專利名稱：一種用于前列腺癌早期診斷和治療的抗psma/fitc雙特異性抗體及其制備方法
技術領域：
本發明涉及ー種抗體，具體涉及ー種用于前列腺癌早期診斷和治療的抗PSMA/FITC雙特異性抗體及其制備方法。
背景技術：
前列腺癌是歐美國家最常見的惡性腫瘤之一，它位居于歐美男性腫瘤發病率的第二位。在美國，前列腺癌的發病率占所有惡性腫瘤的第一位，死亡率僅次于肺癌。在中國近年來前列腺癌發病率也呈逐漸上升趨勢。對于前列腺癌的早期診斷，日益受到學者的重視，繼前列腺酸性磷酸酶(PAP)、前列腺特異性抗原(PSA)等被發現并廣泛應用于前列腺癌的診治之后，ー種存在于LNCaP系前列腺癌細胞膜中的糖蛋白——前列腺特異性膜抗原(prostate-specific membrane antigen, PSMA )越來越引起人們的關注。目前，關于PSMA的單鏈抗體已經多見報道，但是關于抗PSMA的雙特異性抗體，特別是抗PSMA/FITC(fluorescein isothiocyanate,異硫氰酸突光素)雙特異性抗體國內外均未見報道。早期的雙特異性抗體是用化學交聯技術制備的，即用化學交聯劑將兩種不同特異性的單克隆抗體或抗體的Fab (fragment of antigen binding)片段通過ニ硫鍵或者硫醚鍵連成BsAb (bispecific antibody,雙特異性抗體)。但是該操作易使抗體抗原結合部位的結構發生改變而影響其活性。1983年Milstein等在單克隆抗體技術的基礎上,進ー步擴展雜交瘤技術，用細胞工程法制備出雙特異性單克隆抗體(BispecificMonoclonalAntibody, BsMAb),即將兩株各自分泌不同特異性單抗的雜交瘤細胞再融合得到四源雜交瘤(quadroma),或將ー株雜交瘤細胞株和免疫脾細胞融合獲得三源雜交瘤(trioma),均可獲得同時具有兩種親代單抗特異性的BsAb。但是該方法必須從大量相似的免疫球蛋白中篩選具有雙特異性的BsAb，費時 費力，同時多倍體雜交瘤細胞穩定性差，需要經常進行克隆。因此上述兩種方法正被迅速發展的基因工程抗體制備法所取代。
發明內容
本發明的目的是提供ー種利用基因工程抗體制備方法得到的用于前列腺癌早期診斷和治療的抗PSMA/FITC雙特異性抗體及其制備方法，以PSMA為靶標，能夠特異性結合前列腺癌細胞和半抗原FITC。本發明所采用的技術方案是:
一種用于前列腺癌早期診斷和治療的抗PSMA/FITC雙特異性抗體，其特征在干: 所述的抗體具有如SEQ ID N0.5的全長核酸序列:
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權利要求
1.種用于前列腺癌早期診斷和治療的抗PSMA/FITC雙特異性抗體，其特征在于: 所述的抗體具有如SEQ ID N0.5的全長核酸序列:ccctctagaaataattttgtttaactttaagaaggagatatacatatgaaatacctgctgccgaccgctgctgctggtctgctgctcctcgctgcccagccggcgatggctatggccgaggtgcagctgcagcagtcaggacccgacctggtgaagcctggggcctcaatgaagatttcctgcaaggcttctggatacacattcactgactacaacatggactgggtgaaggagagacatggaaagagccttgagtggattggagatattaatcctaaaaatggcgttactatttacaaccagaagttcaagggcaaggccacattgactgtagacaagtcctccaccacagcctacatggagctccgcagcctgacatctgaagacactgcagtctattattgtgcaagaggggactmctatggtaactactttgactactggggccaaggcaccagtctcacagtctcctcagccaaaacgacmcccaagcttggaggtggcggatccgaagttcagctggttgaatctggtggtggtctggttcagccgggtggttctctgcgtctgtcttgcgctgcttctggtttcaccttctctgactactggatgaactgggttcgtcaggctccgggtaaaggtctggaatgggttgctcagatccgtaacaaaccgtacaactacgaaacctactacgctgactctgttaaaggtcgtttcaccatctctcgtgacacctctaaaaacaccgtttacctgcagatgaactctctgcgtgctgaagacaccgctgtttactactgcaccggttcttactacggtatggactactggggtcagggtaccctggttaccgtttcttctcaccaccaccaccaccactgagatccggctgctaacaaagcccgaaaggaagctgagttggctgctgccaccgctgaccggtctgcagactagaaataattttgtttaactttaagaaggagatatacatatgaaatacctgctgccgaccgctgctgctggtctgctgctcctcgctgcccagccggcgatggctatggactacaaagacatccagatgacccagtctccgtcttctctgtctgcttctgttggtgaccgtgttaccatcacctgccgtgcttctcagtctctggttcactctcagggtaacacctacctgcgttggtaccagcagaaaccgggtaaagctccgaaagttctgatctacaaagtttctaaccgtttctctggtgttccgtctcgtttctctggttctggttctcagaccgacttcaccctgaccatctcttctctgcagccggaagacttcgctacctactactgccagcagtctacccacgttccgtggaccttcggtcagggtaccaaagttgaactgaaacgtgctggaggtggcggatccgacattcagatgacacagtctccagcctccctatctgtatctgtgggagaaactgtcaccatcacatgtcgaacaagtgagaatatttacagtaatttagcatggtatcagcagaaacagggaaaatctcctcagctcctggtctatactgcaacaaacttagcagatggtgtgccctcaaggttcagtggcagtggatcaggcacacagtattccctcaagatcaacagcctgcagtctgatgattctgggacttattactgtcaacatttttggggtactccgtacacgttcggaggggggaccaagctggaaataaaacggcaccaccaccaccaccactgactcgagcac ； 上述核酸序列的長度為1783。
2.種用于前列腺癌早期診斷和治療的抗PSMA/FITC雙特異性抗體的制備方法，其特征在于: 由以下步驟實現: 步驟ー:抗PSMA/FITC雙特異性抗體核酸序列的設計與合成:根據 VLpsma、VHpsma, VLfitc, VHfitc 的核酸序列和 VHpsma-L-VLfitc ； VHfitc-L-VLpsma 的連接形式設計相應的引物，如下表所示；
全文摘要
本發明涉及一種用于前列腺癌早期診斷和治療的抗PSMA/FITC雙特異性抗體。目前關于PSMA的單鏈抗體已經多見報道，但是關于抗PSMA/FITC雙特異性抗體鮮有研究。本發明所涉及雙特異性抗體具有如SEQIDNo.5的全長核酸序列。本發明采用基因重組技術生產，便于大規模生產和制備；抗體分子量小，對腫瘤組織的穿透力較強，特別是針對前列腺組織具有較厚的前列腺包膜的解剖特點，小分子抗體更容易到達病變部位；可以通過預定位技術與病變部位前列腺癌細胞相結合，進而通過半抗原攜帶的藥物或者標記物實現前列腺癌的治療和早期診斷。
文檔編號C12N15/70GK103087171SQ201210564978
公開日2013年5月8日 申請日期2012年12月24日 優先權日2012年12月24日
發明者宦怡, 魏夢綺, 袁遠, 鄭敏文, 張勁松, 楊勇, 任靜, 黃旭方, 趙亞超, 李昕宇 申請人:中國人民解放軍第四軍醫大學