原發性肥大性骨關節病致病基因的制作方法
【專利摘要】本發明涉及原發性肥大性骨關節病（PHO）的標記物。更具體而言，本發明涉及原發性肥大性骨關節病（PHO）的基因標記物及其用途，以及擴增其的引物、檢測其的探針以及相關試劑盒。
【專利說明】原發性肥大性骨關節病致病基因
【技術領域】
[0001]本發明涉及原發性肥大性骨關節病(PHO)的標記物。更具體而言，本發明涉及原發性肥大性骨關節病(PHO)的基因標記物。
【背景技術】
[0002]原發性肥大性骨關節病(primaryhypertrophic osteoarthropathy ；PH0),也稱作厚皮性骨膜病(pachydermoperiostosis ；PDP),是一種很少見的家族遺傳疾病，通常表現為:回狀頭皮增生、杵狀指、骨膜增厚和大關節痛，屬于常染色體遺傳病，嚴重影響患者的外觀，給患者造成巨大心理負擔。PHO通常為男性發病，女性較少發病(男女比例為7:1)[4，5]，目前我國所報道的32例病患均為男性。治療一般采用手術切除增生皮膚。PHO病因尚不清楚，多數人認為本病為遺傳性疾病，但由于遺傳模式尚未清楚，發病率極低，且由于疾病表現嚴重導致家族性病例極罕見，因此對于該疾病的致病基因研究較為困難。國外早期的分子方面發病機制聚焦于前列腺素E2 (PGE2)的代謝途徑，PGE2是體內普遍存在的脂類代謝物，其產物會擴大炎癥區域，故而在體內循環水平較低。研究發現了患者羥基前列腺素脫氫酶(HPGD)基因中負責編碼分解PGE2酶(15-PGDH)的部分發生了突變，導致了酶功能的喪失。并在患者和攜帶者尿液中發現了 PGE2含量的上升。
[0003]目前單基因疾病的研究開始大量采用外顯子組重測序的方法，最近，外顯子組測序(exome sequencing)被成功地應用于發現稀有單基因疾病的致病基因，如Freeman - Sheldon 綜合癥的 MYH3 基因，Schinzel-Giedion 綜合征的 SETBPl 基因，以及嚴重大腦畸形的 TOR62 突變等(Ng SB, Turner EH, Robertson PD, et al, Targetedcapture and massively parallel sequencing of 12 human exomes.Nature2009，461 (7261):272-276; A H, Bff vB, C G, et al, De novo mutations of SETBPl causeSchinzel-Giedion syndrome.D-9216904(-1546-1718(Electronic));Bilguvar K, OzturkAK, Louvi A, et al, ffhol e-exome sequencing identifies recessive WDR62mutations insevere brain malformations.Nature 2010, 467 (7312): 207-210.)。全外顯子測序技術已被證明為降低稀有單基因疾病候選基因甚至發現其致病基因的有力、有效手段，僅通過對幾個很少的個體(包括患者及正常對照)的全外顯子進行測序來篩選與疾病相關的變異，其成功率大為提升。
[0004]本領域中急需找到PHO的致病基因，以及突變位點。
【發明內容】
[0005]本研究通過外顯子組測序的方法確定了 PHO的致病基因。
[0006]在第一方面，本發明涉及PHO的生物標記物，即突變的SLC02A1基因或SLC02A1蛋白，所述生物標記物是具有選自如下的突變的SLC02A1基因或SLC02A1蛋白:
[0007]在外顯子2 中移碼突變(c.121delC;p.L40Cfs*36)；
[0008]在外顯子13 中錯義突變(c.1781G>A;p.C593Y)；[0009]在外顯子12 中錯義突變(c.1681C>T;p.R560C)；
[0010]在外顯子4中錯義突變(c.440G>A;p.W146X)；
[0011]在外顯子7-8剪接中錯義突變(c.940+lG>A;p.R343H)；
[0012]在外顯子5-6剪接中錯義突變(c.724+lG>A;p.A241Y)。
[0013]在一個實施方案中，本發明的突變的SLC02A1基因為SEQ ID NO:1的序列中具有以下突變:
[0014]在外顯子2中移碼突變(c.121delC)；
[0015]在外顯子13中錯義突變(c.1781G>A)；
[0016]在外顯子12中錯義突變(c.16810T)；
[0017]在外顯子4中錯義突變(c.440G>A)；
[0018]在外顯子7-8剪接中錯義突變(c.940+lG>A)；
[0019]在外顯子5-6剪接中錯義突變(c.724+lG>A)。
[0020]在一個實施方案中，本發明的突變的SLC02A1蛋白為SEQ ID N0:2的序列中具有以下突變:
[0021]在外顯子2中移碼突變(p.L40Cfs*36)；
[0022]在外顯子13中錯義突變 (p.C593Y)；
[0023]在外顯子12中錯義突變(p.R560C)；
[0024]在外顯子4中錯義突變(p.W146X)；
[0025]在外顯子7-8剪接中錯義突變(p.R343H)；
[0026]在外顯子5-6剪接中錯義突變(p.A241Y)。
[0027]在一個實施方案中，本發明的突變的SLC02A1蛋白為SEQ ID NO:2的序列中具有外顯子2中移碼突變(p.L40Cfs*36)，在一個具體實例中，所述突變的SLC02A1蛋白的序列是 SEQID NO:31。
[0028]在第二方面，本發明涉及一種檢測PHO的方法，所述方法包括檢測受試者的SLC02A1基因或SLC02A1蛋白中是否存在突變位點，如果有突變位點，則所述受試者被鑒定為患有PHO或易患ΡΗ0,所述突變位點選自如下任一種或其組合:
[0029]在外顯子2 中移碼突變(c.121delC;p.L40036)；
[0030]在外顯子13 中錯義突變(c.1781G>A;p.C593Y)；
[0031]在外顯子12 中錯義突變(c.1681C>T;p.R560C)；
[0032]在外顯子4中錯義突變(c.440G>A; p.W146X)；
[0033]在外顯子7-8剪接中錯義突變(c.940+lG>A;p.R343H)；
[0034]在外顯子5-6剪接中錯義突變(c.724+lG>A;p.A241Y)。
[0035]在一個實施方案中，SLC02A1蛋白為SEQ ID NO:2的序列表示。
[0036]在一個實施方案中，SLC02A1基因為SEQ ID NO:1的序列表示。
[0037]在一個實施方案中，本發明的檢測PHO的方法包括如下至少一組引物擴增的步驟:
[0038]SEQ ID NO:5 和 SEQ ID NO:6 ；
[0039]SEQ ID NO:9 和 SEQ ID NO: 10 ；
[0040]SEQ ID NO: 11 和 SEQ ID NO: 12 ；[0041]SEQ ID NO:15 和 SEQ ID NO:16 ；
[0042]SEQ ID NO:23 和 SEQ ID NO:24 ；
[0043]SEQ ID NO:25 和 SEQ ID NO:26。
[0044]在一個實施方案中，本發明的檢測PHO的方法中檢測突變位點通過選自如下的技術進行:測序、電泳、核酸雜交、原位雜交、PCR、逆轉錄酶鏈反應和變性高效液相色譜。
[0045]在第三方面，本發明涉及通過PCR檢測SLC02A1基因或SLC02A1蛋白突變中使用的引物對，所述突變是選自如下任一種或其組合:
[0046]在外顯子2 中移碼突變(c.121delC;p.L40036)；
[0047]在外顯子13 中錯義突變(c.1781G>A;p.C593Y)；
[0048]在外顯子12 中錯義突變(c.1681C>T;p.R560C)；
[0049]在外顯子4中錯義突變(c.440G>A; p.W146X)；
[0050]在外顯子7-8剪接中錯義突變(c.940+lG>A;p.R343H)；
[0051]在外顯子5-6剪接中錯義突變(c.724+lG>A;p.A241Y)，
[0052]其中所述引物對分別基于選自如下的位置前后設計，使得擴增該位置(編號基于SLC02A1的cDNA序列，724+1表示cDNA序列的724位之后在基因組DNA中是內含子序列，該內含子序列的第一位發生突變，940+1與之類似):121、1781、1681、440、940+1和724+1。
[0053]在第四方面，本發明涉及與突變SLC02A1基因互補的核酸探針，所述突變是選自如下任一種或其組合:
[0054]在外顯子2 中移碼突變(c.121delC;p.L40036)；
[0055]在外顯子13 中錯義突變(c.1781G>A;p.C593Y)；
[0056]在外顯子12 中錯義突變(c.1681C>T;p.R560C)；
[0057]在外顯子4中錯義突變(c.440G>A; p.W146X)；
[0058]在外顯子7-8剪接中錯義突變(c.940+lG>A;p.R343H)；
[0059]在外顯子5-6剪接中錯義突變(c.724+lG>A;p.A241Y)，
[0060]所述探針與突變SLC02A1基因的互補區包括選自如下的位置(編號基于SLC02A1的cDNA序列，724+1表示cDNA序列的724位之后在基因組DNA中是內含子序列，該內含子序列的第一位發生突變，940+1與之類似):121、1781、1681、440、940+1和724+1。
[0061]在第五方面，本發明涉及檢測突變SLC02A1基因或SLC02A1蛋白的試劑盒，包含一組或多組引物對，其中所述突變是選自如下任一種或其組合:
[0062]在外顯子2 中移碼突變(c.121delC;p.L40036)；
[0063]在外顯子13 中錯義突變(c.1781G>A;p.C593Y)；
[0064]在外顯子12 中錯義突變(c.1681C>T;p.R560C)；
[0065]在外顯子4中錯義突變(c.440G>A; p.W146X)；
[0066]在外顯子7-8剪接中錯義突變(c.940+lG>A;p.R343H)；
[0067]在外顯子5-6剪接中錯義突變(c.724+lG>A;p.A241Y)，
[0068]其中所述引物對分別基于選自如下的位置前后設計，使得其擴增產物涵蓋該位置(編號基于SLC02A1的cDNA序列，724+1表示cDNA序列的724位之后在基因組DNA中是內含子序列，該內含子序列的第一位發生突變，940+1與之類似):121、1781、1681、440、940+1和 724+1。[0069]在一個實施方案中，所述檢測突變SLC02A1基因或SLC02A1蛋白的試劑盒包含選自如下的至少一組引物:
[0070]SEQ ID NO:5 和 SEQ ID NO:6 ；
[0071]SEQ ID NO:9 和 SEQ ID NO: 10 ；
[0072]SEQ ID NO: 11 和 SEQ ID NO: 12 ；
[0073]SEQ ID NO: 15 和 SEQ ID NO: 16 ；
[0074]SEQ ID NO:23 和 SEQ ID NO:24 ；
[0075]SEQ ID NO:25 和 SEQ ID NO:26。
[0076]在第六方面，本發明涉及檢測突變SLC02A1基因的試劑盒，包含一個或多個核酸探針，所述突變是選自如下任一種或其組合:
[0077]在外顯子2 中移碼突變(c.121delC;p.L40036)；
[0078]在外顯子13 中錯義突變(c.1781G>A;p.C593Y)；
[0079]在外顯子12 中錯義突變(c.1681C>T;p.R560C)；
[0080]在外顯子4中錯義突變(c.440G>A; p.W146X)；
[0081]在外顯子7-8剪接中錯義突變(c.940+lG>A;p.R343H)；
[0082]在外顯子5-6剪接中錯義突變(c.724+lG>A;p.A241Y)，
[0083]所述探針與突變SLC02A1基因上包含選自如下的位置的區域互補(編號基于SLC02A1的cDNA序列，724+1表示cDNA序列的724位之后在基因組DNA中是內含子序列，該內含子序列的第一位發生突變，940+1與之類似):121、1781、1681、440、940+1和724+1。
[0084]該研究將為PHO的發病機制研究奠定重要基礎，有可能為PHO的患者治療提供全新的理論依據。
【具體實施方式】
[0085]在本發明中，采用本領域通用表示法表示突變。例如，突變(c.1781G>A;p.C593Y)中，c表示cDNA，p表示蛋白質，DNA水平的突變對應蛋白質水平的突變；移碼突變(c.121delC;p.L40Cfs*36)中，c.121delC 表示 DNA 水平第 121 位缺失 C，p.L40Cfs*36 表示從40位起算的36個氨基酸的移碼，形成的突變蛋白質僅有75個氨基酸，如SEQ ID N0:31中所示；在錯義突變(c.940+lG>A;p.R343H)中，c.940+1表示c.940后面是內含子，+1表示該內含子的第I位，這位的G突變為A ;同理在突變(c.724+lG>A;p.A241Y)中，c.724+lG>A表示c.724后面是內含子，+1表示該內含子的第I位,這位的G突變為A。
[0086]野生型SLC02A1基因的cDNA序列如SEQ ID NO:1所示，其中
[0087]外顯子1:為1-96 ;外顯子2:為97-234 ;外顯子3:為235-397 ;外顯子4:為398-625 ;外顯子5:為626-724 ;外顯子6:為725-861 ;外顯子7:為862-940 ;外顯子8:為941-1105 ;外顯子 9:為 1106-1295 ;外顯子 10:為 1296-1461 ;外顯子 11:為 1462-1625 ;外顯子12:為1626-1690 ;外顯子13:為1691-1814 ;外顯子14:為1815-1932。其中外顯子5后的內含子第I位和外顯子7后的內含子第I位是G (在本發明中該位置分別以724+1和940+1表示)，該突變影響剪接，從而使得剪接后的蛋白序列分別發生A241Y和R343H突變。
[0088]SEQ ID NO:2:野生型SLC02A1蛋白的氨基酸序列。
[0089]對于本發明說明書和權利要求書中，提及基因序列，本領域技術人員應當理解，實際包括互補雙鏈的任意一條，或者兩條。為了方便，在本說明書和權利要求書中，雖然多數情況下只給出了一條鏈，但實際上也公開了與之互補的另一條鏈。例如提及SLC02A1基因的cDNA序列，實際上包括該序列以及其互補序列。例如，提及SEQ ID NO: 1，實際包括其互補序列。本領域技術人員還可以理解，利用一條鏈可以檢測另一條鏈，反之亦然。
[0090]本申請中的基因序列包括DNA形式或RNA形式，公開其中一種，意味著另一種也被公開。例如提及SLC02A1基因的cDNA序列，實際也包括相應的RNA序列。
[0091 ] 實施例1確定PHO的致病基因。
[0092]發明人近幾年在國內收集到5例PHO病例，所有患者均表現出回狀頭皮增生、易出油出汗、杵狀指、X光片檢測表明長骨骨膜增厚等典型的PHO疾病特征。
[0093]發明人對其中患有PHO的兩兄弟(在表1中編號Pl和P2)和其父母的外顯子組序列進行了測序。具體步驟如下:
[0094]樣品制備:采集所述兩PHO患者及其父母家人外周血，利用試劑盒抽提外周血白細胞中的基因組 DNA (RelaxGene Blood DNA System DP319-02.TIANGEN, China)，利用NanoDrop 2000測量DNA的濃度及純度(Thermo Scientif ic, USA),所得的每個標本基因組DNA的0D260/0D280均位于1.7-2.0之間，濃度不少于100ng/ul，總量不少于30 μ L.[0095]然后，對上述四個樣本的外顯子組序列進行了測序。測序平臺為Illumina Hiseq2000,依照 Illumina/Solexa 標準建庫說明書(參見 http://www.1llumina.com/)進行測序，簡述如下:
[0096]I)將基因組DNA隨機打斷成200_300bp左右的片段，隨后在片段兩端分別連接上接頭制備雜交文庫；
[0097]2)文庫經純化后經過連接反應介導的PCR(LM-PCR)的線性擴增與生物素標記的DNA文庫進行雜交富集，再經過L M-PCR的線性擴增后進行上機測序,讀取長度為90bp，每個樣本的平均測序深度最少為50 ；
[0098]3)測序后獲得的原始測序片段(reads)由 Illumina basecalling SoftwareI.7 進行處理，經過過濾去污染、使用 SOAPaligner 2.20 (Li R, Li Y, KristiansenK，et al，SOAP: short oligonucleotide alignment program.Bioinformatics2008，24 (5): 713-714 ;Li R，Yu C，Li Y，et al，S0AP2:an improved ultrafast tool forshort read alignment.Bioinformatics 2009，25 (15): 1966-1967)比對參考基因組，獲得比對到基因組上的唯一匹配測序片段。靶區域的基因型由S0APsnp(Li R，Li Y, Fang X，YangH，et al，SNP detection for massively p arallel whole-genome resequencing.GenomeRes 2009，19(6):1124-1132)確定。
[0099]結果，在這些樣本中分別發現:父親有84841個單核苷酸多態性(SNPs)和7168處的插入/缺失；母親有83064個單核苷酸多態性(SNPs)和7149處的插入/缺失；患者Pl有83547個單核苷酸多態性(SNPs)和7160處的插入/缺失；患者P2有82499個單核苷酸多態性(SNPs)和7109處的插入/缺失。
[0100]隨后，對結果通過四個公共數據庫(dbSNP(vl31): http: //hgdownload.cse.ucsc.edu/goldenPath/hgl9/database/snpl31.txt.gz.； 1000 人:ftp://ftp.1OOOgenomes.eb1.ac.uk/voll/ftp或ftp://ftp_trace.ncb1.nih.gov/1000genomes/ftp ；hapmap:ftp://ftp.ncb1.nlm.nih.gov/hapmap ； 以及 YH 數據 庫:http://yh.genomics, org.cn)進行過濾,去掉所有已知的且在數據庫中等位基因頻率大于0.005的變異。
[0101]發現兩患者在基因SLC02A1上都同時具有兩個符合共分離的雜合突變點:在外顯子2中移碼突變(c.121delC;p.L40C);在外顯子13中錯義突變(c.1781G>A;p.C593Y)。通過家族中2名患者和13位正常人SNP篩查共分離，這個位點可能是致病位點。
[0102]結果顯示于表1。SLC02A1負責編碼前列腺素轉運蛋白，是一個擁有12次跨膜結構的轉運子超家族成員。具有14個外顯子。能夠轉運P⑶2、PGEl、PGE2、PGF2a和PGH2。
[0103]因此，發明人認為SLC02A1基因極有可能為PHO的致病基因。
[0104]實施例2在其他病例中確認上述PHO的致病基因。
[0105]接著，發明人納入其它PHO患者，對SLC02A1基因為PHO的致病基因進行驗證。驗證中利用sanger法測序驗證SLC02A1基因的突變，其中考慮了家系內、家系外、散發等樣本驗證情況。
[0106]分別對5名患者、20名家系內正常人(即該5例患者的父母，他們均未發病)和384名家系外正常人(即與表2中所有患者無血緣關系的對照)基因進行檢測，針對SL0C02A1基因所有外顯子序列設計引物，通過PCR擴增，產物純化，測序的方法獲得有關序列，根據序列測定結果屬于突變型還是野生型，驗證SLC02A1與PHO疾病之間相關性。
[0107]具體方法步驟如下:`[0108]1.DNA 提取:
[0109]分別采取5名家系內患者、20名家系內正常人和384名家系外正常人外周靜脈血按照實施例1的方法提取基因組DNA和測定DNA含量。
[0110]2.引物設計及PCR反應
[0111]引物設計參考人類基因組序列數據庫hgl9/build36.3，具體見下。
[0112]a)引物序列:
[0113]
【權利要求】
1.一種具有選自如下的突變的SLC02A1基因或SLC02A1蛋白: 在外顯子2中移碼突變(c.121delC;p.L40Cfs*36)； 在外顯子13中錯義突變(c.1781G>A;p.C593Y)； 在外顯子12中錯義突變(c.1681C>T;p.R560C)； 在外顯子4中錯義突變(c.440G>A;p.W146X)； 在外顯子7-8剪接中錯義突變(c.940+lG>A;p.R343H)； 在外顯子5-6剪接中錯義突變(c.724+lG>A;p.A241Y)。
2.權利要求1的SLC02A1基因，為SEQID NO:1的序列中具有以下突變: 在外顯子2中移碼突變(c.121delC)； 在外顯子13中錯義突變(c.1781G>A)； 在外顯子12中錯義突變(c.16810T)； 在外顯子4中錯義突變(c.440G>A)； 在外顯子7-8剪接中錯義突變(c.940+lG>A)； 在外顯子5-6剪接中錯義突變(c.724+lG>A)。
3.權利要求1的SLC02A1蛋白，為SEQID NO:2的序列中具有以下突變: 在外顯子2中移碼突變(p.L40Cfs*36)； 在外顯子13中錯義突變(p.C593Y)； 在外顯子12中錯義突變(p.R560C)； 在外顯子4中錯義突變(p.W146X)； 在外顯子7-8剪接中錯義突變(P.R343H)； 在外顯子5-6剪接中錯義突變(p.A241Y)。
4.一種檢測PHO的方法，所述方法包括檢測受試者的SLC02A1基因或SLC02A1蛋白中是否存在突變位點，如果有突變位點，則所述受試者被鑒定為患有PHO或易患ΡΗ0，所述突變位點選自如下任一種或其組合: 在外顯子2中移碼突變(c.121delC;p.L40036)； 在外顯子13中錯義突變(c.1781G>A;p.C593Y)； 在外顯子12中錯義突變(c.1681C>T;p.R560C)； 在外顯子4中錯義突變(c.440G>A;p.W146X)； 在外顯子7-8剪接中錯義突變(c.940+lG>A;p.R343H)； 在外顯子5-6剪接中錯義突變(c.724+lG>A;p.A241Y)。
5.權利要求4的方法，包括如下至少一組引物擴增的步驟:
SEQ ID NO:5 和 SEQ ID NO:6 ；
SEQ ID NO:9 和 SEQ ID NO:10 ；
SEQ ID NO:11 和 SEQ ID NO:12 ；
SEQ ID NO:15 和 SEQ ID NO:16 ；
SEQ ID NO:23 和 SEQ ID NO:24 ；
SEQ ID NO:25 和 SEQ ID NO:26。
6.檢測SLC02A1基因或SLC02A1蛋白突變中使用的引物對，所述突變是選自如下任一種或其組合:在外顯子2中移碼突變(c.121delC;p.L40036)； 在外顯子13中錯義突變(c.1781G>A;p.C593Y)； 在外顯子12中錯義突變(c.1681C>T;p.R560C)； 在外顯子4中錯義突變(c.440G>A;p.W146X)； 在外顯子7-8剪接中錯義突變(c.940+lG>A;p.R343H)； 在外顯子5-6剪接中錯義突變(c.724+lG>A;p.A241Y)， 其中所述引物對分別基于如下的位置前后設計，使得擴增該位置:121、1781、1681、`440,940+1 和 724+1。
7.與突變SLC02A1基因互補的核酸探針，所述突變是選自如下任一種或其組合: 在外顯子2中移碼突變(c.121delC;p.L40036)； 在外顯子13中錯義突變(c.1781G>A;p.C593Y)； 在外顯子12中錯義突變(c.1681C>T;p.R560C)； 在外顯子4中錯義突變(c.440G>A;p.W146X)； 在外顯子7-8剪接中錯義突變(c.940+lG>A;p.R343H)； 在外顯子5-6剪接中錯義突變(c.724+lG>A;p.A241Y)，` 所述探針與突變SLC02A1基因的互補區包括選自如下的位置:121、1781、1681、440、940+1 和 724+1。
8.檢測突變SLC02A1基因或SLC02A1蛋白的試劑盒，包含一組或多組引物對，其中所述突變是選自如下任一種或其組合: 在外顯子2中移碼突變(c.121delC;p.L40036)； 在外顯子13中錯義突變(c.1781G>A;p.C593Y)； 在外顯子12中錯義突變(c.1681C>T;p.R560C)； 在外顯子4中錯義突變(c.440G>A;p.W146X)； 在外顯子7-8剪接中錯義突變(c.940+lG>A;p.R343H)； 在外顯子5-6剪接中錯義突變(c.724+lG>A;p.A241Y)， 其中所述引物對分別基于選自如下的位置前后設計，使得其擴增產物涵蓋該位置:121、1781、1681、440、940+1 和 724+1。
9.權利要求8的試劑盒，包含選自如下的至少一組引物:
SEQ ID NO:5 和 SEQ ID NO:6 ；
SEQ ID NO:9 和 SEQ ID NO:10 ；
SEQ ID NO:11 和 SEQ ID NO:12 ；
SEQ ID NO:15 和 SEQ ID NO:16 ；
SEQ ID NO:23 和 SEQ ID NO:24 ；
SEQ ID NO:25 和 SEQ ID NO:26。
10.檢測突變SLC02A1基因的試劑盒，包含一個或多個核酸探針，所述突變是選自如下任一種或其組合: 在外顯子2中移碼突變(c.121delC;p.L40036)； 在外顯子13中錯義突變(c.1781G>A;p.C593Y)； 在外顯子12中錯義突變(c.1681C>T;p.R560C)；在外顯子4中錯義突變(c.440G>A;p.W146X)； 在外顯子7-8剪接中錯義突變(c.940+lG>A;p.R343H)； 在外顯子5-6剪接中錯義突變(c.724+lG>A;p.A241Y)， 所述探針與突變SLC02A1基因上包含選自如下的位置的區域互補:121、1781、1681、440,940+1和 724+1。
【文檔編號】C12N15/11GK103509799SQ201210201545
【公開日】2014年1月15日 申請日期:2012年6月18日 優先權日:2012年6月18日
【發明者】吳元明, 吳丹, 孫茂, 王國霞, 戴梅枝, 王俊, 汪建, 楊煥明 申請人:深圳華大基因科技有限公司, 第四軍醫大學法醫物證司法鑒定所