專利名稱：一種點(diǎn)籃子魚(yú)染色體的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于魚(yú)類染色體的制備領(lǐng)域，特別涉及一種點(diǎn)籃子魚(yú)染色體的制備方法。
背景技術(shù)：
點(diǎn)籃子魚(yú)(Siganus guttatus),隸屬于硬骨魚(yú)綱(Osteichthyes),福鰭亞綱(Actinopterygii), S盧形目(Perciformes),刺尾魚(yú)亞目(Acanthuroidei),籃子魚(yú)科(Siganidae)，籃子魚(yú)屬，是一種雜食、廣鹽、暖水性魚(yú)類，從珊瑚礁到河口水域都有分布。點(diǎn)籃子魚(yú)肉質(zhì)鮮美，經(jīng)濟(jì)及營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，在我 國(guó)的廣東、香港及東南亞、中東和斐濟(jì)等國(guó)家和地區(qū)深受廣大消費(fèi)者喜愛(ài)。染色體核型分析是魚(yú)類細(xì)胞遺傳學(xué)研究的重要內(nèi)容之一，不僅對(duì)認(rèn)識(shí)魚(yú)類的分類系統(tǒng)、進(jìn)化關(guān)系及染色體演化過(guò)程具有重要意義，還可為魚(yú)類遺傳育種提供細(xì)胞遺傳學(xué)依據(jù)。20世紀(jì)70年代，我國(guó)才開(kāi)始進(jìn)行魚(yú)類染色體核型分析研究，起步較晚，而我國(guó)海洋魚(yú)類染色體核型研究就更晚。目前魚(yú)類染色體核型研究方法主要有壓片法、胚胎細(xì)胞制片法、夕卜周血培養(yǎng)或腎細(xì)胞短期培養(yǎng)法、活體注射法等。從實(shí)驗(yàn)原理來(lái)看，可大致分為活體注射法和細(xì)胞培養(yǎng)法兩類。細(xì)胞培養(yǎng)法借鑒了哺乳動(dòng)物染色體制備技術(shù)，有絲分裂指數(shù)較高，但操作繁雜，不易穩(wěn)定操作。相比較而言，活體注射法較為快速簡(jiǎn)便。不同魚(yú)類，在制片過(guò)程、觀察方法等都不盡相同。目前，涉及點(diǎn)籃子魚(yú)染色體的研究未見(jiàn)報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是針對(duì)現(xiàn)有海水魚(yú)類的染色體數(shù)目多且小，再加上同一細(xì)胞在分裂中期的染色體形態(tài)差別往往不是很明顯等問(wèn)題，本發(fā)明提供一種點(diǎn)籃子魚(yú)染色體的制備方法，可以為探討點(diǎn)籃子魚(yú)細(xì)胞遺傳學(xué)特性，種質(zhì)資源保護(hù)、系統(tǒng)演化與分類及開(kāi)展雜交育種試驗(yàn)提供可靠的技術(shù)手段。本發(fā)明的一種點(diǎn)籃子魚(yú)染色體的制備方法，包括(I)從點(diǎn)籃子魚(yú)中取出頭腎組織置于盛有生理鹽水的培養(yǎng)皿中，清洗除去血塊及其他組織，剪碎頭腎組織；然后將頭腎組織充分勻漿制成細(xì)胞懸液；(2)在上述細(xì)胞懸液中加入KCl溶液，于37 38°C低滲3(T40min，離心；收集低滲后的細(xì)胞，加入預(yù)冷至4 5°C的卡諾氏固定液，吹打均勻后4 5°C下靜置，離心后再固定一次；離心后，棄去上清液，加入預(yù)冷至4 5°C的固定液，吹打均勻后4 5°C下靜置；(3)離心后，棄去上清液，重新加入f2ml預(yù)冷至4 5°C的固定液，吹打均勻后用預(yù)冷凍的玻片滴片，每片1-2滴，烘干；(4)待上述玻片干燥后，用吉姆薩染液染色20_30min，將染色后的玻片依次用磷酸緩沖液和蒸餾水沖洗，烘干；待玻片干燥后，置于顯微鏡下觀察，選取染色體分散良好的中期細(xì)胞進(jìn)行顯微攝影。所述步驟(I)中的生理鹽水的質(zhì)量百分比濃度為0. 9%。所述步驟(2)中的KCl溶液的濃度為0. 075mol/L。
所述步驟(2)中的卡諾氏固定液由體積比為3:1的甲醇和冰醋酸配制。所述步驟(2)和(3)中的固定液由體積比為1:1的甲醇和冰醋酸配制。所述步驟(4)中的吉姆薩染液的濃度為10wt%，pH值為6. 8，由磷酸緩沖液配制。所述步驟(4)中的磷酸緩沖液的pH值為6. 8。所述步驟(3)和(4)中的烘干為自然干燥或放入40°C烘箱中烘干。
有益.效果(I)本發(fā)明可以通過(guò)制片獲得數(shù)目完整、分散良好、長(zhǎng)度適中、著絲粒清楚、兩條單體適度分開(kāi)、形態(tài)清晰的點(diǎn)籃子魚(yú)染色體中期分裂相；(2)本發(fā)明操作簡(jiǎn)便，結(jié)果穩(wěn)定，而且無(wú)須昂貴的試劑和特殊的儀器；(3)目前還未見(jiàn)點(diǎn)籃子魚(yú)染色體的研究，本發(fā)明可以為探討點(diǎn)籃子魚(yú)細(xì)胞遺傳學(xué)特性，種質(zhì)資源保護(hù)、系統(tǒng)演化與分類及開(kāi)展雜交育種試驗(yàn)提供可靠的技術(shù)手段。
圖I為本發(fā)明得到的點(diǎn)籃子魚(yú)染色體中期分裂相。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明講授的內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對(duì)本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求書(shū)所限定的范圍。實(shí)施例II)從點(diǎn)籃子魚(yú)中取出頭腎組織，置于盛有0. 9wt%生理鹽水的培養(yǎng)皿中，清洗2-3遍，除去血塊及其他組織，用剪刀剪碎頭腎組織。2)用吸管將充分剪碎的頭腎組織移入IOml玻璃勻漿器中，充分勻漿制成細(xì)胞懸液。3)用吸管將細(xì)胞懸液移入IOml離心管中，加入0. 075mol/L KCl溶液，放入37°C恒溫水浴箱中低滲30min，1000r/min離心8min。4)收集低滲后的細(xì)胞，加入預(yù)冷至4°C卡諾氏固定液(甲醇冰醋酸=3:1配制，現(xiàn)用現(xiàn)配)，用吸管吹打均勻后4°C下靜置30min，1000r/min離心8min，離心后再固定I次。5)固定離心后，棄去上清液，加入預(yù)冷至4°C固定液(甲醇冰醋酸=1:1配制，現(xiàn)用現(xiàn)配)，用吸管吹打均勻后4°C下靜置30min。6)固定離心后，棄去上清液，重新加入Iml預(yù)冷至4°C固定液(甲醇冰醋酸=1:1配制，現(xiàn)用現(xiàn)配)，用滴管吹打均勻，用干凈的預(yù)冷凍玻片滴片，每片1-2滴，滴片后自然干燥或放入40 0C烘箱中烘干。7)待玻片干燥后，用10wt%吉姆薩(Giemsa)染液(pH=6. 8，磷酸緩沖液配制)染色20min，染色后的玻片依次用磷酸緩沖液(pH=6. 8)和蒸餾水沖洗，自然干燥或放入40°C烘箱中烘干。8)待玻片干燥后，置于顯微鏡下觀察，選取染色體分散良好的中期細(xì)胞進(jìn)行顯微攝影。
權(quán)利要求
1.一種點(diǎn)籃子魚(yú)染色體的制備方法，包括 (1)從點(diǎn)籃子魚(yú)中取出頭腎組織置于盛有生理鹽水的培養(yǎng)皿中，清洗除去血塊及其他組織，剪碎頭腎組織；然后將頭腎組織充分勻漿制成細(xì)胞懸液； (2)在上述細(xì)胞懸液中加入KCl溶液，于37 38°C低滲3(T40min，離心；收集低滲后的細(xì)胞，加入預(yù)冷至4 5°C的卡諾氏固定液，吹打均勻后4 5°C下靜置，離心后再固定一次；離心后，棄去上清液，加入預(yù)冷至4 5°C的固定液，吹打均勻后4 5°C下靜置； (3)離心后，棄去上清液，重新加入f2ml預(yù)冷至4 5°C的固定液，吹打均勻后用預(yù)冷凍的玻片滴片，每片1-2滴，烘干； (4)待上述玻片干燥后，用吉姆薩染液染色20-30min，將染色后的玻片依次用磷酸緩沖液和蒸餾水沖洗，烘干；待玻片干燥后，置于顯微鏡下觀察，選取染色體分散良好的中期細(xì)胞進(jìn)行顯微攝影。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種點(diǎn)籃子魚(yú)染色體的制備方法，其特征在于所述步驟(I)中的生理鹽水的質(zhì)量百分比濃度為O. 9%。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種點(diǎn)籃子魚(yú)染色體的制備方法，其特征在于所述步驟(2)中的KCl溶液的濃度為O. 075mol/L。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種點(diǎn)籃子魚(yú)染色體的制備方法，其特征在于所述步驟(2)中的卡諾氏固定液由體積比為3:1的甲醇和冰醋酸配制。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種點(diǎn)籃子魚(yú)染色體的制備方法，其特征在于所述步驟(2)和(3)中的固定液由體積比為1:1的甲醇和冰醋酸配制。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種點(diǎn)籃子魚(yú)染色體的制備方法，其特征在于所述步驟(4)中的吉姆薩染液的濃度為10wt%，pH值為6. 8，由磷酸緩沖液配制。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種點(diǎn)籃子魚(yú)染色體的制備方法，其特征在于所述步驟(4)中的磷酸緩沖液的PH值為6. 8。
8.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種點(diǎn)籃子魚(yú)染色體的制備方法，其特征在于所述步驟(3)和(4)中的烘干為自然干燥或放入40°C烘箱中烘干。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種點(diǎn)籃子魚(yú)染色體的制備方法，包括(1)從點(diǎn)籃子魚(yú)中取出頭腎組織置于盛有生理鹽水的培養(yǎng)皿中，清洗除去血塊及其他組織，剪碎頭腎組織；然后將頭腎組織充分勻漿制成細(xì)胞懸液；(2)低滲、固定；(3)固定離心后，滴片；(4)染色；待玻片干燥后，置于顯微鏡下觀察，選取染色體分散良好的中期細(xì)胞進(jìn)行顯微攝影。本發(fā)明操作簡(jiǎn)便，結(jié)果穩(wěn)定，而且無(wú)須昂貴的試劑和特殊的儀器，可以通過(guò)制片獲得數(shù)目完整、分散良好、長(zhǎng)度適中、著絲粒清楚、兩條單體適度分開(kāi)、形態(tài)清晰的點(diǎn)籃子魚(yú)染色體中期分裂相。
文檔編號(hào)C12Q1/68GK102766692SQ20121024757
公開(kāi)日2012年11月7日 申請(qǐng)日期2012年7月17日 優(yōu)先權(quán)日2012年7月17日
發(fā)明者宋煒, 張鳳英, 張濤, 章龍珍, 蔣科技, 馬凌波 申請(qǐng)人:中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院東海水產(chǎn)研究所