專利名稱：一種產(chǎn)酯酶b1的海洋枯草芽孢桿菌c5及其酯酶b1的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于海洋微生物領(lǐng)域，特別涉及一種產(chǎn)酯酶BI的海洋枯草芽孢桿菌C5及其所產(chǎn)酯酶BI。
背景技術(shù)：
海洋是地球上最大的生態(tài)系統(tǒng)，海洋中分布的微生物數(shù)量巨大，總類繁多。海洋微生物具有種群多樣性、生理生化類群多樣性、生態(tài)功能多樣性和遺傳特征多樣性，擁有不同于其他環(huán)境微生物來源的遺傳資源。近年來，隨著海洋生物技術(shù)的發(fā)展和人們對開發(fā)海洋資源意識的增強，國內(nèi)外對海洋微生物及其酶的研究進展很快，尋找具有全新性質(zhì)的酶已成為國際酶制劑研究的熱 點。海洋微生物為適應海洋低溫、高壓、高鹽這一生命極限環(huán)境，海洋微生物酶表現(xiàn)了比陸源微生物酶更為獨特的生理功能與酶學特性，其開發(fā)應用潛力巨大，愈來愈引起世界各國的重視與開發(fā)，海洋微生物酯酶就是其中之一。酯酶(Esterase，EC3. I. I )，是一類能夠?qū)︴ユI作用的水解酶，可以催化不同底物的水解和合成反應，并可應用于食品、醫(yī)藥、化工、環(huán)保等行業(yè)。從海洋微生物中開發(fā)、尋找、篩選，采用各種遺傳變異手段，開發(fā)出新的產(chǎn)酶菌株，正是當今世界各國開發(fā)海洋微生物酯酶的重要方向。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目在于從海洋微生物中開發(fā)、尋找、篩選出繁殖快，發(fā)酵周期短，培養(yǎng)簡便，能通過控制培養(yǎng)條件大幅提高酯酶產(chǎn)量的新的產(chǎn)酯酶菌株，從而開發(fā)提供一種產(chǎn)酯酶BI的海洋枯草芽孢桿菌株C5及其所產(chǎn)酯酶BI。本發(fā)明提供的產(chǎn)酯酶BI的海洋枯草芽孢桿菌株C5(簡稱菌株C5)是從渤海底泥樣品中篩選分離出一株產(chǎn)酯酶BI的海洋枯草芽孢桿菌株C5(為Bacillus subtilis)，該海洋枯草芽孢桿菌株C5的16S rDNA基因序列長1462bp，其16S rDNA基因序列如圖I所示，該海洋枯草芽孢桿菌株C5保藏在中國武漢典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏號為CCTCCM2012306。菌落形態(tài)特征菌株C5在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上呈大而扁平的白色菌落，斜面置4°C保存下一段時間，菌落變成黑色，能夠產(chǎn)生黑色素。革蘭氏染色反應呈陽性；桿狀，單個或短鏈排列；芽孢中生或偏中生，使菌體明顯膨大。菌株C5生理生化特征對菌株C5進行了生理生化鑒定實驗，結(jié)果見表I。根據(jù)《伯杰細菌鑒定手冊》(第八版)所述，該菌株C5的各項生理生化特征與Bacillus subtilis基本相同。表I菌株C5和模式菌株的特征比較
權(quán)利要求
1.由渤海底泥篩選獲得的海洋枯草芽孢桿菌C5，其特征在于該產(chǎn)酯酶BI的海洋枯草芽孢桿菌C5在牛肉膏、蛋白胨培養(yǎng)基上呈大而扁平的白色菌落，斜面置4°C保存下一段時間，菌落變成黑色，能夠產(chǎn)生黑色素，革蘭氏染色反應呈陽性，桿狀，單個或短鏈排列，芽孢中生或偏中生，使菌體明顯膨大；海洋枯草芽孢桿菌C5(為Bacillu subtilis)的16S rDNA基因序列長1462bp,其16S rDNA基因序列如圖I所示，該海洋枯草芽孢桿菌C5保藏在中國武漢典型培養(yǎng)物保藏中心， 保藏號為 CCTCCM2012306。
2.一種權(quán)利要求I的產(chǎn)酯酶BI的海洋枯草芽孢桿菌C5產(chǎn)的酯酶BI。
3.根椐權(quán)利要求2的酯酶BI，其特征在于該酯酶BI的酶學性質(zhì)為酯酶BI是由蛋白亞基構(gòu)成，分子量為83. 8KDa,酯酶BI的最適作用溫度為45°C，最適pH為8. O, pH7. O 10. O之間較穩(wěn)定，ρΗ7· 0—8. O之間，酶活能保持80%以上，該酯酶BI在7. 0—10. O的pH 范圍內(nèi)孵育2h，酶活仍能保持在80%以上；金屬離子Na+、Mn2+、Ca2+、Sr2+、Li+、Co2+、Mg2+、K+、 Fe2+對酶活沒有影響，Al3+、Cu2+、Zn2+能夠一定程度的抑制酯酶BI的酶活，Ag+、Hg+、Fe3+是酯酶BI活性的抑制劑，Ba2+離子能夠提高酯酶BI的活性，EDTA對活性有抑制作用，說明該酯酶BI是金屬依賴酶；非離子型表面活性劑TritonX-IOO及陰離子表面活性劑Tween 40 對酯酶BI活性有一定的激活作用，均能促使酯酶BI活性提高I. 5倍以上，其它表面活性劑PCMB、十二烷基硫酸鈉、CTAB、苯甲基硫酰氟、脂肪醇聚氧乙烯醚、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸鈉、直鏈烷基苯磺酸鈉、椰油烷基酰胺對酯酶BI活性具有抑制作用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種產(chǎn)酯酶B1的海洋枯草芽孢桿菌C5及產(chǎn)酯酶B1,該海洋枯草芽孢桿菌C5基因序列長1462bp,16S rDNA基因序列如
圖1所示,該酯酶B1最適溫度為45℃，最適pH為8.0，溫度穩(wěn)定范圍為0～30℃，pH穩(wěn)定范圍為7.0～10.0,其分子量為83.8kDa,金屬離子中Na+、Mn2+、Ca2+、Sr2+、Li+、Co2+、Mg2+、K+、Fe2+對酶活沒有影響,Al3+、Cu2+、Zn2+能夠一定程度的抑制酯酶B1的酶活,Ag+、Hg+、Fe3+對酯酶B1活性抑制,Ba2+離子能夠提高酯酶B1的活性，EDTA對酯酶B1活性有抑制作用。該酯酶B1可廣泛應用于食品、醫(yī)藥、化工、降解農(nóng)藥及環(huán)保等行業(yè)。
文檔編號C12R1/125GK102925381SQ20121033460
公開日2013年2月13日 申請日期2012年9月11日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月11日
發(fā)明者孫謐, 郝建華, 劉均忠, 徐甲坤 申請人:中國水產(chǎn)科學研究院黃海水產(chǎn)研究所