專利名稱：能水解結合型膽汁酸的微生物溶液的制備方法
技術領域：
本發明屬于ー種微生物溶液的制備方法，具體為能水解結合型膽汁酸的微生物溶液的制備方法。用該微生物溶液水解結合型膽汁酸變為エ業上需要的游離型膽汁酸。
背景技術：
各種動物膽汁中都存在著與甘氨酸和牛磺酸結合的膽汁酸鹽，一直以來，人們分離エ業和醫藥膽汁酸單體都是首先用高濃度的NaoH，在長時間高溫或高壓條件下，水解結合型膽汁酸變為游離型膽汁酸，如曹榮安、李良玉、劉妍妍、范淼、張麗萍發表的“豬膽汁中 膽酸皂化工藝研究”(見《食品科技》2009年第11期)。尋找ー種溫和、安全的水解方法，是水解結合型膽汁酸變為游離型膽汁酸的發展方向。已有文獻還表明，膽汁酸是膽汁的重要成分，在脂肪代謝中起著重要作用。膽汁酸主要存在于腸肝循環系統并通過再循環起一定的保護作用。只有ー少部分膽汁酸進入外圍循環。促進膽汁酸腸肝循環的動力是肝細胞的轉運系統一吸收膽汁酸并將其分泌入膽汁、縮膽囊素誘導的膽囊收縮、小腸的推進蠕動，回腸黏膜的主動運輸及血液向門靜脈的流入。膽汁酸在腸中通過兩種機理被機體重新吸收。進餐后，膽囊在胰酶分泌素作用下發生收縮。在收縮過程中，膽囊的作用像馬達，驅動腸肝循環。通常情況下，在進餐消化后30分鐘內，十二指腸中的膽汁酸濃度急劇升高。在腸道中，各種形式的膽汁酸充分發揮各自的生理功能，并再次決定了自身的命運。腸道上段膽汁酸與脂類的消化吸收有夫。腸道下段(即回腸及近側結腸)膽汁酸自身發生變化在腸內微生物作用下發生轉化，并在腸黏膜中大部分以原來的或轉化的形式按主動運輸或被動運輸機理被重新吸收。只有一小部分隨食物殘渣排出體外。膽汁酸鹽極性越差，越容易與未吸收的纖維素或微生物結合，也越容易通過被動擴散被吸收。腸內微生物主要集中在回腸內容物及大腸內容物中。所述內容物主要指腸內待排泄物。
發明內容
為了克服現有技術的不足，本發明拋開了常規的用NaoH皂化結合型膽汁酸的エ藝，依據膽汁酸在動物體內屬于腸肝循環的原理，采用ー種有效方法，從腸內內容物中提取出能水解結合型膽汁酸的微生物溶液。本發明解決其技術問題的基本思路是依據膽汁酸在動物體內屬于腸肝循環的原理，取動物回腸內容物及大腸內容物來培養提取其中的微生物，進而來水解結合型膽汁酸變成游離型膽汁酸。本發明解決其技術問題所采用的技術方案是一種能水解結合型膽汁酸的微生物溶液的制備方法，其特征是取動物回腸及大腸，刮出回腸和大腸中的內容物；在刮出的內容物中，添加內容物體積O. 5-10倍的水稀釋混勻，過濾除掉固體雜質，得到濾液；按濾液體積加入O. 1-0. 5倍的MRS培養基，保持溫度在35_42°C，培養24_72小吋，
得培養液；用離心機分離培養液，得到沉淀物；加沉淀物重量1-100倍的無菌生理鹽水混懸，得到能水解結合型膽汁酸的微生物溶液；常溫保存微生物溶液，備用。本發明中，所述內容物主要指腸內待排泄物。MRS為(肉湯)培養基。
本發明的有益效果是，這種微生物溶液能水解結合型膽汁酸變為エ業上需要的游離型膽汁酸。進而還可以從鴨膽汁中用大孔樹脂等方法分離其中的鵝去氧膽酸(CDCA)。
具體實施例方式下面結合具體的實施例對本發明進ー步說明。但本發明的應用范圍不限于下列實施例。實施例I :取動物回腸及大腸，刮出回腸和大腸中的內容物；在刮出的內容物中，添加內容物體積O. 5倍的水稀釋混勻，用布過濾除掉固體雜質，得到濾液；按濾液體積加入O. I倍的MRS培養基，保持溫度在42°C，培養72小時，得培養液；用離心機以5000r/min離心15min,沉淀培養液,得到沉淀物； 加沉淀物重量80倍的無菌生理鹽水混懸，得到能水解結合型膽汁酸的微生物溶液；常溫保存微生物溶液，備用。實施例2 取動物回腸及大腸，刮出回腸和大腸中的內容物；在刮出的內容物中，添加內容物體積3倍的水稀釋混勻，用過濾機過濾除掉固體雜質，得到濾液；按濾液體積加入O. 2倍的MRS培養基，保持溫度在40°C，培養70小時，得培養液；用離心機以3000r/min離心18min,沉淀培養液,得到沉淀物；加沉淀物重量1-100倍的無菌生理鹽水混懸，得到能水解結合型膽汁酸的微生物溶液；常溫保存微生物溶液，備用。實施例3:取動物回腸及大腸，刮出回腸和大腸中的內容物；在刮出的內容物中，添加內容物體積6倍的水稀釋混勻，用布過濾除掉固體雜質，得到濾液；按濾液體積加入O. 2倍的MRS培養基，保持溫度在38°C，培養60小時，得培養液；用離心機以4000r/min離心16min,沉淀培養液,得到沉淀物；加沉淀物重量90倍的無菌生理鹽水混懸，得到能水解結合型膽汁酸的微生物溶液；常溫保存微生物溶液，備用。實施例4 取動物回腸及大腸，刮出回腸和大腸中的內容物；在刮出的內容物中，添加內容物體積6倍的水稀釋混勻，用布過濾除掉固體雜質，得到濾液；按濾液體積加入O. 4倍的MRS培養基，保持溫度在36°C，培養72小時，得培養液；用離心機以6000r/min離心IOmin,沉淀培養液,得到沉淀物；
加沉淀物重量20倍的無菌生理鹽水混懸，得到能水解結合型膽汁酸的微生物溶液；常溫保存微生物溶液，備用。實施例5 取動物回腸及大腸，刮出回腸和大腸中的內容物；在刮出的內容物中，添加內容物體積3倍的水稀釋混勻，用布過濾除掉固體雜質，得到濾液；按濾液體積加入O. 26倍的MRS培養基，保持溫度在38°C，培養42小時，得培養液；用離心機以4000r/min離心15min,沉淀培養液,得到沉淀物；加沉淀物重量5倍的無菌生理鹽水混懸，得到能水解結合型膽汁酸的微生物溶液；常溫保存微生物溶液，備用。
權利要求
1.一種能水解結合型膽汁酸的微生物溶液的制備方法，其特征是 取動物回腸及大腸，刮出回腸和大腸中的內容物； 在刮出的內容物中，添加內容物體積O. 5-10倍的水稀釋混勻，過濾除掉固體雜質，得到濾液； 按濾液體積加入O. 1-0. 5倍的MRS培養基，保持溫度在35-42°C，培養24-72小時，得培養液； 用離心機分離培養液，得到沉淀物； 加沉淀物重量1-100倍的無菌生理鹽水混懸，得到能水解結合型膽汁酸的微生物溶液； 常溫保存微生物溶液，備用。
全文摘要
一種能水解結合型膽汁酸的微生物溶液的制備方法，其特征是取動物回腸及大腸，刮出回腸和大腸中的內容物；在刮出的內容物中，添加內容物體積0.5-10倍的水稀釋混勻，過濾除掉固體雜質，得到濾液；按濾液體積加入0.1-0.5倍的MRS培養基，保持溫度在35-42℃，培養24-72小時，得培養液；用離心機沉淀培養液，得到沉淀物；加沉淀物重量1-100倍的無菌生理鹽水混懸，得到能水解結合型膽汁酸的微生物溶液；常溫保存微生物溶液，備用。這種微生物溶液能水解結合型膽汁酸變為工業上需要的游離型膽汁酸。進而還可以從鴨膽汁中用大孔樹脂等方法分離其中的鵝去氧膽酸(CDCA)。
文檔編號C12N1/00GK102703320SQ201210175319
公開日2012年10月3日 申請日期2012年5月30日 優先權日2012年5月30日
發明者吳憲君, 吳昱隆, 寧玉蓉, 干文冬 申請人:綿陽勁柏生物科技有限責任公司