專利名稱：一種酵母來源活性多肽的制備方法
技術領域：
本發明涉及生物制品領域，具體涉及一種酵母來源活性多肽的制備方法。
背景技術：
健康是人類全面發展的基礎，隨著科學技術的發展和生活水平的提高，健康已經成為二十一世紀人類追求的最終目標，以疾病預防和養身健體為目的的功能食品也因此被越來越多的人所青睞，功能食品產業必將成為食品行業發展的主動脈，并帶動相關產業經濟的發展。作為一種重要的功能食品——生物活性多肽，因其具有顯著的生理及藥理活性而被廣泛應用于醫藥、保健、食品、化妝品等行業。多肽類產品從上世紀90年代以來，已迅速成為國際市場暢銷藥物或功能食品的原料“新寵”。迄今為止，科學家已發現的天然多肽類生理物質已有數萬種之多，涉及到激素、神經、細胞生長、生殖、腫瘤病變、神經激素傳遞質及免疫調節等領域。多肽藥物和多肽功能食品的開發研究是目前生物醫藥和功能食品領域中最活躍、進展最快的部分，也將是二十一世紀最有前途的產業之一。酵母菌體具有較高的營養價值，蛋白質含量高達50%左右，且人體必需氨基酸(如賴氨酸)的含量較高等特點。國內酵母蛋白質的應用還主要停留在利用酵母內源酶系水解蛋白質等物質生產酵母提取物作為調味料，附加值低，市場競爭力差。因此，開發以酵母為原料的生物活性多肽，對提高酵母附加值，提升產業鏈結構有著深遠影響。目前，利用酵母為原料制備生物活性多肽已有研究，其主要的制備方法為酶解法制備具有各種生理活性的活性多肽。這些制備方法采用酵母蛋白提取與酶解分步進行，所用的酶為菠蘿蛋白酶、堿性蛋白酶、胰蛋白酶等單一酶；酵母蛋白中核蛋白含量較高，已有制備方法沒有有效除去核酸類雜質，而人體攝入過量的核酸后會在體內積累核酸代謝產物尿酸，容易引起痛風和尿結石等疾病。
發明內容
本發明的目的在于提供一種酵母來源的活性多肽的制備工藝，以干酵母為原料， 采用混合酶酶解、過濾(或離心)、除雜和膜分離，獲得具有多種生理活性的多肽組分。本發明采用混合酶實現酵母蛋白提取和酶解一體化，提高制備效率，并且采用乙醇沉淀法有效除去核酸和多糖類雜質，并通過膜分離獲得具有降血糖、降血壓及抗氧化活性的多肽組分。本發明的目的可以通過以下技術方案實現
將酵母粉和水以一定比例混合，加入以內切酶、外切酶、風味酶組成的混合酶，酶解后固液分離。采用乙醇沉淀法除去液相組分中的多糖及核酸類雜質，上清液經超濾膜過濾分離，濾過液經減壓濃縮和真空冷凍干燥后獲得活性多肽。該發明的具體操作步驟如下
一種酵母來源的活性多肽制備方法，包括以下步驟
(1)將干酵母粉和水按固液比1: 5^1: 15 g/mL混合后加入酶進行酶解，所述酶為內切
3酶、外切酶及風味酶的混合物，三種酶所占比例依次為l(T30%Wt、l(T30%Wt和4(T80%wt，酶解溫度為2(T45°C，酶解時間為2 4h ；
(2)步驟(1)得到的酶解液在9(Tll(TC滅酶后，過濾或離心分離得到液相組分；再除去液相組分中的多糖及核酸類雜質；
(3)然后通過超濾膜分離，濾過液經減壓濃縮和真空冷凍干燥后獲得活性多肽。所述酶的加入量為干酵母粉質量的0. 59Γ2. 5%。步驟(2)所述除去液相組分中的多糖及核酸類雜質是采用乙醇沉淀法，乙醇的加入量為過濾或離心所得液相組分的體積的2飛倍。所述超濾膜分離選用截留分子量為5kDiTl0kDa的超濾膜。所述內切酶、外切酶及風味酶可以在技術領域常用酶范圍內任意選擇。本發明與現有技術相比，具有如下的優點和有益效果
1、本發明采用混合酶酶解法獲得酵母多肽，將提取和酶解兩個工藝過程合并，有效地提高了活性多肽的生產效率，縮短了工藝流程。采用乙醇沉淀法除去多肽中的核酸和多糖類雜質，提高了活性多肽的純度。2、本發明采用超濾膜分離獲得分子量低于IOkDa的多肽組分，其生物活性更加明顯，經體外活性測定，該多肽組分具有降血壓、降血糖、抗氧化的活性。在多肽濃度為0. 5mg/ mL時，對血管緊張素轉移酶的抑制率為42. 4%，對α -葡萄糖苷酶抑制率為32. 42%，超氧陰離子的清除率為54. 8%。
具體實施例方式以下結合實施例對本發明做進一步說明，但本發明的實施方式不限于此。實施例1
(1)酵母蛋白的提取和酶解將干酵母粉和水按固液比1: 5 g/mL混合，選用含中性肽鏈內切酶10% wt、亮氨酸氨肽酶10% wt及風味蛋白酶80% wt的混合酶酶解。加酶量為干酵母粉的1% wt，酶解溫度為45°C，酶解時間為池。(2)酶解液的分離與除雜酶解液在90°C下滅酶后過濾，取液相組分加入4倍(V/ V)的乙醇，去除其中的多糖和核酸類雜質。(3)活性多肽的超濾膜分離利用截留分子量為5kDa的超濾膜過濾分離，濾過液減壓濃縮及真空冷凍干燥后得到活性多肽。(4)活性肽生理功能鑒定利用HPLC檢測該活性多肽對ACE酶的抑制作用。結果表明，在多肽濃度為0. 5mg/mL時，對血管緊張素轉移酶的抑制率為42. 4%
實施例2
(1)酵母蛋白的提取和酶解將干酵母粉和水按固液比1: 10 g/mL混合，選用含糜蛋白酶20% wt、亮氨酸氨肽酶20% wt及風味蛋白酶60% wt的混合酶酶解。加酶量為干酵母粉的0. 5%wt，酶解溫度為35°C，酶解時間為池。(2)酶解液的分離與除雜酶解液在100°C下滅酶后離心，取液相組分加入2倍(V/ V)的乙醇，去除其中的多糖和核酸類雜質。(3)活性多肽的超濾膜分離利用截留分子量為SkDa的超濾膜過濾分離，濾過液減壓濃縮及真空冷凍干燥后得到活性多肽。
(4)活性肽生理功能鑒定采用鄰苯三酚自氧化法測定該組分超氧陰離子清除活性。結果表明，在多肽濃度為0. 5mg/mL時，超氧陰離子的清除率為54. 8%。實施例3
(1)酵母蛋白的提取和酶解將干酵母粉和水按固液比1: 15 g/mL混合，選用含中性肽鏈內切酶30% wt、羧肽酶30% wt及風味蛋白酶40% wt的混合酶酶解。加酶量為干酵母粉質量的2. 5% wt，酶解溫度為20°C，酶解時間為4h。(2)酶解液的分離與除雜酶解液在110°C下滅酶后離心，取液相組分加入6倍(V/ V)的乙醇，去除其中的多糖和核酸類雜質。(3)活性多肽的超濾膜分離利用截留分子量為IOkDa的超濾膜過濾分離，濾過液減壓濃縮及真空冷凍干燥后得到活性多肽。(4)活性肽生理功能鑒定通過體外實驗，檢測活性多肽對α -葡萄糖苷酶的抑制活性。結果表明，在多肽濃度為0. 5mg/mL時，對α -葡萄糖苷酶抑制率為32. 42%。
權利要求
1.一種酵母來源的活性多肽制備方法，其特征在于，包括以下步驟(1)將干酵母粉和水按固液比1:5^1: 15 g/mL混合后加入酶進行酶解，所述酶為內切酶、外切酶及風味酶的混合物，三種酶所占比例依次為l(T30%Wt、l(T30%Wt和4(T80%wt，酶解溫度為2(T45°C，酶解時間為2 4h ；(2)步驟(1)得到的酶解液在9(Tll(TC滅酶后，過濾或離心分離得到液相組分；再除去液相組分中的多糖及核酸類雜質；(3)然后通過超濾膜分離，濾過液經減壓濃縮和真空冷凍干燥后獲得活性多肽。
2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述酶的加入量為干酵母粉質量的 0. 5% 2. 5%ο
3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)所述除去液相組分中的多糖及核酸類雜質是采用乙醇沉淀法，乙醇的加入量為過濾或離心所得液相組分的體積的2飛倍。
4.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述超濾膜分離選用截留分子量為 5kDa IOkDa的超濾膜。
全文摘要
本發明公開了一種酵母來源活性多肽的制備方法。將酵母粉和水混合，加入以內切酶、外切酶、風味酶組成的混合酶，酶解后固液分離。采用乙醇沉淀法除去液相組分中的多糖及核酸類雜質。上清液經截留分子量為5kDa~10kDa的超濾膜過濾分離，濾過液經減壓濃縮和真空冷凍干燥后獲得活性多肽。經過體外活性測定，該酵母來源活性多肽具有降血壓、抗氧化及降血糖活性。
文檔編號C12P21/06GK102286591SQ20111027228
公開日2011年12月21日 申請日期2011年9月15日 優先權日2011年9月15日
發明者倪賀, 葉就, 張才軍, 李琳, 胡松青, 郭莎莎 申請人:華南理工大學, 廣東五洲藥業有限公司