專利名稱：一種對石蠟組織的egfr外顯子基因突變檢測試劑盒的制作方法
技術領域：
本實用新型涉及一種檢測試劑盒，尤其是涉及一種對石蠟組織的EGFR外顯子基因突變檢測試劑盒。
背景技術：
EGFR是一種蛋白酪氨酸激酶受體(RTK)，位于第7號染色體pl3 q22區，全長200kb，由28個外顯子組成，編碼1186個氨基酸，其糖蛋白分子量約170kDa。EGFR家族有4 個結構相似的受體分子ErbBl (EGFR)、ErbB2 (HER2)、ErbB3 (HER3)、ErbB4 (HER4)。EGFR誘導癌癥至少通過3種機制EGFR配體的過表達，EGFR的擴增或EGFR的突變活化。在這3種機制中，EGFR的突變活化是導致腫瘤細胞異常生物學行為的最主要因素。基于EGFR在腫瘤細胞過表達的特點，目前已開發出多種EGFR靶向藥物。按照作用機制，可將其分為5種1)作用于EGFR激酶區的小分子酪氨酸激酶抑制劑(EGFR-TKI)，如吉非替尼(Gefitinib)、厄洛替尼(Erlotinib) ；2)作用于EGFR胞外域部分的單克隆抗·體(mAb),如西妥昔單抗(Cetuximab)、帕尼單抗(Vectibix) ；3)利用RNAi作用機理,特異性降解EGFR ；4)與EGFR單克隆抗體偶聯的細胞毒素、細胞殺傷因子、放射性粒子等，選擇性殺死富含EGFR的腫瘤細胞；5)阻礙EGFR的二聚化/寡聚化進而抑制EGFR的激活。其中EGFRTKI藥物在治療非小細胞肺癌(NSCLC)臨床療效明顯，已被推薦為晚期患者的一線藥物。常用的EGFR-TKI包括吉非替尼和厄洛替尼，是目前NSCLC患者最有效的靶向藥物。但EGFR-TKI并非對所有患者都有效。EGFR外顯子18、19或21發生突變的患者，吉非替尼有效率可高達80%，而野生型患者基本無效。EGFR敏感突變是藥物有效的前提1-4。但部分EGFR-TKI初始治療有效的患者后期會發生耐藥，與EGFR E20突變密切相關5。以NSCLC為例，EGFR E20突變發生率為I. 6%，約占EGFR突變9%，50%的EGFR-TKI耐藥由EGFR E20的I790M點突變所致。因此通過檢測EGFR基因有沒有突變，可以篩選出抗EGFR (表皮生長因子受體)靶向藥物治療有效的腫瘤患者，實現腫瘤病人的個體化治療，從而延長患者生存期。對于有突變的患者，則能減少不必要的治療費用和毒副作用。目前檢測EGFR基因突變的檢測試劑原料需多方配備，實驗過程分步進行，耗時較長，容易污染，準確性不高，所以探索一種檢測EGFR基因突變快速可靠的方法已經成為臨床實驗研究的熱點問題。
實用新型內容為了解決上述技術問題，本實用新型提供一種對石蠟組織的EGFR外顯子基因突變檢測試劑盒，包括盒體I、盒蓋2，盒體I內設置墊板3和隔離墻4，隔離墻4的一側墊板上設置有 PCR 管 5、EGFR18-p 引物瓶 6、EGFR19_p 引物瓶 7、EGFR20_p 引物瓶 8、EGFR20_pl引物瓶9、EGFR21-p引物瓶10、裝酶混合物的試劑瓶11 ;隔離墻4的另一側設置有去離子水瓶12、醋酸鈉溶液瓶13、100%酒精瓶14、70%酒精瓶15。[0007]將盒蓋2蓋住后，隔離墻4的兩側分別形成密閉空間，能防止試劑揮發等引起的污染，使得實驗更準確。所述引物的濃度為5 U mol/L。所述引物序列和擴增片段大小如下表所示
引物__序歹丨■!__片段大小_
EGFRl8-p-R 5'-CTCTGTGTTCTTGTCCCCCC-3' 166bp EGFRl 8-p-F S'-GCCTGTGCCAGGGACCTT ACy__
EGFRl9-p-F 5'-CGTCTTCCTTCTCTCTCTGT-3' 148bp
EGFRi9-p-R 5^ccacacagcaaagcagaaac-s ^__EGFR2Q-p-F 5'-ATGCGAAGCCACACTGACGT_3' 139bp
EGFR2Q-p-R 5/-AAGGGCATGAGCTGCGTGAT-3>__
egfr21-p-f 5 ^ccaggaacgtactggtgaaa-s^ i27bp
EGFR21-P-R 5'-TGACCTAAAGCCACCTCCTT-3'__
EGFR2Q-pl-F S'-ATCACGCAGCTCATGCCCTT^ 129bp EGFR2Q-pl-R S'-CGTATCTCCCTTCCCTGATT^__所述酶混合物包括濃度為0. 4mmol/L 的 dNTPs, 4mmol/L 的 Mg2+, 2xBuffer,
I.25U/25 u I 的 HsTaq0本實用新型與現有產品相比，具有如下積極有益的效果本試劑盒結構簡單、設計合理、使用方便、檢測過程不易受污染；本試劑盒在檢測石蠟組織的EGFR外顯子基因突變時具有敏感性高、特異性強、耗時短等優點；本試劑盒中設置的隔離墻，使得一個空間變為兩個空間，能有效防止試劑揮發等引起的污染，使得實驗更準確。
圖I為本實用新型的整體結構示意圖。
具體實施方式
以下結合附圖和實施例對本實用新型進行進一步說明。如圖I所示，本實用新型的一個實施例為對石蠟組織的EGFR外顯子基因突變檢測試劑盒，包括盒體I、盒蓋2，盒體I內設置墊板3和隔離墻4，隔離墻4的一側墊板上設置有 PCR 管 5、EGFR18-p 引物瓶 6、EGFR19_p 引物瓶 7、EGFR20_p 引物瓶 8、EGFR20_pl 引物瓶9、EGFR21-p引物瓶10、裝酶混合物的試劑瓶11 ;隔離墻4的另一側設置有去離子水瓶12、醋酸鈉溶液瓶13、100%酒精瓶14、70%酒精瓶15。將盒蓋2蓋住后，隔離墻4的兩側分別形成密閉空間，能防止試劑揮發等引起的污染，使得實驗更準確。所述引物的濃度為5 y mol/L。所述引物序列和擴增片段大小如下表所示
權利要求1. 一種對石蠟組織的EGFR外顯子基因突變檢測試劑盒，其特征在于，它包括盒體(I)、盒蓋(2)，盒體(I)內設置墊板(3)和隔離墻(4)，隔離墻(4)的一側墊板上設置有PCR管(5)、EGFR18-p 引物瓶(6)、EGFR19_p 引物瓶(7)、EGFR20_p 引物瓶(8)、EGFR20_pl 引物瓶(9)、EGFR21-p引物瓶(10)、裝酶混合物的試劑瓶(11);隔離墻⑷的另一側墊板上設置有去離子水瓶(12)、醋 酸鈉溶液瓶(13)、100%酒精瓶(14)、70%酒精瓶(15)。
專利摘要本實用新型公開了一種對石蠟組織的EGFR外顯子基因突變檢測試劑盒，包括盒體1、盒蓋2，盒體1內設置墊板3和隔離墻4，隔離墻4的一側墊板上設置有PCR管5、EGFR18-p引物瓶6、EGFR19-p引物瓶7、EGFR20-p引物瓶8、EGFR20-p1引物瓶9、EGFR21-p引物瓶10、裝酶混合物的試劑瓶11；隔離墻4的另一側設置有去離子水瓶12、醋酸鈉溶液瓶13、100％酒精瓶14、70％酒精瓶15。本試劑盒結構簡單、設計合理、使用方便、檢測過程不易受污染；本試劑盒中設置的隔離墻，使得一個空間變為兩個空間，能有效防止試劑揮發等引起的污染，使得實驗更準確。
文檔編號C12Q1/68GK202519263SQ2012201629
公開日2012年11月7日 申請日期2012年4月17日 優先權日2012年4月17日
發明者馮繼鋒, 吳建中, 唐金海, 曹海霞, 馬蓉 申請人:馮繼鋒, 吳建中, 唐金海, 曹海霞, 馬蓉