專利名稱：便于反轉錄pcr擴增的試劑盒的制作方法
技術領域：
本實用新型涉及ー種試劑盒，具體涉及ー種便于反轉錄PCR擴增的試劑盒。
背景技術：
聚合酶鏈式反應(PCR)是體外酶促合成特異DNA片段的ー種方法，由高溫變性、低溫退火及適溫延伸等幾步反應組成ー個周期，循環進行，使目的DNA得以迅速擴增，目前很多的片段擴增是以mRNA序列為模板，經過反轉錄聲稱cDNA，然后進行PCR擴增，步驟較為復雜，涉及的試劑較多，目前在進行mRNA提取、反轉錄和PCR擴增試驗時，需要進行試劑的配制和準備，對于實驗人員來說配制和準備試劑増加了實驗過程中的復雜性。并且因為制作 實驗試劑的過程中熟練程度和認知水平的不同，可能配制出的試劑也并不相同，從而不能保證實驗結果的穩定性和可靠性。
實用新型內容本實用新型為解決進行反轉錄PCR擴增實驗時，由于實驗人員的熟練程度和認知水平的不同，導致實驗結果的穩定性和可靠性不能得到保證的問題，進而提供一種便于反轉錄PCR擴增的試劑盒。本實用新型為解決上述技術問題采取的技術方案是本實用新型所述的ー種便于反轉錄PCR擴增的試劑盒由盒體和七個試劑瓶組成，所述七個試劑瓶位于盒體內，所述七個試劑瓶分別為TRIZOL試劑瓶、氯仿試劑瓶、異丙醇試劑瓶、こ醇試劑瓶、RNase-Free水試劑瓶、反轉錄體系混合液試劑瓶和PCR體系混合液試劑瓶，盒體盒底的上端面上加工有七個圓形凹槽，所述TRIZOL試劑瓶、氯仿試劑瓶、異丙醇試劑瓶、こ醇試劑瓶、RNase-Free水試劑瓶、反轉錄體系混合液試劑瓶和PCR體系混合液試劑瓶對應安裝在七個圓形凹槽上，所述七個試劑瓶均為不透光的棕色瓶。本實用新型的有益效果是本實用新型的便于反轉錄PCR擴增的試劑盒在實驗中試劑能夠快捷、穩定地進行生物學實驗室的mRNA提取、反轉錄和PCR擴增試驗；本實用新型的試劑盒實驗有效率高、大大提高了實驗結果的穩定性和可靠性，并且操作簡便，適合實驗室中使用。
圖I是本實用新型的便于反轉錄PCR擴增的試劑的立體圖，圖2是具體實施方式
一中盒底的俯視圖。
具體實施方式
具體實施方式
一如圖I所示，本實施方式的便于反轉錄PCR擴增的試劑盒由盒體8和七個試劑瓶組成,所述七個試劑瓶位于盒體8內，所述七個試劑瓶分別為TRIZOL試劑瓶
I、氯仿試劑瓶2、異丙醇試劑瓶3、こ醇試劑瓶4、RNase-Free水試劑瓶5、反轉錄體系混合液試劑瓶6和PCR體系混合液試劑瓶7，盒體8盒底的上端面上加工有七個圓形凹槽8-1，所述TRIZOL試劑瓶I、氯仿試劑瓶2、異丙醇試劑瓶3、こ醇試劑瓶4、RNase-Free水試劑瓶5、反轉錄體系混合液試劑瓶6和PCR體系混合液試劑瓶7對應安裝在七個圓形凹槽8-1上，所述七個試劑瓶均為不透光的棕色瓶。
具體實施方式
ニ 如圖2所示本實施方式盒體8的長度L為25cm，盒體8的寬度W為10cm，盒體8的高度H為15cm。其他組成及連接關系與具體實施方式
一相同。便于反轉錄PCR擴增的試劑盒實驗的操作步驟步驟一、取IOOmg組織加入Iml TRIZOL試劑瓶I中的試劑勻漿，室溫放置5分鐘；步驟ニ、在勻漿液中加入200 μ I氯仿試劑瓶2中的試劑，混勻后室溫放置5分鐘，保持溫度為4°C，將混勻后勻漿液放置在離心機離上，離心時間15分鐘，控制轉速12000轉/分鐘；步驟三、離心后取上清液加入新EP管中，加入500 μ I異丙醇試劑瓶3中的試劑，混勻后室溫孵育10分鐘；步驟四、保持溫度為4°C，將步驟三混勻的漿液放置在離心機離上，離心時間10分鐘，控制轉速12000轉/分鐘，倒掉上清液，加入75%こ醇試劑瓶4中的試劑清洗沉淀；步驟五、保持溫度為4°C，將步驟四混勻的漿液放置在離心機離上，離心時間10分鐘，控制轉速7500轉/分鐘，倒掉上清液，使沉淀物干燥呈現半透明狀，加入50 100 μ IRNase-Free水試劑瓶5中的試劑溶解沉淀，所得溶液為提取到的總mRNA ；步驟六、取2. 5 μ I總mRNA加入PCR管中，加入反轉錄體系混合液試劑瓶6中的溶液17. 5 μ I，混合后在65°C保溫I分鐘，在30°C保溫I分鐘，逐漸升溫至65°C，升溫時間為15 30分鐘，在98°C保溫5分鐘，在5°C保持5分鐘；步驟七、反轉錄完成后,取反轉錄后的cDNA溶液I μ I加入PCR管中,加入設計好的上下游引物各I μ I，加入PCR體系混合液試劑瓶7中的試劑17μ 1，PCR反應條件為94°C預變性5分鐘，30個循環的94°C 30秒、55°C 30秒、72°C 30秒，最后72°C延伸10分鐘，所得PCR產物進行瓊脂糖凝膠電泳觀察結果。
權利要求1.一種便于反轉錄PCR擴增的試劑盒，其特征在干所述試劑盒由盒體(8)和七個試劑瓶組成，所述七個試劑瓶位于盒體(8)內，其特征在于所述七個試劑瓶分別為TRIZOL試劑瓶(I)、氯仿試劑瓶(2)、異丙醇試劑瓶(3)、こ醇試劑瓶(4)、RNase-Free水試劑瓶(5)、反轉錄體系混合液試劑瓶(6)和PCR體系混合液試劑瓶(7)，盒體(8)盒底的上端面上加工有七個圓形凹槽(8-1)，所述TRIZOL試劑瓶(I)、氯仿試劑瓶(2)、異丙醇試劑瓶(3)、こ醇試劑瓶(4)、RNase-Free水試劑瓶(5)、反轉錄體系混合液試劑瓶(6)和PCR體系混合液試劑瓶(7)對應安裝在七個圓形凹槽(8-1)上，所述七個試劑瓶均為不透光的棕色瓶。
2.根據權利要求I所述的便于反轉錄PCR擴增的試劑盒，其特征在干盒體(8)的長度(L)為25cm，盒體⑶的寬度(W)為10cm，盒體⑶的高度⑶為15cm。
專利摘要便于反轉錄PCR擴增的試劑盒，它涉及一種試劑盒。本實用新型為解決進行反轉錄PCR擴增實驗時，由于實驗人員的熟練程度和認知水平的不同，導致實驗結果的穩定性和可靠性不能得到保證的問題。七個試劑瓶分別為TRIZOL試劑瓶、氯仿試劑瓶、異丙醇試劑瓶、乙醇試劑瓶、RNase-Free水試劑瓶、反轉錄體系混合液試劑瓶和PCR體系混合液試劑瓶，盒體盒底的上端面上加工有七個圓形凹槽，TRIZOL試劑瓶、氯仿試劑瓶、異丙醇試劑瓶、乙醇試劑瓶、RNase-Free水試劑瓶、反轉錄體系混合液試劑瓶和PCR體系混合液試劑瓶對應安裝在七個圓形凹槽上，七個試劑瓶均為不透光的棕色瓶。本實用新型用于反轉錄PCR擴增實驗。
文檔編號C12M1/00GK202465677SQ2012201061
公開日2012年10月3日 申請日期2012年3月20日 優先權日2012年3月20日
發明者侯曉明, 倪華 申請人:東北農業大學