專利名稱：脫脂乳培養(yǎng)基在檢測ⅱ類細(xì)菌素產(chǎn)生菌qs中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種液體脫脂乳培養(yǎng)基的新用途，特別涉及一種液體脫脂乳培養(yǎng)基在檢測或輔助檢測待檢細(xì)菌產(chǎn)生II類細(xì)菌素是否存在群體感應(yīng)調(diào)控現(xiàn)象中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
群體感應(yīng)(Quorum Sensing，QS)是指微生物群體某些基因的表達(dá)受到與群體密度相關(guān)的信號(hào)分子調(diào)控的現(xiàn)象。即細(xì)菌通過合成、分泌自誘導(dǎo)分子(autoinducer，Al)作為信號(hào)分子，并能感知其濃度變化，當(dāng)Al濃度隨著細(xì)菌群體密度達(dá)到一定閾值時(shí)，啟動(dòng)特異性基因表達(dá)，控相關(guān)的生物學(xué)功能，如菌體發(fā)光、抗生素的生物合成、毒性因子的產(chǎn)生、胞外多糖的合成、細(xì)菌叢集、生物膜形成、質(zhì)粒接合轉(zhuǎn)移、穩(wěn)定生長期的進(jìn)入等。近些年來，隨著生活水平的提高，人們對食品安全的要求也越來越高。世界范圍內(nèi)的食品安全問題日益突出，每年因?yàn)槭吃葱圆【鷮?dǎo)致人類疾病的事件也屢見不鮮。然而，大量使用化學(xué)防腐劑可能導(dǎo)致人體不同程度的副作用，比如誘癌、致畸和引起食物中毒等問題。因此，研究者越來越多地關(guān)注天然食品防腐劑。乳酸菌細(xì)菌素是由公認(rèn)安全的乳酸菌在代謝過程中產(chǎn)生的一類蛋白類抗菌物質(zhì)，是一類綠色、健康的天然生物防腐劑，主要對與其遺傳關(guān)系相近的細(xì)菌具有殺菌或溶菌作用。乳酸菌產(chǎn)生的細(xì)菌素主要有四類，其中，II類細(xì)菌素為未經(jīng)修飾的熱穩(wěn)定疏水性多肽，分子量小于lOKDa，不含羊毛硫氨酸。II類細(xì)菌素由于其抗菌譜廣，穩(wěn)定性好，可以彌補(bǔ)乳酸鏈球菌素(nisin)的一些不足，從而成為一類極具發(fā)展?jié)摿Φ氖称诽烊环栏瘎?。對?xì)菌素的純化、分子結(jié)構(gòu)、特征、抑菌機(jī)理、應(yīng)用等方面的研究已經(jīng)進(jìn)行的較為深入，但對其發(fā)酵調(diào)控方面的研究尚處于起步階段。目前研究發(fā)現(xiàn)，群體感應(yīng)機(jī)制是調(diào)控乳酸菌產(chǎn)生II類細(xì)菌素行為的重要機(jī)制。但已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的受群體感應(yīng)機(jī)制調(diào)控的II類細(xì)菌素產(chǎn)生菌，多為偶然發(fā)現(xiàn)。其中，細(xì)菌素合成能力喪失的細(xì)胞表型的獲得是關(guān)鍵。而細(xì)菌素合成能力喪失的細(xì)胞表型，一般是通過控制接種量及培養(yǎng)溫度等因素來獲得。但由于大多乳酸菌都采用MRS培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中的牛肉膏、蛋白胨等氮源可能會(huì)充當(dāng)自誘導(dǎo)肽的角色，進(jìn)而干擾通過控制接種量、培養(yǎng)溫度等途徑對群體感應(yīng)的認(rèn)定，影響QS的研究。培養(yǎng)基的選擇對群體感應(yīng)調(diào)控現(xiàn)象的研究也有著非常重要的影響。Flynn等的研究發(fā)現(xiàn)唾液乳桿菌唾液亞種(Lactobacillus salivariussubsp.salivarius)UCC 118在麥芽汁培養(yǎng)中培養(yǎng)可獲得不產(chǎn)細(xì)菌素的表型。由于很多乳酸菌都可以在脫脂乳培養(yǎng)基中生長，因此以脫脂乳培養(yǎng)基為研究對象無疑是一個(gè)不錯(cuò)的選擇。雖然已發(fā)現(xiàn)許多產(chǎn)II類細(xì)菌素乳酸菌，但其細(xì)菌素的產(chǎn)生是否受到群體感應(yīng)機(jī)制調(diào)控尚未形成一套有效的檢測方法
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種液體脫脂乳培養(yǎng)基的新用途。
本發(fā)明所提供的新用途具體為液體脫脂乳培養(yǎng)基在檢測或輔助檢測待檢細(xì)菌產(chǎn)生II類細(xì)菌素是否存在群體感應(yīng)調(diào)控現(xiàn)象中的應(yīng)用。所述液體脫脂乳培養(yǎng)基的溶質(zhì)為脫脂乳，溶劑為水；所述脫脂乳與所述水的配比為8 12g比100ml, pH為6.5 7.0。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種檢測或輔助檢測待檢細(xì)菌產(chǎn)生II類細(xì)菌素是否存在群體感應(yīng)調(diào)控現(xiàn)象的方法。該方法包括如下步驟:先將具有產(chǎn)生II類細(xì)菌素能力的待檢細(xì)菌懸浮在無菌生理鹽水中(IO9CFUAiL)，接種于液體脫脂乳培養(yǎng)基中培養(yǎng)，在進(jìn)入穩(wěn)定期之前這一時(shí)間段中的任一時(shí)刻(上述培養(yǎng)體系此時(shí)不含有II類細(xì)菌素)，然后向所述液體脫脂乳培養(yǎng)基中添加自誘導(dǎo)物，繼續(xù)培養(yǎng)至50-70h，如60h，得到培養(yǎng)物，檢測所述培養(yǎng)物中是否存在所述II類細(xì)菌素，按照如下方法確定所述待檢細(xì)菌II類細(xì)菌素的產(chǎn)生是否存在群體感應(yīng)調(diào)控現(xiàn)象:若所述培養(yǎng)物中存在所述II類細(xì)菌素，則認(rèn)為所述待檢細(xì)菌II類細(xì)菌素的產(chǎn)生存在群體感應(yīng)調(diào)控現(xiàn)象或候選存在群體感應(yīng)調(diào)控現(xiàn)象；反之，則認(rèn)為所述待檢細(xì)菌II類細(xì)菌素的產(chǎn)生不存在群體感應(yīng)調(diào)控現(xiàn)象或候選存在群體感應(yīng)調(diào)控現(xiàn)象。所述自誘導(dǎo)物為將所述待檢細(xì)菌在產(chǎn)生II類細(xì)菌素狀態(tài)下進(jìn)行液體發(fā)酵得到的發(fā)酵上清液。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，所述將具有產(chǎn)生所述II類細(xì)菌素能力的待檢細(xì)菌接種于液體脫脂乳培養(yǎng)基中培養(yǎng)，在進(jìn)入穩(wěn)定期之前這一時(shí)間段中的任一時(shí)刻中，接種量為
0.5% (體積比)，培養(yǎng)溫度為37°C，培養(yǎng)時(shí)間為8-12h，或10 12h。以上為用于檢測群體感應(yīng)調(diào)控現(xiàn)象是否存在的培養(yǎng)物的前處理方式。所述液體脫脂乳培養(yǎng)基的溶質(zhì)為脫脂乳，溶劑為水；所述脫脂乳與所述水的配比為 8 12g 比 100ml, pH 為 6.5 7.0。所述自誘導(dǎo)物是按照包括如下步驟的方法獲得的:將具有產(chǎn)生II類細(xì)菌素能力的所述待檢細(xì)菌接種于能使所述待檢細(xì)菌產(chǎn)生II類細(xì)菌素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)至穩(wěn)定期，如穩(wěn)定期末期(這時(shí)發(fā)酵液中自誘導(dǎo)物含量最高)，收集發(fā)酵上清液，得到所述自誘導(dǎo)物。
`
在本發(fā)明的實(shí)施例中，所述能使所述待檢細(xì)菌產(chǎn)生II類細(xì)菌素的培養(yǎng)基為MRS培養(yǎng)基，如液體MRS培養(yǎng)基。實(shí)際操作中，所述自誘導(dǎo)物的獲得方法具體可包括如下步驟:將所述待檢細(xì)菌以體積百分比0.5 I %或體積百分比0.5 %的接種量接種到所述MRS培養(yǎng)基中，30 37°C培養(yǎng)20-24h，或37°C培養(yǎng)20-24h，或37°C培養(yǎng)24h后收集發(fā)酵上清液，得到所述自誘導(dǎo)物。所述液體MRS培養(yǎng)基的溶劑為水，溶質(zhì)為蛋白胨、牛肉膏、酵母浸粉、K2HPO4.3Η20、檸檬酸三銨、NaAC、葡萄糖、MgSO4.7H20、MnSO4.H2O和吐溫80 ;所述水、所述蛋白胨、所述牛肉膏、所述酵母浸粉、所述K2HPO4.3H20、所述檸檬酸三銨、所述NaAC、所述葡萄糖、所述MgSO4.7Η20、所述MnSO4^H2O和所述吐溫80 的配比為 100ml: IOg: IOg: 5g: 2g: 2g: 5g:20g: 0.58g: 0.25g: lmL，其 pH 為 6.5 7.0。所述方法中檢測所述培養(yǎng)物中是否存在所述II類細(xì)菌素是通過檢測所述培養(yǎng)物對指示菌的抑菌作用實(shí)現(xiàn)的，如果所述培養(yǎng)物對指示菌有抑菌作用，所述培養(yǎng)物中含有所述II類細(xì)菌素，如果所述培養(yǎng)物對指示菌無抑菌作用，所述培養(yǎng)物中不含有所述II類細(xì)菌素。所述指示菌為其生長能被所述待檢細(xì)菌所產(chǎn)II類細(xì)菌素抑制的菌株，如植物乳桿菌(L.plantarum)PL2 (可被戍糖乳桿菌(Lactobacillus pentosus) 31-1 所產(chǎn) II 類細(xì)菌素抑制)或單核細(xì)胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes) 54002 (可被戍糖乳桿菌(L.pentosus)LPL1-5所產(chǎn)II類細(xì)菌素抑制)。在本發(fā)明的實(shí)施例中，檢測所述培養(yǎng)物對所述指示菌的抑菌作用的方法具體可包括如下步驟:首先，將經(jīng)過所述自誘導(dǎo)物誘導(dǎo)培養(yǎng)至50-70h，如60h的所述待檢細(xì)菌培養(yǎng)物的上清液過濾除菌，收集液體并調(diào)整pH至6.5 7.0，得到待測液體。其次，取新鮮過夜培養(yǎng)的指示菌，用無菌生理鹽水稀釋至IO6 107CFU/mLjn 106CFU/mL，取Iml與冷卻至45 55°C，如50°C的15 20ml MRS固體培養(yǎng)基混勻倒平板。待平板凝固后，放入牛津杯，分為處理組和對照組。處理組按照50 200 μ I/杯，如100 μ I/杯的用量，加入上述待測液體，對照組中不加入上述待測液體。37°C培養(yǎng)18 36h，如24h，觀察抑菌效果。如果對照組無抑菌圈，而處理組出現(xiàn)抑菌圈，則所述培養(yǎng)物對所述指示菌有抑菌作用，如果對照組無抑菌圈，而處理組也未出現(xiàn)抑菌圈，則所述培養(yǎng)物對所述指示菌無抑菌作用。上述方法中的所述待檢細(xì)菌為乳酸菌，如乳桿菌。在本發(fā)明的實(shí)施例中具體為戊糖乳桿菌(Lactobacillus pentosus) 31-1 或戍糖乳桿菌(L.pentosus) LPL1-5本發(fā)明的再一個(gè)目的是提供一種獲取具有不產(chǎn)II類細(xì)菌素細(xì)胞表型的II類細(xì)菌素產(chǎn)生菌細(xì)胞的方法。該方法包括如下步驟:將具有產(chǎn)生II類細(xì)菌素能力的待檢細(xì)菌接種(接種量可小于等于0.5% )于液體脫脂乳培養(yǎng)基中培養(yǎng)即得到具有不產(chǎn)所述II類細(xì)菌素細(xì)胞表型的II類細(xì)菌素產(chǎn)生菌細(xì)胞。其中，不產(chǎn)所述II類細(xì)菌素的細(xì)胞表型是指所述具有產(chǎn)生II類細(xì)菌素能力的待檢細(xì)菌的代謝物對指示菌無抑制生長作用的細(xì)胞表型。所述指示菌為其生長能被所述待檢細(xì)菌所產(chǎn)II類細(xì)菌素抑制的菌株，如植物乳桿菌(L.plantarum) PL2 和單核細(xì)胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes) 54002。實(shí)際操作中，可利用包括如下步驟的方法獲得所述具有不產(chǎn)II類細(xì)菌素細(xì)胞表型的II類細(xì)菌素產(chǎn)生菌:將II類細(xì)菌素產(chǎn)生菌以0.5% (II類細(xì)菌素產(chǎn)生菌懸浮于無菌生理鹽水中，細(xì)胞密度為109CFU/mL)的接種量接種到所述液體脫脂乳培養(yǎng)基中，37°C培養(yǎng)。所述液體脫脂乳培養(yǎng)基的溶質(zhì)為脫脂乳，溶劑為水；所述脫脂乳與所述水的配比為 8 12g (如 Hg)比 100ml。上述方法中的所述待檢細(xì)菌為乳酸菌，如乳桿菌。在本發(fā)明的實(shí)施例中具體為戊糖乳桿菌(Lactobacillus pentosus) 31-1 或戍糖乳桿菌(L.pentosus) LPL1-5本發(fā)明使得從II類細(xì)菌素產(chǎn)生菌中大規(guī)模高通量篩選受群體感應(yīng)調(diào)控的菌株成為了可能，且本發(fā)明檢測方法簡便，成本低廉，不需要昂貴的儀器設(shè)備。另外，通過本發(fā)明所提供的方法獲得的菌種可用于II類細(xì)菌素發(fā)酵的群體感應(yīng)調(diào)控方面的研究。
圖1為利用液體脫脂乳培養(yǎng)基檢測或輔助檢測待檢細(xì)菌產(chǎn)生II類細(xì)菌素是否存在群體感應(yīng)調(diào)控現(xiàn)象的流程圖。圖2為自誘導(dǎo)物誘導(dǎo)II類細(xì)菌素產(chǎn)生的抑 菌活性實(shí)驗(yàn)結(jié)果。其中，A實(shí)驗(yàn)組(經(jīng)自誘導(dǎo)物誘導(dǎo)的液體脫脂乳培養(yǎng)基培養(yǎng)物的抑菌效果)出為對照組I (用等量MRS液體培養(yǎng)基代替自誘導(dǎo)物誘導(dǎo)的液體脫脂乳培養(yǎng)基培養(yǎng)物的抑菌效果)；C為對照組3(100μ IL.pentosus 31_160h培養(yǎng)物與自誘導(dǎo)物(5μ1/10ηι1)的混合物的抑菌效果)；D為對照組2(自誘導(dǎo)物的抑菌效果)。
具體實(shí)施例方式下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。液體脫脂乳培養(yǎng)基:稱取脫脂乳(哈爾濱美華生物技術(shù)股份有限公司原料脫脂乳粉)llg，溶于1OOmL蒸懼水中，6.5 7.0,115°C滅菌10 13min。液體MRS培養(yǎng)基:稱取蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母浸粉5g，K2HPO4.3H20 2g，檸檬酸三銨 2g，NaAC 5g，葡萄糖 20g, MgSO4.7H20 0.58g，MnSO4.H2O 0.25g，吐溫 801mL，溶于 IOOmL 蒸餾水中，pH6.5 7.0，121°C滅菌 20min。液體1/2MRS培養(yǎng)基:除蒸餾水外，其他各種MRS培養(yǎng)基成分X 1/2，pH6.5 7.0，121°C 滅菌 20min。液體1/5MRS培養(yǎng)基:除蒸餾水外，其他各種MRS培養(yǎng)基成分X 1/5，pH6.5 7.0，121°C 滅菌 20min。液體1/10MRS培養(yǎng)基:除蒸餾水外，其他各種MRS培養(yǎng)基成分X 1/10，pH6.5
.7.0,121°C滅菌 20min。固體MRS培養(yǎng)基:為MRS液體培養(yǎng)基加入15g/L瓊脂粉。固體TSYE培養(yǎng)基:稱取胰蛋白胨17g，大豆胨3g，酵母浸粉6g，NaCl 5g，K2HPO4.3Η20 2.5g，葡萄糖2.5g，瓊脂粉15，溶于IOOmL蒸餾水中，pH6.5 7.0，121°C滅菌20mino實(shí)施例1、檢測或輔助檢測戊糖乳桿菌(L.pentosus) 31-1產(chǎn)生II類細(xì)菌素是否存在群體感應(yīng)調(diào)控現(xiàn)象戊糖乳桿菌(Lactobacilluspentosus) 31-1 為 II 類細(xì)菌素產(chǎn)生菌(GuorongLiuiYanni LviPinglan LiiKang Zhou，Jinglan Zhang.Pentocin 31-1,an ant1-Listeriabacteriocin produced by Lactobacillus pentosus 31-1 isolated from Xuan-WeiHam，a traditionalChina fermented meat product.Food Control，2008，19:353-359.Zhang Jinlan， Liu Guorong， Shang Nan， Cheng Wanpeng， Chen Shangwu, Li Pinglan.Purification and Partial Amino Acid Sequence of Pentocin 31-1,an Ant1-ListeriaBacteriocin Produced by Lactobacillus pentosus 31-1.Journal of FoodProtection, Volume 72,Number 12.2524-2529.) 本實(shí)施例將詳述如何利用本發(fā)明的方法檢測或輔助檢測戊糖乳桿菌(L.pentosus) 31-1產(chǎn)生II類細(xì)菌素是否存在群體感應(yīng)調(diào)控現(xiàn)象(實(shí)驗(yàn)流程如圖1所示)。具體按照如下步驟進(jìn)行:1、制備自誘導(dǎo)物(發(fā)酵上清液)將懸浮于無菌生理鹽水(109cfu/ml)中的戊糖乳桿菌(L.pentosus) 31-1以0.5% (體積比)的接種量接種到液體MRS培養(yǎng)基中，37°C培養(yǎng)24h(戊糖乳桿菌(L.pentosus) 31-1處于穩(wěn)定期末期)，13800 Xg離心5min，收集發(fā)酵上清液，作為自誘導(dǎo)物。2、獲得具有不產(chǎn)II類細(xì)菌素細(xì)胞表型的L.pentosus 31-1
將懸浮于無菌生理鹽水(109cfu/ml)中的L.pentosus 31-1以0.5% (體積比)的接種量分別接種到液體脫脂乳培養(yǎng)基(同時(shí)設(shè)置如下四種液體培養(yǎng)基作為液體脫脂乳培養(yǎng)基的對照:液體MRS培養(yǎng)基、液體1/2MRS培養(yǎng)基、液體1/5MRS培養(yǎng)基和液體1/10MRS培養(yǎng)基)中，并在37°C條件下培養(yǎng)12h、24h、36h、48h、60h、72h后，分別檢測此時(shí)五種液體培養(yǎng)基的培養(yǎng)物中是否存在II類細(xì)菌素。具體方法為:分別收集不同培養(yǎng)時(shí)間的五種液體培養(yǎng)基的培養(yǎng)物，13800 X g離心5min，取上清液過濾除菌，調(diào)節(jié)pH至6.5 7.0，取100 μ I備用。以可被所述待檢細(xì)菌所產(chǎn)II類細(xì)菌素抑制生長的植物乳桿菌(L.plantarum)PL2為指示菌用杯碟法測定上述不同培養(yǎng)時(shí)間的五種液體培養(yǎng)基培養(yǎng)物上清液的抑菌活性，從而判定所述培養(yǎng)物中是否含有II類細(xì)菌素。具體操作為:取過夜培養(yǎng)的新鮮指示菌植物乳桿菌(L.plantarum) PL2，用無菌生理鹽水稀釋至106CFU/mL，取Iml與冷卻至50°C的20ml的MRS固體培養(yǎng)基混勻倒平板。待凝固后，放入牛津杯，按照100 μ I/杯的用量，加入經(jīng)上述處理的上清液，37°C培養(yǎng)24h，觀察抑菌效果。結(jié)果顯示，經(jīng)過72h培養(yǎng)，加入了液體脫脂乳培養(yǎng)基培養(yǎng)物上清液的平板仍未產(chǎn)生抑菌圈，而加入作為對照的四種液體培養(yǎng)基(MRS培養(yǎng)基、1/2MRS培養(yǎng)基、1/5MRS培養(yǎng)基和1/10MRS培養(yǎng)基)平板均產(chǎn)生抑菌圈(表I)。這一結(jié)果表明，包括對照培養(yǎng)基在內(nèi)的共五種培養(yǎng)基中，只有所述液體脫脂乳培養(yǎng) 基的培養(yǎng)物上清液中不存在II類細(xì)菌素，進(jìn)而說明利用所述液體脫脂乳培養(yǎng)基獲得了不產(chǎn)II類細(xì)菌素細(xì)胞表型的L.pentosus 31_1。表I不同培養(yǎng)基對L.pentosus 31-1合成II類細(xì)菌素的影響
權(quán)利要求
1.液體脫脂乳培養(yǎng)基在檢測或輔助檢測待檢細(xì)菌產(chǎn)生II類細(xì)菌素是否存在群體感應(yīng)調(diào)控現(xiàn)象中的應(yīng)用；所述待檢細(xì)菌為具有產(chǎn)生II類細(xì)菌素能力的細(xì)菌。
2.檢測或輔助檢測待檢細(xì)菌產(chǎn)生II類細(xì)菌素是否存在群體感應(yīng)調(diào)控現(xiàn)象的方法，包括如下步驟: 先將具有產(chǎn)生II類細(xì)菌素能力的待檢細(xì)菌接種于液體脫脂乳培養(yǎng)基中培養(yǎng)，在進(jìn)入穩(wěn)定期之前這一時(shí)間段中的任一時(shí)刻，然后向所述液體脫脂乳培養(yǎng)基中添加自誘導(dǎo)物，繼續(xù)培養(yǎng)至50-70h，得到培養(yǎng)物，檢測所述培養(yǎng)物中是否存在所述II類細(xì)菌素；按照如下方法確定所述待檢細(xì)菌II類細(xì)菌素的產(chǎn)生是否存在群體感應(yīng)調(diào)控現(xiàn)象:若所述培養(yǎng)物中存在所述II類細(xì)菌素，則所述待檢細(xì)菌II類細(xì)菌素的產(chǎn)生存在群體感應(yīng)調(diào)控現(xiàn)象或候選存在群體感應(yīng)調(diào)控現(xiàn)象；反之，則所述待檢細(xì)菌II類細(xì)菌素的產(chǎn)生不存在群體感應(yīng)調(diào)控現(xiàn)象或候選不存在群體感應(yīng)調(diào)控現(xiàn)象；所述自誘導(dǎo)物為將所述待檢細(xì)菌在產(chǎn)生II類細(xì)菌素狀態(tài)下進(jìn)行液體發(fā)酵得到的發(fā)酵上清液。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于:所述自誘導(dǎo)物是按照包括如下步驟的方法獲得的:將所述待檢細(xì)菌接種于能使所述待檢細(xì)菌產(chǎn)生II類細(xì)菌素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)至穩(wěn)定期，如穩(wěn)定期末期，收集發(fā)酵上清液，得到所述自誘導(dǎo)物。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于:所述自誘導(dǎo)物是按照包括如下步驟的方法獲得的:將所述待檢細(xì)菌接種于MRS培養(yǎng)基中培養(yǎng)至穩(wěn)定期，如穩(wěn)定期末期，收集發(fā)酵上清液，得到所述自誘導(dǎo)物。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于:所述自誘導(dǎo)物是按照包括如下步驟的方法獲得的:將所述待檢細(xì)菌以體積百分比0.5 1%或體積百分比0.5%的接種量接種到所述MRS培養(yǎng)基中，30 37°C培養(yǎng)20-24h，或37°C培養(yǎng)20_24h，或37°C培養(yǎng)24h后收集發(fā)酵上清液，得到所述自誘導(dǎo)物。
6.獲取具有不產(chǎn)II類細(xì)菌素細(xì)胞表型的II類細(xì)菌素產(chǎn)生菌細(xì)胞的方法，包括如下步驟:將具有產(chǎn)生II類細(xì)菌素能力的待檢細(xì)菌接種于液體脫脂乳培養(yǎng)基中培養(yǎng)即可得到具有不產(chǎn)所述II類細(xì)菌素細(xì)胞表型的II類細(xì)菌素產(chǎn)生菌細(xì)胞。
7.根據(jù)權(quán)利要求2-6中任一所述的方法，其特征在于:所述待檢細(xì)菌為乳酸菌。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于:所述待檢細(xì)菌為乳桿菌。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于:所述待檢細(xì)菌為戊糖乳桿菌(Lactobacillus pentosus) 31-1 或戊糖乳桿菌(L.pentosus) LPL1-5。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種液體脫脂乳培養(yǎng)基的新用途。該新用途為在檢測或輔助檢測待檢細(xì)菌產(chǎn)生II類細(xì)菌素是否存在群體感應(yīng)調(diào)控現(xiàn)象中的應(yīng)用。在所述應(yīng)用中，先將具有產(chǎn)生II類細(xì)菌素能力的待檢細(xì)菌接種于液體脫脂乳培養(yǎng)基中培養(yǎng)，在進(jìn)入穩(wěn)定期之前這一時(shí)段的任一時(shí)刻，然后向所述脫脂乳培養(yǎng)基中添加自誘導(dǎo)物，繼續(xù)培養(yǎng)至50-70h，得到培養(yǎng)物，檢測所述培養(yǎng)物中是否存在II類細(xì)菌素；若所述培養(yǎng)物中存在II類細(xì)菌素，則所述待檢細(xì)菌產(chǎn)生II類細(xì)菌素存在或候選群體感應(yīng)調(diào)控現(xiàn)象；反之，則所述待檢細(xì)菌產(chǎn)生II類細(xì)菌素不存在或候選不存在群體感應(yīng)調(diào)控現(xiàn)象。本發(fā)明使得從II類細(xì)菌素產(chǎn)生菌中大規(guī)模高通量篩選受群體感應(yīng)調(diào)控的菌株成為了可能，且方法簡便，成本低廉。
文檔編號(hào)C12N1/20GK103173516SQ20111043175
公開日2013年6月26日 申請日期2011年12月21日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月21日
發(fā)明者李平蘭, 張香美, 王 華, 王洋 申請人:中國農(nóng)業(yè)大學(xué)