí)施例I:[0146]動物研究（飼喂和處死）：[0147]動物試驗(yàn)在OfficeVeterinaireCantonal,EtatdeVaud認(rèn)可的授權(quán)No.2120之下進(jìn)行。從Harlan,Barcelona獲得妊娠一周后的兩月齡的雌性Sprague-Dawley大鼠。在它們到達(dá)的當(dāng)天，母鼠置于單獨(dú)的籠子中，隨機(jī)分為對照（CTRL)或蛋白質(zhì)限制（PR)組。動物不限量得到食物和水，維持在12小時(shí)的光/暗周期下。[0148]CTRL和PR母鼠的日糧在表I中詳述。CTRL母鼠接受含有20%蛋白質(zhì)（酪蛋白）的對照日糧，配合妊娠期間標(biāo)準(zhǔn)的大鼠蛋白質(zhì)需要量（Reevesetal.，1993)。PR母鼠接受含有10%蛋白質(zhì)（酪蛋白）的PR日糧。兩種日糧是等熱量的，蛋白質(zhì)缺乏通過添加玉米淀粉來平衡。[0149]表I:對照（CTRL)和蛋白質(zhì)限制（PR)AIN_93G日糧的組成日糧[0150]成分CTRLPR玉米淀粉5363酪蛋白（K-Caseinate)2010蔗糖1010大豆油77纖維素55礦物質(zhì)mixAIN-93G4-礦物質(zhì)mixAIN-93M-4礦物質(zhì)mixAIN-93II[0151]【權(quán)利要求】1.羅伊氏乳桿菌DSM17938，所述羅伊氏乳桿菌DSM17938用于促進(jìn)在幼年哺乳動物中的認(rèn)知功能的健康建立，和/或預(yù)防、或修復(fù)或降低認(rèn)知功能損傷的嚴(yán)重度的羅伊氏乳桿菌DSM17938。2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的羅伊氏乳桿菌DSM17938，其中，所述幼年哺乳動物是動物。3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的羅伊氏乳桿菌DSM17938，其中，所述幼年哺乳動物是人類胎兒、早產(chǎn)或足月嬰兒、學(xué)步兒或兒童或青年。4.權(quán)利要求1-3的任一項(xiàng)所述的羅伊氏乳桿菌DSM17938，其中，所述幼年哺乳動物在子宮內(nèi)、或在出生期間或出生之后經(jīng)歷了或正在經(jīng)歷IUGRjP/或有或被預(yù)測有低的、非常低的或極低的出生體重，小于胎齡，和/或正在遭受或遭受了認(rèn)知功能損傷。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的羅伊氏乳桿菌DSM17938，其中，所述認(rèn)知功能損傷是由于出生時(shí)的低氧血癥-缺血。6.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的羅伊氏乳桿菌DSM17938，其中，向胎兒施用是通過向懷孕母親施用。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的羅伊氏乳桿菌DSM17938，其中，向懷孕母親施用在她懷孕I、2、3、4、5、6、7、8或9個(gè)月時(shí)開始，或?qū)τ陬A(yù)期的動物相當(dāng)?shù)臅r(shí)間施用。8.根據(jù)權(quán)利要求1-5的任一項(xiàng)所述的羅伊氏乳桿菌DSM17938，其中，向幼年哺乳動物施用是直接的施用或間接的通過哺乳的母親施用。9.根據(jù)前述權(quán)利要求的任一項(xiàng)所述的羅伊氏乳桿菌DSM17938，其中，向胎兒或嬰兒的施用期持續(xù)至少一周，優(yōu)選的兩周，更優(yōu)選的至少一個(gè)月。10.根據(jù)前述權(quán)利要求的任一項(xiàng)所述的羅伊氏乳桿菌DSM17938，其中，向?qū)W步兒或幼童的施用期持續(xù)至少4周，優(yōu)選的2-12個(gè)月，更優(yōu)選的至少18個(gè)月的時(shí)間。11.根據(jù)前述權(quán)利要求的任一項(xiàng)所述的羅伊氏乳桿菌DSM17938，其中，對兒童的施用持續(xù)時(shí)間是直到該兒童4歲，優(yōu)選的6歲，更優(yōu)選的達(dá)到15歲，對青年的施用持續(xù)時(shí)間是直到成年早期20歲。12.根據(jù)前述權(quán)利要求的任一項(xiàng)所述的羅伊氏乳桿菌DSM17938，其中，所述羅伊氏乳桿菌DSM17938以其純的形式，或稀釋在水或母乳中，在食品增補(bǔ)劑中，或在奶補(bǔ)強(qiáng)劑中，或任何腸內(nèi)的喂養(yǎng)，包括營養(yǎng)喂養(yǎng)期間的奶支持物，在嬰兒配制食品中，或在基于奶的飲料中直接向嬰兒或?qū)W步兒童施用。13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的羅伊氏乳桿菌DSM17938，其中，所述嬰兒配制食品是用于早產(chǎn)嬰兒的配方奶、初始配方奶或后續(xù)配方奶或成長奶。14.根據(jù)前述權(quán)利要求的任一項(xiàng)所述的羅伊氏乳桿菌DSM17938，其中，向懷孕或哺乳母親或兒童或青年施用是口服，優(yōu)選的在食物、飲料、食物增補(bǔ)劑或藥物組合物中。15.根據(jù)權(quán)利要求的任一項(xiàng)所述的羅伊氏乳桿菌DSM17938，其中，所述羅伊氏乳桿菌DSM17938以每日劑量IXIO3到IX1012，優(yōu)選的IXIO7到IX10ncfu(cfu=菌落形成單位)被施用給嬰兒、學(xué)步兒、兒童或青年。16.根據(jù)前述權(quán)利要求的任一項(xiàng)所述的羅伊氏乳桿菌DSM17938，其中，所述羅伊氏乳桿菌DSM17938作為包含IXIO3到IX1012cfu/g干組合物的組合物被施用給懷孕或哺乳母親，或嬰兒，或?qū)W步兒或兒童或青年。17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的羅伊氏乳桿菌DSM17938，其中，所述組合物包含進(jìn)一步的成分或益生元，優(yōu)選地選自菊粉、低聚果糖（FOS)、短鏈低聚果糖（短鏈I0S)、低聚半乳糖(GOS)和牛乳低聚糖(CMOS)。18.根據(jù)權(quán)利要求16或17所述的羅伊氏乳桿菌DSM17938，其中，所述組合物還包含一種或更多種附加的益生菌。19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的羅伊氏乳桿菌DSM17938，其中，所述一種或更多種其他益生菌優(yōu)選地選自BifidobacteriumlongumBB536(ATCCBAA-999)；Lactobacillusrhamnosus(CGMCC1.3724)、Bifidobacteriumlactis(NCC2818)或其混合物。20.根據(jù)前述權(quán)利要求的任一項(xiàng)所述的羅伊氏乳桿菌DSM17938，其中，所述羅伊氏乳桿菌DSM17938已被滅活從而使得它為非復(fù)制性的。21.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的羅伊氏乳桿菌DSM17938，其中，所述羅伊氏乳桿菌DSM17938用于促進(jìn)幼年哺乳動物中的認(rèn)知、學(xué)習(xí)和/或記憶和/或心智表現(xiàn)。22.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的羅伊氏乳桿菌DSM17938，其中，所述羅伊氏乳桿菌DSM17938用于促進(jìn)幼年哺乳動物中的注意力能力、知覺、執(zhí)行能力、語言能力和情緒。23.根據(jù)前述權(quán)利要求的任一項(xiàng)所述的羅伊氏乳桿菌DSM17938，其中，所述羅伊氏乳桿菌DSM17938用于阻止和/或降低受損的學(xué)習(xí)能力，執(zhí)行能力的受損或不良發(fā)育，記憶損傷，注意力困難，降低的智力，不良心智表現(xiàn)，情緒反常/擾動，或與不能溝通和例如孤獨(dú)癥的社會化相關(guān)的失調(diào)中任一項(xiàng)的嚴(yán)重度。24.根據(jù)前述權(quán)利要求的任一項(xiàng)所述的羅伊氏乳桿菌DSM17938，其中，所述羅伊氏乳桿菌DSM17938用于提高幼年哺乳動物的皮層和/或海馬中GAP43、BDNF,GFAP或MBP的任一個(gè)的表達(dá)水平。25.根據(jù)前述權(quán)利要求的任一項(xiàng)所述的羅伊氏乳桿菌DSM17938，其中，所述羅伊氏乳桿菌DSM17938用于促進(jìn)幼年哺乳動物的皮層和/或海馬中髓鞘形成、神經(jīng)元生長、神經(jīng)元存活、神經(jīng)元分化和神經(jīng)元可塑性的任一項(xiàng)。26.—種包含羅伊氏乳桿菌DSM17938的組合物，所述羅伊氏乳桿菌DSM17938用于促進(jìn)幼年哺乳動物中認(rèn)知功能的健康建立和/或修復(fù)、阻止或降低認(rèn)知功能損傷的嚴(yán)重度。27.根據(jù)權(quán)利要求2所述6的組合物，其中，所述組合物是食品增補(bǔ)劑、奶補(bǔ)強(qiáng)劑、初始嬰兒配制食品、后續(xù)嬰兒配制食品、成長奶或基于奶的飲料。【文檔編號】A23L1/30GK104185427SQ201280065591【公開日】2014年12月3日申請日期:2012年11月30日優(yōu)先權(quán)日:2011年12月30日【發(fā)明者】加芙列拉·貝爾貢齊立-德蒙,馬加利·福爾,尼科爾·庫施申請人:生命大地女神有限公司