專利名稱：流產嗜性衣原體外膜重組蛋白及其編碼基因與應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種重組蛋白及其編碼基因與應用，尤其涉及一種流產嗜性衣原體外膜蛋白的重組蛋白及其編碼基因，以及在檢測高敏感性流產嗜性衣原體方面的應用。
背景技術：
衣原體(Chlamydia)是一大群與革蘭氏陰性菌有密切關系的專性真核細胞內寄生的原核生物。流產嗜性衣原體是比較常見的導致母豬流產的病原體，同時其致病動物種類也非常廣泛，能夠引起公豬和其它動物包括長期與患畜有接觸的人群的各種疾病。流產嗜性衣原體所引起的各種動物和人的感染已使許多國家的畜牧業生產和公共衛生影響遭受了巨大的經濟損失。進入九十年代，豬衣原體在國內外感染總體均呈上升趨勢，規模化豬場的不斷發展也伴隨著豬衣原體病感染的不斷上升，給集約化養豬業造成嚴重的經濟損失。為保障畜禽與人類健康，最根本的解決辦法就是能夠找到衣原體的相關致病因子，模擬相關致病因子在衣原體感染過程中的遞呈過程，研究該致病因子與其重組蛋白免疫在抵抗流產衣原體感染方面的作用，從而探索預防豬流產嗜性衣原體性感染的新途徑，并在此基礎上研究新的衣原體相關診斷方法。在衣原體診斷方面，目前應用最多的仍然是主要外膜蛋白(MOMP)和脂多糖 (LPS)。他們主要用作ELISA方法中的包被抗原，進行衣原體抗體檢測，如法國IDVET公司的流產衣原體檢測試劑盒。有時也作為熒光抗體進行衣原體抗原檢測，如英國OXOID公司的衣原體熒光檢測試劑盒。基于流產衣原體和沙眼衣原體全基因序列測序工作的順利完成， 給相關研究者提供了更好的衣原體研究基因平臺。
發明內容
本發明的目的是提供一種抗原性好，特異性強、敏感性高的流產嗜性衣原體外膜重組蛋白及其編碼基因。本發明所提供的流產嗜性衣原體外膜重組蛋白，命名為PompD-N，是如下a)或 b)a)由序列表中SEQ ID No. 2自氨基末端第173-611位所示的氨基酸序列組成的蛋白質；b)序列表中SEQ ID No. 2所示的氨基酸序列組成的蛋白質。為了使a)的PompD-N蛋白質便于純化，可在由序列表中SEQ IDNo. 2自氨基末端第173-611位所示的氨基酸序列組成的蛋白質的氨基末端或羧基末端連接上如表1所示的標簽。表1.標簽序列
權利要求
1.流產嗜性衣原體外膜重組蛋白，是如下a)或b)a)由序列表中SEQID No. 2自氨基末端第173-611位所示的氨基酸序列組成的蛋白質；b)序列表中SEQID No. 2所示的氨基酸序列組成的蛋白質。
2.編碼流產嗜性衣原體外膜重組蛋白的基因。
3.根據權利要求2所述的基因，其特征在于是如下a)或b)或c)a)其核苷酸殘基序列如序列表中SEQID No. 1自5'末端第517-1825位所示；b)其核苷酸殘基序列如序列表中SEQID No. 1所示；c)在嚴格條件下與a)或b)限定的DNA片段雜交且編碼與流產嗜性衣原體外膜重組蛋白的DNA分子。
4.一種重組表達載體，含有以流產嗜性衣原體外膜重組蛋白PompD-N的編碼基因為目的基因的表達盒。
5.含有權利要求4所述重組表達載體的轉基因細胞系及重組菌。
6.權利要求1所述流產嗜性衣原體外膜重組蛋白、權利要求2或3所述基因在檢測流產嗜性衣原體中的應用。
7.流產嗜性衣原體的檢測方法，是以權利要求1所述的流產嗜性衣原體外膜重組蛋白為抗原，以間接ELISA方法檢待測樣本中的流產嗜性衣原體抗體。
8.以權利要求1所述的流產嗜性衣原體外膜重組蛋白為包被抗原的流產嗜性衣原體酶聯免疫吸附試劑盒。
9.根據權利要求8所述的流產嗜性衣原體酶聯免疫吸附試劑盒，其特征在于還含有酶結合物工作液、陽性對照、陰性對照、樣品稀釋液、IOX濃縮洗滌液、顯色液A、顯色液B和終止液。
10.根據權利要求9所述的流產嗜性衣原體酶聯免疫吸附試劑盒，其特征在于所述酶結合物工作液為HRP標記兔抗豬IgG多克隆抗體，所述陽性對照為豬C. abortus標準陽性血清，所述陰性對照為豬標準陰性血清。
全文摘要
本發明涉及流產嗜性衣原體外膜重組蛋白及其編碼基因與應用。本發明的流產嗜性衣原體外膜重組蛋白，是如下a)或b)a)由序列表中SEQ ID No.2自氨基末端第173-611位所示的氨基酸序列組成的蛋白質；b)序列表中SEQ ID No.2所示的氨基酸序列組成的蛋白質。本發明的流產嗜性衣原體外膜重組蛋白具有良好的抗原性，特異性強。以流產嗜性衣原體外膜重組蛋白為抗原，以間接ELISA方法可以檢測流產嗜性衣原體，該方法操作簡便，檢測快速，成本低。
文檔編號C12N1/19GK102180953SQ20111004856
公開日2011年9月14日 申請日期2011年2月28日 優先權日2011年2月28日
發明者何誠, 凌勇, 楊君敬, 歐長波, 潘青 申請人:中國農業大學