專利名稱：一種同時分析犬基因組dna 17個基因座的熒光標記檢測試劑盒及其檢測方法和應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種熒光標記復合擴增檢測試劑盒，具體是涉及一種通過復合擴增同時分析犬基因組DNA16個STR基因座和DAmel基因座的五色熒光標記復合擴增檢測試劑盒。
背景技術：
STR (short tandem r印eat，短串聯重復序列)是存在于真核生物基因組中的一類具有長度多態性的DNA序列，其核心序列由2 6個堿基構成，因該核心序列在不同個體間呈不同數目的串聯重復而呈現出長度多態性，因而短串聯重復序列遺傳多態性在個體識別、親權鑒定、法醫鑒定、遺傳育種及遺傳連鎖圖譜構建等應用上起著非常重要的作用。STR基因座具有因片段小而容易擴增、各基因座的擴增條件相似而能夠構建檢測試劑盒的特點，因而具有靈敏、準確、快速、信息量大等優點，尤其是在建立DNA數據庫方面，STR復合擴增技術具有極大的優越性。長期的DNA檢驗實踐表明，STR基因座的遺傳多態性在品種間存在一定的差異，各個基因座間差別也很大。在犬類的個體識別、親權鑒定和遺傳育種等方面多采用美國ABI公司推薦的MockMarks Animal Genotyping System的10 個犬基因座。在實現本發明的過程中，發明人發現現有技術至少存在以下問題美國ABI公司推薦的MockMarks Animal Genotyping System中僅有10個犬基因座，而且有部分基因座遺傳多態性不高，或是不同犬群間差異較大，由此給DNA檢驗技術的應用及其效率帶來一定的影響，不能滿足使用的要求。
發明內容
發明目的
本發明的目的是提供一種犬17個基因座的熒光標記復合擴增檢測試劑盒，提高了系統的累計個體識別力和累積非父排除率，滿足犬的個體識別、親權鑒定和遺傳育種等方面應用的需要。技術方案
一種同時分析犬基因組DNA 17個基因座的熒光標記檢測試劑盒，其特征在于該試劑盒含有引物混合物如下
權利要求
1. 一種同時分析犬基因組DNA 17個基因座的熒光標記檢測試劑盒，其特征在于該試劑盒含有引物混合物如下
2.根據權利要求1所述的一種同時分析犬基因組DNA17個基因座的熒光標記檢測試劑盒，其特征在于所述的17個基因座對應的引物分四組并分別用四種不同的熒光染料進行標記；其中PEZ1、PEZ2、FH2010、PEZ5 和 PEZ12 為一組，DAmel、PEZ21、PEZ3、PEZ6 和 PEZ8 為一組；FH2054、VWFX、F!E611 和 FH2132 為一組；PEZ20、PEZ15 和 FH2079 為一組；根據權利要求2所述的一種同時分析犬基因組DNA 17個基因座的熒光標記檢測試劑盒，其特征在于四種熒光染料為FAM、HEX、TAMRA, R0X。
3.根據權利要求3所述的一種同時分析犬基因組DNA17個基因座的熒光標記檢測試劑盒，其特征在于PEZ1、PEZ2、FH2010、PEZ5 和 PEZ12 為一組，其對應的引物采用 FAM 標記；DAmel、PEZ21、 PEZ3、PEZ6 和 PEZ8 為一組，其對應的引物采用 HEX 標記；FH2054、VffFX, FH2611 和 FH2132 為一組，其對應的引物采用TAMRA標記；PEZ20、PEZ15和 2079為一組，其對應的引物采用 ROX標記；具體為
4.根據權利要求1-4所述的一種同時分析犬基因組DNA 17個基因座的熒光標記檢測試劑盒，其特征在于所述的試劑盒為
5. 一種同時分析犬基因組DNA 17個基因座的熒光標記檢測試劑盒的檢測方法，其特征在于按如下步驟實現A、犬基因組DNA提取；B、按權利要求3或4所述的17個基因座的分組并對相應的引物進行熒光標記；C、PCR擴增體系
6.根據權利要求6所述的一種同時分析犬基因組DNA17個基因座的熒光標記檢測試劑盒的檢測方法，其特征在于步驟A中的犬基因組DNA樣品來源包括血液、血痕、組織、精斑、口腔拭子或毛發。
7.一種同時分析犬基因組DNA 17個基因座的熒光標記檢測試劑盒的應用，其特征在于該試劑盒應用于鑒別犬性別。
全文摘要
本發明涉及一種犬17個基因座熒光標記復合擴增檢測試劑盒，該系統可以同時分析犬基因組DNA17個基因座的遺傳多態性，其中的17個基因座DAmel、PEZ1、PEZ2、PEZ3、PEZ5、PEZ6、PEZ8、PEZ12、PEZ15、PEZ20、PEZ21、FH2010、FH2054、FH2079、FH2132、FH2611、VWFX分為4組，共涉及5種顏色的熒光標記。本發明的熒光標記復合擴增檢測試劑盒提供用于復合擴增17個基因座的寡核苷酸引物混合物；系統中包含的用于鑒別DNA樣品性別的基因座是DAmel基因座。該系統的檢測結果表明其多態性高、平衡性好、靈敏度高、特異性強、分型結果準確、種屬特異性強，完全能夠滿足犬類個體識別、親權鑒定以及DNA數據庫建設的需要。
文檔編號C12Q1/68GK102321752SQ20111023246
公開日2012年1月18日 申請日期2011年8月15日 優先權日2010年8月19日
發明者付平峰, 蘭康, 葉俊華, 李濤, 杜蔚安, 楊前勇, 熊勇華, 王博, 鄭衛國, 陳麗娜 申請人:公安部南昌警犬基地, 無錫中德美聯生物技術有限公司