用于結核病診斷的蛋白以及試劑盒的制作方法

用于結核病診斷的蛋白以及試劑盒的制作方法
【專利摘要】本發明屬于生物化學和免疫學領域，涉及一種用于結核病診斷的蛋白以及試劑盒。具體地，本發明涉及一種分離的蛋白，其氨基酸序列如SEQ?ID?NO：1或SEQ?ID?NO：2所示。本發明的蛋白可以作為作為細胞水平的結核病免疫診斷分子標識，具有良好的符合率和反應強度。
【專利說明】用于結核病診斷的蛋白以及試劑盒
【技術領域】
[0001]本發明屬于生物化學和免疫學領域，涉及一種用于結核病診斷的蛋白以及試劑盒。
【背景技術】
[0002]結核分枝桿菌是對人類健康威脅最大的病原體之一，結核病是當今世界上成年人中的主要傳染病，已對國際公共衛生構成嚴峻挑戰。結核菌在感染人體以后，多處于潛伏狀態或持續感染狀態，它能在感染宿主細胞內逃避宿主的防御作用而大量繁殖并和宿主達到一種微妙的平衡，感染者一生中的任何時候都有可能發病。一般情況下，10%的感染者將發展為活動性肺結核。一個未經治療的活動性肺結核病人，一年能傳染10 - 15人。
[0003]近五十年來，結核病的控制理論與技術、臨床診斷治療水平與研究均有長足的進步。由于有效化療藥物(異煙肼、利福平、吡嗪酰銨、鏈霉素、乙胺丁醇等)的普遍應用和卡介苗在世界范圍的推廣，使得結核病的發病率曾一度降低，以至于人們樂觀地認為，結核病將同天花一樣被人類徹底消滅。但在八十年代中期，由于過分樂觀的估計形勢，減少投資、縮減機構，放松對結核病的治療與管理，結核病又在許多國家死灰復燃，發病率在全世界范圍內再次回升。1993年WHO宣布結核病處于“全球緊急狀態”，并呼吁“迅速采取行動與結核病危機進行斗爭”，這在WHO歷史上發表這樣的聲明尚屬首次。耐藥及耐多藥結核病也已成為當前結核病控制工作中的重大威脅。
[0004]在常用的肺結核診斷技術中存在著陽性率低、周期長、操作復雜、假陽性率高等問題。故此需要一種快速、簡便、敏感、特異的診斷方法。
[0005]目前結核病毒診斷方法有:(一)痰菌檢查:痰涂菌檢查和痰結核菌檢查簡便易行，準確性較高，痰中查出結核菌，就能確診患了結核病。一般初次就診要查三個痰標本，即夜間痰、清晨痰和即時痰。它雖然是診斷肺結核“金指標”但診斷率低，培養周期長。痰結核菌培養，結果可信度高，并能做結核菌藥敏試驗，但需時6 - 8周，應用受到限制。(二)X射線檢查:胸部X線檢查可以早期發現結核病，而且可以確定病灶的部位、性質、范圍，了解發病情況及用于治療效果的判斷，并且開展方便，病人樂于接受。胸部CT可以發現較小的或隱蔽部位的病變，可以彌補一般X線檢查的不足。但容易與其他肺部疾病混淆，需要專業醫生確證。(三)肺結核病免疫學診斷:1.常用的有結核菌素純蛋白衍化物(PPD)試驗，該試驗陽性是感染過結核菌的證據之一，但是假陽性率高，容易誤診。2.血中、痰中結核抗體檢測陽性也有助于診斷，也容易出現假陽率。3.BACTEC法測結核分枝桿菌的代謝物，一般兩周可分離出分枝桿菌，但菌量多少能影響陽性結果出現的天數。5.聚合酶鏈反應(PCR)，優點是敏感性可達98% — 100%，缺點是特異性較差。(四)其他檢查:只能作為輔助診斷，不能作為診斷依據。1.纖維支氣管鏡檢查，可以直接觀察或間接判斷支氣管、肺內病變，并且有活組織檢查、灌洗、錄像、拍攝氣管內照片等功能，對于診斷和鑒別診斷特別有用。2.胸腔鏡和縱隔鏡檢查，均可用于觀察胸腔、縱隔內腫大淋巴結，并可取出活組織檢查以利診斷和鑒別診斷。3.超聲波檢查，主要用`于胸腔積液的診斷和鑒別診斷。[0006]結核分枝桿菌(MTB)培養物濾液中有一種早期分泌抗原革巴蛋白(early secretoryantigenic target，ESAT-6)，GenBank 登錄號為:NC_00962，g1: 15608177，相對分子質量為6000，在MTB感染早期即可被機體的免疫系統所識別，是重要的T細胞抗原抗原。ESAT-6來源的合成多肽被廣泛地用于外周血MTB特異性Y-干擾素(IFN-Y)應答情況的檢測，臨床上用于診斷是否有MTB感染指標之一 [Ravn P.Munk ME.Andersen AB Prospectiveevaluation ofa whole—blood test using Mycobacterium tuberculosis-specificantigens ESAT_6and CFP-1Ofor diagnosis of active tuberculosis2005 ；HarbceM.0etteinger T.Wiker HG Evidence for oceurrence of the ESAT-6protein inMycobacterium tuberculosis and virulent Mycobacterium bovis and for its absencein Mycabacterium bovis BCG1996 ；Zhang, Μ., H.Wang, M.Liao, et al.(2010)."Diagnosisof latent tuberculosis infection in bacille Calmette-Guerin vaccinatedsubjects in China by interferon-gamma ELISpot assay.〃Int J Tuberc LungDisl4(12):1556-1563.]o
[0007]盡管如此，目前尚需要發現新的診斷結核病或者檢測結核分枝桿菌的標識，以及新的檢測診斷結核病或者檢測結核分枝桿菌的方法和試劑。

【發明內容】

[0008]本發明人經過深入的研究和創造性的勞動，得到了一類蛋白，本發明人驚奇地發現，本發明的蛋白能夠作為診斷結核病或者檢測結核分枝桿菌的標識，并且其具有良好的敏感性和特異性。由此提供了下述發明:
[0009]本發明的一個方面涉及一種分離的蛋白，其氨基酸序列如SEQ IDNO:1 (本發明中有時稱為Rvll98)或SEQ ID NO:2 (本發明中有時稱為Rv2016)所示。所述蛋白為用于結核病診斷或結核桿菌檢測的蛋白。
[0010]Rvl 198的氨基酸序列:86aa
[0011 ] MASRFMTDPHAMRDMAGRFEVHAQTVEDEARRMWASAQNISGAGWSGMAEATSLDTMAQMNQAFRNIVNMLHGVRDGLVRDANNYE (SEQ ID NO:1)
[0012]Rv2016的氨基酸序列:180aa
[0013]FLAALVGTIRDTRFDIADMRNWRPGWFPTMHSRCLSNLIHDRIWAHLVTLIASNPGTSIKDKGATREIVVGAHLRLRIKRHHA⑶EISTYPTRTAIEFWQQGSQPAFPGLEEVRIAVGYRWDPDTREIGAPLLSLRDGKDHVIWWELDEPAAGVKITWTPIEPTLPSIDFGDLGEDSGA (SEQ ID NO:2)
[0014]本發明的另一方面一種分離的核苷酸，其編碼本發明的蛋白；具體地，所述核苷酸的序列如SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4所示。
[0015]Rvl 198的核苷酸序列(讀碼框):258bp
[0016]ATG ACC ATC AAC TAT CAA TTC GGG GAT GTC GACGCT CAC GGC GCC ATG ATC CGCGCT CAG GCC GGG TTGCTG GAG GCC GAG CAT CAG GCC ATC ATT CGT GAT GTGTTG ACC GCGAGT GAC TTT TGG GGC GGC GCC GGT TCGGCG GCC TGC CAG GGG TTC ATT ACC CAG TTG GGCCGTAAC TTC CAG GTG ATC TAC GAG CAG GCC AAC GCC CACGGG CAG AAG GTG CAG GCT GCCGGC AAC AAC ATG GCGCAA ACC GAC (SEQ ID NO:3)
[0017]Rv2016的核苷酸序列(讀碼框):540bp[0018]TTC CTT GCT GCT CTT GTT GGC ACC ATC AGG GATACG CGC TTC GAC ATC GCC GACATG CGG AAC TGG CGGCCG GGA TGG TTT CCG ACC ATG CAT AGC CGG TGT CTGTCC AAC CTCATC CAC GAC AGA ATC TGG GCA CAC CTGGTC ACC CTC ATC GCG AGC AAT CCA GGC ACC AGCATCAAG GAC AAG GGT GCC ACC CGC GAG ATT GTG GTT GGCGCA CAC CTG CGG TTG CGA ATCAAA CGC CAC CAC GCAGGT GAC GAG ATC AGC ACC TAC CCG ACC CGA ACC GCCATC GAA TTCTGG CAA CAG GGC AGC CAG CCC GCC TTCCCG GGG CTG GAA GAG GTT CGC ATT GCG GTG GGCTAT CGG TGG GAC CCT GAT ACC CGC GAG ATC GGA GCC CCCCTG CTG TCG CTT CGC GAC GGGAAA GAT CAC GTC ATCTGG GTA GTC GAA CTC GAC GAG CCT GCG GCC GGC GTGAAG ATC ACCTGG ACC CCG ATC GAG CCG ACA CTA CCGTCC ATC GAC TTC GGT GAC TTG GGT GAA GAC TCTGGAGCA (SEQ ID NO:4)[0019]Rvl 198和Rv2016的讀碼框的核苷酸序列可以由實施例1或2中的相應的質粒或PCR產物測序得到，并可進一步根據讀碼框核苷酸序列推知編碼的氨基酸序列。當然，上述的讀碼框的核苷酸序列也可以通過人工合成得到。所述蛋白可以通過將讀碼框序列通過合適的表達載體和宿主細胞得到。
[0020]本發明的再一方面涉及一種重組載體，其含有本發明的核苷酸。
[0021 ] 本發明的再一方面涉及一種重組宿主細胞，其含有本發明的重組載體。
[0022]本發明的再一方面涉及一種引物對，其包含SEQ ID NO:7和SEQID NO:8所示的核苷酸序列，和/或包含SEQ ID NO:9和SEQ ID NO: 10所示的核苷酸序列。具體地，所述引物對的核苷酸序列如SEQ IDNO:7和SEQ ID NO:8所示，和/或如SEQ ID NO:9和SEQ IDNO:10所示。
[0023]本發明的再一方面涉及一種抗體，其能夠與本發明的蛋白(Rvl 198和/或Rv2016)特異性結合；具體地，所述抗體為單克隆抗體或多克隆抗體；具體地，所述抗體連接有可檢測的標記物。
[0024]所述多克隆抗體或單克隆抗體可以參照本領域人員知悉的方法制備。
[0025]在本發明中，術語“特異性結合”具有免疫學的一般含義，例如抗原抗體間的結合。
[0026]本發明的再一方面涉及一種抗體偶聯物，包括抗體部分和偶聯部分，其中，所述抗體部分為本發明的抗體，所述偶聯部分為選自放射性核素、藥物、毒素、細胞因子、酶、熒光素、載體蛋白、脂類、和生物素中的一種或多種
[0027]本發明的再一方面涉及一種組合物，其含有本發明的蛋白(Rvll98和/或Rv2016)、本發明的核苷酸、本發明的重組載體、本發明的重組宿主細胞、本發明的引物對、本發明的抗體、或者本發明的抗體偶聯物；可選地，所述組合物還含有藥學上可接受的載體或賦形劑；具體地，所述組合物為疫苗組合物，并且所述藥學上可接受的載體或賦形劑為疫苗用載體或賦形劑。
[0028]在本發明中，術語“疫苗用載體或賦形劑”是指選自如下物質的一種或多種，包括但不限于:pH調節劑、表面活性劑、佐劑、離子強度增強劑。具體地，例如，pH調節劑包括但不限于磷酸鹽緩沖液，表面活性劑包括但不限于陽離子，陰離子或者非離子型表面活性劑。其中，非離子型表面活性劑包括但不限于:Tween-80。佐劑包括但不限于氫氧化鋁，氟氏完全佐劑。離子強度增強劑包括但不限于氯化鈉。
[0029]本發明的再一方面涉及一種試劑盒，其包含本發明的抗體、本發明的抗體偶聯物、或者本發明的引物對；具體地，所述試劑盒為用于診斷結核病特別是肺肺結核或者檢測結核桿菌的試劑盒。
[0030]本發明的再一方面涉及一種篩選藥物的模型，其包含本發明的蛋白(Rvll98和/或Rv2016)或者本發明的核苷酸；具體地，所述藥物為診斷和/或治療和/或預防和/或輔助治療結核病特別是肺結核的藥物或者為抗結核桿菌的藥物。
[0031 ] 例如，可以通過被篩選的藥物是否能夠檢測本發明的蛋白(Rvl 198和/或Rv2016)或者本發明的核苷酸，來判斷被篩選的藥物是否能夠用作診斷和/或治療和/或預防和/或輔助治療結核病特別是肺結核的藥物或者為抗結核桿菌的藥物。
[0032]本發明的再一方面涉及本發明的蛋白或者本發明的核苷酸在制備或者作為篩選藥物的模型中的用途，具體地，所述所述藥物為診斷和/或治療和/或預防和/或輔助治療結核病特別是肺結核的藥物或者為檢測結核桿菌或抗結核桿菌的藥物。
[0033]本發明的再一方面涉及本發明的蛋白(Rvll98和/或Rv2016)、本發明的核苷酸、本發明的重組載體、本發明的重組宿主細胞、本發明的引物對、本發明的抗體或者本發明的抗體偶聯物在制備診斷和/或治療和/或預防和/或輔助治療結核病特別是肺結核的藥物(包括但不限于疫苗)或者制備檢測結核桿菌或抗結核桿菌的藥物中的用途。
[0034]本發明的再一方面涉及一種在體內或體外檢測結核桿菌的方法，包括使用本發明的抗體或者本發明的引物對的步驟；具體地，所述方法為抗原檢測方法(例如western blot或者ELISA)或者PCR法。一種在體內或體外檢測結核桿菌的方法，其為ELISP0T法。檢測的樣本包括但不限于:被檢測者的痰液、血液、組織、淋巴細胞、DNA等等。
[0035]本發明的再一 方面涉及一種診斷結核病特別是肺結核的方法，包括使用本發明的抗體或者本發明的引物對的步驟；具體地，所述方法為抗原檢測方法(例如western blot或者ELISA)或者PCR法。一種診斷結核病特別是肺結核的方法，其為ELISP0T法。
[0036]下面還給出了本發明涉及的部分術語的解釋。
[0037]表達載體
[0038]本發明還涉及包含本發明核酸序列、啟動子和轉錄及翻譯終止信號的重組表達載體。可以將上述各種核酸和調控序列連接在一起來制備重組表達載體，該載體可以包括一個或多個方便的限制位點，以便在這些位點插入或取代編碼本發明的蛋白或抗體的核酸序列。或者，可以通過將核酸序列或包含該序列的核酸構建體插入適當表達載體而表達本發明所述核酸序列。制備表達載體時，可使編碼序列位于載體中以便與適當的表達調控序列可操作地連接。
[0039]重組表達載體可以是任何便于進行重組DNA操作并表達核酸序列的載體(例如質粒或病毒)。載體的選擇通常取決于載體與它將要導入的宿主細胞的相容性。載體可以是線性或閉環質粒。
[0040]載體可以是自主復制型載體(即存在于染色體外的完整結構，可獨立于染色體進行復制)，例如質粒、染色體外元件、微小染色體或人工染色體。載體可包含保證自我復制的任何機制。或者，載體是一個當導入宿主細胞時，將整合到基因組中并與所整合到的染色體一起復制的載體。此外，可應用單個載體或質粒，或總體包含將導入宿主細胞基因組的全部DNA的兩個或多個載體或質粒，或轉座子。
[0041]優選本發明所述載體含有一個或多個便于選擇轉化細胞的選擇標記。選擇標記是這樣一個基因，其產物賦予對殺生物劑或病毒的抗性、對重金屬的抗性，或賦予營養缺陷體原養型等。細菌選擇標記的例子如枯草芽孢桿菌或地衣芽孢桿菌的dal基因,或者抗生素如氨芐青霉素、卡那霉素、氯霉素或四環素的抗性標記。
[0042]優選本發明所述載體包含能使載體穩定整合到宿主細胞基因組中，或保證載體在細胞中獨立于細胞基因組而進行自主復制的元件。
[0043]就進行自主復制的情況而言，載體還可以包含復制起點，使載體能在目標宿主細胞中自主地復制。復制起點可以帶有使其在宿主細胞中成為溫度敏感型的突變(參見例如，fEhrlich, 1978，美國國家科學院學報75:1433)。
[0044]可以向宿主細胞插入一個以上拷貝的本發明核酸序列以提高該基因產物的產量。該核酸序列的拷貝數增加可以通過將該序列的至少一個附加拷貝插入宿主細胞基因組中，或者與該核酸序列一起插入一個可擴增的選擇標記，通過在有合適選擇試劑存在下培養細胞，挑選出含有擴增拷貝的選擇性標記基因、從而含有附加拷貝核酸序列的細胞。
[0045]用于連接上述各元件來構建本發明所述重組表達載體的操作是本領域技術人員所熟知的(參見例如SambiOOk等，分子克隆實驗手冊，第二版，冷泉港實驗室出版社，冷泉港，紐約，1989)。[0046]宿主細胞
[0047]本發明還涉及包含可用來重組生產本發明的蛋白或抗體的本發明所述核酸序列(多核苷酸)的重組宿主細胞。可將包含本發明之核酸序列的載體導入宿主細胞，從而使該載體以上述染色體整合體或自我復制的染色體外載體形式得以維持。術語“宿主細胞”涵蓋任何由于復制期間發生的突變而與親本細胞不同的后代。宿主細胞的選擇很大程度上取決于本發明的蛋白或抗體編碼基因及其來源。
[0048]宿主細胞可以是原核細胞或者真核細胞，例如細菌或酵母細胞。可以通過本領域技術人員熟知的技術將載體導入宿主細胞。
[0049]制備方法
[0050]本發明還涉及重組制備本發明本發明的蛋白或抗體的方法，該方法包括:(a)在適于產生本發明的蛋白或抗體的條件下，培養含有核酸構建體的宿主細胞，該核酸構建體包含編碼所述本發明的蛋白或抗體的核酸序列；和(b)回收該肽。
[0051]在本發明所述制備方法中，用本領域已知方法在合適本發明的蛋白或抗體產生的營養培養基中培養細胞。例如，可以在合適的培養基中，在允許本發明的蛋白或抗體表達和/或分離的條件下，通過搖瓶培養、實驗室或工業發酵罐中小規模或大規模發酵(包括連續、分批、分批加料或固態發酵)來培養細胞。在包含碳源和氮源以及無機鹽的合適的培養基中，采用本領域已知的步驟進行培養。合適的培養基可由供應商提供或者可以參照公開的組成(例如，美國典型培養物保藏中心的目錄中所述)來制備。如果本發明的蛋白或抗體被分泌到培養基中，則可以直接從培養基中回收。如果本發明的蛋白或抗體不分泌，可以從細胞裂解物中回收。
[0052]可以用本領域已知方法回收所產生的本發明的蛋白或抗體。例如，可以通過常規操作(包括，但不限于離心、過濾、抽提、噴霧干燥、蒸發或沉淀)從培養基中回收。
[0053]可以通過各種本領域已知的操作來純化本發明所述本發明的蛋白或抗體，這些操作包括，但不限于層析(例如，離子交換層析、親和層析、疏水作用層析、層析聚焦、和大小排阻層析)、HPLC、電泳(例如，制備性等電點聚焦)、差示溶解度(例如硫酸銨沉淀)、SDS-PAGE或抽提(例如參見，蛋白質純化,J.C.Janson和Lars Ryden編，VCHPublishers, New York, 1989)。
[0054]在本發明中，術語“結核桿菌”，包括但不限于，例如，結核分枝桿菌；術語“結核分枝桿菌”包括但不限于，結核分枝桿菌H37Rv。
[0055]發明的有益效果
[0056]本發明的蛋白可以作為作為結核病(例如肺結核)或結核桿菌細胞免疫診斷分子標識，具有良好的符合率和反應強度。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0057]圖1:Rv2127-Rv2234基因片段的PCR擴增結果。其中，泳道M表示DNA marker(DL2000:2000,1000，750，500，250，IOObp);泳道 2 為 Rvl 198 ;泳道 3 為 Rv2016。
[0058]圖2:表達后Rvl 198和Rv2017的PAGE。其中，泳道M表示蛋白marker，泳道4為Rv2016，泳道 6 為 Rvll98。
[0059]圖3:蛋白純化結果。其中，泳道M表示蛋白marker ;泳道I為Rv2016 ;泳道2為Rvll98。
[0060]圖4:1160個蛋白的ELISP0T初篩鑒定結果分布圖。其中，白色小星為Rvll98的細胞免疫反應強度，黑色小星為Rv2016的細胞免疫反應強度。
[0061]圖5:10個蛋白的ELISP0T鑒定部分結果。
【具體實施方式】
[0062]下面將結合實施例對本發明的實施方案進行詳細描述。本領域技術人員將會理解，下面的實施例僅用于說明本發明，而不應視為限定本發明的范圍。實施例中未注明具體技術或條件者，按照本領域內的文獻所描述的技術或條件(例如參考J.薩姆布魯克等著，黃培堂等譯的《分子克隆實驗指南》，第三版，科學出版社)或者按照產品說明書進行。所用試劑或儀器未注明生產廠商者，均為可以通過市購獲得的常規產品。
[0063]實施例1:MTB H37Rv的相關基因的克隆和表達(Gateway法)
[0064]Invitrogen公司的Gateway技術為蛋白的重組和表達提供了一種可能，它是從PCR產物開始創建Gateway?入門克隆。這種方法是通過合并attB位點到上游和下游引物上，然后共同孵育PCR擴增產物和pDONR?(包含attP位點)以及Gateway? BP Clonase?酶混合物。接著轉化進大腸桿菌中，將會獲得包含目的基因的入門克隆，同時目的基因兩側具有attL重組位點。這個入門克隆可以與Gateway?目的載體pDEST17進行重組表達，快速高效得到目的蛋白[Walhout AJ, Temple GF, Brasch MA.etal.GATEWAY recombinationalcloning:application to the cloning of large numbers of open reading framesor ORFeomes.Methods Enzymolj.2000，328:575-592 ;RachaeI M.GoIdstone，NicoleJ.Moreland, Ghader Bashirijetal.A new Gateway_vector and expression protocolfor fast and efficient recombinant protein expression in Mycobacteriumsmegmatis.Protein Expression and Purification57(2008) 81 - 87 ；A high throughputscreen to identify secreted and transmembrane proteins involved in Drosophilaembryogenesis.PNAS1998;95;9973-9978.]。
[0065]本實驗以于MTB H37Rv的基因組為模板,利用Invitrogen公司提供的Gateway技術，表達全部ORF編碼的蛋白質,經過western blot方法檢測臨床血衆獲得具有較高敏感性特異性抗原，為臨床診斷、疾病治療、預防控制提供堅實的物質基礎。
[0066]一、實驗方法
[0067]1.基因序列的獲取
[0068]根據已經公開的MTB H37Rv的ORFs基因序列，用Primer designer設計引物序列，按照Gateway系統的引物設計方案，為引物序列添加attB臂，由北京新擎科公司完成引物的合成。
[0069]其為正向引物臂為:
[0070]GGGGACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCTTC (SEQ ID NO:5)；
[0071]反向引物臂為:
[0072]GGGGACCACTTTGTACAAGAAAGCTGGGTCCTA (SEQ ID NO:6)。
[0073]共完成引物設計3535對，因篇幅所限，部分引物如下面的表1所示。
[0074]表1:部分合成引物(不含att臂的部分) [0075]
【權利要求】
1.一種分離的蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2所示。
2.一種分離的核苷酸，其編碼權利要求1所述的蛋白；具體地，所述核苷酸的序列如SEQ ID NO:3 或 SEQ ID NO:4 所示。
3.一種重組載體，其含有權利要求2所述的核苷酸。
4.一種重組宿主細胞，其含有權利要求3所述的重組載體。
5.一種引物對，其包含SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8所示的核苷酸序列，和/或包含SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10所示的核苷酸序列。
6.一種抗體，其能夠與權利要求1所述的蛋白特異性結合；具體地，所述抗體為單克隆抗體或多克隆抗體；具體地，所述抗體連接有可檢測的標記物。
7.一種抗體偶聯物，包括抗體部分和偶聯部分，其中，所述抗體部分為權利要求6所述的抗體，所述偶聯部分為選自放射性核素、藥物、毒素、細胞因子、酶、熒光素、載體蛋白、月旨類、和生物素中的一種或多種。
8.一種組合物，其含有權利要求1所述的蛋白、權利要求2所述的核苷酸、權利要求3所述的重組載體、權利要求4所述的重組宿主細胞、權利要求5所述的引物對、權利要求6所述的抗體或者權利要求7所述的抗體偶聯物；可選地，所述組合物還含有藥學上可接受的載體或賦形劑；具體地，所述組合物為疫苗組合物，并且所述藥學上可接受的載體或賦形劑為疫苗用載體或賦形劑。
9.一種試劑盒，其包含權利要求6所述的抗體、權利要求7所述的抗體偶聯物、或者權利要求5所述的引物對；具體地，所述試劑盒為用于診斷結核病特別是肺肺結核或者檢測結核桿菌的試劑盒。`
10.一種篩選藥物的模型，其包含權利要求1所述的蛋白或者權利要求2所述的核苷酸；具體地，所述藥物為診斷和/或治療和/或預防和/或輔助治療結核病特別是肺結核的藥物或者為抗結核桿菌的藥物。
11.權利要求1所述的蛋白或者權利要求2所述的核苷酸在制備或者作為篩選藥物的模型中的用途，具體地，所述所述藥物為診斷和/或治療和/或預防和/或輔助治療結核病特別是肺結核的藥物或者為檢測結核桿菌或抗結核桿菌的藥物。
12.權利要求1所述的蛋白、權利要求2所述的核苷酸、權利要求3所述的重組載體、權利要求4所述的重組宿主細胞、權利要求5所述的引物對、權利要求6所述的抗體或者權利要求7所述的抗體偶聯物在制備診斷和/或治療和/或預防和/或輔助治療結核病特別是肺結核的藥物(包括但不限于疫苗)或者制備檢測結核桿菌或抗結核桿菌的藥物中的用途。
【文檔編號】C12N15/11GK103864907SQ201210549696
【公開日】2014年6月18日 申請日期:2012年12月18日 優先權日:2012年12月18日
【發明者】劉立國, 金奇, 張笑冰, 張維佳 申請人:中國醫學科學院病原生物學研究所