專利名稱：一種細胞模型及其構建方法和在篩選抗神經紊亂性疾病藥物中的應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及基因工程及分子藥理學技術領域，具體涉及一種能夠篩選以mGluR2為靶點的抗神經系統疾病藥物的細胞模型及其構建方法，和該細胞模型在篩選抗神經紊亂性疾病藥物中的應用。
背景技術：
現代社會隨著環境污染和生活壓力的日益加重，精神類疾病和神經性疾病，特別是神經退行性疾病越來越多地困擾著人類。最新公布的《世界衛生報告》指出目前，神經退行性疾病及其精神類疾病已成為人類的大敵。從全球范圍來看,神經退行性疾病帕金森氏癥患者就約有500萬人，僅僅是在中國，患者已超過200多萬人。因此針對精神類疾病以及神經退行性疾病的新藥創制已經被列入國家重點發展戰略。也成為全球各大藥物研發公 司關注的焦點。C族GPCR成員因為其獨特的生理功能成為精神類疾病以及神經退行性疾病藥物研發焦點中的焦點。C族GPCR成員包括代謝型Y-氨基丁酸受體(GABABR)、代謝型谷氨酸受體(mGluRl-8)、鈣敏感性受體(CaSR)以及味覺受體，該家族受體在體內參與很多重要的生理進程，過度激活或抑制都會引起癲癇、精神分裂癥、亨庭頓癥、帕金森癥、藥物依賴性、疼痛等神經紊亂性疾病的病理發生。功能上的重要性和結構上的易操控性，使得該家族成員成為重要的藥物作用靶點，也成為各大藥物公司研發的重點，有著潛在的極高的科研和市場價值。截止到2005年，根據IMS Health做出的相應統計，現在銷售的藥物中與GPCR有關的抗精神病藥，銷售額已達到476億美元，并保持強勁的增長速度。mGluR2是中樞神經系統中的一個重要受體，屬于C族GPCR，與mGluR3 —起被歸為mGluR亞族IKGroup II mGluRs)。mGluR2是位于細胞膜上的跨膜受體，是一種重要的G蛋白偶聯受體。其活化狀態失調會引起下游信號通路激活紊亂，從而引起一系列精神紊亂性疾病的發生。mGluR2是一個同源二聚體，廣泛分布于大腦皮層，嗅前核，伏隔核，下丘腦，海馬回等部位的細胞中。每個mGluR2包括兩個胞外的VFT和兩個跨膜HD結構域。當谷氨酸結合到正構位點或變構劑結合到變構位點，mGluR2被激活并與G i/o相耦聯，被激活后會抑制腺苷酸環化酶進而抑制cAMP產生。通常情況下，mGluR2主要定位在突觸前膜，抑制神經遞質的釋放，影響神經元的興奮性和突觸的傳遞，是治療神經系統紊亂藥物的理想靶標。目前這方面的研究尚處于起步階段，以mGluR2為祀點的藥物還未被用于臨床。但是大量動物實驗及臨床前研究證明，mGluR2敲除模型及其他藥理研究方法發現mGluR2在認知、藥物成癮及精神病等生理及病理過程中發揮重要作用。臨床前及臨床研究表明mGluRs亞族II是治療焦慮及精神分裂癥的潛在新型藥物靶點，這一發現在焦慮及精神分裂癥治療史上具有里程碑意義，有可能最終推動mGluR亞族II的激動劑或PAMs成為治療這兩種疾病的基礎治療方案。此外，mGluR2的激動劑及陽性變構劑還可以治療其他中樞神經系統疾病，包括疼痛、成癮、抑郁及癲癇坐寸O基于細胞信號通路的高通量藥物篩選(high throughput screening, HTS)是利用細胞信號系統作為應答元件，通過高靈敏度的數據采集系統和技術手段檢測作為藥物靶點的受體及各種蛋白所介導的細胞內信號事件，從而觀測化合物是否能作用于藥物靶點，進而找到具有靶點選擇性的先導化合物。而分子與細胞水平的藥物篩選模型具有材料用量少、藥物作用機制明確等特點，已經成為目前尋找和發現新藥物的主要藥物篩選方法(FONNUM F. A rapid radio chemical method for the determination of cholineacetyl transferase [ J ]. J Neurochem , 1975, 24 ( 2 ) : 407 - 409.)。將藥物革巴點導入工具細胞，并構建穩定的重組高表達目標藥物靶點的細胞篩選模型，是實現高通量藥物篩選的關鍵環節。藥物篩選模型是用于證明某種物質具有藥理活性(生物活性、治療作用)的實驗方法，是尋找和發現新藥物的重要條件之一。
目前，基于GPCR下游信號轉導的高通量藥物篩選方法學相對比較成熟，多家公司可提供高通量檢測儀器及方案。藥物篩選模型的發現和構建則成為制約和推動該領域發展的重要因素，尤其是基于受體分子機制的模型構建更是成為發現新型先導化合物的核心技術和難點。現有技術中還沒有能夠高通量篩選神經系統紊亂性疾病藥物的細胞模型。
發明內容
針對現有技術中的上述不足，本發明建立了一種抗神經紊亂性疾病的篩選模型，它是一種能夠穩定表達與神經系統疾病相關的GPCR-mGluR2，能夠靈敏、特效地篩選以mGluR2為靶點的藥物，包括激動劑、抑制劑和變構劑等。本發明提供的一種細胞模型，是攜帶并能表達mGluR2基因的哺乳動物細胞。即該細胞模型是克隆了表達編碼人源mGluR2基因序列的體外培養的哺乳動物細胞。優選地，所述mGluR2基因的核苷酸序列如SEQ ID NO: I所示。優選地，所述哺乳動物細胞為CHO細胞或HEK293細胞。其它哺乳動物細胞也能夠實現本發明，而以CHO細胞或HEK293細胞構建效果最佳。優選地，該細胞模型的名稱為中國倉鼠卵巢細胞CH0-hmGluR2(C12)，于2012年9月18日保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC NO: C2012100。保藏地址中國.武漢.武漢大學。本發明還提供了一種上述細胞模型的構建方法，步驟如下
(1)將mGluR2基因與表達載體連接，構建含有mGluR2基因的重組質粒；
(2)將重組質粒轉染哺乳動物細胞，培養成能穩定表達mGluR2基因的細胞株，該細胞株即為所述的細胞模型。上述細胞模型的構建方法，優選地，還包括對細胞株進行綜合評估的步驟(3):在細胞株中加入mGluR2激動劑或抑制劑，測定下游信號應答反應，根據應答反應結果評估該細胞株是否作為細胞模型。所述測定下游信號應答反應包括檢測mGluR2與其配體結合程度、mGluR2下游G蛋白與[35S]GTP YS結合程度、環腺苷酸積累量、三磷酸肌醇積累量和細胞內鈣離子流變化量中的一種或幾種。其中檢測mGluR2與其配體結合程度以及G蛋白與[35S]GTPyS結合程度可以采用放射性結合實驗。
優選地，步驟(I)所述的表達載體為pcDNA5/FRT。優選地,步驟(2)使用的細胞為CHO細胞。例如可以使用Invitrogen商品化細胞系Flp-in CHO細胞，Flp-In細胞系經設計可快速構建穩定表達細胞系，以能夠采用Flp-In表達載體表達目的蛋白。這些細胞在轉錄活躍區上含有一個穩定整合的重組酶識別序列(FRT)位點。Flp-In表達載體的定點整合可確保高表達量。用Flp-In表達載體和Flp重組酶載體P0G44共轉染Flp-In細胞系，使得表達載體被定點整合在每個細胞的相同染色體位點上。上述細胞模型的構建方法，更優選地步驟(I)還包括對構建的重組質粒進行測序鑒定；步驟(2)所述的重組質粒轉染哺乳動物細胞是將重組質粒與表達重組酶的質粒P0G44共導入哺乳動物細胞中，再利用潮霉素(Hygromycin)進行篩選，獲得帶有潮霉素抗性的單克隆細胞，繼續培養后利用Western blot、測細胞中的cAMP或Ca2+流等方法檢測能夠表達mGluR2的陽性克隆，培養成能穩定表達mGluR2基因的細胞株。
本發明還提供了上述細胞模型在篩選抗神經紊亂性疾病藥物中的應用。優選地，所述抗神經紊亂性疾病藥物為mGluR2激動劑、mGluR2抑制劑、mGluR2正向變構劑、mGluR2反向變構劑或mGluR2沉默變構劑。本發明具有以下有益效果
本發明的細胞模型通過檢測細胞信號分子所產生的應答信號直接監測mGluR2的活性，能夠高通量、低成本、準確地篩選神經紊亂性疾病的藥物；本發明細胞模型的制備方法簡單可控，成本低廉；本發明神經紊亂性疾病藥物篩選方法步驟簡單，成本低廉，準確性高，可實現高通量的篩選，具有很好的穩定性和可靠性。為抗神經紊亂性疾病藥物的篩選提供了新的思路，具有很好的市場前景。
圖I為本發明細胞模型的工作原理圖。圖2為對陽性克隆的Western blot鑒定結果圖，其中，CHO表示CHO空細胞，CH0-mGluR2 C10、C11、C12、C13、C14 和 C15 分別表示不同編號的 CHO- mGluR2 細胞克隆。圖3為LY379268對CH0_mGluR2細胞內鈣流及對細胞活力的影響實驗結果。A為不同濃度LY379268對細胞內鈣流的影響，縱坐標為細胞內鈣釋放量；B為不同濃度LY379268對細胞活力的影響，縱坐標為光度吸收值(在波長為560nm處的吸光值)，橫坐標為LY379268的濃度。圖4為LY341495對LY379268誘導的CH0_mGluR2細胞內鈣流及對細胞活力的影響結果。A為不同濃度LY341495對LY379268誘導的細胞內鈣流的影響，縱坐標為細胞內鈣釋放量。B為不同濃度LY341495對細胞活力的影響，縱坐標為光度吸收值(在波長為560nm處的吸光值)，橫坐標為LY341495的濃度。圖5為CHO空細胞以及CH0-mGluR2細胞系中LY379268、DHPG對細胞內鈣流的影響。A為不同濃度LY379268對CHO空細胞(CHO Mock)和CH0_mGluR2細胞系(CHO-mGluR2-Clonel2)胞內鈣流的影響，B為不同濃度藥物(LY379268和DHPG)對CH0_mGluR2細胞系(CH0- mGluR2-Clonel2)胞內鈣流的影響。圖6為不同細胞接種數目對應答元件檢測的影響，縱坐標為CH0_mGluR2細胞內鈣釋放量，橫坐標為每孔細胞數。圖7為細胞不同傳代數對應答元件檢測的影響，A為第7代，B為第23代，縱坐標為CH0-mGluR2細胞內鈣釋放量，橫坐標為LY379268和L-Glutamate濃度。圖8為基于該細胞模型的藥物篩選方法的評估結果，縱坐標為細胞內鈣釋放量，橫坐標為樣品數。LY379268+表示加入LY379268藥物處理的實驗組，LY379268-表示未加藥物處理的對照組。
具體實施例方式下面結合附圖和具體實施例對本發明作進一步說明，以使本領域的技術人員可以更好地理解本發明并能予以實施，但所舉實施例不作為對本發明的限定。實施例中用到的材料和試劑如下· Flp-in CHO細胞(一種中國倉鼠卵巢細胞，以下實施例中簡稱CHO細胞)、表達載體pcDNA5/FRT和轉染試劑Lipofectin2000為Invitrogen公司的商業化產品；F12培養基和胎牛血清購自Gibco公司；其它試劑均為進口和國產分析純試劑；LY379268、LY341495購自Tocris、L-Glutamate (L-谷氨酸)購自 Sigma 公司。實施例I細胞模型的構建
以中國倉鼠卵巢細胞(CHO)為受體細胞，進行細胞模型的建立。將CHO細胞培養在含10%胎牛血清的F12培養基培養，置于37°C、5%C02培養箱中培養。(I)重組質粒構建
使用人源mGluR2 cDNA (SEQ ID NO: I)序列進行擴增，得到目的基因mGluR2，將擴增的mGluR2基因和pcDNA5/FRT表達載體由連接酶催化連接，轉化大腸桿菌；擴增，提取質粒DNA，抽提測序以鑒定陽性克隆，鑒定正確的陽性克隆即為重組質粒，命名為pcDNA5/FRT-mGluR2。(2)重組質粒轉染CHO細胞
DNA和脂質體(Lipofectin2000)混合物的配制(60mM培養皿)
A溶液
重組質粒 pcDNA5/FRT-mGluR2 O. 8 μ g 表達重組酶(f Ip)的質粒pOG447. 2 μ g
培養基 Opti MEM500 μ L
A溶液混合,室溫放置5min ；
B溶液
脂質體 Lipofectamine200020 μ L
培養基 Opti MEM500 μ L
B溶液混合，室溫放置5min ；
將A液與B液混合，室溫放置20min，然后將混合液加入到CHO細胞中。在37°C、5% CO2的二氧化碳培養箱內培養6h后,換為含血清含抗生素培養基。(3)陽性克隆篩選
轉染24h后的CHO細胞按I :10的密度傳代再培養24h，以含500 μ g/mL Hygromycin(潮霉素)的F12選擇性培養基進行選擇性篩選培養，每3天用選擇性培養基換液一次，持續2周可見陽性克隆出現。采用極端稀釋法將陽性克隆挑出，接種至96孔板再用含250 μ g/mL Hygromycin的F12選擇培養液擴增傳代,得到穩定轉染的陽性克隆細胞模型。(4)陽性克隆鑒定
步驟(3)獲得的細胞模型用western blot進行鑒定，以獲得克隆中mGluR2表達情況，CHO空細胞作為對照。利用mGluR2特異性抗體，我們發現挑選的10-15號克隆都有mGluR2表達(CH0- mGluR2細胞系的CIO，Cll，C12，C13，C14，C15)，而空細胞中mGluR2卻沒有表達(圖2)。我們選擇12克隆做后續實驗。12號克隆命名為中國倉鼠卵巢細胞CH0_hmGluR2 (C12)，保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC NO: C2012100。實施例2本發明細胞模型用于藥物篩選的特異性 mGluR2為Gi/o偶聯的G蛋白偶聯受體，其激活后通過抑制腺苷酸環化酶(AC)進而抑制cAMP產生，因而可以通過檢測cAMP的產生來檢測mGluR2激活情況；另外可以在該細胞系中轉染Gqi9嵌合型G蛋白，可以將mGluR2激活的信號偶聯到PLC信號通路來，繼而促進胞內鈣離子釋放，因而可以通過檢測Ca2+釋放確定mGluR2激活情況，本實施例中為了鑒定細胞系可以穩定表達功能性的mGluR2，均采用檢測Ca2+釋放的方法。為檢測該細胞模型用于藥物篩選的特異性，確保應答元件的響應是由mGluR2的活性變化所調控。選用Group II mGluRs的特異性激動劑LY379268，Group II mGluRs的特異性抑制劑LY341495，分別以不同的濃度處理細胞模型并通過檢測應答分子的響應確定其誘導激活率，通過MTT法確定細胞的活力。(I) LY379268對細胞內Ca2+釋放及細胞活力的量效關系
①將細胞接種于96孔板中過夜，待細胞完全貼壁后，換上I μΜ Fluo-4 AM (鈣熒光探針)和 O. 02% pluronic acid 孵育 Ih0 然后分別加入 1(Γ10，1(Γ9，1θΛ 1(Γ7，1(Γ6，1(Γ5，KT4M的LY379268進行刺激，每組設3個重復。用FlexStation 3多功能酶標儀工作站測定各組誘導的Ca2+釋放。試驗結果參見圖3Α，LY379268作為Group II mGluRs特異性激動劑，對mGluR2的激活效果明顯。在本實驗中，LY379268對細胞內Ca2+的誘導釋放率與LY379268濃度呈劑量依賴關系。②將細胞接種于96孔板中過夜，待細胞完全貼壁后，換上新鮮的無血清培養液培養 24h，分別加入濃度為 1(Γ9，10' 3 X 10' 10' 3 X 10' 1θΛ 1(T5，KT4M 的 LY379268 進行刺激，每組設3個重復。處理24h后用MTT (比色法)檢測細胞活力。試驗結果參見圖3 B，通過MTT檢測可知，細胞活力隨LY379268濃度增加無顯著增力口(圖3)。這說明LY379268對細胞內Ca2+釋放的促進與細胞增殖的活力無關。(2) LY341495對LY379268誘導內鈣釋放的影響
①將細胞接種于96孔板中過夜，待細胞完全貼壁后，換上I μΜ Fluo-4 AM和0. 02%pluronic acid 孵育 lh。使用 l(Tn，1(T1CI，1(Γ9，1θΛ 1(Γ7，1(Γ6，1(T5，KT4M LY341495 預孵育30min，加入IO-5M的LY379268混合液進行刺激，每組設3個重復。用FlexStation 3多功能酶標儀工作站測定誘導的Ca2+釋放。實驗結果見圖4A，LY341495作為Group II mGluRs特異性抑制劑，能夠有效抑制LY379268對mGluR2的激活。在本實驗中，1(Γ5Μ LY341495對濃度為1(Γ5Μ的LY379268誘導的細胞系內鈣釋放均能抑制，使內鈣釋放程度接近于本底。②將細胞接種于96孔板中過夜，待細胞完全貼壁后，換上新鮮的無血清培養液培養 24h,分別加入濃度為 1(Γ10，1(Γ9，1(Γ8，3 X 1(Γ8，10' 1(Γ6，3 X 1(Γ6，KT5M 的 LY341495 進行處理，每組設3個重復。處理24h用MTT檢測細胞活力。試驗結果參見圖4B，由試驗結果可見當LY341495濃度在10_1CI至10_5M上時，細胞活力隨LY341495濃度增加無顯著降低。這說明LY341495對LY379268誘導的內Ca2+釋放的抑制與細胞增殖的活力無關。(3) DHPG對細胞內Ca2+釋放及細胞活力的量效關系
①將細胞接種于96孔板中過夜，待細胞完全貼壁后，換上I μΜ Fluo-4 AM (鈣熒光探針)和 O. 02% pluronic acid 孵育 lh。然后分別加入 10—11，ΙΟ—1。，10_9，10_8，10_7，10_6，10_5，10_4，10_3M的LY379268混合液進行刺激，每組設3個重復，以CHO空細胞作為對照。用FlexStation 3多功能酶標儀工作站測定各組誘導的Ca2+釋放。 ②將細胞接種于96孔板中過夜，待細胞完全貼壁后，換上新鮮的無血清培養液繼續培養 24h，分別加入濃度為 10-11，10_10，10_9，10_8，10_7，10_6，10_5，10_4，1(Γ3Μ 的 DHPG 進行刺激，每組設3個重復，以CHO空細胞作為對照。用FleXStation3多功能酶標儀工作站測定誘導的Ca2+釋放。試驗結果參見圖5，由試驗結果可見DHPG作為Group I mGluRs特異性激動劑，對CH0-mGluR2的激活無明顯效果(圖5B)，而Group II mGluRs特異性激動劑LY379268能夠顯著激活胞內Ca2+釋放而對CHO空細胞沒有激活作用(圖5A)，這說明其他GPCR的特異性配體對該模型不會產生干擾。(4) 96孔板不同細胞接種數目對細胞內Ca2+釋放的影響
無論是自動還是人工接種細胞于96孔板，每孔中的細胞數目都不會完全相同。為了檢驗不同細胞數目對篩選結果的影響，尋求一個最適的細胞接種密度。分別接種數目為5，000、10，000,20, 000,40, 000/孔的細胞于96孔板，每組設3個重復。待細胞完全貼壁后，分別加入ΙΟμΜ的LY379268刺激，以不含LY379268的緩沖液作為空白對照。用FlexStation 3多功能酶標儀工作站測定誘導的Ca2+釋放。在本實例中發現(結果見圖6)，細胞密度為5，000、10，000、20，000、40，000個/孔
時，在這個范圍內，熒光鈣流的信號隨著細胞數目的增加而增加。綜合考慮各因素，在試驗中均采用40，000/孔的細胞密度。(5)細胞穩定性檢測
隨著細胞傳代次數的增加，外源目的基因的表達可能丟失，因此，目的基因是否能在宿主細胞中穩定表達，即傳代穩定性是檢測細胞系優劣的重要指標。為此我們在CH0-mGluR2細胞傳到第7代和第23代時進行檢測。將細胞接種于96孔板中過夜，待細胞完全貼壁后，換上新鮮的無血清培養液繼續培養24h，分別加入不同濃度的LY379268以及L-Glutamate進行刺激，每組設3個重復。用FleXStation3多功能酶標儀工作站測定誘導的Ca2+釋放。實驗結果參見圖7，由實驗結果可見LY379268和L-Glutamate可以明顯激活mGluR2誘導的Ca2+釋放。說明該細胞模型具有良好的傳代穩定性。實施例3基于細胞模型的藥物篩選方法的評估
建立篩選模型的目的是篩選活性物質，反映該物質所具有的生物活性，因此，對篩選模型能否準確地反映受試物的生物活性，必須進行客觀地評價。評價一個篩選模型的優劣有很多指標，如模型的穩定性、靈敏性、特異性等。除此之外，為了使模型能夠達到篩選的要求，還需要對篩選模型進行定量評價，主要分析該模型能否有效地反映樣品的活性。評價藥物篩選模型的常用的定量技術參數，主要如下
(1)信號本底比(signalto background, S/B)
信號本底比反映的是藥物篩選模型獲得的數據(M Signal)與本底數據(Μ BadtgMund)之間的距離。一般來講，這種比值越大，信號與本底的距離越大，在反映樣品作用方面有越大的范圍，易于反映樣品作用。一般情況下，信號本底比的數值應大于3，當值小于3時，就不能有效地反映樣品的生物活性。信號本底比的計算公式如下
S/B M signal/M Background
(2)信噪比(siganlto noise, S/N)
信噪比是儀器分析中常用的方法評價參數，噪音通常是指在同樣測定條件下，本底所產生的記錄信號。通常情況下，信噪比要大于10才能認為是可以應用的方法。信噪比的計算公式如下
S/N (M SignaI M Background) /SD Background
其中SD Background 表示本底數據標準差。(3) Z ' 因子
Z '因子綜合考慮了信號的變化和波動范圍，它只與實驗的重現性與可靠性有關而與實驗的內容無關，因而在評價高通量藥物篩選模型的穩定性和可靠性中得到廣泛的應用，Z '因子是沒有單位的統計學參數，其值在O I之間，Z'因子〈0.5表示穩定性差，實驗的可靠性低，這樣的模型不能用于藥物篩選，Z '因子在0. 5 I時，模型穩定性高，可以充分確保建立的模型用于藥物的篩選。Z '因子的計算公式如下
權利要求
1.一種細胞模型，其特征在于，該細胞模型是攜帶并能表達mGluR2基因的哺乳動物細胞。
2.根據權利要求I所述的細胞模型，其特征在于，所述mGluR2基因的核苷酸序列如SEQID NO: I 所示。
3.根據權利要求I所述的細胞模型，其特征在于，所述哺乳動物細胞為CHO細胞或HEK293 細胞。
4.根據權利要求I所述的細胞模型，其特征在于，名稱為中國倉鼠卵巢細胞CH0-hmGluR2(C12)，于2012年9月18日保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC NO: C2012100。
5.權利要求Γ4任一所述的細胞模型的構建方法，其特征在于，步驟如下 (1)將mGluR2基因與表達載體連接，構建含有mGluR2基因的重組質粒； (2)將重組質粒轉染哺乳動物細胞，培養成能穩定表達mGluR2基因的細胞株，該細胞株即為所述的細胞模型。
6.根據權利要求5所述的細胞模型的構建方法，其特征在于，還包括對細胞株進行綜合評估的步驟(3):在細胞株中加入mGluR2激動劑或抑制劑，測定下游信號應答反應，根據應答反應結果評估該細胞株是否作為細胞模型。
7.根據權利要求6所述的細胞模型的構建方法，其特征在于，步驟(I)所述的表達載體為 pcDNA5/FRT。
8.根據權利要求6所述的細胞模型的構建方法，其特征在于，步驟(2)中的哺乳動物細胞為CHO細胞。
9.權利要求f4任一所述的細胞模型在篩選抗神經紊亂性疾病藥物中的應用。
10.根據權利要求9所述細胞模型在篩選抗神經紊亂性疾病藥物中的應用，其特征在于，所述抗神經紊亂性疾病藥物為mGluR2激動劑、mGluR2抑制劑、mGluR2正向變構劑、mGluR2反向變構劑或mGluR2沉默變構劑。
全文摘要
本發明公開了一種細胞模型及其構建方法和在篩選抗神經紊亂性疾病藥物中的應用，屬于基因工程及分子藥理學技術領域。本發明的細胞模型是攜帶并能表達mGluR2基因的哺乳動物細胞。該細胞模型的構建方法是將mGluR2基因與表達載體連接構建成重組質粒后導入哺乳動物細胞，經過篩選培養獲得能穩定表達mGluR2基因的細胞株。該細胞模型可用于篩選抗神經紊亂性疾病藥物，通過將待篩選物質加入到細胞模型培養基中，測定應答元件的產量或被激活程度來判斷該物質是否被篩出。本發明的細胞模型能夠高通量、低成本且準確地篩選抗神經紊亂性疾病藥物，篩選方法步驟簡單可控，成本低廉，通量高，具有很好的穩定性和可靠性。
文檔編號C12R1/91GK102888382SQ201210394298
公開日2013年1月23日 申請日期2012年10月17日 優先權日2012年10月17日
發明者張文華, 皮振鈞, 胡萍, 孫兵, 孟夏, 劉劍峰 申請人:吉瑞泰(武漢)生物科技有限公司