Tgm5基因突變檢測特異性引物和液相芯片的制作方法
【專利摘要】本發明公開了一種TGM5基因突變檢測液相芯片和特異性引物，該液相芯片主要包括有：每種由5’端的tag序列和3’端針對目的基因突變位點的特異性引物序列組成的ASPE引物所述特異性引物序列為：針對T116C位點的SEQ?ID?NO.7及SEQ?ID?NO.8，針對A212G位點的SEQ?ID?NO.9及SEQ?ID?NO.10，和/或針對A117G位點的SEQ?ID?NO.11及SEQ?ID?NO.12；有anti-tag序列包被的微球；擴增引物。本發明所提供的檢測液相芯片的檢測結果與測序法的吻合率高達100％，實現多個突變位點的野生型和突變型并行檢測。
【專利說明】TGM5基因突變檢測特異性引物和液相芯片
【技術領域】
[0001]本發明屬于分子生物學領域，涉及醫學和生物技術，具體的是涉及一種TGM5基因突變檢測特異性引物和液相芯片。
【背景技術】
[0002]TGM5稱谷氨酸胺轉移酶(Transglutaminase 5)。位于15號染色體15ql5.2的長臂上，更準確的說，TGM5基因的堿基在15號染色體上位于43524792到43559054堿基對之間，包含13個外顯子和12個內含子。TGM5基因是轉谷氨酰胺酶家族的成員，可以促進谷氨酰胺和賴氨酸殘基之間形成蛋白的交叉連接，從而使蛋白質組裝的穩定化，這種反應對鈣存在依賴性，在這個基因的突變與肢端脫皮綜合征有關。
[0003]目前，TGM5基因突變檢測方法主要有=Illumina光纖微珠芯片技術，雖然Illumina光纖微珠芯片技術是高靈敏度和精確性的高通量檢測系統，但是自動化程度低，手工操作比較多，難以滿足實際應用的需要。
[0004]本發明目標檢測的TGM5基因突變位點，如表所示:
[0005]
【權利要求】
1.一種TGM5基因突變檢測液相芯片，其特征在于，包括有: (A).針對TGM5基因不同突變位點分別設計的野生型和突變型的ASPE引物對:每條ASPE引物由5’端的tag序列和3’端針對目的基因突變位點的特異性引物序列組成，所述特異性引物序列為:針對T116C位點的SEQ ID N0.7及SEQ ID N0.8，針對A212G位點的SEQID N0.9 及 SEQ ID N0.10，和 / 或針對 A117G 位點的 SEQ ID N0.11 及 SEQ ID N0.12 ;所述tag 序列選自 SEQID N0.1 -SEQ ID N0.6 ； (B).有ant1-tag序列包被的、具有不同顏色編碼的微球,所述ant1-tag序列與微球連接中間還設有間隔臂序列；所述ant1-tag序列選自SEQ ID NO).13-SEQ ID N0.18，且所述ant1-tag序列能相應地與(A)中所選的tag序列互補配對； (C).用于擴增出需要檢測的、具有相應突變位點的目標序列的引物。
2.根據權利要求1所述的TGM5基因突變檢測液相芯片，其特征在于，所述擴增引物為:針對 T116C 位點的 SEQ ID N0.19 及 SEQ ID N0.20，針對 A212G 位點的 SEQ ID NO).21 及SEQ IDNO).22，和 / 或針對 A117G 位點的 SEQ ID NO).23 及 SEQ ID N0.24。
3.根據權利要求1或2所述的TGM5基因突變檢測液相芯片，其特征在于，所述ASPE引物為:針對T116C位點的由SEQ ID N0.1和SEQ ID N0.7組成的序列及由SEQ ID N0.2和SEQ ID N0.8組成的序列，針對A212G位點的由SEQ ID NO).3和SEQ ID N0.9組成的序列及由SEQ ID NO).4和SEQ ID N0.10組成的序列，和/或針對Al 17G位點的由SEQ ID N0.5和SEQ ID NO).11組成的序列及由SEQ ID N0.6和SEQ ID N0.12組成的序列。
4.根據權利要求1所述的TGM5基因突變檢測液相芯片，其特征在于，所述間隔臂為5-10 個 T。
5.用于TGM5基因突變檢測的特異性引物，其特征在于，所述特異性引物序列為:針對 T116C 位點的 SEQ ID N0.7 及 SEQ ID N0.8，針對 A212G 位點的 SEQ ID N0.9 及 SEQ IDN0.10，和 / 或針對 A117G 位點的 SEQ ID NO).11 及 SEQ ID NO).12 ?
【文檔編號】C12N15/11GK103451273SQ201210179355
【公開日】2013年12月18日 申請日期:2012年5月31日 優先權日:2012年5月31日
【發明者】許嘉森, 吳詩揚 申請人:益善生物技術股份有限公司