專利名稱：枯草芽孢桿菌及其分離培養方法
技術領域：
本發明涉及細菌及細菌的分離培養方法，具體涉及一種枯草芽孢桿菌及其分離培養方法。
背景技術：
芝麻香型白酒以糧食為原料，大曲、麩曲等為糖化發酵劑，利用自然界微生物開放式發酵，霉菌、酵母、細菌協同作用，融入醬香堆積工藝，形成具有獨特風格的白酒，一般芝麻香型白酒麩曲采用細菌、酵母、霉菌等多菌種純培養后混合應用于釀酒生產，由實際生產可知，微生物菌種的性能對芝麻香型酒的品質具有重要的影響。
發明內容
本發明的目的在于提供一種枯草芽孢桿菌及其分離培養方法，通過該分離培養方法獲得耐高溫、產吡嗪類化合物能力較好、適應能力強的枯草芽孢桿菌，提高芝麻香酒品
質和產量。本發明的技術解決方案是該枯草芽孢桿菌B3 Bacillus subtilis菌株是從高溫曲中分離篩選得到的，已于2011年11月29日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，菌種編號為=CGMCC No. 5512。其中，該枯草芽孢桿菌的分離培養方法包括以下步驟取今世緣生物工程公司培養制作的高溫曲樣品IOg接種于IOOmL芽孢桿菌富集培養基中，35°C培養18 24小時，得菌懸液；將上述菌懸液置于80°C水浴中加熱10 20分鐘以殺死不能形成芽孢的菌體；隨后將加熱處理過的菌懸液稀釋10 —3、10 —4、10 —5，每個稀釋梯度的樣品取ImL加入直徑為90mm無菌培養皿中，倒入融化保溫的芽孢桿菌分離培養基25 mL中混合，待凝固后倒置于50-60 °C培養箱培養24 48小時；挑取培養皿內形態規則的菌落,在芽孢桿菌分離培養基上劃線培養，進行多次反復的分離純化，獲得單個純種菌落，鏡檢確定為桿狀細菌后采用16S rDNA序列同源性分析，篩選出枯草芽孢桿菌，保藏于營養瓊脂斜面備用；經菌種鑒定后取活力較強菌株命名為B3。其中，芽孢桿菌富集培養基蛋白胨10g，KH2PO4 1.5g，酵母膏3g，Na2HPO4 2g，淀粉 3g，MgS04.7H20 O. lg, H2O 1000 mL, pH7. 8 121°C，15 分鐘。其中，芽孢桿菌分離培養基由芽孢桿菌富集培養基與7°Bx麥芽汁培養基，溶化后以1:1的質量混勻而成。本發明從高溫曲中分離篩選得到枯草芽孢桿菌，枯草芽孢桿菌的耐溫性能較好，60°C仍能夠保持良好的性能，而且具有較好的產吡嗪化合物的能力，采用該菌種生產的麩 曲用于芝麻香型白酒生產能提高自產酒的優質品率。
具體實施例方式下面結合具體實施例進一步說明本發明的技術解決方案，實施例只是用于理解技術方案，而不能理 解為是對技術解決方案的限制。實施例I :依以下步驟分離培養枯草芽孢桿菌
取今世緣生物工程公司培養制作的高溫曲樣品IOg接種于IOOmL芽孢桿菌富集培養基中，35°C培養18小時，得菌懸液；將上述菌懸液置于80°C水浴中加熱10分鐘以殺死不能形成芽孢的菌體；隨后將加熱處理過的菌懸液適當稀釋10 —3、10 —4、10 —5，每個稀釋梯度的樣品取ImL加入直徑為90mm無菌培養皿中，倒入融化保溫的芽孢桿菌分離培養基25 mL中混合，待凝固后倒置于50°C培養箱培養48小時；挑取培養皿內形態規則的菌落,在芽孢桿菌分離培養基上劃線培養，進行多次反復的分離純化，獲得單個純種菌落，鏡檢確定為桿狀細菌后采用16S rDNA序列同源性分析，篩選出枯草芽孢桿菌，保藏于營養瓊脂斜面備用；經菌種鑒定后取活力較強菌株命名為B3 ;其中，芽孢桿菌富集培養基蛋白胨10g，KH2PO41.5g，酵母膏 3g, Na2HPO4 2g，淀粉 3g，MgS04.7H20 0. lg, H2O 1000 mL, pH7. 8 121。。，15 分鐘；其中，芽孢桿菌分離培養基由芽孢桿菌富集培養基與7°Bx麥芽汁培養基，溶化后以1:1的質量混勻而成。實施例2 :依以下步驟分離培養枯草芽孢桿菌
取今世緣生物工程公司培養制作的高溫曲樣品IOg接種于IOOmL芽孢桿菌富集培養基中，35°C培養21小時，得菌懸液；將上述菌懸液置于80°C水浴中加熱15分鐘以殺死不能形成芽孢的菌體；隨后將加熱處理過的菌懸液適當稀釋10 —3、10 —4、10 —5，每個稀釋梯度的樣品取ImL加入直徑為90mm無菌培養皿中，倒入融化保溫的芽孢桿菌分離培養基25 mL中混合，待凝固后倒置于55°C培養箱培養36小時；挑取培養皿內形態規則的菌落,在芽孢桿菌分離培養基上劃線培養，進行多次反復的分離純化，獲得單個純種菌落，鏡檢確定為桿狀細菌后采用16S rDNA序列同源性分析，篩選出枯草芽孢桿菌，保藏于營養瓊脂斜面備用；經菌種鑒定后取活力較強菌株命名為B3 ;其中，芽孢桿菌富集培養基蛋白胨10g，KH2PO41.5g，酵母膏 3g, Na2HPO4 2g，淀粉 3g，MgS04.7H20 0. lg, H2O 1000 mL, pH7. 8 121。。，15 分鐘；其中，芽孢桿菌分離培養基由芽孢桿菌富集培養基與7°Bx麥芽汁培養基，溶化后以1:1的質量混勻而成。實施例3 :依以下步驟分離培養枯草芽孢桿菌
取今世緣生物工程公司培養制作的高溫曲樣品IOg接種于IOOmL芽孢桿菌富集培養基中，35°C培養24小時，得菌懸液；將上述菌懸液置于80°C水浴中加熱20分鐘以殺死不能形成芽孢的菌體；隨后將加熱處理過的菌懸液適當稀釋10 —3、10 —4、10 —5，每個稀釋梯度的樣品取ImL加入直徑為90mm無菌培養皿中，倒入融化保溫的芽孢桿菌分離培養基25 mL中混合，待凝固后倒置于60°C培養箱培養24小時；挑取培養皿內形態規則的菌落,在芽孢桿菌分離培養基上劃線培養，進行多次反復的分離純化，獲得單個純種菌落，鏡檢確定為桿狀細菌后采用16S rDNA序列同源性分析，篩選出枯草芽孢桿菌，保藏于營養瓊脂斜面備用；經菌種鑒定后取活力較強菌株命名為B3 ;其中，芽孢桿菌富集培養基蛋白胨10g，KH2PO41.5g，酵母膏 3g, Na2HPO4 2g，淀粉 3g，MgS04.7H20 0. lg, H2O 1000 mL, pH7. 8 121。。，15 分鐘；其中，芽孢桿菌分離培養基由芽孢桿菌富集培養基與7°Bx麥芽汁培養基，溶化后以1:1的質量混勻而成。比較例4 :菌種優化對比試驗
將實施例2的菌株(B3)與實驗室保藏的四株枯草芽孢桿菌(B1、B12、B13、B16)分別接入到麩皮培養基中，接種量為1%，于60°C培養48h，測定其吡嗪類化合物含量，如表I所示， 表I不同菌株的固態培養產物中吡嗪類化合物的含量
權利要求
1.枯草芽孢桿菌，其特征是該枯草芽孢桿菌B3Bacillus subtilis菌株是從今世緣生物工程公司培養制作的高溫曲中分離篩選得到的，已于2011年11月29日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，菌種編號為=CGMCC No. 5512。
2.枯草芽孢桿菌的分離培養方法，其特征是該枯草芽孢桿菌的分離培養方法包括以下步驟取今世緣生物工程公司培養制作的高溫曲樣品IOg接種于IOOmL芽孢桿菌富集培養基中，35°C培養18 24小時，得菌懸液；將上述菌懸液置于80°C水浴中加熱10 20分鐘以殺死不能形成芽孢的菌體；隨后將加熱處理過的 菌懸液稀釋10 —3、10 —4、10 —5，每個稀釋梯度的樣品取ImL加入直徑為90mm無菌培養皿中，倒入融化保溫的芽孢桿菌分離培養基25mL中混合，待凝固后倒置于50-60°C培養箱培養24 48小時；挑取培養皿內形態規則的菌落，在芽孢桿菌分離培養基上劃線培養，進行多次反復的分離純化，獲得單個純種菌落，鏡檢確定為桿狀細菌后采用16S rDNA序列同源性分析，篩選出枯草芽孢桿菌， 保藏于營養瓊脂斜面備用；經菌種鑒定后取活力較強菌株命名為B3 ;其中，芽孢桿菌富集培養基蛋白胨10g, KH2PO4 1.5g，酵母膏 3g, Na2HPO4 2g，淀粉 3g，MgSO4.7H20 O. lg, H2O 1000 mL，ρΗ7· 8121°C，15分鐘；其中，芽孢桿菌分離培養基由芽孢桿菌富集培養基與7°Bx麥芽汁培養基，溶化后以1:1的質量混勻而成。
全文摘要
本發明涉及一種枯草芽孢桿菌及其分離培養方法，從今世緣生物工程公司培養制作的高溫曲中分離得到枯草芽孢桿菌，該菌種經性能對比試驗，具有耐高溫、產吡嗪類化合物能力較好、適應能力強、易培養等特點，能夠提高芝麻香酒品質和產量。
文檔編號C12R1/125GK102618474SQ20121010136
公開日2012年8月1日 申請日期2012年4月10日 優先權日2012年4月10日
發明者吳建峰, 孫瑩, 季方, 楊艷 申請人:江蘇今世緣酒業股份有限公司