專利名稱：一種燕麥肽的酶法提取方法
技術領域：
本發明涉及一種燕麥肽及其提取方法與應用，特別涉及一種燕麥肽及其提取方法與其在制備抑制ACE活性和降血壓的食品或藥物中的應用。屬于酶法提取燕麥肽技術領域。
背景技術：
燕麥，禾本科燕麥屬，一年生或多年生草本植物。燕麥營養價值豐富而全面，其蛋白質、脂肪、維生素E、膳食纖維以及鈣、鎂、鐵、磷等礦物元素含量均高于其它谷類作物，具有降血脂、降低膽固醇、降血壓、降血糖和抗氧化性等多種生物活性功能。血管緊張素轉化酶(Angiotensin-I-convertingenenzyme, ACE,EC 3. 4. 15. I)是一種含鋅二肽羧酶，廣泛分布于哺乳動物組織中并對其血壓調節起著關鍵性的作用。ACE在人體腎素-血管緊張素系統(Renin angiotensin system, RAS)和激肽-激肽生成酶系統 (Kallikerni-kinin system,KKS)中，對血壓調節起著重要的作用。因此通過抑制體內ACE 活性來達到治療高血壓的目的是一條非常重要的途徑。近年來，一些具有特定生理活性的短肽，如ACE抑制肽、阿片肽、免疫調節肽等引起了人們的極大關注，這些肽具有安全性高、無副作用、來源廣泛等優點。植物蛋白以其不可替代的優點成為人們研究活性肽的主要來源。燕麥降壓肽即是從燕麥蛋白中得到的一種活性多肽。燕麥麩皮是燕麥加工過程中的副產物，其中蛋白質含量很高，目前國內外對燕麥麩皮的研究主要集中在膳食纖維方面，對燕麥麩皮蛋白的利用很少。
發明內容
本發明的目的是提供一種燕麥肽的酶法提取方法及其應用。本發明的技術方案所提供的燕麥肽的酶法提取方法，以燕麥麩皮為原料采用酶法提取燕麥肽，包括如下步驟
(1)預處理將燕麥麩皮粉碎過60-100目篩,燕麥麩皮與水混合,燕麥麩皮水的重量比為I : 10-1 20，調節pH為8. 0-9. 5，在溫度為50-60°C條件下，進行攪拌預處理，預處理時間為30-50min ；
(2)酶處理在經過步驟(I)預處理后的液體中加入堿性蛋白酶，堿性蛋白酶的添加量為20-50mL/kg燕麥麩皮，在45-55 °C下攪拌處理2_5小時；
然后，加入風味蛋白酶，風味蛋白酶的添加量為50-70mL/Kg燕麥麩皮，在50_60°C下攪拌處理1-2小時；
(3)純化將步驟(2)酶處理后的液體離心取上清液，在上清液中加入β-葡聚糖酶和真菌淀粉酶反應2-4小時，β -葡聚糖酶的用量為30-50mL/Kg燕麥麩皮，真菌淀粉酶的用量為60-80ml/Kg燕麥麩皮，過濾得到澄清液體；將所述澄清液體加入到以CBE313ADS17大孔吸附樹脂為填料的吸附柱中，然后用去離子水沖洗至洗脫液中沒有糖分和鹽分，最后用體積濃度60%-75%乙醇溶液洗脫，得到含燕麥肽的溶液；
3(4)制干粉將含燕麥肽溶液旋轉蒸發濃縮至一半體積，噴射干燥得到燕麥肽干粉。所述步驟(2)中，所述堿性蛋白酶的添加量優選為40mL/Kg燕麥麩皮；所述風味蛋白酶的添加量優選為60mL/Kg燕麥麩皮。所述堿性蛋白酶和所述風味蛋白酶為諾維信公司產品。所述步驟(3)中，所述過濾得到澄清液體，過濾的濾徑為O. 5-0. 8 μ m。所述步驟(3)中，所述澄清液體優選按照CBE313ADS17大孔吸附樹脂的2倍體積加入到吸附柱中；所述乙醇溶液洗脫的體積優選為吸附柱體積的2倍。用所述方法制備的燕麥肽的應用，其在制備抑制ACE活性和降血壓的食品或藥物中的應用。本發明的有益效果本發明的方法將燕麥麩皮用酶法降解燕麥麩皮蛋白成為燕麥肽，通過板框過濾、樹脂吸附等手段將其分離提純，所得燕麥肽89%的分子量在1500Da以下，具有抑制ACE的活性，可以廣泛應用于降壓保健食品或制備降壓藥物等領域。
具體實施例方式下面結合具體實例對本發明做詳細說明。下述實施例中的實驗方法，如無特殊說明，均為常規方法。實施例I、燕麥肽的制備一、燕麥肽的制備
具體步驟如下
I、燕麥麩皮預處理
燕麥麩皮粉碎至60-100目，凱氏定氮法測定其中蛋白含量可達25%。將80g步驟I所述60-100目的燕麥麩皮與去離子水按重量比I : 10混合，調pH值到9.0，在55°C水浴中攪拌處理時間為40min。2、酶處理
預處理后測定液體pH值至8. 0-8. 5，加入堿性蛋白酶(諾維信Alcalase2. 4L)，添加量為20mL/kg燕麥麩皮。在溫度55°C條件下，繼續攪拌2小時；然后加入風味蛋白酶(諾維信FlavourzymelOOOL)，添加量為50mL/Kg燕麥麩皮，在55°C繼續攪拌2小時。3、將步驟2酶解后的液體在4000rpm下離心10分鐘取上清液，在上清液中加入 β -葡聚糖酶(購自湖南尤特爾生化，添加量為50mL/Kg燕麥麩皮)，真菌淀粉酶(購自江蘇博立生物制品有限公司，添加量為80mL/Kg燕麥麩皮)反應3小時，利用板框過濾機(濾徑為O. 5-0. 8 μ m)過濾，加入硅藻土助濾，得到棕色澄清液體。4、將步驟3得到的澄清液體按照2 I倍體積加入到裝有CBE313ADS17吸附樹脂的吸附柱中，用去離子水沖洗至洗脫液沒有糖分和鹽分。再用75% (體積百分含量)的乙醇水溶液洗脫，接收洗脫液體積為柱體積的2倍。旋轉蒸發濃縮至一半體積，噴射干燥得 IOg燕麥肽。二、燕麥肽的分子量分析
將步驟一獲得的燕麥肽進行相對分子量分布測定，采用HPLC法，測定色譜條件安捷侖高效液相色譜儀1100 ;色譜柱TSKgel2000 SffXL體積排阻色譜柱(300mmX7. 8mm);流動相:乙腈/冰醋酸/三氟乙酸:45/55/0. I (v/v/v);檢測UV 220nm ;流速:0. 5mL/min ;柱溫30°C。結果表明95%的多肽分子量在1500Da以下，是較好的ACE抑制肽源。實施例2、燕麥肽的制備一、燕麥肽的制備
提取燕麥肽的工藝流程具體步驟如下
I、燕麥麩皮處理
為了獲得更多燕麥肽，選用60-100目燕麥麩皮，凱氏定氮法測定其中蛋白含量可達
25%。將50Kg所述60-100目的燕麥麩皮與去離子水按重量比I : 15混合，調pH值到
8.5，在55°C水浴中攪拌處理時間為30min。2、酶處理
預處理后測定液體pH值至8. 0-8. 5，加入堿性蛋白酶(諾維信Alcalase2. 4L)，添加量為20-50mL/kg燕麥麩皮。在溫度55°C條件下，繼續攪拌3小時；然后加入風味蛋白酶(諾維信FlavourzymelOOOL)，添加量為50_70mL/Kg燕麥麩皮，在55°C繼續攪拌I小時。3、將步驟2酶解后的液體在4000rpm下離心10分鐘取上清液，在上清液中加入 β -葡聚糖酶(購自湖南尤特爾生化，添加量為30-50mL/Kg燕麥麩皮)，真菌淀粉酶(購自江蘇博立生物制品有限公司，添加量為60-80mL/Kg燕麥麩皮)反應4小時，利用板框過濾機(濾徑為O. 5-0. 8 μ m)過濾，加入硅藻土助濾，得到棕色澄清液體。4、將步驟3得到的澄清液體按照2 I倍體積加入到裝有CBE313ADS17吸附樹脂的吸附柱中，用去離子水沖洗至洗脫液沒有糖分和鹽分。再用75% (體積百分含量)的乙醇水溶液洗脫，接收洗脫液體積為柱體積的2倍。旋轉蒸發濃縮至一半體積，噴射干燥得
6.5Kg燕麥肽。二、燕麥肽的分子量分析
將步驟一獲得的燕麥肽進行相對分子量分布測定，采用HPLC法，測定色譜條件安捷侖高效液相色譜儀1100 ;色譜柱TSKgel2000 SffXL體積排阻色譜柱(300mmX7. 8mm);流動相:乙腈/冰醋酸/三氟乙酸:45/55/0. I (v/v/v);檢測UV 220nm ;流速:0. 5mL/min ;柱溫30°C。結果表明88%的多肽分子量在1500Da以下，是較好的ACE抑制肽源。
權利要求
1.一種燕麥肽的酶法提取方法，其特征在于以燕麥麩皮為原料米用酶法提取燕麥肽， 步驟如下(1)預處理將燕麥麩皮粉碎過60-100目篩,燕麥麩皮與水混合,燕麥麩皮水的重量比為I : 10-1 20，調節pH為8-9. 5，在溫度為50-60°C條件下，進行攪拌預處理，預處理時間為30-50min ；(2)酶處理在經過步驟(I)預處理后的液體中加入堿性蛋白酶，堿性蛋白酶的添加量為20-50mL/kg燕麥麩皮，在45-55 °C下攪拌處理2_5小時；然后，加入風味蛋白酶，風味蛋白酶的添加量為50-70mL/Kg燕麥麩皮，在50_60°C下攪拌處理1-2小時；(3)純化將步驟(2)酶處理后的液體離心取上清液，在上清液中加入β-葡聚糖酶，真菌淀粉酶反應2-4小時，β -葡聚糖酶的用量為30-50mL/Kg燕麥麩皮，真菌淀粉酶的用量為60-80mL/Kg燕麥麩皮，過濾得到澄清液體；將所述澄清液體加入到以CBE313ADS17大孔吸附樹脂為填料的吸附柱中，然后用去離子水沖洗至洗脫液中沒有糖分和鹽分，最后用體積濃度60%-75%乙醇溶液洗脫，得到含燕麥肽的溶液；(4)制干粉將含燕麥肽溶液旋轉蒸發濃縮至一半體積，噴射干燥得到燕麥肽干粉。
2.根據權利要求I所述的方法，其特征在于步驟(2)中，所述堿性蛋白酶的添加量優選為40mL/Kg燕麥麩皮；所述風味蛋白酶的添加量優選為60mL/Kg燕麥麩皮。
3.根據權利要求I所述的方法，其特征在于所述步驟(3)中，所述過濾得到澄清液體， 過濾的濾徑為O. 5-0. 8 μ m。
4.根據權利要求I所述的方法，其特征在于所述步驟(3)中，所述澄清液體優選按照 CBE313ADS17大孔吸附樹脂的2倍體積加入到吸附柱中；所述乙醇溶液洗脫的體積優選為吸附柱體積的2倍。
5.用權利要求I所述方法制備的燕麥肽的應用，其特征在于其在制備抑制ACE活性和降血壓的食品或藥物中的應用。
全文摘要
本發明公開了一種燕麥肽的酶法提取方法，屬于酶法提取燕麥肽技術領域。該燕麥肽的制備方法，包括如下步驟(1)將燕麥麩皮與水混合，調節pH為8.0-9.5，在溫度為50-60℃條件下攪拌預處理；(2)在預處理后的液體中加入堿性蛋白酶，在45-55℃下攪拌處理2-5小時；然后，加入風味蛋白酶，在50-60℃下攪拌處理1-2小時；(3)將酶解后的液體離心取上清液，在上清液中加入β-葡聚糖酶和真菌淀粉酶反應2-4小時，過濾得到澄清液體；將澄清液體用大孔吸附樹脂吸附純化得到含燕麥肽的溶液。該燕麥肽具有抑制ACE酶的活性，可以廣泛應用于降壓保健食品等領域。本發明方法操作簡單，具有較高的純度和得率。
文檔編號C12P21/06GK102605030SQ201210077339
公開日2012年7月25日 申請日期2012年3月22日 優先權日2012年3月22日
發明者鄒聯, 郁磊, 陶丁偉 申請人:無錫德冠生物科技有限公司