合成的植酸酶變體的制作方法【專利摘要】本發明涉及具有升高的熱穩定性、在pH2對酸有升高的穩定性、對胃蛋白酶有升高的穩定性和具有寬的活性pH范圍的合成的植酸酶，并涉及編碼合成的植酸酶的分離的核酸序列，以及在動物飼料中使用該植酸酶來減少糞漿中磷酸鹽的含量，和包含該合成的植酸酶的動物飼料添加劑和動物飼料。【專利說明】合成的植酸酶變體[0001]本發明涉及植酸酶、編碼植酸酶的氨基酸序列和編碼植酸酶的核苷酸序列、生產和使用植酸酶的方法、以及包含這些植酸酶的動物飼料。[0002]磷是活生物體生長的必需元素。在畜牧業中，作為一個原則，必須在飼料中補充無機磷，以獲得好的生長速率。在谷物和豆類植物中，磷主要是以植酸鹽的形式儲存。然而，單胃動物，例如豬、家禽和魚，不能直接吸收植酸鹽或植酸，這導致植酸鹽的排泄，這意味著在進行密集家畜飼養區域中磷的超負荷。此外，通過結合例如鈣、銅或鋅等金屬，植酸作為對單胃動物新陳代謝造成不利影響的物質。為了補償這些動物中磷酸鹽的不足和確保其充分生長和足夠健康，人們向動物飼料中添加無機磷酸鹽。所述無機磷酸鹽的添加花費昂貴，并導致對環境的進一步的不利影響。通過在動物飼料中使用植酸酶，植酸鹽被水解，并導致糞漿(slurry)中較低含量的肌醇磷酸鹽和無機磷酸鹽。向動物飼料中添加植酸酶提高了有機磷的可獲得性，并減少了由排泄的、結合于植酸的磷酸鹽對環境的不利影響。在文獻中描述了真菌和細菌來源的許多天然的植酸酶。[0003]植酸酶，也稱為肌醇六磷酸磷酸水解酶，其是一類能夠從植酸切割至少一個磷酸殘基的磷酸酶。[0004]EP420358總體上描述了微生物植酸酶的克隆和表達，WO2006/38062描述了作為動物飼料添加劑的來源于弗氏檸檬酸細菌(Citrobacterfreundii)的微生物植酸酶,和WO2007/112739描述了基于來自布氏檸檬酸細菌(Citrobacterbraakii)的天然植酸酶的植酸酶和其生產及其在動物飼料中使用的方法。[0005]Haefner等人(HaefnerS.,KnietschA.,ScholtenE.,BraunJ.,LohscheidtM.和Zelder0.(2005).植酸酶的生物技術生產和應用.ApplMicrobiolBiotechnol68:588-597)描述了植酸酶在人或動物營養領域中的多種已知的用途。W02008/097620中描述了植酸酶的其它用途，例如用于在生物乙醇生產中水解生物質或淀粉。[0006]WO2008/116878和WO2010/034835描述了來自蜂房哈夫尼菌(Hafniaalvei)的植酸酶、其蛋白質序列和變體。Zinin等人(FEMSMicrobiologyLetters(2004)236:283-290)公開了來自變形肥桿菌(Obesumbacteriumproteus)的植酸酶，其序列存在UNIPR0T數據庫中，登錄號為Q6U677。專利申請WO2006/043178、WO2008/097619和WO2008/092901描述了來自多種布丘氏菌屬物種(Buttiauxellasp.)的植酸酶。目前具有最高比活性的天然植酸酶包括來自中間型耶爾森氏菌(Yersiniaintermedia)(W02007/128160)和鼠疫耶爾森氏菌(Yersiniapestis)(W002/048332)的天然植酸酶。[0007]但是，并非所有這些目前可獲得的植酸酶均顯示出生產動物飼料添加劑所必需的那些特性。目前可獲得的植酸酶不具備足夠的熱穩定性來用于動物飼料顆粒的生產中而其活性沒有顯著的喪失。在動物飼料顆粒的生產中，植酸酶與其它常規動物飼料成分在高溫和高濕下被擠壓，以便作為整體來飼喂家畜。在制備期間只在溫度高于80°C才實現有效破壞沙門氏菌(salmonellasp.)和淀粉的膠凝(Amerah等人，WorldsPoultyScienceJournal(2011)67:29-45)。在熱和濕條件下的這種擠壓導致植酸酶活性的大量損失。防止該活性損失的一個可能性是對植酸酶顆粒的復雜包衣，以使它們免受熱的作用。這種植酸酶添加劑的包衣會由于包衣所使用的脂肪或聚合物而產生相當大的額外成本。市售植酸酶的劑量通常基于確定PH5.5的活性(DINISO30024:2009)而確定，但不適應于匹配在各消化道中的pH。這通過不為5.5的pH值處活性的變化導致相當大的劑量不當。[0008]因此，本發明的一個目的是提供具有足夠的熱穩定性的植酸酶，以使其能夠被用于無沙門氏菌的飼料顆粒的生產而不需要例如包衣等額外的保護性措施且具有盡可能低的活性損失。本發明另外的目的是提供可以在寬的PH范圍內使用的植酸酶，伴隨著盡可能小的酶活性降低，以使它能在不同動物物種的消化道的不同PH范圍內可用，從而即使在由于不同的飼料成分而導致PH范圍變動的情況下也確保其在消化道中足夠的酶活性。[0009]這些目的通過合成的植酸酶而得到實現，所述合成的植酸酶具有與SEQID24的氨基酸序列具有至少85%同一性的氨基酸序列。本發明的這些植酸酶具有至少80°C的熱穩定性，并因此適合于在飼料顆粒的生產中使用而其活性不因為造粒過程中的熱濕條件而遭受相當大的活性損失。[0010]此外，它們具有3個以上pH單位的寬pH范圍，在該pH范圍內，它們保留至少50%的在pH5.5處確定的活性，因此當劑量是基于pH5.5的活性確定的時候，它們能夠在具有不同消化PH的多種動物中使用和與不同的飼料成分一起使用，且沒有導致活性損失的過低劑量，并由此不會發生動物對磷酸鹽的增加排泄。[0011]此外，本發明的植酸酶令人吃驚地具有升高的蛋白水解穩定性，并因此它們能夠通過胃而基本上沒有活性損失且保留了在實際作用位點腸中的活性。此外，本發明的植酸酶在PH2具有至少85%的穩定性，并因此確保了在高度酸性范圍內僅有小的活性損失。[0012]合成的植酸酶也能夠具有與SEQID24的氨基酸序列有至少90%同一性的氨基酸序列。[0013]優選地，本發明的合成的植酸酶具有與SEQID24的氨基酸序列有至少94%、特別地優選95%和優選地96、97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0014]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-OOI(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0015]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-002(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0016]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-003(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0017]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-004(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0018]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-005(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0019]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-006(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0020]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-007(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0021]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-008(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0022]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-009(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0023]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-010(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0024]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-OlI(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0025]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-012(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨`基酸序列。[0026]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-013(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0027]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-014(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0028]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-015(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0029]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-016(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0030]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-017(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0031]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-018(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0032]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-019(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0033]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-020(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0034]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-021(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0035]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-022(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0036]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-023(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0037]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-024(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0038]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-025(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0039]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-026(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0040]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-027(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0041]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-028(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0042]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-029(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0043]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-030(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0044]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-031(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0045]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-032(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0046]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-033(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0047]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-034(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0048]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-035(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0049]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-036(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0050]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-037(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0051]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-038(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0052]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-039(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0053]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-040(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0054]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-041(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0055]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-042(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0056]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-043(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0057]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-044(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0058]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-045(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0059]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-046(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0060]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-047(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0061]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-048(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0062]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-049(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0063]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-050(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0064]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-051(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0065]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-052(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0066]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-053(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0067]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-054(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0068]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-055(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0069]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-056(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0070]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-057(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0071]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-058(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0072]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-059(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0073]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-060(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0074]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-061(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0075]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-062(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0076]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-063(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0077]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-064(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。`[0078]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-065(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0079]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-066(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0080]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-067(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0081]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-068(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0082]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-069(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0083]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-070(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0084]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-071(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0085]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-072(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0086]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-073(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0087]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-074(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0088]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-075(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0089]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-076(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0090]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-077(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0091]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-078(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0092]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-079(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0093]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-080(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0094]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-081(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0095]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-082(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0096]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-083(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0097]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-084(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0098]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-085(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0099]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-086(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0100]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-087(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0101]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-088(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0102]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-089(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0103]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-090(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0104]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-091(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0105]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-092(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0106]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-093(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0107]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-094(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0108]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-095(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0109]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-096(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0110]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-097(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0111]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-098(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0112]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-099(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0113]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-1OO(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0114]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體Phv-101(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0115]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-102(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0116]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-103(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0117]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-104(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0118]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-105(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0119]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-106(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0120]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-107(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0121]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-109(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0122]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-110(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0123]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體Phv-lll(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0124]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-112(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0125]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-113(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0126]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-114(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0127]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-115(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0128]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-116(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0129]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-117(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0130]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-118(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0131]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-119(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0132]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-120(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0133]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-121(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0134]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-122(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0135]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-123(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0136]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-124(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0137]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-125(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0138]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-126(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0139]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-127(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0140]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-128(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0141]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-129(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0142]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-130(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0143]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-131(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0144]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-132(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0145]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-133(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0146]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-134(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0147]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-135(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0148]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-136(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0149]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-137(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0150]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-138(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0151]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-139(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0152]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-140(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0153]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-141(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0154]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-142(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0155]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-143(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0156]所述目的進一步地通過這`樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-144(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0157]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-145(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0158]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-146(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0159]所述目的進一步地通過這樣的合成的植酸酶實現，所述合成的植酸酶具有與突變體PhV-147(參見表1，基于SEQID24的按照第2欄的突變)的氨基酸序列有至少95%，優選96%，優選地97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0160]兩個蛋白質序列或核酸序列之間的同一'丨生定義為通過needle程序(2011年4月獲得的版本)計算的同一性。Needle是可自由獲取的EMBOSS程序包的一部分，其可以從網站http://emboss,sourceforge.net/下載。使用標準參數:空位開放10.0(“空位開放罰分”)，空位延伸0.5(“空位延伸罰分”)，就蛋白質來說使用數據文件EBL0SUM62(矩陣)，就DNA來說使用數據文件EDNAFULL(矩陣)。[0161]在一個實施方案中，與本發明的上述植酸酶之一比較，合成的植酸酶在至少一個位置處具有至少一個保守的氨基酸的交換。[0162]為了本發明的目的，“保守的”指氨基酸G至A;A至G，S;V至I，L，A，T，S;I至V,L，M;L至I,M，V;M至L,I，V;P至A,S，N;F至Y,W，H;Y至F，W,H；ffMY,F，H;R至K，E，D;K至R，E，D;H至Q，N，S;D至N,E,K,R，Q;E至Q,D,K,R，N;S至T，A;T至S，V，A;C至S，Τ，A;N至D，Q，H，S;Q至E，N，H，K，R的交換。在本申請中，可以將一個氨基酸的任何保守交換與另一氨基酸的任何保守交換組合，只要植酸酶活性被保留了即可。[0163]有利地，合成的植酸酶是分離的植酸酶。也可行的是，合成的植酸酶不是作為純化的分離植酸酶，而是作為發酵液的形式呈現，其中生物質被完全、部分除去或完全沒有除去。在此時，可以通過移除液體來對發酵液進行濃縮或完全干燥。可以將這些未純化的或部分純化的植酸酶溶液或植酸酶固體用作不同產品中的添加劑。[0164]與來自生物體莫氏耶爾森氏菌(Yersiniamollaretii)和哈夫尼菌(Hafniasp)的兩個野生型植酸酶(其是構建SEQID18的合成植酸酶構建體的基礎)比較，本發明的合成的植酸酶有利地對胃蛋白酶具有升高的穩定性，在PH2具有提高的酸穩定性，寬的活性PH范圍和/或升高的熱穩定性。[0165]本發明也包含分離的核酸序列，所述分離的核酸序列編碼的植酸酶具有與SEQID24的氨基酸序列有至少81%，有利地85或90%，尤其優選地94%和特別地95、96、97、98或99%同一性的氨基酸序列。[0166]本發明同樣包含編碼具有植酸酶活性的酶的分離的核酸序列，其中該核酸序列與SEQID25的核酸序列具有至少85%的同一性，或在高嚴格條件下和上述與SEQID25的核酸序列具有至少85%的同一性的序列之一的互補鏈雜交的核酸序列。在一個特定的實施方案中，分離的核酸序列與SEQID25具有高于90%的同一性，特別是至少91、92、93、94、95、96、97、98或99%的同一性。[0167]本發明還包含重組表達載體，所述載體包含根據本發明的核酸序列之一。[0168]本發明也包含重組宿主細胞，所述重組宿主細胞包含根據本發明的核酸之一，或包含根據本發明的重組表達載體。[0169]本發明的目的還通過重組生產生物體實現，其中該生物體是非人生產生物體，其包含根據本發明的核酸序列之一或其包含根據本發明的重組表達載體。尤其優選地，重組生產生物體為曲霉屬(Aspergillus)、畢赤酵母屬(Pichia)、木霉屬(Trichoderma)^R遜酵母屬(Hansenula)、酵母屬(Saccharomyces)、芽孢桿菌屬(Bacillus)、埃希氏桿菌屬(Escherischia)、克魯維酵母屬(Kluyveromyces)、裂殖酵母屬(Schizosaccharomyces)之一的生物。[0170]本發明還包含動物飼料添加劑，所述動物飼料添加劑包含至少一種根據本發明的植酸酶，特別地具有對應于SEQID24的氨基酸序列或突變體PhV-001，PhV-002,PhV-003，PhV-004,PhV-005,PhV-006,PhV-007,PhV-008,PhV-009,PhV-010,PhV-OlI,PhV-012,PhV-013，PhV-014,PhV-015,PhV-016,PhV-017,PhV-018,PhV-019,PhV-020,PhV-021,PhV-022,PhV-023,PhV-024,PhV-025,PhV-026,PhV-027,PhV-028,PhV-029,PhV-030,PhV-031,PhV-032，PhV-033,PhV-034,PhV-035,PhV-036,PhV-037,PhV-038,PhV-039,PhV-040,PhV-041,PhV-042，PhV-043,PhV-044,PhV-045,PhV-046,PhV-047,PhV-048,PhV-049,PhV-050,PhV-051,PhV-052,PhV-053,PhV-054,PhV-055,PhV-056,PhV-057,PhV-058,PhV-059,PhV-060,PhV-O61，PhV-062,PhV-063,PhV-064,PhV-065,PhV-066,PhV-067,PhV-068,PhV-069,PhV-070,PhV-071,PhV-072,PhV-073,PhV-074,PhV-075,PhV-076,PhV-077,PhV-078,PhV-079,PhV-080，PhV-081,PhV-082,PhV-083,PhV-084,PhV-085,PhV-086,PhV-087,PhV-088,PhV-089,PhV-090，PhV-091,PhV-092,PhV-093,PhV-094,PhV-095,PhV-096,PhV-097,PhV-098,PhV-099,PhV-100,PhV-101,PhV-102,PhV-103,PhV-104,PhV-105,PhV-106,PhV-107,PhV-109,PhV-1l0，PhV-111,PhV-112,PhV-113,PhV-114,PhV-115,PhV-116,PhV-117,PhV-118,PhV-119,PhV-120，PhV-121,PhV-122,PhV-123,PhV-124,PhV-125,PhV-126,PhV-127,PhV-128,PhV-129,PhV-130,PhV-131,PhV-132,PhV-133,PhV-134,PhV-135,PhV-136,PhV-137,PhV-138,PhV-139，PhV-140,PhV-141,PhV-142,PhV-143,PhV-144,PhV-145,PhV-146或PhV-147(根據表I中的定義)之一或具有與其至少90、91、92、93、94、95、96、97、98或99%同一性的氨基酸序列，和還包含常規飼料添加劑，例如用于牛、家禽或豬的常規飼料添加劑，例如維生素、礦物質或其它添加劑。[0171]本發明還包含動物飼料，所述動物飼料包含至少一種根據本發明所述的合成的植酸酶，特別地具有對應于SEQID24的氨基酸序列或突變體PhV-001，PhV-002,PhV-003,PhV-004,PhV-005,PhV-006,PhV-007,PhV-008,PhV-009,PhV-010,PhV-011,PhV-012,PhV-013，PhV-014,PhV-015,PhV-016,PhV-017,PhV-018,PhV-019,PhV-020,PhV-021,PhV-022,PhV-023，PhV-024,PhV-025,PhV-026,PhV-027,PhV-028,PhV-029,PhV-030,PhV-031,PhV-032,PhV-033,PhV-034,PhV-035,PhV-036,PhV-037,PhV-038,PhV-039,PhV-040,PhV-041,PhV-042，PhV-043,PhV-044,PhV-045,PhV-046,PhV-047,PhV-048,PhV-049,PhV-050,PhV-051,PhV-052，PhV-053,PhV-054,PhV-055,PhV-056,PhV-057,PhV-058,PhV-059,PhV-060,PhV-061,PhV-062,PhV-063,PhV-064,PhV-065,PhV-066,PhV-067,PhV-068,PhV-069,PhV-070,PhV-O71，PhV-072,PhV-073,PhV-074,PhV-075,PhV-076,PhV-077,PhV-078,PhV-079,PhV-080,PhV-081,PhV-082,PhV-083,PhV-084,PhV-085,PhV-086,PhV-087,PhV-088,PhV-089,PhV-090，PhV-091,PhV-092,PhV-093,PhV-094,PhV-095,PhV-096,PhV-097,PhV-098,PhV-099,PhV-100，PhV-101,PhV-102,PhV-103,PhV-104,PhV-105,PhV-106,PhV-107,PhV-109,PhV-110,PhV-111,PhV-112,PhV-113,PhV-114,PhV-115,PhV-116,PhV-117,PhV-118,PhV-119,PhV-120，PhV-121,PhV-122,PhV-123,PhV-124,PhV-125,PhV-126,PhV-127,PhV-128,PhV-129,PhV-130，PhV-131,PhV-132,Ph`V-133,PhV-134,PhV-135,PhV-136,PhV-137,PhV-138,PhV-139,PhV-140,PhV-141,PhV-142,PhV-143，PhV-144,PhV-145,PhV-146或PhV-147(根據表I中的定義)之一或具有與其至少90、91、92、93、94、95、96、97、98或99%同一性的氨基酸序列，和還包含常規飼料成分。在本上下文中，可行的飼料成分是用于牛、奶牛、家禽或豬肥滿的飼料顆粒中的所有常規使用的飼料成分。[0172]本發明還包含本發明所述的合成的植酸酶之一的用途，特別地具有對應于SEQID24的氨基酸序列或突變體PhV-001,PhV-002,PhV-003,PhV-004,PhV-005,PhV-006,PhV-OO7，PhV-008,PhV-009,PhV-010,PhV-011,PhV-012,PhV-013,PhV-014,PhV-015,PhV-016,PhV-017，PhV-018,PhV-019,PhV-020,PhV-021,PhV-022,PhV-023,PhV-024,PhV-025,PhV-026,PhV-027,PhV-028,PhV-029,PhV-030,PhV-031,PhV-032,PhV-033,PhV-034,PhV-035,PhV-O36，PhV-037,PhV-038,PhV-039,PhV-040,PhV-041,PhV-042,PhV-043,PhV-044,PhV-045,PhV-046,PhV-047,PhV-048,PhV-049,PhV-050,PhV-051,PhV-052,PhV-053,PhV-054,PhV-055，PhV-056,PhV-057,PhV-058,PhV-059,PhV-060,PhV-061,PhV-062,PhV-063,PhV-064,PhV-065,PhV-066,PhV-067,PhV-068,PhV-069,PhV-070,PhV-071,PhV-072,PhV-073,PhV-074,PhV-075,PhV-076,PhV-077,PhV-078,PhV-079,PhV-080,PhV-081,PhV-082,PhV-083,PhV-084，PhV-085,PhV-086,PhV-087,PhV-088,PhV-089,PhV-090,PhV-091,PhV-092,PhV-093,PhV-094，PhV-095,PhV-096,PhV-097,PhV-098,PhV-099,PhV-100,PhV-101,PhV-102,PhV-103,PhV-104,PhV-105,PhV-106,PhV-107,PhV-109,PhV-110,PhV-111,PhV-112,PhV-113,PhV-114，PhV-115,PhV-116,PhV-117,PhV-118,PhV-119,PhV-120,PhV-121,PhV-122,PhV-123,PhV-124,PhV-125,PhV-126,PhV-127,PhV-128,PhV-129,PhV-130,PhV-131,PhV-132,PhV-133，PhV-134,PhV-135,PhV-136,PhV-137,PhV-138,PhV-139,PhV-140,PhV-141,PhV-142,PhV-143，PhV-144,PhV-145,PhV-146或PhV-147(根據表1中的定義)之一或具有與其至少90、91、92、93、94、95、96、97、98或99%同一性的氨基酸序列的合成的植酸酶的用途，或本發明的動物飼料添加劑的用途，所述動物飼料添加劑包含至少一種根據本發明的合成的植酸酶，特別地具有對應于SEQID24的氨基酸序列或突變體PhV-001,PhV-002,PhV-003,PhV-004,PhV-005,PhV-006,PhV-007,PhV-008,PhV-009,PhV-010,PhV-OlI,PhV-012,PhV-013,PhV-014,PhV-015,PhV-016,PhV-017,PhV-018,PhV-019,PhV-020,PhV-021,PhV-022,PhV-023，PhV-024,PhV-025,PhV-026,PhV-027,PhV-028,PhV-029,PhV-030,PhV-031,PhV-032,PhV-033，PhV-034,PhV-035,PhV-036,PhV-037,PhV-038,PhV-039,PhV-040,PhV-041,PhV-042,PhV-043,PhV-044,PhV-045,PhV-046,PhV-047,PhV-048,PhV-049,PhV-050,PhV-051,PhV-O52，PhV-053,PhV-054,PhV-055,PhV-056,PhV-057,PhV-058,PhV-059,PhV-060,PhV-061,PhV-062,PhV-063,PhV-064,PhV-065,PhV-066,PhV-067,PhV-068,PhV-069,PhV-070,PhV-071，PhV-072,PhV-073,PhV-074,PhV-075,PhV-076,PhV-077,PhV-078,PhV-079,PhV-080,PhV-081,PhV-082,PhV-083,PhV-084,PhV-085,PhV-086,PhV-087,PhV-088,PhV-089,PhV-090,PhV-091,PhV-092,PhV-093,PhV-094,PhV-095,PhV-096,PhV-097,PhV-098,PhV-099,PhV-1O0，PhV-101,PhV-102,PhV-103,PhV-104,PhV-105,PhV-106,PhV-107,PhV-109,PhV-110,PhV-111,PhV-112,PhV-113,PhV-114,PhV-115,PhV-116,PhV-117,PhV-118,PhV-119,PhV-120,PhV-121,PhV-122,PhV-123,PhV-124,PhV-125,PhV-126,PhV-127,PhV-128,PhV-129,PhV-130，PhV-131,PhV-132,PhV-133,PhV-134,PhV-135,PhV-136,PhV-137,PhV-138,PhV-139,PhV-140,PhV-141,PhV-142,PhV-143,PhV-144,PhV-145,PhV-146或PhV-147(根據表I中的定義)之一或具有與其至少90、91、92、93、94、95、96、97、98或99%同一性的氨基酸序列的合成的植酸酶，用于動物飼料中。在本上下文中，所述用途采取的形式可以是在造粒之前，將根據本發明的植酸酶或根據本發明的動物飼料添加劑添加到余下的飼料成分中。在飼料顆粒生產之后，將植酸酶施加(特別是以液態的形式)于這些顆粒也是可行的。[0173]本發明還通過使用根據本發明的上述合成的植酸酶之一實現，所述合成的植酸酶特別地具有對應于SEQID24的氨基酸序列或突變體PhV-001,PhV-002,PhV-003,PhV-OO4，PhV-005,PhV-006,PhV-007,PhV-008,PhV-009,PhV-010,PhV-OlI,PhV-012,PhV-013,PhV-014，PhV-015,PhV-016,PhV-017,PhV-018,PhV-019,PhV-020,PhV-021,PhV-022,PhV-023,PhV-024,PhV-025,PhV-026,PhV-027,PhV-028,PhV-029,PhV-030,PhV-031,PhV-032,PhV-O33，PhV-034,PhV-035,PhV-036,PhV-037,PhV-038,PhV-039,PhV-040,PhV-041,PhV-042,PhV-043,PhV-044,PhV-045,PhV-046,PhV-047,PhV-048,PhV-049,PhV-050,PhV-051,PhV-052，PhV-053,PhV-054,PhV-055,PhV-056,PhV-057,PhV-058,PhV-059,PhV-060,PhV-061,PhV-062,PhV-063,PhV-064,PhV-065,PhV-066,PhV-067,PhV-068,PhV-069,PhV-070,PhV-071,PhV-072,PhV-073,PhV-074,PhV-075,PhV-076,PhV-077,PhV-078,PhV-079,PhV-080,PhV-08I,PhV-082,PhV-083,PhV-084,PhV-085,PhV-086,PhV-087,PhV-088,PhV-089,PhV-090,PhV-091，PhV-092,PhV-093,PhV-094,PhV-095,PhV-096,PhV-097,PhV-098,PhV-099,PhV-100,PhV-101,PhV-102,PhV-103,PhV-104,PhV-105,PhV-106,PhV-107,PhV-109,PhV-110,PhV-111，PhV-112,PhV-113,PhV-114,PhV-115,PhV-116,PhV-117,PhV-118,PhV-119,PhV-120,PhV-121,PhV-122,PhV-123,PhV-124,PhV-125,PhV-126,PhV-127,PhV-128,PhV-129,PhV-130，PhV-131,PhV-132,PhV-133,PhV-134,PhV-135,PhV-136,PhV-137,PhV-138,PhV-139,PhV-140,PhV-141,PhV-142,PhV-143,PhV-144,PhV-145,PhV-146或PhV-147(根據表I中的定義)之一或具有與其至少90、91、92、93、94、95、96、97、98或99%同一性的氨基酸序列的合成的植酸酶，通過使用本發明的動物飼料添加劑實現，所述動物飼料添加劑包含至少一種根據本發明的合成的植酸酶，特別地具有對應于SEQID24的氨基酸序列或突變體PhV-OOI,PhV-002,PhV-003,PhV-004,PhV-005,PhV-006,PhV-007,PhV-008,PhV-009,PhV-010,PhV-Oil,PhV-012,PhV-013,PhV-014,PhV-015,PhV-016,PhV-017,PhV-018,PhV-019,PhV-020,PhV-021,PhV-022,PhV-023,PhV-024,PhV-025,PhV-026,PhV-027,PhV-028,PhV-029,PhV-O30，PhV-031,PhV-032,PhV-033,PhV-034,PhV-035,PhV-036,PhV-037,PhV-038,PhV-039,PhV-040,PhV-041,PhV-042,PhV-043,PhV-044,PhV-045,PhV-046,PhV-047,PhV-048,PhV-049，PhV-050,PhV-051,PhV-052,PhV-053,PhV-054,PhV-055,PhV-056,PhV-057,PhV-058,PhV-059,PhV-060,PhV-061,PhV-062,PhV-063,PhV-064,PhV-065,PhV-066,PhV-067,PhV-068,PhV-069,PhV-070,PhV-071,PhV-072,PhV-073,PhV-074,PhV-075,PhV-076,PhV-077,PhV-078，PhV-079,PhV-080,PhV-081,PhV-082,PhV-083,PhV-084,PhV-085,PhV-086,PhV-087,PhV-088，PhV-089,PhV-090,PhV-091,PhV-092,PhV-093,PhV-094,PhV-095,PhV-096,PhV-097,PhV-098,PhV-099,PhV-100,PhV-101,PhV-102,PhV-103,PhV-104,PhV-105,PhV-106,PhV-107，PhV-109,PhV-110,PhV-111,PhV-112,PhV-113,PhV-114,PhV-115,PhV-116,PhV-117,PhV-118，PhV-119,PhV-120,PhV-121,PhV-122,PhV-123,PhV-124,PhV-125,PhV-126,PhV-127，PhV-128,PhV-129,PhV-130,PhV-131,PhV-132,PhV-133,PhV-134,PhV-135,PhV-136,PhV-137,PhV-138,PhV-139,PhV-140,PhV-141,PhV-142,PhV-143,PhV-144,PhV-145,PhV-146或PhV-147(根據表1中的定義)之一或具有與其至少90、91、92、93、94、95、96、97、98或99%同一性的氨基酸序列的合成的植酸酶，或通過使用動物飼料實現，所述動物飼料包含至少一種所述的合成的植酸酶，特別地具有對應于SEQID24的氨基酸序列或突變體PhV-OOl，PhV-002,PhV-003,PhV-004,PhV-005,PhV-006,PhV-007,PhV-008,PhV-009,PhV-010,PhV-011，PhV-012,PhV-013,PhV-014,PhV-015,PhV-016,PhV-017,PhV-018,PhV-019,PhV-020,PhV-021,PhV-022,PhV-023,PhV-024,PhV-025,PhV-026,PhV-027,PhV-028,PhV-029,PhV-030，PhV-031,PhV-032,PhV-033,PhV-034,PhV-035,PhV-036,PhV-037,PhV-038,PhV-039,PhV-040，PhV-041,PhV-042,PhV-043,PhV-044,PhV-045,PhV-046,PhV-047,PhV-048,PhV-049,PhV-050,PhV-051,PhV-052,PhV-053,PhV-054,PhV-055,PhV-056,PhV-057,PhV-058,PhV-O59，PhV-060,PhV-061,PhV-062,PhV-063,PhV-064,PhV-065,PhV-066,PhV-067,PhV-068,PhV-069,PhV-070,PhV-071,PhV-072,PhV-073,PhV-074,PhV-075,PhV-076,PhV-077,PhV-078，PhV-079,PhV-080,PhV-081,PhV-082,PhV-083,PhV-084,PhV-085,PhV-086,PhV-087,PhV-088,PhV-089,PhV-090,PhV-091,PhV-092,PhV-093,PhV-094,PhV-095,PhV-096,PhV-097,PhV-098,PhV-099,PhV-100,PhV-101,PhV-102,PhV-103,PhV-104,PhV-105,PhV-106,PhV-1O7，PhV-109,PhV-110,PhV-111,PhV-112,PhV-113,PhV-114,PhV-115,PhV-116,PhV-117,PhV-118，PhV-119,PhV-120,PhV-121,PhV-122,PhV-123,PhV-124,PhV-125,PhV-126,PhV-127,PhV-128,PhV-129,PhV-130,PhV-131,PhV-132,PhV-133,PhV-134,PhV-135,PhV-136,PhV-137，PhV-138,PhV-139,PhV-140,PhV-141,PhV-142,PhV-143,PhV-144,PhV-145,PhV-146或PhV-147(根據表1中的定義)之一或具有與其至少90、91、92、93、94、95、96、97、98或99%同一性的氨基酸序列的合成的植酸酶，用來減少家畜的糞漿中磷酸鹽的含量。[0174]所描述的實施方案意在用來闡述和更好地理解本發明，而不以任何方式構成限制。本發明的其他特征獲自優選實施方案的下文描述以及從屬權利要求。在本上下文中，本發明的各特征在每一情況下可以單個地或一起在一個實施方案中實現，并且不以任何方式將本發明限于所描述的實施方案。權利要求的措詞由此明確描述了本發明的主題。【專利附圖】【附圖說明】[0175]圖1顯示了植酸酶HF598(SEQID24)的熱穩定性。在所示溫度于pH5.5加熱植酸酶20分鐘。冷卻后，測定在PH5.5和37°C的殘余活性。為了確定相對殘余活性，將在室溫孵育20分鐘的參照樣品的活性設定為100%。[0176]圖2A和B顯示了植酸酶HF598(SEQID24)和其一些變體的pH曲線。在每個所示的PH處測定植酸酶的活性。為了確定相對活性數據，將pH5.5測定的活性設定為100%。A)在黑曲霉(A.niger)中表達植酸酶并從培養上清測定。B)在大腸桿菌中表達植酸酶，使用N1-NtA柱濃縮并隨后測定。[0177]圖3顯示了表達質粒pGLA53-HF598的質粒圖譜。[0178]圖4顯示了表達質粒pFus5#2的質粒圖譜。[0179]圖5顯示了表達質粒pH6_Fus5#2的質粒圖譜。[0180]圖6顯示了表達質粒pGLA53_Fus5#2的質粒圖譜。實施例[0181]從哈夫尼菌(Hafniasp.)LUl1047克降棺酸酶[0182]按與出版物Huang等(2006)AnovelphytasewithpreferablecharacteristicsfromYersiniaintermedia.BiochemBiophysResCommun350:884-889,Shi等(2008)AnovelphytasegeneappAfromButtiauxellasp.GC2lisolatedfromgrasscarpintestine.Aquaculture275:70-75和W02008116878(實施例1)中類似的方式，利用PCR，在一系列腸細菌中尋找植酸酶，所述PCR使用簡并寡核苷酸Haf10905’-GAYCCNYTNTTYCAYCC-3’(SEQIDI)和Haf10925’-GGNGTRTTRTCNGGYTG-3’(SEQID2)，在40°C和50°C之間的退火溫度下進行。將所形成的PCR產物用作模板，使用寡核苷酸Haf10905’-GAYCCNYTNTTYCAYCC-3’(SEQIDI)和Haf10915’-GCDATRTTNGTRTCRTG-3’(SEQID3)，在同樣的退火條件下進行半巢式PCR。可以從哈夫尼菌屬(Hafnia)的細菌菌株(哈夫尼菌LU11047)中分離片段。使用"Τ0Ρ0TACloninL?試劑盒"(Invitrogen)，按照生產商的操作指南，對所分離的片段進行亞克隆，并隨后進行測序。從該部分序列開始，通過被稱為TAIL-PCR的方法(Yao-GuangLiu和RobertF.Whittier(1995)ThermalasymmetricinterlacedPCR:automatableamplificationandsequencingofinsertendfragmentsfromPlandYACclonesforchromosomewalking.Genomics25,674-681)擴增該植酸酶的全長序列。以下寡核苷酸用于該目的:[0183]3’端的擴增:[0184]1.Hafll65(5，-WCAGNTGWTNGTNCTG-3，,SEQID4)和[0185]Hafl167(5’-CTTCGAGAGCCACTTTATTACCGTCG-3’,SEQID5)[0186]2.Hafl165(5，-WCAGNTGWTNGTNCTG-3，,SEQID4)和[0187]Hafl168(5’-CCAATGTTGTGCTGCTGACAATAGG-3’,SEQID6)[0188]3.Hafl165(5，-WCAGNTGWTNGTNCTG-3，,SEQID4)和[0189]Hafl169(5，-CCGAACTCATCAGCGCTAAAGATGC-3，,SEQID7)[0190]5’端的擴增:[0191]1.Haf1077(5，-CAWCGWCNGASASGAA-3，,SEQID8)和[0192]Hafll70(5’-CGCAGTTTGACTTGATGTCGCGCACG-3’,SEQID9)[0193]2.Haf1077(5，-CAWCGWCNGASASGAA-3’,SEQID8)和`[0194]Hafll71(5，-GTCGCGCACGCCCTATATCGCCAAGC-3，，SEQID10)[0195]3.Haf1077(5，-CAWCGWCNGASASGAA-3’,SEQID8)和[0196]Hafll72(5’-CTGCAAACCATCGCACACGCACTGG-3’，SEQID11)[0197]使用"Τ0Ρ0TACloning?試劑盒"(Invitrogen)克隆所獲得的DNA片段,并進行測序。該核苷酸序列產生編碼來自哈夫尼菌(Hafniasp.)LUl1047的植酸酶的基因SEQID12。由此得到的氨基酸序列SEQID13與來自W0200811678的蜂房哈夫尼菌(Hafniaalvei)植酸酶的植酸酶序列具有98%同一性。使用軟件SignalP2.0，氨基酸1_33被預測為信號肽。由此，成熟的酶開始于第34位的絲氨酸。[0198]1.合成的植酸酶Fus5#2[0199]克降棺酸酶Fus5#2[0200]從哈夫尼菌LUl1047的染色體DNA開始，利用PCR，擴增該植酸酶的第1-1074位堿基的片段(SEQID14)ο從來自莫氏耶爾森氏菌(Yersiniamollaretii)ATCC43969的推定的植酸酶(或酸性磷酸酶)的DNA序列(NCBI序列IDZP_00824387)，產生了用來擴增第1057-1323位核苷酸的寡核苷酸。這用于自莫氏耶爾森氏菌ATCC43969的染色體DNA擴增第二植酸酶片段(SEQID15)。在這兩個植酸酶片段的擴增后，借助所使用的寡核苷酸，在哈夫尼菌片段的3’端和耶爾森氏菌片段的5’端之間產生了與相對的另一植酸酶片段的20bp的重疊。以這種方式，可以通過PCR融合，將兩個片段結合起來，得到植酸酶序列SEQID16，其編碼合成的植酸酶Fus5#2。對于由其得到的氨基酸序列SEQID17，利用軟件SignalP2.0，氨基酸1-33被預測為信號肽。成熟的植酸酶Fus5#2(SEQID18)由核苷酸序列SEQID19編碼。[0201]為了克隆用于大腸桿菌(E.coli)的表達質粒，在植酸酶DNA片段SEQID16的5’末端引入NdeI限制性酶切位點，在3’末端引入HindIII限制性酶切位點和終止密碼子。用于此目的額外需要的這些序列，利用PCR反應，使用植酸酶SEQID16作為模板，通過所使用的引物而引入。利用這些切割位點，將編碼植酸酶的基因克隆到大腸桿菌表達載體pET22b(Novagen)中。通過使用NdeI限制性酶切位點和通過引入終止密碼子，將pelB信號序列從載體上除去，并阻止通讀到存在于質粒上的6xHis標簽。將由此產生的質粒pFus5#2(SEQID20)轉化到大腸桿菌菌株BL21(DE3)(Invitrogen)中。[0202]為了改進植酸酶蛋白質的純化，克隆了具有N-末端6xHis標簽的植酸酶變體。使用不僅引入6xHis標簽而且引入BamHI切割位點的有義寡核苷酸引物H6:5’-ctatggatccgcatcatcatcatcatcacagtgataccgcccctgc-3’(SEQID21),以編碼成熟植酸酶蛋白質的序列SEQID19作為模板，擴增PCR產物。使用相同的反義寡核苷酸，在PCR產物的3’末端再次引入終止密碼子和NdeI限制性酶切位點。通過BamHI/Ndel，將所產生的片段克隆到載體pET22b中，獲得質粒pH6-Fus5#2(SEQID22)，并同樣將其轉化到大腸桿菌(E.coli)BL2KDE3)中。就該構建體來說，包含于pET22b中的pelB信號序列被用于向外周胞質中的轉運。[0203]植酸酶測試法[0204]在微量滴定板中測定植酸酶的活性。在反應緩沖液(250mM乙酸鈉、ImMCaCl2,0.01%吐溫20，pH5.5)中稀釋酶樣品。將10μI的酶溶液與140μI的底物溶液(6mM植酸鈉(SigmaP3168)，溶于反應緩沖液中)一起，于37°C孵育I小時。通過加入150μI的三氯乙酸溶液(15%w/w)終止反應。為了檢測釋放的磷酸,將20μI淬滅了的反應溶液與280μI新鮮配制的染色劑(60mML-抗壞血酸(SigmaA7506)、2.2mM四水合鑰酸銨、325mMH2SO4)混合，于50°C孵育25分鐘，隨后在820nm處測定吸收值。作為空白值，將底物緩沖液于37°C單獨孵育，只有在以三氯乙酸淬滅后，加入IOul的酶樣品。按與其余測定值類似的方式進行染色反應。使用已知濃度的磷酸鹽溶液，通過染色反應的校準曲線來測定所釋放的磷酸的量。[0205]在大腸桿菌中表達[0206]在補充有氨芐青霉素(100mg/l)的LB培養基中，于37°C培養攜帶具有植酸酶表達盒的質粒的大腸桿菌BL21(DE3)菌株。在0.60D(600nm)通過加入ImMIPTG誘導植酸酶的表達。在誘導4小時后,加入10%(v/v)的IOxBugBuster溶液(Novogen),將混合液于室溫孵育15分鐘。離心后，使用上清液測定植酸酶活性。[0207]通討Ni親和層析講行鈍化[0208]為了純化6xHis標記的植酸酶變體，將誘導的表達植酸酶的大腸桿菌培養液用300mMNaCl、Complete?蛋白酶抑制劑(無EDTA)處理(根據制造商RocheAppliedScience的說明書)，并用10%(v/v)的IOxBugBuster溶液(Novogen)處理，并將該混合物于室溫孵育15分鐘。離心后，按照生產商的操作指南，將上清液與N1-NTA柱/試劑盒(Qiagen)結合。在洗滌步驟之后，使用冷的洗脫緩沖液(50mM乙酸鈉緩沖液、300mMNaCl,500mM咪唑、ImMCaCl2)進行洗脫。在測定蛋白質含量之前，通過透析將樣品緩沖液交換為2mM梓檬酸鈉(ρΗ5.5)。[0209]在黑曲霉(Aspergillusniger)中表汰[0210]為了在黑曲霉中表達植酸酶Fus5#2，首先制備了包含植酸酶基因的表達構建體，所述植酸酶基因處于黑曲霉(A.niger)葡糖淀粉酶(glaA)啟動子的控制之下，其側翼具有非編碼3’-glaA區域。通過這種方式，用于將構建體在黑曲霉中整合到3’-glaA區域中。用于胞外蛋白質分泌的信號序列是無花果曲霉(A.ficUUm)植酸酶的信號序列。用于表達構建體的基礎是詳細描述于EP0635574B1的質粒pGBGLA_53(在W09846772中也被稱為pGBTOPFYT-Ι)。借助本領域技術人員已知的基于PCR的克隆技術，以編碼成熟Fus5#2植酸酶的基因節段SEQID19取代pGBGLA-53中無花果曲霉植酸酶的基因節段(編碼以氨基酸序列ASRNQSS起始的成熟植酸酶蛋白質)。這得到質粒pGLA53-Fus5#2(SEQID23)。利用HindIII從所得到的質粒中分離線性表達盒，將其與從質粒pGBLA50(EP0635574Bl)/pGBAAS-1(W09846772中相同質粒的名稱)中分離的amdS標記盒一起共轉化到glaA-缺失的黑曲霉表達菌株中，并按所引用的兩篇專利說明書中的描述，在搖瓶中進行植酸酶的后續表達。每天離心去掉細胞后，測定培養上清液中植酸酶的活性。在第3天到第6天之間達到了最大活性。[0211]2.植酸酶Fus5#2的植酸酶變體[0212]利用PCR，通過突變基因序列SEQID19產生植酸酶的變體。使用“Quickchange定點誘變試劑盒”(Stratagene)進行定向誘變。借助“GeneMorphII隨機誘變試劑盒”(Stratagene)對SEQID19的編碼序列之全部或僅部分進行隨機誘變。通過所使用的模板DNA的量，將誘變率設定為所需的1-5個突變的量。通過單點突變的定向組合或通過依次進行幾個誘變循環來產生多重突變。[0213]在具有高通量能力的測定法中測試所產生的植酸酶變體的植酸酶活性和熱穩定性。為此目的，以基于pET22b的表達構建體轉化后獲得的大腸桿菌BL21(DE3)克隆在96孔微量滴定板中以LB培養基(2%葡萄糖、100mg/l氨芐青霉素)進行孵育(30°C、900rpm、2mm搖床傾斜度)。在0D(600nm)約為0.5時使用ImMIPTG誘導4小時進行孵育。隨后，加入10%(v/v)的IOxBugBuster溶液(Novogen),并將混合物在室溫孵育15分鐘。測定植酸酶的活性和20分鐘溫度脅迫后的殘余活性。[0214]將以這種方式產生的植酸酶HF598(SEQID24)和其變體以類似于之前的部分中所述的操作克隆入大腸桿菌表達載體pET22b(Novagen),并隨后借助大腸桿菌菌株BL2KDE3)表達。此外，克隆用于黑曲霉的合適的表達構建體，從而植酸酶能夠在轉化入黑曲霉后表達。當使用編碼成熟的變體HF598(SEQID24)且已經適應于黑曲霉的密碼子使用(GENEARTAG,Regensburg)的合成的基因(SEQID25)時，獲得了質粒pGla53_HF598(SEQID26)。[0215]熱穩定件(T=)的測定[0216]為了記錄熱失活曲線，將反應緩沖液(250mM醋酸鈉、ImMCaCl2、0.01%吐溫20，PH5.5)中稀釋的酶樣品于各溫度下加熱20分鐘，并然后冷卻至4°C。將非熱處理的參照樣品于室溫放置20分鐘，此后同樣冷卻至4°C。在熱預處理后，通過植酸酶測定法來測定樣品的酶活性。將參照樣品的活性標化為100%。以T5tl值表征各種植酸酶變體的熱穩定性。T50值指示這樣的溫度，在該溫度處，在熱失活后，與沒有經過熱處理的參照樣品相比較，仍然存在50%的殘余活性。兩種植酸酶變體的熱穩定性(以。C表示)的變化來自于各自的Tki值的不同。[0217]表1:以。C表示的植酸酶HF598(見圖1)和其變體的熱穩定性(T5tl)。以[原始氨基酸][位置4][新氨基酸]的形式具體指出各氨基酸變化處相對于SEQID24的變化。符號"表示所討論氨基酸的缺失。氨基酸位置的編號總是指SEQID24。【權利要求】1.植酸酶，其具有與SeqID24的氨基酸序列有至少85%同一性的氨基酸序列。2.根據權利要求1的植酸酶，其具有與SeqID24的氨基酸序列有至少90%，優選地94%，和特別地95、96、97、98或99%同一性的氨基酸序列。3.根據權利要求1或2的植酸酶，其與根據權利要求1的植酸酶比較具有在至少一個位置處的至少一個保守氨基酸交換。4.根據任一前述權利要求的植酸酶，其是分離的植酸酶。5.根據任一前述權利要求的植酸酶，其與來自莫氏耶爾森氏菌和哈夫尼菌的兩個野生型植酸酶比較，具有升高的胃蛋白酶穩定性、升高的熱穩定性和/或升高的比活性。6.編碼植酸酶的分離的核酸序列，所述核酸序列編碼根據權利要求1至5之任一項所述的植酸酶之一。7.編碼植酸酶的分離的核酸序列，所述核酸序列:a)與SeqID25的核酸序列具有至少85%的同一性，b)在高嚴格條件下與a)的序列之一的互補鏈雜交。8.包含根據權利要求6或7的核酸序列的重組表達載體。9.包含根據權利要求6或7的核酸序列或根據權利要求8的載體的重組宿主細胞。10.包含根據權利要求6或7的核酸序列或根據權利要求8的載體的重組生產生物體。11.動物飼料添加劑，其包含`至少一種根據權利要求1至5之任一項所述的植酸酶以及其它飼料添加劑。12.包含至少一種根據權利要求1至5之任一項所述的植酸酶的動物飼料。13.根據權利要求1至5之任一項所述的植酸酶或根據權利要求11的動物飼料添加劑在動物飼料中的用途。14.根據權利要求1至5之任一項所述的植酸酶、根據權利要求11的動物飼料添加劑、或根據權利要求12的動物飼料用于減少家畜的糞漿中的磷酸鹽含量的用途。【文檔編號】C12N9/16GK103502443SQ201280019442【公開日】2014年1月8日申請日期:2012年4月18日優先權日:2011年4月21日【發明者】S·哈夫納,A·威爾澤爾,R·圖默申請人:巴斯夫歐洲公司