專利名稱：提高植物抗性和誘導植物防御反應的蛋白質及其基因、應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及來自真菌的具有多于20個氨基酸的肽、編碼該肽段的核苷酸序列及其應用的領域，特別涉及一種能提高植物抗性和誘導植物防御反應來自于極細鏈格孢菌 (Alternaria tenuissima)的蛋白質及編碼該蛋白質的核苷酸序列及其應用。
背景技術：
煙草花葉病是由煙草花葉病毒引起的病毒病，對煙草生產危害性極大。自苗期至收獲期均能發病，田間株發病率一般為5 % 20 %，個別田塊可高達90 % 100 %，早期發病的損失可達50 70%，甚至失收。此外，病葉在烤曬后顏色不均，煙味差，品質大為降低，嚴重影響我國煙草生產的品質和產量。煙草花葉病毒(tobacco mosaic virus，縮寫為 TMV)，是煙草花葉病等的病原體，病毒粒體為桿狀。目前，對植物病害的防治主要采取化學防治的方法和種植抗病品種，但是由于化學農藥存在污染和抗藥性，使它們往往存在著無法摒除的弊端。上世紀隨著生物技術的發展，植物誘導抗性研究深受植物病理學家的重視。 激發子(elicitor)是一類能激發植物產生防衛反應的化合物，是誘導植物抗性的主要因子之一，也愈發受到關注。氧爆發(Reactive Oxygen Species, R0S)禾口一氧化氮(Nitro oxide, NO)在激發子誘導的植物抗病防衛反應中起著非常重要的作用，它們都參與調控氣孔運動，促進細胞編程性死亡，直接或間接殺死入侵的病原菌，作為第二信使可在轉錄水平上激活和調控植物體內各種防衛相關基因的表達以及參與系統獲得性抗性(Systemic acquired resistance, SAR)的建立等。極細鏈格孢菌產生的蛋白質作為激發子是一種重要的效應分子，它通過識別并作用于植物細胞表面或亞細胞組分的受體分子來傳遞病原菌的激發子信號，啟動植物的防衛系統，誘導植物的局部組織產生過敏性細胞壞死，并通過局部細胞信號物質的系統傳遞使植物最終產生系統獲得性抗性。中國農業科學院植物保護研究所已經從極細鏈格胞菌絲內中分離了一種蛋白激發子PeaTl，并獲得編碼該蛋白的基因(GenBank accession number EF030819)，該蛋白具有誘導植物系統獲得抗性的功能，激發煙草和水稻抗病相關基因和蛋白的表達，但該蛋白不引起煙草過敏(Hypersensitive reaction, HR)反應，即從煙草葉背注入50μ lUymol/L蛋白溶液24h后，在注射周圍不形成壞死斑。研究表明，同一種真菌可以產生一種以上的蛋白激發子，因此進一步挖掘極細鏈格孢菌產生的新蛋白激發子并明確其序列信息，對進一步揭示激發子提高植物抗性的作用機理具有非常重要的意義。
發明內容
本發明的目的是提供一種能夠提高植物抗性及誘導植物防御反應的來自于極細鏈格孢菌(Alternaria tenuissima) JH505菌株的蛋白質及編碼該蛋白質的核苷酸序列及其應用。
本發明所述的極細鏈格孢菌(Alternaria tenuissima) JH505菌株，是從中國湖南省大白菜黑斑病中分離純化獲得的。該菌種已經與2011年5月11日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)進行了保藏，地址北京市朝陽區北辰西路1號院3 號，中國科學院微生物研究所，郵政編碼100101，登記入冊編號CGMCC No :4841，分類命名為極細鏈格孢菌(Alternaria tenuissima)。一種分離的蛋白質，其氨基酸序列如SEQ ID NO 2所示。一種上述分離的蛋白質在提高植物抗性和誘導植物防御反應中的應用。本發明上述分離的蛋白質在提高植物抗性和誘導植物防御反應中的應用，其中所述植物為煙草。一種分離的多核苷酸，其核苷酸序列為下列所述之一(1)編碼氨基酸序列如SEQ ID NO 2的蛋白質的多核苷酸序列；(2)與上述多核苷酸序列根據堿基互補配對原則互補的多核苷酸序列。本發明分離的多核苷酸，其中所述編碼氨基酸序列如SEQ ID NO 2的蛋白質的多核苷酸序列如SEQ ID NO 1所示。一種載體，其含有上述分離的多核苷酸。本發明載體，其中所述載體為如圖9所示在PGEX-6P-1中插入基因Hripl的重組載體 PGEX-6P-1-Hripl。一種遺傳工程的宿主細胞，其含有上述的載體。本發明遺傳工程的宿主細胞，其中所述宿主細胞為含有上述重組載體 PGEX-6P-1-Hripl 的大腸桿菌 Rossetta (DE3)。本發明的蛋白質，是指來自極細鏈格孢菌(Alternaria tenuissima) JH505菌株的培養液、培養液的上清液或菌體的蛋白質。本發明的優點為該蛋白質可以明顯提高植物抗性，濃度低起效快，重組蛋白接種濃度在0. 08 μ M時誘導效果最佳，壞死斑數抑制率為60. 31 %，壞死斑直徑抑制率為 54. 04%。該蛋白質為提高植物的抗病性提供了新的途徑，因而在農業生產上具有廣闊的應用前景。下面結合附圖對本發明作進一步說明。
圖1是本發明中蛋白質用MONO-Q陰離子交換柱進行純化時的蛋白純化圖；圖2是本發明中蛋白質用分子篩Superdex 200 10/300GL進行純化時的蛋白純化圖；圖3是本發明中蛋白質純化時各個步驟的聚丙烯酰胺凝膠電泳圖；其中，I代表濃縮的發酵液過濾液，II代表用MONO-Q陰離子交換柱進行純化時的峰II組分，III代表用分子篩Superdex 200 10/300GL進行純化時的峰II組分；圖4是本發明中用水處理葉片3天后摩擦接種TMV，接種3天后拍攝的煙草葉片；圖5本發明中用1. 0 μ M Hripl處理葉片3天后摩擦接種TMV，接種3天后拍攝的煙草葉片。圖6是本發明中用Hripl處理煙草懸浮細胞后H2A的產生速率；其中■為Hripl處理煙草懸浮細胞后H2A的產生速率， 為空白對照。圖7是本發明中用Hripl處理煙草懸浮細胞后NO含量的測定；其中■為Hripl處理煙草懸浮細胞后NO含量，▲為空白對照。圖8是本發明中Hripl基因目的片段克隆所用PGEX-6P-1載體圖；圖9是本發明中在PGEX-6P-1中插入基因Hripl的重組載體PGEX-6P-I-Hripl ；圖10是本發明中重組蛋白質用GST Column柱進行親和層析后的SDS-PAGE和考馬斯亮蘭染色的電泳圖，M代表蛋白標準，1代表純化的重組蛋白質；
具體實施例方式實施例1極細鏈格孢菌的培養及發酵液制備極細鏈格孢菌(Alternaria tenuissima)是從中國湖南省大白菜黑斑病中分離純化獲得(CGMCC No. 4841)，菌株劃線接種于PDA平板，黑暗中培養1周，挑取菌落邊緣處接種于200mL的葡萄糖液體培養基中，24°C、150r/min黑暗中培養4周，獲得極細鏈格孢菌的發酵液。其中PDA平板的制備方法取去皮馬鈴薯200克，切成塊，加水1000毫升煮沸30 分鐘，濾去馬鈴薯塊，將濾液補足至1000毫升，加葡萄糖20克，瓊脂15克，待葡萄糖和瓊脂溶化后分裝，121°C滅菌30分鐘。葡萄糖液體培養基的制備方法磷酸二氫鉀0. 6g，硝酸鉀0. 7g，七水硫酸鎂 0. 25g，三水磷酸氫二鉀0. 125g，硝酸鈣0. 3g，硼酸lmg，一水硫酸錳1. 5mg,七水硫酸鋅％ig， 二水鉬酸鈉0. Img,碘化鉀20 μ g,五水硫酸銅20 μ g,六水氯化鈷20 μ g, FeNa2EDTA 8mg,煙酸lmg，吡哆醇lmg，泛酸鈣(calcium panthotenate) lmg，鹽酸硫胺素lmg，天冬酰胺lg，葡萄糖20g，加去離子水至1L，在121°C的溫度下，滅菌15分鐘。實施例2粗蛋白質激發子的制備和檢測取實施例1中所得的發酵液，在4°C、13000rpm條件下離心30min，收集上清液，用孔徑0.45 μ m的濾膜(Whatman)抽濾兩次，直至沒有菌體。加入硫酸銨粉末，使發酵液中硫酸銨終濃度為80%來沉淀目標蛋白質，然后將其放在4°C環境下靜置池，在4°C、IOOOOg 條件下離心15min，用Tris-HCl緩沖液QOmM，pH 8.0)在4°C透析下48h(阻斷10，000 分子量)，透析結束后離心，最后將獲得的沉淀物溶解到Tris-HCl緩沖液QOmM，pH 8. 0) 中，4°C透析Mh (阻斷10，000分子量)。收集透析袋中的液體并用孔徑為0. 22 μ m的濾膜 (Millipore Corp.，Billerica, MA, USA)抽濾一次。蛋白質含量用 BCA protein assay kit (Pierce, Inc.，Appleton，WI，USA)經GF-M2000型酶標儀(山東高密彩虹分析儀器有限公司)在波長590nm處測定，蛋白質終濃度為100 μ g/mL。生物活性的檢測以生長3個月，具有5-7片真葉的煙草(Nicotiana tabacum cv. Samsun NN)為材料，將粗蛋白溶液濃度稀釋到50μ g/mL，利用ImL不帶針頭的注射器， 將50 μ L溶液從葉子背面分別注入葉片中，以Tris-HCl緩沖液和相同濃度的牛血清白蛋白 (Bovine Serum Albumin, BSA)溶液為對照，24h觀察是否有壞死斑形成。結果注射粗蛋白質激發子的葉片，注射部位池后葉片表現輕微的透明，1 后可以呈現典型的過敏反應，形成壞死斑。24h后變褐并完全干枯，而對照并無任何反應，和正常葉片一樣。
實施例3蛋白質激發子的分離純化及生物活性測定使用AKTA explore 10 (GE Healthcare)蛋白質純化儀對所得的總蛋白質進行進一步純化，樣品首先通過MONO-Q陰離子交換柱(GE Healthcare)，用5ml的1Tris-HCl緩沖液(75mM, pH 8. 0)平衡MONO-Q陰離子交換柱，用含有NaCl的Tris-HCl緩沖液(NaCl濃度為0-1M)線性洗脫目標蛋白。檢測洗脫峰是否能引起煙草過敏反應。檢測到峰II (見圖 1)能引起過敏反應，故將該組分超濾濃縮(超濾管型號為Amicon Ultra_15，阻斷10，000 分子量，Millipore)，濃縮得到的組分用分子篩Superdex 200 10/300GL(GE)進一步純化， 洗脫緩沖液組分為 50mMNaH2P04，50mM Na2HPO4,150mM NaCl，pH 7.0，流速為 0. 5ml/ml，線性洗脫，最終純化得到能誘導過敏反應的活性組分峰II (見圖幻，并超濾濃縮，超濾過程中將原來的緩沖液替換為Tris-HCI緩沖液QOmM，pH 8. 0)，儲存在_20°C冰箱備用。以上純化過程中蛋白質激發子活性的檢測按照實施例2中生物活性的檢測方法進行。該單一蛋白質峰經15%變性聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測為單一帶(見圖幻，說明蛋白質純度高。該蛋白質表觀分子量為17kD(pI = 5. 50)，將此蛋白質激發子命名為Hripl (過敏反應誘導蛋白1， Hypersensitive response inducing protein 1)。用實例2同樣方法測試，設置不同濃度的Hripl (5 μ M，1 μ Μ，800ηΜ, 600ηΜ, 200ηΜ)，1 μ M能夠引起典型過敏性反應(見圖4禾口圖 5)，最低能引起過敏反應的蛋白濃度為ΙΟΟηΜ。結果分離純化的Hripl可以使煙草形成過敏反應的壞死斑。(1)氧爆發和H2A沉積的測定煙草懸浮細胞(tobacco BY_2)來自 Nicotiana tabacum cv. Xanthi，由中國農業大學生命科學學院贈送。煙草懸浮細胞培養基MS液體培養基(MS+100mg/ml，肌醇；0. 2%, KH2P04 ；0. 2mg/ml，2，4-D ；lmg/ml,VBl ；3%蔗糖)，121°C高壓蒸汽滅菌 15min，室溫保存。懸浮細胞在25°C、150rpm的搖床中培養，使細胞保持在指數增長期，實驗前一天進行上述培養方可使用。離心收集指數增長期的煙草懸浮細胞并重新懸浮于緩沖液(175mM甘露醇，0. 5mM 氯化鈣，0. 5mM硫酸鉀(北京化工，分析純)，IOmM羥乙基哌嗪乙磺酸(HEPES，Sigma), pH 6. 5)中，配制成0. lg/mL (細胞濕重/體積)的重懸細胞，在對1，150印111孵育111。取25(^1^ 重懸細胞加入HEPES緩沖液(175mM甘露醇，0. 5mM氯化鈣，0. 5mM硫酸鉀(北京化工，分析純)，IOmM羥乙基哌嗪乙磺酸(HEPES, Sigma), 0. 3mM發光氨(Luminol))中，同時加入Hripl 使其終濃度為luM，開始用化學發光檢測儀(Promega)，檢測細胞所生成的活性氧。結果用Hripl處理煙草懸浮細胞約IOmin后，煙草懸浮細胞出現氧爆發現象； H2O2的最大值出現在處理后30min，然后H2A濃度逐漸降低。(見圖6)(2) NO積累量的測定NO是植物抗病反應的中早期信號反應，具有調控植物抗病信號傳導途徑的作用。煙草懸浮細胞中NO含量的測定按照Lamotte所敘述的方法((Lamotte et al. 2004), 用NO特殊的熒光體DAF-2DA (4，5- 二氨基熒光素二乙酸酯，4，5-diaminof Iuorescein diacetate) (Sigma-Aldrich)進行熒光標記，然后通過熒光光譜得到NO的量。檢測熒光度結果表明，當Hripl的濃度達到0. 1 μ ηΜ時，就能觀測到Ν0，并且在IOmin內持續增加，在經過Hripl處理后的IOOmin達到穩定水平(見圖7)。實施例4蛋白質激發子Hripl肽段序列的獲得
純化的Hripl蛋白質經雙向電泳檢測，切取蛋白質單點分別經IOng/ μ 1測序級修飾胰蛋白質酶 Gequencing Grade Modified Trypsin，Promega) 30°C、ρΗ7· 5 酶解 30min lh，ESI-MS/MS為英國Micromass公司的Q-T0F2正交加速電噴霧串聯質譜儀。配備納升噴霧源。所有測定均在正離子方式下進行。質譜儀用Glu-fib的串聯質譜碎片校正，質量準確度小于0. IDa。霧化氣為氮氣，碰撞氣體為氬氣。源溫80°C，錐孔電壓50V。TOF加速電壓 9. lkV。MCP檢測器電壓為2150V。毛細管電壓800V。最終通過MALDI-T0F和de novo測序獲得該蛋白質的多個肽段序列，(Dvctggpqtfapqnvr ；o)rllfdlr和(3)lvtsptsgsvdftfk， 根據以上序列設計編碼Hripl基因的PCR引物。實施例5蛋白質激發子Hripl編碼基因的克隆和序列分析利用反轉錄酶鏈式反應(RT-PCR)以及cDNA末端快速擴增技術(RACE)克隆得到編碼上述激發子的基因Hripl。根據質譜測序結果設計激發子編碼基因3’區的簡并引物 (5，-CGTCTYCTGTTYGACCTYCGT-3‘)，利用試劑盒 3，Full Race Kit(TaKaRa)進行 3，-RACE 反應。用膠回收試劑盒(天根，北京)對PCR產物進行純化。將純化得到的產物克隆到載體 PMD19-T (TaKaRa)上，并將該重組質粒轉化感受態細胞DH5 α (Transgen,北京)。選用通用引物M13-47和RV-M進行PCR檢測，篩選出陽性克隆進行核酸測序(英駿公司)。為擴增基因的5’區，據以上測序結果設計兩個引物外引物(5’ -GCCCTCGTTGTGACACTCAAGC-3’ )和內引物(5，-CCTGAGCAGGTCCAGGAATGGGTG-3，)，利用試劑盒 5，Full Race Kit(TaKaRa)進行5，-RACE反應，經過與3，-RACE反應后相同的處理，測序后得到了如SEQ ID NO=I所示的核苷酸序列。根據該核苷酸序列推測的氨基酸序列(SEQ ID NO 2)中包含實施例4中獲得的3個肽段。根據MALDI-T0F和de novo測序結果可以推出，該基因的理論上編碼含有163個氨基酸殘基的蛋白。其cDNA序列包涵139bp的5'側翼序列，495bp的開放讀碼框(ORF)， 和244bp的3'側翼序列。Hripl ORF編碼蛋白分子量17562. 5Da，等電點(pi)為5. 50。對此理論推斷蛋白進行分析，發現Hripl與一些植物病原真菌有很高的相似性。其中相似性最高的是引起小麥斑點病(Wheat tanspot fungus pathogen)的病原菌理論蛋白(Genbank 登錄號為EDU45602)。實施例6 Hripl基因的原核表達和純化(1)表達載體的構建設計蛋白質激發子基因Hripl的特異性引物，引入帶有酶切保護堿基的酶切位點，正向引物5，-EcoRI GGAATTCATGTACTTCTCGAATATACTCCCGG-3，，反向引物5，-Xho I GCT CGAGTCAGCACTGAGGCAAGTTACAGAC-3，，擴增全長 Hripl 基因(94°C 3min ；94°C 30s, 67°C 30s, 72°C lmin，;35循環；72°C IOmin ；4°C )。先將Hripl基因目的片段克隆到PGEX-6P-1載體，經 EcoRI和Xhol酶切后，將Hripl片段克隆到PGEX-6P-1載體(Novagen)(見圖8)的EcoRI/ Xhol位點，電擊轉化到大腸桿菌Rossetta(DE3)，經氨芐青霉素篩選后，挑取生長良好的克隆進行PCR檢測，并對PCR檢測呈陽性的菌落進行測序驗證。表達載體中的目的基因與 PGEX-6P-1質粒上的基因序列完全相同，閱讀框也正確，表明目的基因已成功構建到表達載體中，將構建成功的表達載體命名為pGEX-6P-l-Hrip (見圖9)。(2)誘導表達將步驟(1)中所獲得的表達載體用熱激發轉化到大腸桿菌Rossetta (DE!3)中。質粒提取及轉化表達宿主菌株的方法同(1)，將驗證正確的重組表達菌株過夜活化，同時取 PGEX-6P-1空質粒的菌株作為對照。分別取ImL過夜培養液加入到含有100 μ g/mL氨芐青霉素的IOOmL LB液體培養基中(1 %接種量)，37°C，200r/min振蕩培養2 池培養至OD6tltl 為0. 6 0. 8。加入誘導劑IPTG (終濃度為0. Immo 1/L)，16°C，220r/min繼續振蕩培養24h, 誘導表達目的蛋白。將誘導表達后的菌液5000r/min離心5分鐘后收集菌體，用20mM磷酸緩沖液PH7. 4洗滌一次后，再用20mM、pH7. 4 PBS緩沖液重新懸浮細胞并超聲破碎。將破碎后的混合物13000r/min離心后取上清。取20 μ L上清液，加入5 μ L 5ΧSDS上樣緩沖液 (變性)重懸菌體，沸水浴中加熱lOmin，13000r/min離心lOmin，取上清進行SDS-PAGE檢測，考馬斯亮蘭R250染色，觀察表達情況。轉化空質粒的大腸桿菌處理方法與轉化目的基因的菌株相同，也進行SDS-PAGE檢測。結果經過SDS-PAGE檢測，獲得一個分子量約43_kDa的融合表達蛋白 (GST-Hripl)，其中GST標簽的分子量為^kDa,與預測一致。(3)重組蛋白的純化利用AKTA explorerlO蛋白純化儀進行重組蛋白的純化。選用GST Column柱進行親和層析，先用50mM EDTA的磷酸緩沖液平衡親和柱；取步驟( 離心后的重組蛋白液 5mL進樣，流速為lmL/min，淋洗至基線后，用洗脫緩沖液(20mM PBS，pH7. 4，500mM咪唑)進行洗脫；收集各洗脫峰，在大量體積的磷酸鹽緩沖液O0mM，pH7.4)中4°C透析過夜，隨后進行SDS-PAGE電泳和考馬斯亮蘭染色檢測蛋白的純度(見圖10)。生物活性測定采用實施例2中方法測定重組蛋白質激發子對煙草的活性。結果獲得純化的融合表達蛋白(GST-Hripl重組蛋白)。實施例7重組蛋白(GST-Hripl)在煙草上引起的反應用ImL不帶針頭的注射器，分別將50 μ L、lyM的融合表達蛋白(GST-Hripl)，以及相同濃度的空質粒表達蛋白和iTris-HClOOmM, ρΗ 8.0)溶液分別從葉子背面注入煙草葉片中，24h后觀察葉片上的反應。如實施例3中(1)的方法，觀察重組蛋白誘導H2A在處理葉片上的積累；如實例3 中O)的方法，觀察重組蛋白引起煙草懸浮細胞NO積累量。結果重組蛋白(GST-Hripl)能夠引起煙草葉片發生過敏反應；GST-Hripl使處理葉片H2O2積累，產生紅褐色沉淀；GST-Hripl使處理的煙草懸浮細胞NO含量增加。(1)抗性相關基因半定量RT-PCR分析取GST-Hripl處理不同時間的煙草葉片，用液氮研磨成粉，按50-100mg/mL加入 Trizol試劑，室溫5min靜置，12000rpm離心5min,棄沉淀；按200 μ L氯仿/mL Trizol試劑加入氯仿，渦旋劇烈震蕩混勻，4°C，12000rpm離心15min，吸取上層，加入0. 5mL異丙醇/mL Trizol試劑，混勻，-20°C靜置20min;離心，75% (w/v)乙醇漂洗，離心去除乙醇，5-lOmin 晾干。加入焦碳酸二乙酯(diethypyrocarbonate，DEPC)處理水，測RNA濃度，調成相同濃度。第一鏈cDNA 的合成，采用 TransGen 公司的 TransScript Two-Step RT-PCR Kit。 取 500ng 總 RNA，按照試劑盒說明書，用 TransScript RT/RI Enzyme Mix,以 Anchored Oligo (dT) 18為引物，42°C孵育30min，85°C加熱5min使酶失活。取1 μ L反轉錄產物為模板做PCR，. β -actin為內標基因，以抗性相關基因特異引物做PCR，觀察抗性相關基因的表達情況。 表1.利用反轉錄酶鏈式反應(RT-PCR)檢測抗性基因所用引物序列
權利要求
1.一種分離的蛋白質，其特征在于其氨基酸序列如SEQ ID N0:2所示。
2.—種權利要求1所述的蛋白質在提高植物抗性和誘導植物防御反應中的應用。
3.根據權利要求2所述蛋白質在提高植物抗性和誘導植物防御反應中的應用，其特征在于所述植物為煙草。
4.一種分離的多核苷酸，其特征在于其核苷酸序列為下列所述之一(1)編碼氨基酸序列如SEQID NO 2的蛋白質的多核苷酸序列；(2)與上述多核苷酸序列根據堿基互補配對原則互補的多核苷酸序列。
5.根據權利要求4所述分離的多核苷酸，其特征在于所述編碼氨基酸序列如SEQID NO 2的蛋白質的多核苷酸序列如SEQ ID NO 1所示。
6.一種載體，其特征在于含有權利要求4或5所述的分離的多核苷酸。
7.根據權利要求6所述載體，其特征在于所述載體為在PGEX-6P-1中插入基因Hripl 的重組載體 PGEX-6P-1-Hripl。
8.一種遺傳工程的宿主細胞，其特征在于含有權利要求6或7所述的載體。
9.根據權利要求8所述遺傳工程的宿主細胞，其特述在于所述宿主細胞為含有權利要求7所述重組載體的大腸桿菌Rossetta (DE3)。
全文摘要
本發明提高植物抗性和誘導植物防御反應的蛋白質及其基因、應用涉及來自真菌的具有多于20個氨基酸的肽、編碼該肽段的核苷酸序列及其應用的領域。本發明記載了一種分離的蛋白質，其氨基酸序列如SEQ ID NO2所示；以及一種上述蛋白質在提高植物抗性和誘導植物防御反應中的應用；還記載了一種編碼氨基酸序列如SEQ ID NO2所示的蛋白質的分離的多核苷酸，其核苷酸序列如SEQ ID NO1所示。本發明蛋白質可以明顯的提高植物的抗性，濃度低起效快，為提高植物的抗病性提供了新的途徑。
文檔編號C12N1/21GK102241752SQ20111014920
公開日2011年11月16日 申請日期2011年6月3日 優先權日2011年6月3日
發明者曾洪梅, 楊秀芬, 袁京京, 邱德文, 郭立華, 馬赫什·薩克哈萊姆·庫勒 申請人:中國農業科學院植物保護研究所