專利名稱：一種多用途細胞冷凍以及凍存后復蘇容器的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種醫療器械，具體的說，本發明涉及一種用于對細胞冷凍、復蘇以及輸液用的容器。
背景技術：
隨著生物學技術的發展，細胞治療正在全世界范圍內快速發展和日益被人們所接受。細胞治療的根本是活細胞的獲取和儲存。此外，細胞的體外培養也已經被廣泛應用到各種生物學研究領域。在體外細胞培養工作中，為了保存細胞，并使其長期具有生物活性， 細胞的凍存與復蘇成為至關重要的環節。而對于細胞的制備和儲存，尤其是干細胞的低溫儲存、復蘇的條件和防止操作過程的污染，是目前細胞治療臨床應用的重要課題。許多國家和地區建立了各種細胞庫，最優化細胞凍存復蘇程序和防止污染已經成為細胞生產和保障細胞質量的前提。細胞凍存與復蘇的基本原則是“慢凍速溶”，這樣可以最大限度地保持細胞活性。 細胞凍存過程中，降溫的速度，直接關系到凍存效果，在特定控制的速度和條件下的“緩慢冰凍”是保護細胞使之不發生嚴重損傷的關鍵因素。作為凍存細胞的方法，已知是添加二甲亞砜等的凍害保護劑在-80至_196°C左右的超低溫下保存。如此低的溫度保存需要在極低溫度下也可使用、進而可殺菌處理、使用簡便的冷凍袋。作為凍存細胞的復蘇方法，已知是將凍存的細胞溶液從液氮到37°C水浴加熱后期，再將細胞液體從袋中倒出，移入另一個容器(例如離心管)進行離心，然后，再加入液體、再次離心；然后在注入輸液袋或注射器中供患者使用。目前臨床中廣泛使用的在液氮中儲存細胞的材料是得到美國FDA批準和中國藥監部門許可的德國美天尼公司(Miltenyi Biotec)的細胞儲存袋；然而使用該細胞儲存袋由于在凍存、復蘇離心各階段需要應用不同的容器，導致暴露于空氣的次數增多，增加了細胞產品被污染的機會。另外，在臨床醫生使用時，還需要再將細胞抽吸于不同的容器中，抽吸的過程既可能被污染，又可能破壞部分細胞。本發明的發明人針對現有技術中存在的諸如復蘇率低、操作過程不統一以及上述的凍存細胞容易受到污染以及破壞的技術問題，通過對細胞凍存后復蘇時的全部過程的仔細研究，設計一種新型的細胞冷凍以及復蘇的容器。
發明內容
解決現有技術中所存在的上述技術問題，本發明的目的在于提供一種多用途細胞冷凍以及凍存后復蘇容器。本發明的細胞冷凍以及復蘇的容器實現了一袋多用的功效，既方便了細胞制備過程也方便了臨床使用，更重要的是大大減少了細胞接觸空氣和被污染的機會，有利于細胞的質量控制和產品的純度。為了實現上述目的，本發明的第一方面涉及一種多用途細胞冷凍以及凍存后復蘇容器，包括凍存袋，空置狀態下具有橢圓形的底部和長方形的上部，其特征在于，凍存袋的橢圓形底部具有加厚層，并且所述凍存袋的袋口還連接有灌洗和輸出通道、細胞輸入管道以及清洗液進入管道。在所述的多用途細胞冷凍以及凍存后復蘇容器中，所述細胞輸入管道以及清洗液進入管道的終端連接有Luer螺栓。在所述的多用途細胞冷凍以及凍存后復蘇容器中，所述的凍存袋由乙烯-醋酸乙烯酯(EVA)、乙烯-甲基丙烯酸酯或直鏈狀低密度聚乙烯制成；優選地，所述的凍存袋由乙烯-醋酸乙烯酯(EVA)制成。在所述的多用途細胞冷凍以及凍存后復蘇容器中，所述的加厚層由乙烯-醋酸乙烯酯(EVA)、乙烯-甲基丙烯酸酯或直鏈狀低密度聚乙烯制成；優選地，所述的加厚層由乙烯-醋酸乙烯酯(EVA)制成。在所述的多用途細胞冷凍以及凍存后復蘇容器中，所述灌洗和輸出通道、細胞輸入管道以及清洗液進入管道由乙烯-醋酸乙烯酯、乙烯-甲基丙烯酸酯或直鏈狀低密度聚乙烯制成；優選地，所述的加厚層由乙烯-醋酸乙烯酯(EVA)制成。在所述的多用途細胞冷凍以及凍存后復蘇容器中，所述凍存袋的厚度為 100-500 μ m ;優選地，所述凍存袋的厚度為150-350 μ m。在所述的多用途細胞冷凍以及凍存后復蘇容器中，所述加厚層的厚度為所述凍存袋厚度的1/3-1/2。在所述的多用途細胞冷凍以及凍存后復蘇容器中，所述加厚層可以采用熱熔粘法進行。例如，可以采用熱輥在凍存袋的一面或兩面上加熱熔融上述樹脂的同時并擠出并加壓而形成加厚層。熱輥的溫度優選為150-250°C。在所述的多用途細胞冷凍以及凍存后復蘇容器中，所述凍存袋還具有標簽袋，用于插入樣本信息的標簽，以確保樣品的正確管理。優選地，所述標簽袋位于所述凍存袋的下部。在所述的多用途細胞冷凍以及凍存后復蘇容器中，所述灌洗和輸出通道采用保護帽封閉；該保護帽為可以扭開的密封結構。保護帽的中間為耐冷橡膠，外加金屬圈保護。保護帽打開后，凍存袋可以與灌洗液裝置連接，細胞清洗完畢后，加入細胞終懸液，蓋回保護帽。應用前，打開金屬圈，如同輸液裝置，醫生用針插入橡膠層，即可以得到細胞懸液。本發明的多用途細胞冷凍以及凍存后復蘇容器，復蘇后的離心步驟中可以兼用作離心袋，當其中盛有細胞懸浮液時，離心狀態下會自然鼓起形成一個類圓錐體，細胞會隨著離心力自然沉降在底部，清洗時，只需把離心后的上清液倒出，清洗數次后，直接加入欲給患者輸入的液體以懸浮細胞，因此冷凍袋又成為直接可供臨床使用的輸液袋。本發明的第二方面，還涉及一種凍存細胞的復蘇方法，其采用本發明的多用途細胞冷凍以及凍存后復蘇容器，將從液氮中取出的多用途細胞冷凍以及凍存后復蘇容器置于 37°C恒溫水浴溶解，并直接進行離心分離。優選地，所述離心過程在500-1000轉/分鐘的條件下進行。本發明具有以下有益的技術效果現有的已經獲得批準在臨床使用的產品，是單純的冷凍袋。功能只是完成細胞的冷凍和儲存過程。復蘇后就必須剪開和倒出細胞，然后棄置。細胞在清洗和使用前需要換數次液體及相應的容器，極大地增加了細胞被丟失、破壞和污染的幾率。本發明的容器綜合了全部的細胞冷凍、復蘇和使用的過程，彌補了原有產品的不足，從設計理念上和便利使用的角度，完善了細胞臨床治療前的處理過程，使細胞質量得到保障，科學合理、經濟適用，從而極大地保障了細胞治療的臨床效果。
圖I :本發明一個實施例的多用途細胞冷凍以及凍存后復蘇容器空置狀態的示意圖。圖2 :本發明一個實施例的多用途細胞冷凍以及凍存后復蘇容器盛有細胞懸液狀態下的示意圖。圖中附圖標記所代表的含義分別為100-凍存袋；10-長方形的上部；20_橢圓形的底部；30_加厚層；40_細胞輸入管道；50_清洗液進入管道；60_灌洗和輸出通道; 70-Luer螺栓；80_標簽；90_輸液掛孔。
具體實施例方式下面將結合附圖和具體的實施例對本發明的技術方案進行詳細描述，但附圖以及具體實施例不作為對本發明專利的限定。實施例I如圖I所示，本實施例涉及一種多用途細胞冷凍以及凍存后復蘇容器，包括凍存袋，空置狀態下具有橢圓形的底部和長方形的上部，凍存袋的厚度為250 μ m,凍存袋由乙烯-醋酸乙烯酯(EVA)制成；所述凍存袋的袋口還連接有灌洗和輸出通道、細胞輸入管道以及清洗液進入管道。細胞輸入管道以及清洗液進入管道的終端連接有Luer螺栓；凍存袋的橢圓形底部具有加厚層，加厚層的厚度為100 μ m，加厚層同樣由EVA制成；凍存袋還具有標簽袋和輸液掛孔；凍存袋的袋口還連接有灌洗和輸出通道，該端口用于與灌洗液裝置連接， 所述灌洗和輸出通道采用保護帽封閉；該保護帽為可以扭開的密封結構。保護帽的中間為耐冷橡膠，外加金屬圈保護。保護帽打開后，凍存袋可以與灌洗液裝置連接，細胞清洗完畢后，加入細胞終懸液，蓋回保護帽。應用前，打開金屬圈，如同輸液裝置，醫生用針插入橡膠層，即可以得到細胞懸液。當盛有細胞懸液的時候，本實施例的多用途細胞冷凍以及凍存后復蘇容器如附圖 2所示，其在復蘇后的離心步驟中可以兼用作離心袋，其底部成為一個離心容器，細胞被離心至底部,清洗時,只需把離心后的上清液倒出，清洗數次后,直接加入欲給患者輸入的液體以懸浮細胞，因此冷凍袋又成為直接可供臨床使用的輸液袋。實施例2本實施例涉及一種多用途細胞冷凍以及凍存后復蘇容器，包括凍存袋，空置狀態下具有橢圓形的底部和長方形的上部，凍存袋的厚度為300 μ m,凍存袋由乙烯-醋酸乙烯酯(EVA)制成；所述凍存袋的袋口還連接有灌洗和輸出通道、細胞輸入管道以及清洗液進入管道。細胞輸入管道以及清洗液進入管道的終端連接有Luer螺栓；加厚層的厚度為 150 μ m，加厚層由乙烯-甲基丙烯酸酯制成；凍存袋還具有標簽袋和輸液掛孔；凍存袋的袋口還連接有灌洗和輸出通道，該端口用于與灌洗液裝置連接，所述灌洗和輸出通道采用保護帽封閉；該保護帽為可以扭開的密封結構。保護帽的中間為耐冷橡膠，外加金屬圈保護。 保護帽打開后，凍存袋與灌洗液裝置連接，細胞清洗完畢后，加入細胞終懸液，蓋回保護帽。 應用前，打開金屬圈，如同輸液裝置，醫生用針插入橡膠層，即可以得到細胞懸液。本實施例的多用途細胞冷凍以及凍存后復蘇容器，在復蘇后的離心步驟中可以兼用作離心袋，其底部成為一個離心容器，細胞被離心至底部，清洗時，只需把離心后的上清液倒出，清洗數次后，直接加入欲給患者輸入的液體以懸浮細胞，因此冷凍袋又成為直接可供臨床使用的輸液袋。實施例3本實施例涉及一種多用途細胞冷凍以及凍存后復蘇容器，包括凍存袋，空置狀態下具有橢圓形的底部和長方形的上部，凍存袋的厚度為300 μ m,凍存袋由乙烯-醋酸乙烯酯(EVA)制成；所述凍存袋的袋口還連接有灌洗和輸出通道、細胞輸入管道以及清洗液進入管道。細胞輸入管道以及清洗液進入管道的終端連接有Luer螺栓；加厚層的厚度為 150 μ m，加厚層由乙烯-甲基丙烯酸酯制成；凍存袋還具有標簽袋和輸液掛孔；凍存袋的袋口還連接有灌洗和輸出通道，該端口用于與灌洗液裝置連接，所述灌洗和輸出通道采用保護帽封閉；該保護帽為可以扭開的密封結構。保護帽的中間為耐冷橡膠，外加金屬圈保護。 保護帽打開后，凍存袋與灌洗液裝置連接，細胞清洗完畢后，加入細胞終懸液，蓋回保護帽。 應用前，打開金屬圈，如同輸液裝置，醫生用針插入橡膠層，即可以得到細胞懸液。本實施例的多用途細胞冷凍以及凍存后復蘇容器，在復蘇后的離心步驟中可以兼用作離心袋，其底部成為一個離心容器，細胞被離心至底部，清洗時，只需把離心后的上清液倒出，清洗數次后，直接加入欲給患者輸入的液體以懸浮細胞，因此冷凍袋又成為直接可供臨床使用的輸液袋。以上所述，僅為本發明的優選實施例，不能解釋為以此限定本發明的范圍，凡在本發明的權利要求書要求保護的范圍內所做出的等同的變形和改變的實施方式均在本發明所要求保護的范圍內。
權利要求
1.一種多用途細胞冷凍以及凍存后復蘇容器，包括凍存袋，空置狀態下具有橢圓形的底部和長方形的上部，其特征在于，凍存袋的橢圓形底部具有加厚層，并且所述凍存袋的袋口還連接有灌洗和輸出通道、細胞輸入管道以及清洗液進入管道。
2.根據權利要求I所述的多用途細胞冷凍以及凍存后復蘇容器，其特征在于所述的凍存袋由乙烯-醋酸乙烯酯、乙烯-甲基丙烯酸酯或直鏈狀低密度聚乙烯制成。
3.根據權利要求2所述的多用途細胞冷凍以及凍存后復蘇容器，其特征在于所述的加厚層由乙烯-醋酸乙烯酯、乙烯-甲基丙烯酸酯或直鏈狀低密度聚乙烯制成。
4.根據權利要求1-3任一項所述的多用途細胞冷凍以及凍存后復蘇容器，其特征在于所述灌洗和輸出通道、細胞輸入管道以及清洗液進入管道由乙烯-醋酸乙烯酯、乙烯-甲基丙烯酸酯或直鏈狀低密度聚乙烯制成。
5.根據權利要求1-3任一項所述的多用途細胞冷凍以及凍存后復蘇容器，其特征在于所述細胞輸入管道以及清洗液進入管道的終端連接有Luer螺栓。
6.根據權利要求3任一項所述的多用途細胞冷凍以及凍存后復蘇容器，其特征在于所述凍存袋的厚度為100-500 μ m。
7.根據權利要求5所述的多用途細胞冷凍以及凍存后復蘇容器，其特征在于所述加厚層的厚度為所述凍存袋厚度的1/3-1/2。
8.根據權利要求1-3任一項所述的多用途細胞冷凍以及凍存后復蘇容器，其特征在于所述灌洗和輸出通道采用保護帽封閉；該保護帽為可以扭開的密封結構，保護帽的中間為耐冷橡膠，外加金屬圈保護。
9.根據權利要求1-3任一項所述的多用途細胞冷凍以及凍存后復蘇容器，其特征在于所述凍存袋還具有標簽和輸液掛孔。
10.一種凍存細胞的復蘇方法，其特征在于采用多用權利要求1-9任一項所述的多用途細胞冷凍以及凍存后復蘇容器對細胞進行冷凍和復蘇，復蘇時將所述多用途細胞冷凍以及凍存后復蘇容器從液氮中取出、置于37°C恒溫水浴溶解，并直接進行離心分離。
11.權利要求10所述的凍存細胞的復蘇方法，其特征在于所述離心過程在500-1000轉 /分鐘的條件下進行。
全文摘要
本發明涉及一種多用途細胞冷凍以及凍存后復蘇容器，包括凍存袋，空置狀態下具有橢圓形的底部和長方形的上部，其特征在于，凍存袋的橢圓形底部具有加厚層，并且所述凍存袋的袋口還連接有灌洗和輸出通道、細胞輸入管道以及清洗液進入管道。本發明的細胞冷凍以及復蘇的容器實現了一袋多用的功效，既方便了細胞制備過程也方便了臨床使用，更重要的是大大減少了細胞接觸空氣和被污染的機會，有利于細胞的質量控制和產品的純度。
文檔編號C12M3/00GK102586104SQ20111043621
公開日2012年7月18日 申請日期2011年12月23日 優先權日2011年12月23日
發明者胡敏 申請人:北京瑞建天行生物技術有限公司