專利名稱：基于納米金和適配體的小分子探針及其制備方法
技術領域：
本發明屬于生物分析檢測技術領域，具體涉及一種基于納米金和適配體的小分子探針及其制備方法。
背景技術：
核酸適配體(aptamer)是一類體外人工篩選出來的DNA或RNA寡核苷酸序列，可以高效、專一地識別其配體(A. D. Ellington, J. ff. Szostak, Nature 1990, 346,818-822)，在臨床診斷和疾病治療領域成為越來越重要的分子工具。核酸適配體是一系列單鏈核酸分子，能夠與特異靶分子相結合，特異性如同抗體一樣，對可結合的配體有嚴格的識別能力和高度的親和力。核酸適配體與靶分子相互作用的基礎是空間結構的互補，在結合靶分子前后核酸適配體通常會有顯著的結構變化這一特性廣泛應用于電化學、熒光、石英晶體微天平等信號檢測手段。近年來，基于核酸適配體的比色策略發展迅速，人們可以直 接用肉眼實現對靶分子的直接檢測。核酸適配體具有易于合成、化學穩定性高和目標分子范圍的特點。分子信標(molecular beacon)是一種呈發夾結構的莖環雙標記寡核苷酸探針，兩端的核酸序列互補配對，因此標記在一端的熒光基團與標記在另一端的淬滅基團緊緊靠近。熒光基團被激發后產生的光子被淬滅劑淬滅，由熒光基團產生的能量以紅外而不是可見光形式釋放出來。分子信標因具有靈敏度高、特異結合性好、靶分子不用標記無需分離等優點而被廣泛應用于生物學和生物分析領域。分子信標中最常用的淬滅基團是DABSYL、TMARA等有機淬滅劑，這些淬滅劑可以有效淬滅大部分的熒光素，但是對于不同的熒光素的淬滅效率差異很大，對于長波長發射的熒光素例如Cy5，Texas Red等的淬滅效果就很差。納米金具有高的消光系數和較寬的光譜吸收特性，它比常規有機發光團分子的消光系數高 3 5 個數量級(Jin, R. ; ffu, G. ; Li, Z. ; Mirkin, C. A. ; Schatz, G. C·，J. Am. Chem. Soc. 2003，1643-54)。納米金作為信號傳導載體在生物技術和納米技術領域有著廣泛的應用。Fan等發現納米金可以淬滅聚荷陽離子的突光，Stern-Volmer常數可達10n/M，比小分子熒光淬滅劑提高了 9-10個數量級。近年來，納米金作為淬滅基團在納米金一熒光素復合物體系中理論模型、淬滅效率以及實際應用的研究越來越多。將納米金應用到分子信標中，與常規淬滅基團DABCYL相比，納米金可以在可見到近紅外的波長范圍內，有效淬滅各種熒光染料，而且金顆粒在較低的離子強度條件下吸收效果較好，所以用納米金粒子代替DABSYL大大提高了分子信標的靈敏度和特異性。
發明內容
本發明所要解決的第一問題在于克服現有技術中分子信標在檢測長波長發射時靈敏度和特異性降低等問題，提供一種基于納米金和適配體的小分子探針。本發明所要解決的又一技術問題在于提供一種基于納米金和適配體的小分子探針的制備方法。
本發明所要解決的又一技術問題在于提供一種包括基于納米金和適配體的小分子探針的試劑盒。本發明所要解決的又一技術問題在于提供一種基于納米金和適配體的小分子探針的使用方法。為了解決現有技術中的這些問題，在第一個方面，本發明提供的技術方案是基于納米金和適配體的小分子探針，包括納米金顆粒，以及組裝在納米金顆粒上的一種以上巰基修飾DNA片段，其特征在于，還包括一種以上的熒光基團標記的適配體，且所述一種以上適配體至少部分片段與所述的一種以上巰基修飾DNA組互補雜交。優選的，所述巰基修飾DNA片段，其3’端為巰基-SH修飾且在該末端有6_10個長度的胸腺嘧啶T作為間隔，其5’端的部分堿基與所述的熒光基團標記的適配體能夠互補雜交。 優選的，所述納米金的粒徑為13納米-15納米。優選的，所述組裝在納米金顆粒上的巰基修飾DNA片段為3種，與其互補雜交的適配體為3種。優選的，所述一種以上的熒光基團標記的適配體，其5’端修飾有不同的熒光基團，包括但不限為-R0X，-FAM或-Cy5。優選的，所述納米金顆粒與核酸適配體熒光基團的距離控制在2-3納米。巰基修飾DNA片段，其3’端為巰基(-SH)修飾且在該末端有6-10個長度的胸腺嘧啶T作為間隔，標記有熒光基團的核酸適配體與所述巰基修飾DNA片段的間隔部分之外的堿基互補雜交，通過間隔的堿基數目控制所述納米金顆粒與核酸適配體熒光基團的距離。優選的，所述小分子探針，包括至少下列一對熒光基團標記的適配體及與其互補雜交的組裝在納米金顆粒上的巰基修飾DNA片段
與腺苷A特異結合的適配體如SEQ ID No. I所示AA:5’ -AGAGAACCTGGGGGAGTATTGCGGAGGAAGGT-3’，巰基修飾的與腺苷A特異性結合的核酸適配體互補的DNA 片段如 SEQ ID No. 4 所示 PA: 5’ -CCC AGG TTC TCT TTTTTTTTTT-SH-3’
與鉀離子K+特異結合的適配體如SEQ ID No. 2所示AK:5’ --TCTACGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGGT-3’，巰基修飾的與鉀離子K+特異性結合的核酸適配體互補的 DNA 片段如 SEQ ID No. 5 所示 PK: 5’ -CTA ACC CGT AGA TTTTTTTTTT-SH-3’
與可卡因特異結合的適配體如SEQ ID No. 3所示AC:5’一AAGTGGGGAGACAAGGATAAATCCTTCAATGAAGTGGGTCTCCC-3’，巰基修飾的與可卡因特異性結合的核酸適體互補的DNA片段如SEQ ID No. 6 所示 PC: 5，-TTG TCT CCC CAC TTTTTTTTTTTT-SH-3，；
上述的三種適配體的5’端連接有-R0X，-FAM或-Cy5熒光基因中的一種，且各個適配體的熒光基因各不相同。在第二個方面，本發明提供了基于納米金和核酸適配體的小分子探針的制備方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟
(1)準備與核酸適配體互補的巰基修飾的DNA片段及納米金顆粒，還加入了為核酸適配體I. 5-2. 5倍摩爾濃度的10個胸腺嘧啶T，通過金硫鍵將DNA片段組裝到納米金表面得到納米金-DNA片段；
(2)準備熒光基團標記的核酸適配體，將等摩爾量的核酸適配體與步驟(I)制備的納米金-DNA片段混合得到所述基于納米金和核酸適配體的小分子探針。優選的，在第二個方面的制備方法，所述步驟(I)為將一定量的巰基修飾的DNA和納米金混合，得到納米金-DNA片段，過夜后加入一定濃度的PBS，離心去掉未組裝到納米金表面的DNA片段。優選的，在第二個方面的制備方法，步驟(2)加入的胸腺嘧啶T為核酸適配體2倍摩爾濃度的胸腺嘧啶。優選的，在第二個方面的制備方法，所述納米金的粒徑為13納米-15納米。優選的，在第二個方面的制備方法，在最終的納米金-DNA片段混合溶液中，巰基修飾的DNA : 10個胸腺嘧啶T :納米金的濃度為1:2: 10000。在第三個方面，本發明提供了一種包括基于納米金和適配體的小分子探針的試劑 盒，所述試劑盒，包括納米金顆粒，還包括組裝在納米金顆粒上的一種以上巰基修飾DNA片段，一種以上的熒光基團標記的適配體，且所述一種以上適配體至少部分片段與所述的一種以上巰基修飾DNA組互補雜交。優選的，在第三個方面的試劑盒，所述巰基修飾DNA片段，其3’端為巰基-SH修飾且在該末端有6-10個長度的胸腺嘧啶T作為間隔，其5’端的部分堿基與所述的熒光基團標記的適配體能夠互補雜交。優選的，在第三個方面的試劑盒，所述納米金的粒徑為13納米-15納米。優選的，在第三個方面的試劑盒，所述一種以上的熒光基團標記的適配體，其5’端修飾有不同的熒光基團，包括但不限為-R0X，-FAM或-Cy5。優選的，在第三個方面的試劑盒，包括至少下列一對熒光基團標記的適配體及與其互補雜交的組裝在納米金顆粒上的巰基修飾DNA片段
與腺苷A特異結合的適配體如SEQ ID No. I所示Aa:5’ -R0X-AGAGAACCTGGGGGAGTATTGCGGAGGAAGGT-3’，巰基修飾的與腺苷A特異性結合的核酸適配體互補的DNA 片段如 SEQ ID No. 4 所示 Pa: 5’ -CCC AGG TTC TCT TTTTTTTTTT-SH-3’
與鉀離子K+特異結合的適配體如SEQ ID No. 2所示Ak: 5’-FAM-TCTACGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGGT-3’，巰基修飾的與鉀離子K+特異性結合的核酸適配體互補的DNA片段如SEQ IDNo. 5 所示 Pk: 5，-CTA ACC CGT AGA TTTTTTTTTT-SH-3’
與可卡因特異結合的適配體如SEQ ID No. 3所示Ae:5’ _Cy5_AAGTGGGGAGACAAGGATAAATCCTTCAATGAAGTGGGTCTCCC-3’，巰基修飾的與可卡因特異性結合的核酸適體互補的DNA片段如 SEQ ID No. 6 所示 Pc: 5，-TTG TCT CCC CAC TTTTTTTTTTTT-SH-3’。在第四個方面，本發明提供了基于納米金和適配體的小分子探針的使用方法，其特征在于，將所述小分子探針加入待測溶液，室溫放置1-24小時然后測量熒光信號的變化。優選的，在第四個方面的使用方法，所述待測溶液還加入了待測小分子類似物。為了驗證該方法的特異性，即該探針能夠特異性檢測靶分子，而其類似物分子不會對結果產生干擾，所以在實驗過程中加入了小分子的類似物，比如腺苷A的類似物，腺苷G，T，C。鉀離子K+的類似物Li+，Na+。可卡因的類似物芽子堿甲酯(ΕΜΕ)、苯甲酸(BE)。本專利申請中的術語“適配體”是本領域技術人員所熟知的，指的是能夠與特定的靶分子結合的單鏈核酸，包括DNA或RNA。本發明使用的核酸適配體5’端修飾有不同的熒光基團。本發明中，三條適配體aptamer鏈用不同的熒光基團標記，與納米金表面組裝的互補DNA雜交，一起構成納米金多色探針。未檢測反應前，由于適配體熒光基團靠近納米金表面，其熒光被納米金淬滅，信號水平很低。當存在其中可與其中一種適配體特異性結合的小分子時，適配體就與小分子結合，并離開納米金表面，因此，納米金的淬滅作用不發揮作用，該適配體釋放強烈的熒光信號。本專利申請中的術語“熒光基團”是本領域技術人員所熟知的，能夠標記到DNA上的熒光基團都可以，但是三種不同的熒光基團的激發和發射峰位置需要相差50 nm以上，避免發射光譜的疊加。修飾好的熒光基團的核酸適配體可以從生物公司購買，但在熒光基團的選擇上要求各個核酸適配體熒光基團的激發和發射波長不能有重疊。因此也不宜采用磷
光基團。本專利申請中的術語“巰基修飾DNA片段”是本領域技術人員所熟知的，就是在實驗采用的DNA片段的末端標記有巰基。本發明中的探針設計，先將幾種不同序列巰基修飾的DNA片段(單鏈)組裝在納米金顆粒上，這幾條DNA片段單鏈可以分別與其特定需要的適配體(aptamer)互補雜交。且適配體鏈用不同的熒光基團標記，與納米金表面組裝的互補DNA雜交，一起構成納米金多色探針。由于熒光基團靠近納米金表面，其信號很低，只要存在其中一種小分子時，aptamer遠離納米金表面，釋放強烈熒光信號
相對于現有技術中的方案，本發明的優點是
I.本發明的小分子探針具有相對較高的檢測靈敏度，納米金具有極高的淬滅能力，而且金顆粒在較低的離子強度條件下吸收效果較好，所以用納米金粒子代替DABSYL大大提高了分子信標的靈敏度和特異性。特異性強、重復性好、準確率高，有效減少了假陽性結果。由于本發明采用適配體技術，因而能保持結果的正確，大大降低了假陽性結果出現的幾率，使得本發明適宜實際推廣。本發明的方法可以利用未經精度提純的待測樣品直接檢測而仍舊能保持實用的靈敏度和特異性，不會出現適配體與靶分子(MAM mRNA)和其他非特異核酸序列互相干擾的情況。操作簡單，檢測時間短。由于本發明小分子探針的檢測方法實際上只需要將小分子探針和帶檢測的樣品簡單混合放置后，然后測量熒光信號的變化。除去檢測步驟，其他步驟操作簡單、方便，耗時短，無需復雜儀器及特別技巧，尤其是該方法可以利用未經精度提純的待測樣品直接檢測這樣極大地方便了檢測操作，節省了試劑使用并加快了檢測進程，可以推廣進行實際的產業應用。檢測分子種類多，本發明的納米金(AuNPs)探針，探針結合適配體技術，該探針將熒光基團標記的適配體及其巰基修飾的互補序列共組裝到納米金表面，可以在均相體系中檢測多種小分子，該策略為快速檢測多種小分子提供一種潛在的方法。產品質量穩定，儲存條件要求不高。適配體比蛋白抗體更穩定,不易變性,容易長時間保存，這造成產品的有效期將大大延長。
下面結合附圖及實施例對本發明作進一步描述
圖I為基于納米金和適配體的小分子探針的設計以及檢測原理示意圖。
圖2A為本發明小分子探針對腺苷A檢測結果及空白對照；圖2B為本發明小分子探針對腺苷A及類似物腺苷(T，G, C)檢測的信號對比。圖3A為本發明小分子探針對鉀離子K+檢測結果及空白對照；圖38為本發明小分子探針對鉀離子K+及類似物離子(Li，Na)檢測的信號對比。
圖4A為本發明小分子探針對可卡因cocaine檢測結果及空白對照；圖4B為本發明小分子探針對可卡因及類似物芽子堿甲酯(ΕΜΕ)、苯甲酸(BE)檢測的信號對比。
具體實施例方式以下結合具體實施例對上述方案做進一步說明。應理解，這些實施例是用于說明本發明而不限于限制本發明的范圍。實施例中采用的實施條件可以根據具體廠家的條件做進一步調整，未注明的實施條件通常為常規實驗中的條件。以下將以舉例形式進行說明，如有未詳盡之處，可以參見常用的實驗手冊，如《分子克隆實驗手冊》以及所用試劑和儀器的廠商說明書。其中，所有化學試劑均采用分析級，實驗用水經Milli-XQ過濾，各試劑均和材料可以商用渠道獲得，腺嘌呤(Α)、鳥嘌呤(G)、胞嘧啶(C)、胸腺嘧啶(T)購自sigma公司，熒光基團標記的適配體以及互補DNA片段購自大連TKARA公司，各種金屬離子購自國藥集團，納米金由本實驗室合成。
實施例實施例I納米金-DNA片段的制備
1.I準備納米金顆粒
納米金的合成，高濃度納米金為檸檬酸還原法制備后用離心法濃縮制得(Hurst, S.J. ; Lytton-Jean, A. K. ; Mirkin, C. A. , Anal Chem 2006, 8313-8. )。4 保存，使用時根據具體需要進行稀釋或濃縮，合成的納米金為13納米。準備三條分別與腺苷、鉀離子以及可卡因適配體互補的巰基修飾的DNA片段，直接從商業渠道獲得。通過金硫鍵將DNA片段組裝到納米金表面得到納米金-DNA片段
將三條分別與腺苷、鉀離子以及可卡因的適配體互補的巰基修飾的DNA以及有利于DNA雜交的巰基修飾的10個T構成的DNA (SH-TlO)和10 nM的納米金混合，核酸體DNA終濃度為I μ M，而SH-TlO的終濃度為2 μ Μ。過夜后加入濃度為O. I M的PBS，pH值為7. 4，采用12000 rpm速度，在4度下離心3次，每次用O. I M的PBS懸浮，去掉未組裝到納米金表面的DNA。實施例2熒光基團標記的核酸適配體及納米金和核酸適配體的小分子探針的制備
2.I準備熒光基團標記的腺苷、鉀離子以及可卡因適配體，直接從商業渠道獲得。能夠標記到DNA上的熒光基團都可以，但是三種不同的熒光基團的激發和發射峰位置需要相差50 nm以上，避免發射光譜的疊加。將熒光基團標記的腺苷、鉀離子以及可卡因的適配體按等摩爾量與實施例I中組裝好DNA片段的納米金溶液混合，在室溫下放置一夜。適配體與上述DNA片段雜交。離心去掉多余的適配體，得到需要的小分子探針。實施例3使用本發明的基于納米金和適配體的小分子探針的檢測取實施例2中制備好的小分子探針，同時加入10 mM的A、100 mM KCl和I mM可卡因，室溫放置I小時，空白對照是等量的去離子水，然后用相應波長激發測量其熒光信號。為了考察該探針的特異性，實驗過程中同時加入各種檢測物的類似物，例如腺苷A的類似物T、C、G，K+的類似物Li+、Na+以及可卡因的類似物芽子堿甲酯(ΕΜΕ)、苯甲酸(BE)，各自濃度與其類似物相同，如圖2- 4所示，可以看到，該探針的選擇性非常好。上述實例只為說明本發明的技術構思及特點，其目的在于讓熟悉此項技術的人是能夠了解本發明的內容并據以實施，并不能以此限制本發明的保護范圍。凡根據本發明精神實質所做的等效變換或修飾，都應涵蓋在本發明的保護范圍之內。權利要求
1.基于納米金和適配體的小分子探針，包括納米金顆粒，以及組裝在納米金顆粒上的一種以上巰基修飾DNA片段，其特征在于，還包括一種以上的熒光基團標記的適配體，且所述一種以上適配體至少部分片段與所述的一種以上巰基修飾DNA組互補雜交。
2.根據權利要求I所述的基于納米金和適配體的小分子探針，其特征在于，所述巰基修飾DNA片段，其3’端為巰基-SH修飾且在該末端有6-10個長度的胸腺嘧啶T作為間隔，其5’端的部分堿基與所述的熒光基團標記的適配體能夠互補雜交。
3.根據權利要求I所述的基于納米金和適配體的小分子探針，其特征在于，所述納米金的粒徑為13納米-15納米。
4.根據權利要求I所述的基于納米金和適配體的小分子探針，其特征在于，所述納米金顆粒與核酸適配體熒光基團的距離控制在2-3納米。
5.根據權利要求I所述的基于納米金和適配體的小分子探針，其特征在于，所述一種以上的熒光基團標記的適配體，其5’端修飾有各不相同的熒光基團，為-ROX，-FAM或 _Cy5。
6.根據權利要求I所述的基于納米金和適配體的小分子探針，其特征在于，所述組裝在納米金顆粒上的巰基修飾DNA片段為3種，與其互補雜交的適配體為3種。
7.根據權利要求1-6任一項所述的基于納米金和適配體的小分子探針，其特征在于，所述小分子探針，包括至少下列一對熒光基團標記的適配體及與其互補雜交的組裝在納米金顆粒上的巰基修飾DNA片段 與腺苷A特異結合的適配體如SEQ ID No. I所示Aa:5’ - AGAGAACCTGGGGGAGTATTGCGGAGGAAGGT-3’，巰基修飾的與腺苷A特異性結合的核酸適配體互補的DNA 片段如 SEQ ID No. 4 所示 Pa: 5’ -CCC AGG TTC TCT TTTTTTTTTT-SH-3’ 與鉀離子K+特異結合的適配體如SEQ ID No. 2所示Ακ:5’ -TCTACGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGGT-3’，巰基修飾的與鉀離子K+特異性結合的核酸適配體互補的 DNA 片段如 SEQ ID No. 5 所示 Pk: 5’ -CTA ACC CGT AGA TTTTTTTTTT-SH-3’ 與可卡因特異結合的適配體如SEQ ID No. 3所示A。: 5’- AAGTGGGGAGACAAGGATAAATCCTTCAATGAAGTGGGTCTCCC-3’，巰基修飾的與可卡因特異性結合的核酸適體互補的DNA片段如 SEQ ID No. 6 所示 Pc: 5，-TTG TCT CCC CAC TTTTTTTTTTTT-SH-3’ ； 上述的三種適配體的5’端連接有-ROX，-FAM或-Cy5熒光基因中的一種，且各個適配體的熒光基因各不相同。
8.制備權利要求1-7所述的基于納米金和核酸適配體的小分子探針的方法，其特征在于，包括以下步驟 (1)準備與核酸適配體互補的巰基修飾的DNA片段及納米金顆粒，還加入了為核酸適配體I. 5-2. 5倍摩爾濃度的10個胸腺嘧啶T，通過金硫鍵將DNA片段組裝到納米金表面得到納米金-DNA片段； (2)準備熒光基團標記的核酸適配體，將等摩爾量的核酸適配體與步驟(I)制備的納米金-DNA片段混合得到所述基于納米金和核酸適配體的小分子探針。
9.根據權利要求8所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(I)為將一定量的巰基修飾的DNA和納米金混合，得到納米金-DNA片段，過夜后加入一定濃度的PBS，離心去掉未組裝到納米金表面的DNA片段。
10.根據權利要求8所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)加入的胸腺嘧啶T為核酸適配體2倍摩爾濃度的胸腺嘧啶。
11.根據權利要求8所述的制備方法，其特征在于，所述納米金的粒徑為13納米-15納米。
12.根據權利要求8所述的制備方法，其特征在于，在最終的納米金-DNA片段混合溶液中，巰基修飾的DNA : 10個胸腺嘧啶T :納米金的濃度為1:2: 10000。
13.一種基于納米金和適配體的小分子探針的試劑盒，所述試劑盒，包括納米金顆粒，還包括組裝在納米金顆粒上的一種以上巰基修飾DNA片段，一種以上的熒光基團標記的適配體，且所述一種以上適配體至少部分片段與所述的一種以上巰基修飾DNA組互補雜交。
14.根據權利要求13所述的試劑盒，其特征在于，所述巰基修飾DNA片段，其3’端為巰基-SH修飾且在該末端有6-10個長度的胸腺嘧啶T作為間隔，其5’端的部分堿基與所述的突光基團標記的適配體能夠互補雜交。
15.根據權利要求13所述的試劑盒，其特征在于，所述納米金的粒徑為13納米-15納米。
16.根據權利要求13所述的試劑盒，其特征在于，所述一種以上的熒光基團標記的適配體，其5’端修飾有不同的熒光基團，為-ROX，-FAM或-Cy5。
17.根據權利要求13所述的試劑盒，其特征在于，包括至少下列一對熒光基團標記的適配體及與其互補雜交的組裝在納米金顆粒上的巰基修飾DNA片段 與腺苷A特異結合的適配體如SEQ ID No. I所示Aa:5’ -ROX-AGAGAACCTGGGGGAGTATTGCGGAGGAAGGT-3’，巰基修飾的與腺苷A特異性結合的核酸適配體互補的DNA 片段如 SEQ ID No. 4 所示 Pa: 5’ -CCC AGG TTC TCT TTTTTTTTTT-SH-3’ 與鉀離子K+特異結合的適配體如SEQ ID No. 2所示Ak: 5’-FAM-TCTACGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGGT-3’，巰基修飾的與鉀離子K+特異性結合的核酸適配體互補的DNA片段如SEQ IDNo. 5 所示 Pk: 5，-CTA ACC CGT AGA TTTTTTTTTT-SH-3’ 與可卡因特異結合的適配體如SEQ ID No. 3所示Ae:5’ _Cy5_AAGTGGGGAGACAAGGATAAATCCTTCAATGAAGTGGGTCTCCC-3’，巰基修飾的與可卡因特異性結合的核酸適體互補的DNA片段如 SEQ ID No. 6 所示 Pc: 5，-TTG TCT CCC CAC TTTTTTTTTTTT-SH-3’。
18.基于納米金和適配體的小分子探針的使用方法，其特征在于，將所述小分子探針加入待測溶液，室溫放置1-24小時然后測量熒光信號的變化。
全文摘要
本發明公開了基于納米金和適配體的小分子探針及其制備方法，本發明的小分子探針包括納米金顆粒，以及組裝在納米金顆粒上的一種以上巰基修飾DNA片段，還包括一種以上的熒光基團標記的適配體，且所述一種以上適配體至少部分片段與所述的一種以上巰基修飾DNA組互補雜交。本發明的小分子探針檢測時間短，操作簡單，特異性強、重復性好、準確率高，有效減少了假陽性結果。由于本發明采用適配體技術，具有相對較高的檢測靈敏度，而且能同時檢測多種分子。
文檔編號C12N15/11GK102676508SQ20121011811
公開日2012年9月19日 申請日期2012年4月20日 優先權日2012年4月20日
發明者宋世平, 樊春海, 黃慶 申請人:華森新科(蘇州)納米技術有限公司