專利名稱：一種啤酒嚴(yán)格厭氧菌檢測(cè)專用培養(yǎng)基的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及到一種啤酒嚴(yán)格厭氧菌檢測(cè)專用培養(yǎng)基，屬于微生物發(fā)酵領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
嚴(yán)格厭氧菌在國(guó)外較多報(bào)道，國(guó)內(nèi)啤酒業(yè)較少報(bào)道有檢出。一是國(guó)內(nèi)很少有專門針對(duì)嚴(yán)格厭氧菌的檢測(cè)內(nèi)容，二是嚴(yán)格厭氧菌對(duì)氧的要求比較苛刻，而國(guó)內(nèi)早期啤酒釀造對(duì)氧的質(zhì)控水平較低。目前隨著中國(guó)啤酒釀造質(zhì)控水平的提高，啤酒中溶氧量的越來(lái)越低， 以前只在國(guó)外培養(yǎng)到的絕對(duì)厭氧菌如果膠桿菌(Pectinatus sp.)和巨球菌(Megasphaera cerevisiae)的污染風(fēng)險(xiǎn)不斷增加。嚴(yán)格厭氧菌的生長(zhǎng)會(huì)產(chǎn)生過(guò)多的乙酸、丁酸、乳酸等多種脂肪酸以及H2S和甲醇硫等一些嚴(yán)重影響風(fēng)味的物質(zhì)，使被污染啤酒產(chǎn)生令人討厭的臭雞蛋氣味的生長(zhǎng)會(huì)產(chǎn)生過(guò)多的乙酸、丁酸、乳酸等多種脂肪酸以及H2S和甲醇硫等一些嚴(yán)重影響風(fēng)味的物質(zhì)，使被污染啤酒產(chǎn)生令人討厭的臭雞蛋氣味。因此，對(duì)嚴(yán)格厭氧菌的檢測(cè)技術(shù)和選擇培養(yǎng)基進(jìn)行預(yù)研，建立起實(shí)用的檢測(cè)技術(shù)，能夠增強(qiáng)對(duì)產(chǎn)品的質(zhì)量控制和檢測(cè)水平，應(yīng)對(duì)可能出現(xiàn)的嚴(yán)格厭氧菌污染風(fēng)險(xiǎn)。由于嚴(yán)格厭氧菌的獨(dú)特的特性，現(xiàn)在很少有報(bào)道關(guān)于該種類有害菌的培養(yǎng)分離報(bào)道，本發(fā)明開(kāi)發(fā)了一種利用嚴(yán)格厭氧菌產(chǎn)生獨(dú)特的代謝產(chǎn)物的特性，與培養(yǎng)基中的組分產(chǎn)生顯色反應(yīng)的篩選培養(yǎng)基。
發(fā)明內(nèi)容
該發(fā)明培養(yǎng)基配方和制作方法如下酵母浸提物0. 3-0. 6 %，蛋白胨0. 2-0. 4 %，乳酸鈉1_3 %，抗壞血酸 0. 1-0. 3% ；硫代硫酸鈉(Na2S204 · 5H20) :0. 01-0. 03%，醋酸鉛0. 01-0. 03%，亞甲藍(lán)(美蘭):0. 0002-0. 0005%，苯乙醇(PEA) 0. 1-0. 3%，瓊脂粉(ager) 1. 5%0各成分精確稱量后裝入一定體積(根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要)的錐形瓶?jī)?nèi)加蒸餾水，各成分混勻后，在電爐上加熱煮沸3-5分鐘(培養(yǎng)基由藍(lán)色變成無(wú)色)，各成分完全溶解為止。溫度降到50°C左右倒平板使用。該平板一定要在嚴(yán)格厭氧的厭氧盒或者厭氧罐或者厭氧管中使用。
圖1是有氧時(shí)培養(yǎng)基。圖2是無(wú)氧時(shí)培養(yǎng)基。圖3是pc和乳酸菌混合接種。圖 4是pf和乳酸菌混合接種。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1培養(yǎng)基的配制方法稱取酵母浸提物0. 5g，蛋白胨0. 3g，乳酸鈉1. 7g，抗壞血酸0. Ig ；硫代硫酸鈉 (Na2S204 ·5Η20) :0. Olg，醋酸鉛0. 02g，亞甲藍(lán)(美蘭):0. 0002g，苯乙醇(PEA) :0. 2g，瓊脂粉(ager) 1. 5g。各成分精確稱量后裝入一定體積(根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要)的錐形瓶?jī)?nèi)加蒸餾水100ml， 各成分混勻后，在電爐上加熱煮沸3-5分鐘(培養(yǎng)基由藍(lán)色變成無(wú)色)，各成分完全溶解為止。溫度降到50°C左右倒平板使用。該平板一定要在嚴(yán)格厭氧的厭氧盒或者厭氧罐或者厭氧管中使用。實(shí)施例2培養(yǎng)基的使用方法接種菌種為果膠桿菌的兩個(gè)菌株P(guān)ectinatus cerevisiiphilus和 Pectinatusfrisingensis以及乳酸菌，接種梯度為10_3梯度，在厭氧培養(yǎng)兩個(gè)星期。 醋酸鉛和被果膠桿菌釋放的硫化氫反應(yīng)生成硫化鉛形成了黑色菌落。由于乳酸菌不產(chǎn)生硫化氫，它們的菌落仍然是乳白色的。因此可以很明顯的區(qū)分鑒定出嚴(yán)格厭氧菌。具體的菌落顏色和效果可以見(jiàn)說(shuō)明書附圖部分。
權(quán)利要求
1.一種啤酒嚴(yán)格厭氧菌檢測(cè)鑒定專用培養(yǎng)基，其配方如下酵母浸提物0. 3-0. 6 %，蛋白胨0. 2-0. 4 %，乳酸鈉:1-3%,抗壞血酸0. 1-0. 3 % ； 硫代硫酸鈉(Na2S204 · 5H20) :0. 01-0. 03 %，醋酸鉛.0· 01-0. 03 %，亞甲藍(lán)(美蘭) 0. 0002-0. 0005%，苯乙醇(PEA) 0. 1-0. 3%，瓊脂粉(ager) 1. 5%0
2.如權(quán)利要求1所述的啤酒嚴(yán)格厭氧菌檢測(cè)鑒定專用培養(yǎng)基，其制作使用方法如下 將以上各成分精確稱量后裝入一定體積(根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要)的錐形瓶?jī)?nèi)加蒸餾水，各成分混勻后，在電爐上加熱煮沸3-5分鐘(培養(yǎng)基由藍(lán)色變成無(wú)色)，各成分完全溶解為止，溫度降到50°C左右倒平板使用。該平板一定要在嚴(yán)格厭氧的厭氧盒或者厭氧罐或者厭氧管中使用。
3.如權(quán)利要求1所述的啤酒嚴(yán)格厭氧菌檢測(cè)鑒定專用培養(yǎng)基，其各組分優(yōu)選為稱取酵母浸提物0. 5g，蛋白胨0. 3g，乳酸鈉1. 7g，抗壞血酸0. Ig ；硫代硫酸鈉 (Na2S204 *5H20) :0. Olg，醋酸鉛0. 02g，亞甲藍(lán)(美蘭):0. 0002g，苯乙醇(PEA) :0.2g，瓊脂粉(ager) 1. 5g，溶解于IOOml水中。
4.如權(quán)利要求1所述的啤酒嚴(yán)格厭氧菌檢測(cè)鑒定專用培養(yǎng)基用于分離啤酒中嚴(yán)格厭氧菌的用途。
全文摘要
本發(fā)明提供一種啤酒嚴(yán)格厭氧菌檢測(cè)鑒定專用培養(yǎng)基，利用嚴(yán)格厭氧菌產(chǎn)生獨(dú)特的代謝產(chǎn)物的特性，與培養(yǎng)基中的組分產(chǎn)生顯色反應(yīng)的篩選培養(yǎng)基，醋酸鉛和被果膠桿菌釋放的硫化氫反應(yīng)生成硫化鉛生成黑色菌落。其他污染菌不產(chǎn)生硫化氫，它們的菌落仍然是乳白色的。因此可以很明顯的區(qū)分鑒定出嚴(yán)格厭氧菌，該發(fā)明對(duì)嚴(yán)格厭氧菌的檢測(cè)鑒定更簡(jiǎn)單明了，能夠增強(qiáng)對(duì)產(chǎn)品的質(zhì)量控制和檢測(cè)水平，應(yīng)對(duì)可能出現(xiàn)的嚴(yán)格厭氧菌污染風(fēng)險(xiǎn)，效果顯著。
文檔編號(hào)C12R1/01GK102533929SQ201110383270
公開(kāi)日2012年7月4日 申請(qǐng)日期2011年11月28日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月28日
發(fā)明者宋緒磊, 林智平, 王德良, 袁雪萍, 賈鳳超, 郭立蕓 申請(qǐng)人:中國(guó)食品發(fā)酵工業(yè)研究院, 北京燕京啤酒股份有限公司