專利名稱：油松花粉小肽的提取方法
技術領域：
本發明屬于分子生物工程與生物化學工程領域，尤其是一種油松花粉小肽的提取方法。
背景技術：
油松花粉含有人體所需的全部營養成分，且搭配合理，能夠全部補充、均衡人體所需的營養，素有“綠色黃金”之稱。近年來的研究表明，蛋白質在動物消化道中的消化酶作用下水解終產物大部分是2或3個氨基酸殘基組成的小肽，肽的吸收具有速度快、耗能低、 不易飽和且各種肽之間轉運無競爭性和抑制性的特點，生物酶工程加工方法在溫和反應條件下，水解生成多肽及氨基酸等物質，具有很高營養價值與功能特性，具有反應可控、副反應少、產品質量好和不破壞氨基酸等特點，生物酶法將是植物蛋白資源開發利用最有效、最有前途的加工方法。油松花粉破壁一般采用氣流干法法，能耗高，營養物損失大，有文獻報道采用濕法破壁比較理想，但需要添加助磨劑，而且破壁后糊狀物需要干燥。本發明的方法的優勢在于將濕法破壁時的水量提高數倍，避免了研磨過程中物料粘稠問題，固液分離后的濾液可以在酶水解制備小肽時作為媒介使用。專利文獻CN101100691公開了一種用復合酶從油松花粉中提取小肽的方法，由于審查員認為該申請沒有充分說明油松花粉的溶出方法，因此被認為公開不充分，本申請基于該申請的基礎上，充分說明了油松花粉的破壁方法，并獲得良好的效果。
發明內容
本發明的目的在于克服現有技術的不足之處，提供了一種油松花粉小肽的提取方法，本方法在于采用濕法膠體磨破壁，加入的水可以用于酶法水解蛋白質的介質，該方法不僅生產周期短，產品收率高。一種油松花粉小肽的提取方法，其特征在于提取小肽的方法包括以下步驟(1)將油松花粉與水混合，用膠體磨將油松花粉進行濕法破壁，破壁后過濾，得到破壁油松花粉及過濾液；(2)將破壁油松花粉用溶劑萃取出可溶性的成分；(3)將萃取后的油松花粉脫溶劑后放入帶有攪拌器的容器內，加入過濾液，調節溶液PH值為8 9后，在20 70°C條件下攪拌2 4小時，形成油松花粉混合液；(4)在油松花粉混合液中加入復合酶，充分攪拌2 8小時；(5) 90°C條件下滅酶，離心分離去除料渣，即得到小肽營養液。而且，所述步驟O)的溶劑為食用溶劑油或超臨界C02。而且，所述的油松花粉與水的質量比為1 5 15。而且，所述的在油松花粉混合液中加入的酶為堿性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶中的其中幾種的混合物。
而且，所述的酶的添加量與油松花粉干基的重量比為0. 2 0. 4 50 150。而且，所述小肽營養液中小肽分子量為300-1000道爾頓，即2 8個氨基酸所組成小分子肽。本發明的優點和有益效果為1.本發明是利用濕法將油松花粉破壁，破壁后含有營養組分的濾液可以用于酶水解工藝用媒介，克服了濕法破壁時由于料液比小物料粘稠，料液比大后續處理費用高的問題，最大限度保留油松花粉天然、高營養的性質。2.采取本發明的方法制得的油松花粉提取液，由于破壁徹底，使活性的小分子肽以及維生素、多糖、礦物質等營養成分充分溶出，更加適合食用，營養更加豐富。3.采用本發明制得的油松花粉提取液容易分離，水溶性高，不破壞花粉的營養成份，而且不存在花粉提取液受熱產生蛋白質凝固的現象，這種產品具有易于人體吸收的活性小肽及一些礦物質等微量營養元素。4.本發明是利用復合酶水解油松花粉蛋白，根據不同酶的反應特點，不用調節PH 值，由于蛋白質在水解過程中產生較多的羧基，使體系PH值不斷降低，最初體系為堿性，采用2709枯草桿菌發酵得到的堿性蛋白酶，最適于PH值為9-11，主要催化絲氨酸，當體系pH 值降到8以下時，中性蛋白酶發揮作用，中性蛋白酶由枯草芽孢桿菌發酵得到，最適于pH值為6. 0-7. 5，可由于多種蛋白質水解；而木瓜蛋白酶有較寬的pH范圍，由于不用堿調節pH 值，體系不產生鹽。
具體實施例方式下面通過具體實施例對本發明作進一步詳述，以下實施例只是描述性的，不是限定性的，不能以此限定本發明的保護范圍。實施例1 本發明用酶從油松花粉中提取小肽的方法，是利用復合酶的催化反應作用，使油松花粉中的蛋白質轉變為易被人體吸收的活性小分子肽，其提取方法包括以下步驟(1).在敞口容器中中加入除雜后油松花粉200份，飲用水2000份，用膠體磨研磨破壁，在顯微鏡下觀察破壁達到95%時，用板框壓濾機分離，得到破壁油松花粉和濾液；(2).取150份破壁后油松花粉，用二氧化碳超臨界萃取提取出油松花粉可溶性非蛋白成分；將萃取后的油松花粉份放入一個帶攪拌器的容器內，在45°C溫度條件下，加入 1800份的濾液制成混合液，用堿調節混合液pH = 10，浸泡攪拌3小時。(3).在上述混合液中加入0. 2份堿性蛋白酶(南寧東恒華道生物科技有限責任公司，枯草桿菌堿性蛋白酶)，0. 2份中性蛋白酶(南寧東恒華道生物科技有限責任公司)，在 45°C溫度條件下充分攪拌3小時，反應結束，pH = 5. 8 ；(4).在90°C條件下滅酶30min，冷卻至40°C離心分離，除去料渣，制成小肽營養液。(5).采用高效液相色譜法測定分子量，主要出峰位置在300-700道爾頓，即2_8個氨基酸組成的小肽。實施例2 將實施例1中的工藝步驟O)中的pH值調整為9，將工藝步驟(3)中酶的種類由中性蛋白酶改成木瓜蛋白酶即可，反應結束，體系PH = 5. 8。其他操作方法同實施例1。實施例3(1).在敞口容器中中加入除雜后油松花粉200份，飲用水1000份，用膠體磨研磨破壁，在顯微鏡下觀察破壁達到95%時，用板框壓濾機分離，得到破壁油松花粉和濾液；(2).取100份破壁后油松花粉，用6#溶劑油(符合GB 16629-2008標準)萃取出油松花粉可溶性非蛋白成分；將萃取后的油松花粉放入一個帶攪拌器的容器內，在50°C溫度條件下，用1000份的濾液將溶液調節至pH = 10，浸泡攪拌3小時。(3).在上述溶液中加入0. 2份堿性蛋白酶，0. 1份中性蛋白酶，0. 2份木瓜蛋白酶充分攪拌3小時，反應結束，pH = 5. 5 ；(4).在90°C條件下滅酶30min，冷卻至40°C離心分離，離心分離，除去料渣，制成
小肽營養液。
權利要求
1.一種油松花粉小肽的提取方法，其特征在于提取小肽的方法包括以下步驟(1)將油松花粉與水混合，用膠體磨將油松花粉進行濕法破壁，破壁后過濾，得到破壁油松花粉及過濾液；(2)將破壁油松花粉用溶劑萃取出可溶性的成分；(3)將萃取后的油松花粉脫溶劑后放入帶有攪拌器的容器內，加入過濾液，調節溶液 PH值為8 9后，在20 70°C條件下攪拌2 4小時，形成油松花粉混合液；(4)在油松花粉混合液中加入復合酶，充分攪拌2 8小時；(5)90°C條件下滅酶，離心分離去除料渣，即得到小肽營養液。
2.根據權利要求1所述的油松花粉小肽的提取方法，其特征在于所述步驟O)的溶劑為食用溶劑油或超臨界C02。
3.根據權利要求1所述的油松花粉小肽的提取方法，其特征在于所述的油松花粉與水的質量比為1 5 15。
4.根據權利要求1所述的油松花粉小肽的提取方法，其特征在于所述的在油松花粉混合液中加入的酶為堿性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶中的其中幾種的混合物。
5.根據權利要求1所述的油松花粉小肽的提取方法，其特征在于所述的酶的添加量與油松花粉干基的重量比為0.2 0.4 50 150。
6.根據權利要求1所述的油松花粉小肽的提取方法，其特征在于所述小肽營養液中小肽分子量為300-1000道爾頓，即2 8個氨基酸所組成小分子肽。
全文摘要
本發明涉及一種油松花粉小肽的提取方法，該方法包括以下步驟(1)將油松花粉與水混合，用膠體磨將油松花粉濕法破壁，過濾；(2)將過破壁后的油松花粉用溶劑油萃取出可溶性的成分；(3)將溶劑萃取后的油松花粉放入帶有攪拌器的容器內，加入(1)中得到的濾液，用堿調節pH值為8～9，在20～70℃條件下攪拌2～4小時，形成油松花粉混合液；(4)酶解、滅酶，離心分離去除料渣，即得到富含小肽的油松花粉營養液。本發明不僅生產周期短，產品收率高，而且提取液的營養成份是容易被人體吸收的小分子肽，所得的活性小分子肽營養液水溶性高，可直接使用。
文檔編號C12P21/06GK102229973SQ20111016134
公開日2011年11月2日 申請日期2011年6月15日 優先權日2011年6月15日
發明者尹樹花, 王貴玉, 薛潤鵬, 郭麗梅 申請人:承德暢達生物科技有限公司