專利名稱：一株誘導(dǎo)降香黃檀形成降香的真菌的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物工程技術(shù)領(lǐng)域，具體地說涉及一株能夠誘導(dǎo)降香黃檀形成降香的真菌。
背景技術(shù)：
降香黃檀odor if era T. Chen,又名降香、花梨母(海南),豆科蝶形花亞科黃檀屬常綠喬木，是我國5屬8類34種珍貴紅木品種之一，也是海南省特有的瀕危樹種，屬國家二級保護(hù)植物，其樹干和根的干燥心材為名貴中藥“降香”。降香具有行氣活血，止痛、止血的功效，可用于脘腹疼痛，肝郁肋痛，胸痹刺痛，跌打損傷，外傷出血等病癥，入藥始見于我國唐代，在傳統(tǒng)中醫(yī)學(xué)和藏醫(yī)學(xué)中已有上千年的歷史?！吨腥A人民共和國藥典》從 1985年版開始，規(guī)定降香黃檀為降香的基源植物。由于降香價(jià)格高,市場需求極大,近年來降香黃檀遭到掠奪式砍伐，野生資源趨于枯竭。近年來，為保護(hù)瀕危的降香黃檀自然資源，并實(shí)現(xiàn)對資源的可持續(xù)利用，除產(chǎn)區(qū)海南省外，在廣東、廣西、云南等省已成功引種降香黃檀，并建成了一些規(guī)?；娜斯しN植基地。自然條件下，降香的產(chǎn)生過程十分緩漫，一般生長71年的降香黃檀主干開始形成心材，二十年左右才能積累到一定數(shù)量以供藥用，結(jié)香過程往往長達(dá)幾十年甚至上百年，不能滿足社會的用藥需求。目前，生產(chǎn)上主要靠降香黃檀自然生長形成藥材，生產(chǎn)周期過長是其最大的缺陷。因此，充分利用降香黃檀資源，提高結(jié)香效率，加快結(jié)香過程，增加產(chǎn)量，緩解藥材供需矛盾，是當(dāng)前降香生產(chǎn)上亟待解決的關(guān)鍵問題。經(jīng)文獻(xiàn)檢索，尚未見到利用真菌誘導(dǎo)降香黃檀生產(chǎn)中藥降香的相關(guān)公開報(bào)道。利用微生物來提高降香產(chǎn)量，改善品質(zhì)，縮短生產(chǎn)周期，是最有應(yīng)用前景的途徑之一，適用于大規(guī)模標(biāo)準(zhǔn)化、商品化生產(chǎn)，對降香黃檀資源的保護(hù)、開發(fā)和利用提供有效的途徑，具有重要的經(jīng)濟(jì)、社會和生態(tài)效益。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一株能夠誘導(dǎo)降香黃檀形成降香的真菌，該株真菌菌株是從降香黃檀的結(jié)香部位分離得到的，它能誘導(dǎo)降香黃檀樹干分泌形成中藥降香。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)步驟是先培養(yǎng)真菌，再將真菌接種到降香黃檀樹的樹干上。經(jīng)過一段時(shí)間后，在接種部位的周圍會產(chǎn)生中藥降香，該物質(zhì)燃燒時(shí)能產(chǎn)生降香燃燒特有的辛辣香氣。本發(fā)明采用的一株真菌經(jīng)鑒定為鐮孢ipusarium sp.),保藏編號CGMCCNo. 6379。這株真菌于2012年7月17日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，保藏單位地址北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號，中國科學(xué)院微生物研究所。真菌JXMFC-5的培養(yǎng)特性為在PDA培養(yǎng)基上菌落為白色，氣生菌絲為氈狀，菌落背面為微黃色，生長I周菌落直徑為6 8cm，小型分生孢子單孢，橢圓形或長圓形，稍彎曲，(7. 92 10. 64) X (2. I 3. 76) μ m。
具體地說，本發(fā)明的培養(yǎng)技術(shù)步驟如下
將由降香黃檀莖干結(jié)香部位分離得到的鐮孢(Fusarium鄧·~)屬真菌JXMFC-5自低溫保藏的斜面試管菌種活化后，轉(zhuǎn)接于PDA培養(yǎng)基的平皿中，25°C恒溫培養(yǎng)Γ7天，然后轉(zhuǎn)接于鋸末-麥麩固體培養(yǎng)基中，恒溫培養(yǎng)15 35天；鋸末-麥麩培養(yǎng)溫度為22 28°C。將上述培養(yǎng)的菌種接種到鋸末-麥麩復(fù)合固體培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，待菌絲長到培養(yǎng)基三分之二之后就可以作為接菌菌株使用；鋸末-麥麩復(fù)合固體培養(yǎng)基中鋸末-麥麩的體積比為1:1。
具體實(shí)施例方式一株誘導(dǎo)降香黃檀形成降香的真菌，其培養(yǎng)方法為先將這株真菌自低溫保藏的斜面試管菌種活化后，轉(zhuǎn)接于PDA培養(yǎng)基的平皿中，25°C恒溫培養(yǎng)Γ7天，然后轉(zhuǎn)接于鋸末-麥麩固體培養(yǎng)基中，恒溫培養(yǎng)15 35天,培養(yǎng)溫度為22 28°C ;鋸末-麥麩復(fù)合固體培 養(yǎng)基中鋸末-麥麩的體積比為1:1，待菌絲長到培養(yǎng)基三分之二之后就可以作為接菌菌株使用。實(shí)施例I
PDA培養(yǎng)基平皿中培養(yǎng)的真菌JXMFC-5接種在鋸末-麥麩復(fù)合固體培養(yǎng)基上生長15天，備用。選取樹齡為5年的降香黃檀樹，用直徑為Icm的鉆頭在樹干上鉆孔3個(gè)，孔深為2 3cm，各個(gè)孔洞上下間的間隔約為10cm，左右間隔約為7cm，每個(gè)孔洞各接入O. 8^1. 2g上述培養(yǎng)15天的真菌JXMFC-5。接種4個(gè)月后進(jìn)行觀察接入真菌JXMFC-5的孔洞周圍均有紫褐色的降香產(chǎn)生，從孔洞周圍取下的木料燃燒時(shí)，產(chǎn)生濃烈的獨(dú)特的降香香味，且其醇溶性固形物含量達(dá)到10%以上，符合藥典規(guī)定要求。比較例I
PDA培養(yǎng)基平皿中培養(yǎng)的真菌JXMFC-5接種在鋸末-麥麩復(fù)合固體培養(yǎng)基上生長20天，備用。選取樹齡為6年的降香黃檀樹，用直徑為Icm的鉆頭在樹干上鉆孔6個(gè)，孔深為2 3cm，各個(gè)孔洞上下間的間隔約為15cm，左右間隔約為6cm，其中3個(gè)孔洞各接入O. 8^1. 2g上述培養(yǎng)20天的真菌JXMFC-5，另外3個(gè)孔洞各注射5%硫酸鋅5ml。接種4個(gè)月后進(jìn)行觀察接入真菌JXMFC-5的孔洞周圍均有紫褐色的降香產(chǎn)生；注射5%硫酸鋅的孔洞周圍有淺黃色的降香產(chǎn)生。從孔洞周圍取下木料燃燒時(shí)，JXMFC-5形成的紫褐色的降香產(chǎn)生較濃烈的獨(dú)特的降香香味。按照2010年版藥典規(guī)定的熱浸法測定降香醇溶性浸出物，各稱取接種真菌JXMFC-5 4個(gè)月形成的降香、5%硫酸鋅誘導(dǎo)形成的降香和市售降香O. 3g，精密稱定(準(zhǔn)確至O. OOOlg)，每個(gè)樣做三個(gè)重復(fù)，置IOOml的錐形瓶中，精密加乙醇30ml，密塞，稱定重量，靜置I小時(shí)后，連接回流冷凝管，加熱至沸騰，并保持微沸I小時(shí)。放冷后，取下錐形瓶，密塞，再稱定重量，用乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用干燥濾器濾過，精密量取濾液10ml，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105°C干燥3小時(shí)，置干燥器中冷卻30分鐘，迅速精密稱定重量。以干燥品計(jì)算供試品中醇溶性浸出物的含量(％)。其測定結(jié)果如下表表I不同處理誘導(dǎo)形成的降香與市售降香的醇溶性浸出物含量
權(quán)利要求
1.一株誘導(dǎo)降香黃檀形成降香的真菌，它是保藏編號為CGMCC No. 6379的鐮孢屬真菌JXMFC-5 (.Fusarium sp.);它的培養(yǎng)特性是在PDA培養(yǎng)基上菌落為白色，氣生菌絲為氈狀，菌落背面為微黃色，生長I周菌落直徑為6 8cm，小型分生孢子單孢，橢圓形或長圓形，稍彎曲，(7. 92 10. 64) X (2. I 3. 76 ) μ m。
2.如權(quán)利要求I所述的真菌，其培養(yǎng)方法為先將這株真菌自低溫保藏的斜面試管菌種活化后，轉(zhuǎn)接于PDA培養(yǎng)基的平皿中，25°C恒溫培養(yǎng)Γ7天，然后轉(zhuǎn)接于鋸末-麥麩固體培養(yǎng)基中，恒溫培養(yǎng)15 35天，培養(yǎng) 溫度為22 28°C ;待菌絲長滿培養(yǎng)基三分之二之后就可以作為接菌菌株使用。
3.如權(quán)利要求I所述的真菌，其特征在于它能誘導(dǎo)降香黃檀樹產(chǎn)生中藥降香。
全文摘要
本發(fā)明公開了一株能夠誘導(dǎo)降香黃檀形成中藥降香的真菌菌株，它是保藏編號為CGMCC No.6379的鐮孢屬真菌JXMFC-5(Fusariumsp.)；它的培養(yǎng)特性是在PDA培養(yǎng)基上菌落為白色，氣生菌絲為氈狀，菌落背面為微黃色，生長1周菌落直徑為6~8cm，小型分生孢子單孢，橢圓形或長圓形，稍彎曲，(7.92~10.64)×(2.1~3.76)μm。該菌株接種到降香黃檀樹的樹干，能夠誘導(dǎo)植物形成中藥降香。該菌株的應(yīng)用，既能夠快速解決降香資源緊缺矛盾；又利于合理開發(fā)降香黃檀樹資源，具有重要的經(jīng)濟(jì)、社會和生態(tài)效益。
文檔編號C12R1/77GK102827779SQ201210338168
公開日2012年12月19日 申請日期2012年9月13日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月13日
發(fā)明者張霖, 郭順星, 孫思勝, 吳育檳, 翁飛鵬, 陳曉梅, 吳俊強(qiáng), 陳德豐 申請人:廣東志康藥業(yè)股份有限公司, 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所