專利名稱：人源抗EV71病毒中和性抗體EV71FabK7、其制備方法及應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及基因工程抗體技術，具體地說，涉及一種人源抗EV71病毒中和性抗體EV71FabK7、其制備方法及應用。
背景技術：
手足口病(Hand foot mouth disease, HFMD)是由腸道病毒引起的傳染病，多發生于5歲以下的嬰幼兒，可引起發熱和手、足、口腔等部位的皮疹、潰瘍，個別患者可引起心肌炎、肺水腫、無菌性腦膜腦炎等并發癥。引發手足口病的腸道病毒有20多種，其中柯薩奇病毒(Cox Asckievirus) A16 M (Cox A16)和腸道病毒 71 型(Enterovirus71. EV71)最常見。1974年Schmidt等人首次報道從美國加利福尼亞暴發的表現為神經系統癥狀疾病 (196擴1973年)的患者體內分離到EV71，隨后，世界上許多國家相繼報道了 EV71病毒在不同地區的流行情況，人們逐漸認識到EV71病毒是手足口病的主要病原。由于手足口病目前沒有相應的疫苗和特異性藥物，因此制備高效、價廉、副反應小的被動免疫制劑成為研究的熱點。利用含有特異性抗體的人源或動物血清免疫球蛋白來預防和治療傳染病由來已久。單克隆抗體的體外抗病毒中和活性和體內保護肌體抵抗病毒攻擊已獲得許多實驗證明，如漢坦病毒、麻疹病毒、RSV病毒、狂犬病毒等中和性單克隆抗體可以在體內100%保護動物免受病毒攻擊.免疫球蛋白(immunoglobulin, Ig)作為抗體成分主要來自捐獻者(恢復期病人)免疫血清，從獲得陽性血清到通過安全性檢測耗時較長，且需投入大量的人力和財力，這就使其大量制備受到限制，同時由于抗體主要來源于血清，因此容易發生血源性傳播疾病的感染。而使用人源基因工程產品替代血制品則可克服這些缺陷，隨著人源基因工程抗體研究的不斷深入，給這一領域的生物制品發展帶來了新的希望和廣闊前景。90年代初興起的噬菌體抗體基因庫技術(Barbas, C. F.等.，1991)和整個基因工程抗體技術研究領域的發展，極大促進了人源或基因工程抗體的開發研究，并已由基礎研究階段步入實質性應用研究和開發階段。人源抗病毒基因工程抗體，尤其是人源全抗體的研究成功，給各種病毒性傳染病的特異性預防和治療開辟了新思路，并在抗病毒感染生物醫藥領域中逐漸開發出一類新的抗病毒藥。
發明內容
本發明的目的是提供一種人源抗EV71病毒中和性抗體EV71FabK7或其活性片段。本發明的另一目的是提供所述抗體EV71FabK7或其活性片段的制備方法。本發明的再一目的是提供所述抗體EV71FabK7或其活性片段的應用。為了實現本發明目的，本發明的一種人源抗EV71病毒中和性抗體EV71FabK7或其活性片段，其輕鏈高變區⑶R1、⑶R2和⑶R3以及重鏈高變區⑶R1、⑶R2和⑶R3的氨基酸序列如表I所示
表I抗體EV71FabK7的重鏈及輕鏈高變區的氨基酸序列
CDRlCDR2CDR3
重鏈 VH SGYYWGSIYHSGSTYYNPSLKSDSSYNGFDP
輕鏈 VL RASQSISSSFLA SASSRATQQYATSLRT前述的抗體EV71FabK7，i)其輕鏈可變區的氨基酸序列如SEQ ID No. I所示，或該序列經替換、缺失或添加一個或幾個氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。例如，將第16位的Arg替換為Lys不會影響蛋白的功能。前述的抗體EV71FabK7，ii)其重鏈可變區的氨基酸序列如SEQ ID No. I所示，或該序列經替換、缺失或添加一個或幾個氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。例如，將第8位的Val替換為Ala不會影響蛋白的功能。本發明還提供編碼所述抗體EV71FabK7的基因。其中，編碼輕鏈可變區和編碼重鏈可變區的核苷酸序列分別如SEQ ID No. 3和SEQ ID No. 4所示。本發明還提供含有編碼所述抗體EV71FabK7的基因的載體及含有該載體的宿主細胞。本發明還提供所述抗體EV71FabK7或其活性片段經改造得到的單鏈抗體ScFv或全抗體免疫球蛋白IgG。本發明還提供所述抗體EV71FabK7或其活性片段的制備方法，利用噬菌體表面展示技術，采集多個EV71病人恢復期外周血淋巴細胞，通過基因工程方法構建了人源抗EV71病毒基因工程抗體文庫，并篩選獲得特異性抗EV71病毒的基因工程抗體Fab段。該抗體是由存在于抗體輕鏈和重鏈基因可變區中的高變區(CDRs)特異性基因序列決定的，并能夠在原核細胞中獲得有效表達的特異性結合EV71病毒的功能性抗體。它特異性識別EV71病毒顆粒抗原，與EV71病毒具有明顯的酶聯免疫(ELISA)反應和抗EV71病毒感染的中和活性功能。EV71FabK7特異性的輕鏈和重鏈可變區基因來源于對人源抗EV71病毒抗體基因庫的特異性富積篩選，該抗體庫的建立來源于中國EV71病毒病人外周血淋巴細胞基因。其輕鏈和重鏈可變區相應的三個CDR區序列組合及其CDR區之間的框架區序列構成了該抗體可變區序列特征，EV71FabK7屬于抗體輕鏈家族VL1。抗體蛋白功能由存在于抗體基因輕鏈和重鏈可變區的決定族互補區CDR1、CDR2和CDR3中特異性核苷酸序列及其互補序列所決定，6個相應的CDR區氨基酸序列構成了抗體的特異性抗原結合區域，決定了本發明抗體的抗原結合特征和抗EV71病毒功能特征。此外，考慮到密碼子的簡并性，例如可在其編碼區，在不改變氨基酸序列的條件下，對編碼上述Fab段抗體的基因序列進行改造，獲得編碼具有相同功能的抗體的基因。本領域技術人員可以根據表達抗體宿主的密碼子偏愛性，人工合成改造基因，以提高抗體的表達效率。進一步地，本發明將上述Fab抗體的輕鏈可變區和重鏈可變區進行重組，獲得分子量更小的單鏈抗體(ScFv)，該抗體同樣能夠特異性識別EV71病毒表面抗原，具有細胞內、免疫的作用。單鏈抗體穿透力強，易于進入局部組織發揮作用。可將上述編碼Fab抗體的基因、ScFv基因克隆到表達載體中，進而轉化宿主，通過誘導表達獲得Fab抗體以及單鏈抗體。此外，可將上述Fab抗體的輕鏈編碼基因和重Fd段基因克隆到全抗表達載體中，并導入宿主細胞中，獲得表達抗EV71病毒的全抗免疫球蛋白。利用ELISA、SDS-PAGE、中和實驗等方法對獲得的Fab抗體進行功能鑒定，結果表明人源Fab抗體EV71FabK7針對SHZH98株和FUYANG-0805株EV71病毒顆粒均有特異性結合，利用中和實驗對Fab抗體進行功能鑒定，結果表明EV71FabK7具有較好的中和活性。、
本發明還提供所述抗體EV71FabK7或其活性片段在制備預防或治療手足口病的藥物中的應用。本發明進一步含有所述抗體EV71FabK7或其活性片段的藥物或檢測試劑。本發明利用噬菌體抗體庫技術，成功地獲得了特異性針對EV71病毒的人源中和性抗體EV71FabK7 ;利用上述獲得的人源中和性抗EV71病毒基因工程抗體可變區基因、Fab抗體基因以及該抗體基因特征下的全抗體基因，可以在原核細胞、酵母細胞、真核細胞及任何重組系統中表達和生產該抗體或以此為基礎的改建后的含有該抗體基因的任何其他基因，獲得具有中和EV71病毒感染的抗體產物，制成臨床上用于預防和治療手足口病的特異性抗體藥物。
圖I為純化后EV71FabK7抗體的SDS-PAGE電泳圖；其中，I為純化抗體EV71FabK7。M為蛋白Marker。圖2為抗EV71病毒人源EV71FabK7抗體的ELISA檢測(SHZH98株)結果，其中陽性對照為商業鼠抗，陰性對照為柯薩奇A4病毒抗體。圖3為抗EV71病毒人源EV71FabK7抗體的ELISA檢測(FUYANG-0805株)結果，其中陽性對照為商業鼠抗，陰性對照為柯薩奇A4病毒抗體。
具體實施例方式以下實施例用于說明本發明，但不用來限制本發明的范圍。若未特別指明，實施例中所用的技術手段為本領域技術人員所熟知的常規手段，所用原料均為市售商品。實施例I人源抗EV71病毒抗體庫的構建及Fab抗體的篩選I. I材料和方法I. I. I病毒、細胞及載體來源EV71病毒SHZH98株和FUYANG-0805株已在文獻(Yang F，Jin Q, He Y，Li L, Hou Y. 2001. The complete genome of Enterovirus 71 Chinastrain.Sci China C Life Sci 和 Wu Z, Yang F, Zhao R, Zhao L, Guo D, Jin Q. 2009.Identification of small interfering RNAs which inhibit the replication ofseveral Enterovirus 71 strains in China. J Virol Methods)中公開，由中國醫學科學院病原生物學研究所提供。用于EV71病毒體外中和實驗的細胞為RD細胞，購自ATCC。菌株為XLl-Blue (Stratagene,美國),載體pComb3H(由美國Scripps研究所提供)。I. I. 2抗原制備
EV71病毒純化分別收獲EV71病毒SHZH98株和FUYANG-0805株感染RD細胞后培養上清，經甲醛滅活和安全檢查后，用20%蔗糖密度梯度35000g，4°C離心3h純化病毒顆粒(Beckman SW28)。I. I. 3噬菌體抗體庫的構建用淋巴細胞分離液(Sigma，美國)從EV71病人恢復期抗凝血液中分離淋巴細胞，用RNeasy Mini Kit (QIAGEN，德國)提取總細胞RNA，以Oligo-dT為引物，提取的RNA為模版采用 Invitrogen公司的第一鏈合成試劑盒(SuperScriptTMIII First-Strand SynthesisSystemfor RT-PCR. Cat No. 18080-051)逆轉錄生成cDNA。用一組擴增人源抗體IgGl重鏈Fd及輕鏈Kappa和Lambda的引物,使用的弓I物序列如下
(一)重鏈Fd區引物5，端VHla 5，-CAG GTG CAG CTC GAG CAG TCT GGG-3’VHlf 5’-CAG GTG CAG CTG CTC GAG TCT GGG-3’VH2f 5’-CAG GTG CAG CTA CTC GAG TCG GG-3’VH3a 5’-GAG GTG CAG CTC GAG GAG TCT GGG-3'VH3f 5’-GAG GTG CAG CTG CTC GAG TCT GGG-3'VH4f 5，-CAG GTG CAG CTG CTC GAG TCG GG-3’VH6f 5’-CAG GTG CAG CTA CTA GAG TGG GG-3’VH6a 5’-CAG GTA CAG CTC GAG CAG TCA GG-3’3，端CGlZ 5’-GCA TGT ACT AGT TTT GTC ACA AGA TTT GGG-3'(二)輕鏈引物K鏈可變區5’ -端VKla 5’-GAC ATC GAG CTC ACC CAG TCT CCA-3’VK2a 5’-GAT ATT GAG CTC ACT CAG TCT CCA-3'VK3a 5’-GAA ATT GAG CTC ACG CAG TCT CCA-3'K鏈可變區3-端CKld 5，-GCG CCG TCT AGA ATT AAC ACT CTC CCCTGT TGA AGC TCT TTG TGA CGG GCG AAC TCA-3’入鏈可變區5_端VLl 5’-AAT TTT GAG CTC ACT CAG CCC CAC-3’VL2 5，-TCT GCC GAG CTC CAG CCT GCC TCC GTG-3’VL3 5，-TCT GTG GAG CTC CAG CCG CCC TCA GTG-3'VL4 5’-TCT GAA GAG CTC CAG GAC CCT GTT GTG TCT GTG-3'VL5 5’-CAG TCT GAG CTC ACG CAG CCG CCC-3’VL6 5，-CAG ACT GAG CTC ACT CAG GAG CCC-3'入鏈可變區3-端CL2 5’-CGC CGT CTA GAA TTA TGA ACA TTC TGT AGG-3’對人源輕鏈和重鏈Fab基因進行PCR擴增。PCR條件為94°C lmin，54°C lmin,72°C 2min,共35個循環。建庫方法基本按文獻(Barbas, C. Fill. , Kang, A. S. , and larner, R.A.Assembly of combinatorial antibody libraries on phage surface: the gene IIIsite. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1991; 88 (18) :7978-7982)進行。具體如下首先將所有不同的重鏈和輕鏈PCR產物分別按各自組群混合。取經XbaI和SacI酶切消化，并經電泳純化后的pComb3H載體DNA1. 5-2 u g與輕鏈混合物500_700ng，加入2u I高濃度連接酶(NEB2000U/iil)，加入連接緩沖液，16°C過夜連接。次日加入100 yl純化水，加入3M NaAc 16 yl，加2. 5-3倍無水乙醇沉淀DNA，離心沉淀，用20 U I純水重懸沉淀后加入到電轉感受態菌XLl-Blue中，電壓2. 5kv，電擊I分鐘。電轉后立即加入2ml SOC培養液，然后立即轉入細菌培養箱中，37°C振蕩培養I小時。將菌液全部涂于含氨芐青霉素的LB平皿上，37°C培養過夜。次日向平皿中加入10-15ml培養液，刮取菌斑，分裝于離心管，12000rpm離心后棄上清，全部用QIAGEN大提質粒試劑盒提取質粒pComb3H-L，混合后凍存于-20°C待用。將克隆入L鏈的pComb3H-L和Fd鏈純化PCR產物，分別用XhoI和SpeI進行雙酶切反應，37°C 3-4h。電泳回收相應的條帶，將質粒和Fd酶切后回收產物定量。取酶切消化后回收純化的載體DNA g，重鏈PCR產物600ng左右，加入2iU高濃度連接酶，力口入相應的連接緩沖液，16°C連接過夜。次日加100 Ul純化水，加3M NaAc 16^1，加2. 5-3 倍無水乙醇沉淀DNA，離心沉淀，用20iU純水重懸沉淀并加入到電轉感受態菌XLl-Blue中，電壓2. 5kv,電擊I分鐘。電轉后立即加入2ml SOC培養液，然后立即轉入細菌培養箱中，37°C 200rpm振蕩培養lh。將菌液轉入一個三角瓶中，加入含20 y g/ml氨芐青霉素的10ml SB-A+，370C 200rpm振蕩培養I小時。加入IOOml SB培養液(含100 u g/ml的Amp和20ii g/ml的Tet)，震蕩培養I小時。加入1012pfu輔助噬菌體VCSM13，37°C靜止感染20min，然后37°C培養2h加入終濃度為70 ii g/ml的Kan，37°C培養過夜。待0D600約為I時，將菌液4°C 4000rpm離心15min,轉移上清至無菌三角瓶中，加入4% (w/v)PEG8000和3% (w/v)NaCl，完全溶解后冰浴30min以上以沉淀噬菌體。4°C 9000rpm離心20_30min，棄上清將沉淀用2ml PBS重懸，瞬時離心，上清即為Fab噬菌體抗體庫。I. I. 4噬菌體抗體庫的富集篩選及Fab段抗體的誘導表達 以超速離心純化的滅活病毒顆粒SHZH98和FUYANG-0805株為篩選抗原。使用時用0. IM NaHCO3 (pH8. 6)溶液稀釋，包被免疫管，用含4%脫脂奶的PBS液，于37°C封閉2h后，力口入上述噬菌體抗體庫，每管lml，37°C孵育2h，用含5%TWeen-20的TBS液反復洗20遍，最后每管用Iml pH2. 2的甘氨酸-鹽酸洗脫液洗脫，并用pH9. 6的Tris液中和。洗脫后的噬菌體繼續感染2ml新鮮的OD6tltl為I. 0左右的XLl-Blu菌，經輔助噬菌體VCSM13 (Stratagene,美國)感染后進行下一輪篩選。如此反復篩選3 4次。具體富集篩選方法及Fab段的誘導表達基本按文獻(Barbas, C. Fill.，Kang, A. S.，and larner, R. A. Assembly of combinatorialantibody libraries on phage surface: the gene III site. Proc. Natl. Acad. Sci.USA. 1991; 88 (18) :7978-7982)進行。噬菌體抗體庫的富集用0. IM NaHCO3CpH8. 6)的溶液將純化的SHZH98株按I :100稀釋分別包被96孔板，4°C過夜。次日用PBS-T(20mM PBS加入0. 05% Tween-20)洗去未吸附的抗原，用3%的脫脂奶37°C封閉lh。棄封閉液，每孔加入60iU噬菌體抗體庫，37°C孵育 2h。棄去孔中未結合的噬菌體，用 TBS-T(50mM Tris-HCl，150mM NaCl，0. 5% Tween-20,pH7. 5)洗液沖洗各孔，沖洗時用移液器反復吹打，共洗20次，以充分洗去未吸附的噬菌體。最后用ddH20洗兩遍，吸凈孔中剩余液體。每孔加入50 ill Glycine-HCl (pH2. 2)的洗脫液，室溫孵育lOmin，在此過程中，用移液器吸頭反復吹打(注意勿吹出氣泡)。將洗脫液集中于一個離心管，按照每孔3 的比例加入2M Tris，使溶液pH值約為7，以中和洗脫下的噬菌體。將洗脫的噬菌體立即加入2ml新鮮的XLl-Blue菌液中(0D600 = I),室溫孵育20min。轉入一個250ml三角瓶中，加入IOml SB(含氨芐青霉素20 y g/ml和四環素20 y g/ml )，立即取10 ill涂于氨芐平皿，用于滴定噬菌體。其余液體37 °C振蕩培養Ih。加入IOOmlSB (含氨芐青霉素IOOii g/ml和四環素20 ii g/ml)，37°C振蕩培養2h。之后，加入輔助噬菌# VCSMl3 (9X1012pfu/ml) lml，37°C靜止 20min，37°C振蕩培養 2h。加入卡那霉素(終濃度70 ii g/ml)，37°C振蕩培養過夜。待細菌長到0D600約為I時，將菌液4°C 6500rpm離心15min，轉移上清至無菌三角瓶，加入4% (ff/V) PEG8000和3% (ff/V) NaCl，完全溶解后冰浴30min以上以充分沉淀噬菌體。4°C 9000rpm離心20-30min，棄上清。將沉淀用2ml PBS重懸，瞬時離心，上清即為第一輪富集篩選Fab噬菌體抗體庫。 Fab陽性克隆的表達隨機挑選2000個經3次富集篩選后的單菌落于96深孔板中，每孔800 ill培養基，37°C培養過夜。次日以1:20的比例轉接至含有800 ill SB培養基(含Amp IOOu g/ml)的96孔板中，37°C培養至0D600 = 0. 2-0. 3時，加入終濃度為ImM的IPTG, 30°C誘導表達8-10hr。4°C 4000rpm離心15min,上清用于檢測。1.1.5人源抗EV71病毒Fab抗體的ELISA檢測(I)檢測Fab的表達用0. IM NaHCO3 (pH9. 6)溶液將抗人Fab抗體(I 2000稀釋后使用，Sigma,美國)包被于酶標板上，4°C過夜；4%脫脂奶封閉，37°C lh，加入表達的Fab抗體，37°C Ih ;加入酶標抗人Fab 二抗(I 2000稀釋后使用，Sigma，美國)，37°C Ih;顯色液顯色，2M H2SCU*止反應，酶標儀檢測吸光度A值。(2)間接酶聯免疫法檢測Fab與EV71病毒結合活性用純化的滅活EV71病毒顆粒作為包被抗原，其余步驟同上。I. I. 6人源Fab抗體可變區基因的核酸序列分析用Qiagen Miniprep Kit (QIAGEN,德國)制備質粒 DNA 進行核酸序列分析。輕重鏈的測序引物分別為5 ' -AAACTAGCTAGTCGCCAAGGA-3丨和5 ; -CCGCGGTGGCGGCCGCAAAT-3 ;。將測序結果與 Internet V-Base 基因庫中 IgG 基因序列進行比較。I. I. 7人源抗EV71病毒Fab抗體的純化用抗人Fab的抗體(Sigma,美國)制備2ml親和層析柱,將濾過的含Fab抗體的菌液加于親和層析柱中，反復循環30min至lh。加入pH值6. 8的PBS預洗緩沖液，洗去非特異性吸附蛋白。加入pH值2. 7的甘氨酸鹽酸緩沖液洗脫結合的Fab抗體蛋白，加入pH值
9.0的Tris-HCl緩沖液中和洗脫下來的溶液，然后用濃縮柱離心濃縮。取純化濃縮后的Fab片段蛋白10 20 u g進行SDS-PAGE電泳。I. I. 8人源抗EV71病毒Fab抗體的中和實驗檢測( I)實驗步驟將100TCID50EV71病毒25 U I和倍比稀釋的抗體25 iU于37°C共同孵育2小時，然后加入濃度為2 X IO5個RD細胞/ml的細胞培養液50iU。觀察7天，記錄細胞病變結果。
(2)結果判定當最高稀釋度抗體的2孔中有I孔出現細胞病變，另一孔不出現細胞病變，該稀釋度的倒數即為該抗體的中和抗體效價；當高稀釋度2孔完全病變，相鄰低稀釋度2孔完全不病變，則兩者平均稀釋度的倒數即為該抗體的中和抗體效價；當兩個相鄰稀釋度抗體均出現I孔細胞病變，另I孔不出現細胞病變，則兩者平均稀釋度的倒數即為該抗體的中和抗體效價。I. 2 結果I. 2. I人源抗EV71病毒抗體庫的篩選用純化的EV71病毒顆粒SHZH98株對噬菌體抗體庫進行富集篩選，3輪篩選后隨機挑取2000個克隆。用抗人Fab抗體(I 2000稀釋后使用，Sigma，美國)和EV71病毒顆粒SHZH98株抗原包被96孔板，加入待測樣品上清，用酶標抗人Fab 二抗(I 2000稀釋后使用，Sigma，美國)檢測。結果顯示共獲得816個人源Fab表達陽性克隆，其中，413個克隆能 夠特異性結合EV71病毒顆粒SHZH98株(表2)。表2SHZH98株對噬菌體抗體庫富集篩選結果
權利要求
1.人源抗EV71病毒中和性抗體EV71FabK7或其活性片段，其特征在于，其輕鏈高變區⑶R1、⑶R2和⑶R3以及重鏈高變區⑶R1、⑶R2和⑶R3的氨基酸序列如下表所示
2.根據權利要求I所述的抗體EV71FabK7，其特征在于， i)其輕鏈可變區的氨基酸序列如SEQID No. I所示，或該序列經替換、缺失或添加一個或幾個氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列；以及 ii)其重鏈可變區的氨基酸序列如SEQID No. 2所示，或該序列經替換、缺失或添加一個或幾個氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。
3.編碼權利要求2所述抗體EV71FabK7的基因。
4.根據權利要求3所述的基因，其特征在于，編碼輕鏈可變區和編碼重鏈可變區的核苷酸序列分別如SEQ ID No. 3和SEQ ID No. 4所示。
5.含有權利要求3或4所述基因的載體。
6.含有權利要求5所述載體的宿主細胞。
7.權利要求I或2所述抗體EV71FabK7或其活性片段經改造得到的單鏈抗體ScFv或全抗體免疫球蛋白IgG。
8.權利要求I或2所述抗體EV71FabK7或其活性片段的制備方法，其特征在于，利用噬菌體表面展示技術，采集多個具有高滴度EV71病毒抗體的病人外周血淋巴細胞，通過基因工程方法構建了人源抗EV71病毒基因工程抗體文庫，并篩選獲得特異性抗EV71病毒的基因工程抗體Fab段，命名為EV71FabK7。
9.權利要求I或2所述抗體EV71FabK7或其活性片段在制備預防或治療手足口病的藥物中的應用。
10.含有權利要求I或2所述抗體EV71FabK7或其活性片段的藥物或檢測試劑。
全文摘要
本發明提供了一種利用噬菌體表面展示技術篩選獲得的人源抗EV71病毒中和性抗體EV71FabK7，其輕鏈和重鏈可變區的氨基酸序列分別如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示。該抗體能夠特異性識別EV71病毒顆粒抗原，可與EV71病毒發生顯著的酶聯免疫反應且具有抗EV71病毒感染的中和活性功能。此外，可將本發明的抗體制成預防和治療手足口病的特異性抗體藥物，從而在臨床中用于預防和治療由EV71病毒引起的手足口病。
文檔編號C12N15/63GK102718864SQ20121020784
公開日2012年10月10日 申請日期2012年6月21日 優先權日2012年6月21日
發明者金奇, 陳哲 申請人:中國醫學科學院病原生物學研究所