專利名稱：一種三糖鐵瓊脂培養基及制備方法
技術領域：
本發明涉及一種三糖鐵瓊脂培養基及制備方法。
背景技術：
目前三糖鐵瓊脂培養基只能觀察細菌對乳糖、葡萄糖、蔗糖利用及是否產生硫化氫的情況，初步判斷細菌的類屬；由于不分層，也不能觀察細菌動力。隨著生物研究的進展， 國內外對細菌鑒別的研究也在不斷的發展中。本發明用以鑒定腸桿菌科細菌。利用生化反應試驗鑒別細菌的種類，其關鍵在于準確、快速、簡便。由于不同細菌具有其各自的獨特酶系統，因而在代謝過程中所產生的分解和合成的代謝產物也不同，這些分解或合成的代謝產物又各具有不同的生化特點，再利用其不同生化特點在相應的培養條件下所產生的生化反應，來進行細菌種類的鑒別，這是目前微生物實驗室最常用的手段。生物工作者一直希望能有一種能克服上述不足的鑒別培養基一一三糖鐵瓊脂培養基。
發明內容
本發明的目的在于提供一種能克服已有鑒別培養基不足的三糖鐵瓊脂培養基。與其它同類培養基相比具備下列特點培養基分上下層，上層加入蛋白胨、氯化鈉、瓊脂(固體)、乳糖、葡萄糖、硫酸亞鐵、硫代硫酸鈉、酚紅、尿素、玫瑰紅酸；下層加入蛋白胨、氯化鈉、瓊脂(半固體)、甘露醇、中國藍進行配方，提供一種既能觀察細菌是否產生硫化氫及對糖的發酵能力，又能觀察細菌是否有動力及分解尿素、甘露醇的情況。為實現上述目的，本發明選擇合適地組分，并進行合理混配，經加溫、溶解、混合、 冷卻、分裝、高溫滅菌等工藝而成一種三糖鐵瓊脂培養基。本發明選擇的配方如下上層蛋白胨5. 0-8. 0g、氯化鈉2. 3-2. 5g、瓊脂 5. 0-6. Og (固體)、乳糖5. 0-6. 0g、葡萄糖0. 05-0. lg、硫酸亞鐵0. l_02g、硫代硫酸鈉 0. 1-0. 15g、尿素 8. 0-10. Og,0. 4%酚紅 2. 5-3. 0ml、l%玫瑰紅酸 2. 3-2. 6ml、蒸餾水 500ml。 下層蛋白胨0. 3-0. 6g、氯化鈉1. 3-1. 5g、瓊脂0. 6-1. 5g(半固體)、甘露醇0. 5-1. OgU% 中國藍1. 5-2. 0ml、蒸餾水300ml。蛋白胨提供細菌氮源；氯化鈉維持均衡的滲透壓；瓊脂是培養基中的支持成分； 硫酸亞鐵能與細菌分解蛋白質產生硫化氫化合，形成黑色硫化鐵；硫代硫酸鈉能防止硫化氫被氧化，而影響硫化鐵的形成；酚紅為指示劑；尿素若細菌產生尿素酶分解尿素生成碳酸銨，碳酸銨進一步分解成氨和二氧化碳使培養基呈堿性，酚紅指示劑呈現紅色；玫瑰紅酸能抑制革蘭陽性細菌生長；中國藍為指示劑；乳糖、葡萄糖、甘露醇除提供細菌作為碳源夕卜，主要是用來鑒別細菌；細菌對乳糖、葡萄糖、甘露醇分解能力各異，有的細菌能分解某些糖類而產酸產氣，有的只產酸，有的不分解，因此可根據各種細菌對糖類分解能力不同來鑒定細菌的種屬。細菌分解糖類產酸可使培養基內的指示劑呈酸性反應，在下層的半固體內可觀察細菌是否有動力。本發明產品的制備方法是
(1)上層a將蛋白胨、氯化鈉、瓊脂按比例加入蒸餾水中，熱熔，調PH7. 2 ；b加入乳糖、葡萄糖、硫酸亞鐵、硫代硫酸鈉、酚紅，壓力蒸汽滅菌113°C 15分鐘；c再加入尿素、玫瑰紅酸(2)下層a將蛋白胨、氯化鈉、瓊脂按比例加入蒸餾水熱熔，調PH7. 6 ；b加入甘露醇、中國藍，分裝試管、高壓113°C 15分鐘，冷卻后加高壓過的上層。注明先將稱量用具和分液燒瓶高壓滅菌。中國藍為指示劑，其水溶液應隔水煮沸無菌后使用。玫瑰紅酸是乙醇溶液，無需滅菌，但加時應避開火焰，以免燃燒。本發明具有以下優點1、三糖鐵瓊脂上下分層，便于觀察；2、上層除能觀察細菌是否產生硫化氫及對糖的發酵能力，還能觀察細菌是否分解尿素情況；3、下層使用的半固體瓊脂可觀察細菌是否有動力，同時還可觀察細菌是否分解甘露醇，可代替單純的甘露醇管；4、實現了一管代替多個生化反應管的作用；5、同時接種一支三糖鐵管和一支蛋白胨水管，18-M小時可鑒定某些細菌到種，如大腸埃希菌、克雷伯菌、變形桿菌等，大大縮短細菌鑒定時間。
具體實施例方式下面結合實施例對本發明作進一步的詳細說明按照下表所列數據及其所述步驟進行配制配方一上層蛋白胨5. 0-8. Og氯化鈉2.3-2. 5g瓊脂5. 0-6. Og (固體)蒸餾水500ml熱熔，調PH7. 2 (40 % NaOH 約 4 滴)，加入乳糖5. 0-6. Og葡萄糖0. 05-0. Ig硫酸亞鐵0. 1-0. 2g硫代硫酸鈉0. 1-0. 15g0. 4%酚紅 2. 5-3. 0ml, 113°C 15 分鐘，加入尿素8-10g1 % 玫瑰紅酸 2.3-2. 6ml下層蛋白胨0.3-0. 6g氯化鈉1.3-1. 5g瓊脂0.6-1. 5g (半固體)蒸餾水300ml熱熔，調PH7. 6 (40 % NaOH約1滴)，加入甘露醇 0. 5-1. Og中國藍 1. 5-2. Oml分裝試管、高壓113°C 15分鐘，冷卻后加高壓過的上層。配方二上層蛋白胨5. Og
氯化鈉2. 5g瓊脂5. Og (固體)蒸溜水500ml熱熔，調PH7. 2 (40 % NaOH 約 4 滴)，加入乳糖5. Og葡萄糖0. 05g硫酸亞鐵0. 18g硫代硫酸鈉0. Ig0. 4%酚紅 3. 0ml，113°C 15 分鐘，加入尿素10. Og玫瑰紅酸 2.5ml下層蛋白胨0.6g氯化鈉l.5g瓊脂1.05g (半固體)蒸餾300ml 熱熔，調 PH7. 6 (40 % NaOH 約 1 滴)，加入甘露醇0. 6g中國藍 1.8ml分裝試管、高壓113°C 15分鐘，冷卻后加高壓過的上層。配方三上層蛋白胨6. Og氯化鈉2. 4g瓊脂5. Og (固體)蒸餾水500ml熱熔，調PH7. 2 (40 % NaOH 約 4 滴)，加入乳糖6. Og葡萄糖0. 06g硫酸亞鐵0. 2g硫代硫酸鈉0. 12g0.4%酚紅 2.8ml，113°C 15 分鐘，加入尿素9. Og玫瑰紅酸 2.4ml下層蛋白胨0.6g氯化鈉1.4g瓊脂1. Ig(半固體)蒸餾300ml 熱熔，調 PH7. 6 (40 % NaOH 約 1 滴)，加入甘露醇0. 8g中國藍 1.9ml分裝試管、高壓113°C 15分鐘，冷卻后加高壓過的上層。配方四
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上層蛋白胨5. 5g氯化鈉2. 5g瓊脂5.5g (固體)蒸餾水500ml熱熔，調PH7 · 2 (40 % NaOH 約 4 滴)，加入乳糖5. 5g葡萄糖0. 06g硫酸亞鐵0. 19g硫代硫酸鈉0. 12g0.4%酚紅 3.0ml，113°C 15 分鐘，加入尿素8. Og玫瑰紅酸 2.6ml下層蛋白胨0.5g氯化鈉1.5g瓊脂1. Og(半固體)蒸餾300ml 熱熔，調 PH7. 6 (40 % NaOH 約 1 滴)，加入甘露醇1. Og中國藍 1.6ml分裝試管、高壓113°C 15分鐘，冷卻后加高壓過的上層。
權利要求
1.一種三糖鐵瓊脂培養基，設有上層和下層，其特征在于上層有蛋白胨5. 0-8. 0g、 氯化鈉2. 3-2. 5g、瓊脂5. 0-6. Og(固體)、乳糖5. 0-6. 0g、葡萄糖0. 05-0. lg、硫酸亞鐵 0. l_02g、硫代硫酸鈉 0. 1-0. 15g、尿素 8. 0-10. Og,0. 4 % 酚紅 2. 5-3. 0ml、l % 玫瑰紅酸 2. 3-2. 6ml、蒸餾水500ml，下層有蛋白胨0. 3-0. 6g、氯化鈉1. 3-1. 5g、瓊脂0. 6-1. 5g(半固體)、甘露醇0. 5-1. 0g、1 %中國藍1. 5-2. Oml、蒸餾水300ml。
2.根據權利要求1所述三糖鐵瓊脂培養基的制備方法，其特征在于步驟如下 上層的制備a、將蛋白胨、氯化鈉、瓊脂按比例加入蒸餾水中，熱熔，調PH7. 2 ；b、加入乳糖、葡萄糖、硫酸亞鐵、硫代硫酸鈉、酚紅，壓力蒸汽滅菌113°C15分鐘；c、再加入尿素、玫瑰紅酸。下層的制備a、將蛋白胨、氯化鈉、瓊脂按比例加入蒸餾水熱熔，調PH7. 6 ； b、加入甘露醇、中國藍，分裝試管、高壓113°C 15分鐘。 將下層冷卻后加高壓過的上層。
全文摘要
本發明涉及一種三糖鐵瓊脂培養基及制備方法，其主要成分是上層蛋白胨、氯化鈉、瓊脂、乳糖、葡萄糖、硫酸亞鐵、硫代硫酸鈉、酚紅、尿素、玫瑰紅酸；下層蛋白胨、氯化鈉、瓊脂、甘露醇、中國藍；用以鑒定腸桿菌科細菌。本發明具有以下優點三糖鐵瓊脂上下分層，便于觀察；上層除能觀察細菌是否產生硫化氫及對糖的發酵能力，還能觀察細菌是否分解尿素情況；下層使用的半固體瓊脂可觀察細菌是否有動力，同時還可觀察細菌是否分解甘露醇，可代替單純的甘露醇管；實現了一管代替多個生化反應管的作用；同時接種一支三糖鐵管和一支蛋白胨水管，18-24小時可鑒定某些細菌到種，如大腸埃希菌、克雷伯菌、變形桿菌等，大大縮短細菌鑒定時間。
文檔編號C12R1/22GK102559840SQ20121002543
公開日2012年7月11日 申請日期2012年1月16日 優先權日2012年1月16日
發明者于雅寧, 孫喆, 崔海玲, 李紅, 蘇桂華, 苘元鵬 申請人:蘇桂華