專利名稱：用于測量低密度脂蛋白膽固醇的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及測量樣本中低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)的方法，其中具有烯丙胺或二烯丙胺單元的聚合物化合物特異地和非LDL(VLDL或者HDL)形成復(fù)合物。
背景技術(shù)：
除了和白蛋白結(jié)合的游離脂肪酸外，存在于血液的脂質(zhì)摻入脂蛋白的結(jié)構(gòu)中，并且它們以乳糜微粒(CHM)、極低密度脂蛋白(VLDL)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白 (HDL)等等的形式存在。膽固醇特別地分布于VLDL、LDL和HDL。已知LDL起運(yùn)輸膽固醇的作用，并且高水平的LDL促進(jìn)動脈硬化。已知血液中低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)的測量成為動脈硬化發(fā)生和進(jìn)行的指示物。Burstein M 等人(Rapid Method for the Isolation of Lipoproteins from Human Serum by Precipitation with Polyanions, J. Lipid Researchll :583，1970)描述， 主要地通過使用聚陰離子化合物使除了 HDL外的脂蛋白特異凝集。然而，該文獻(xiàn)描述的聚陰離子化合物特異地和非LDL(VLDL或者HDL)形成復(fù)合物是困難的。CC Heuck 禾口 G Schlierf(Beta-lipoprotein cholesterol quantitation with polycations，Clin Chem 1977 23 =536-540)描述通過使用聚乙烯亞胺和陽離子交換樹脂排除VLDL和HDL，從而定量脂蛋白膽固醇。然而，該文獻(xiàn)描述的方法難以解決其要求孵育 15分鐘或更長，以及其需要兩類試劑的問題。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種高選擇性測量體液中低密度脂蛋白膽固醇(LDL)的方法。作為為實(shí)現(xiàn)上述目的而進(jìn)行的深入研究的結(jié)果，本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)具有烯丙胺或二烯丙胺單元的聚合物化合物，其能夠和非LDL形成復(fù)合物。使用本發(fā)明的化合物，使得單一的化合物和非LDL(特別地，VLDL和HDL)在短時間形成復(fù)合物成為可能。因此，使得測量包含于LDL的成分(例如膽固醇、中性脂肪和脫輔基蛋白)成為可能。本發(fā)明基于這些發(fā)現(xiàn)而完成。本發(fā)明提供減少或者除去樣本中極低密度脂蛋白(VLDL)和高密度脂蛋白(HDL) 的方法，其包括用具有烯丙胺或二烯丙胺單元的聚合物化合物處理含有極低密度脂蛋白 (VLDL)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)的樣本。本發(fā)明還提供測量體液中低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)的方法，其包括用具有烯丙胺或二烯丙胺單元的聚合物化合物處理體液，并使用(a)膽固醇酯酶和(b)膽固醇氧化酶或者膽固醇脫氫酶測量低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)。優(yōu)選地，使用具有烯丙胺或二烯丙胺單元的聚合物化合物，其和脂蛋白中的極低密度脂蛋白(VLDL)形成復(fù)合物。優(yōu)選地，使用具有烯丙胺或二烯丙胺單元的聚合物化合物，其和脂蛋白中的高密度脂蛋白(HDL)形成復(fù)合物。優(yōu)選地，所述具有烯丙胺或二烯丙胺單元的聚合物化合物是聚(烯丙胺)、聚(烯丙胺)鹽酸鹽、烯丙胺鹽酸鹽共聚物、二烯丙胺鹽酸鹽聚合物和二烯丙胺鹽酸鹽共聚物中的任何，條件是根據(jù)需要任選修飾烯丙胺和二烯丙胺。優(yōu)選地，所述烯丙胺鹽酸鹽共聚物和二烯丙胺鹽酸鹽共聚物分別是烯丙胺鹽酸鹽和-S02-的共聚物以及二烯丙胺鹽酸鹽和-S02-的共聚物。優(yōu)選地，所述具有烯丙胺或二烯丙胺單元的聚合物化合物是聚(烯丙胺)或者二烯丙胺鹽酸鹽和-S02-的共聚物。優(yōu)選地，所述低密度脂蛋白膽固醇通過使得過氧化物酶和色原體作用于從低密度脂蛋白膽固醇產(chǎn)生的過氧化氫以實(shí)施顯色反應(yīng)而測量，所述過氧化氫是由于膽固醇酯酶和膽固醇氧化酶的作用而從所述低密度脂蛋白膽固醇產(chǎn)生的。本發(fā)明還提供用于測量低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)的試劑，其包括(a)膽固醇酯酶、(b)膽固醇氧化酶或者膽固醇脫氫酶和(c)具有烯丙胺或二烯丙胺單元的聚合物化合物。本發(fā)明還提供用于測量低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)的試劑盒，其包括(a)膽固醇酯酶、(b)膽固醇氧化酶、(c)過氧化物酶、(d)色原體和(e)具有烯丙胺或二烯丙胺單元的聚合物化合物。本發(fā)明還提供用于測量低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)的干燥分析元件，其包括 (a)膽固醇酯酶、(b)膽固醇氧化酶、(c)過氧化物酶、(d)色原體和(e)具有烯丙胺或二烯丙胺單元的聚合物化合物。根據(jù)本發(fā)明，可以僅使用單一化合物在短時間內(nèi)高選擇性地測量低密度脂蛋白膽固醇。
圖1顯示實(shí)施例1中進(jìn)行的瓊脂糖凝膠電泳(膽固醇染色的結(jié)果)。圖2顯示對比例1中進(jìn)行的瓊脂糖凝膠電泳(膽固醇染色的結(jié)果)。圖3顯示實(shí)施例2中LDL-C測量的結(jié)果。圖4顯示對比例2中LDL-C測量的結(jié)果。
具體實(shí)施例方式在下文中，本發(fā)明的實(shí)施方案將被詳細(xì)描述。在本發(fā)明說明書中，以％表達(dá)的濃度表示重量百分比濃度。本發(fā)明涉及減少或者除去樣本中極低密度脂蛋白(VLDL)和高密度脂蛋白(HDL) 的方法，其包括用具有烯丙胺或二烯丙胺單元的聚合物化合物處理含有極低密度脂蛋白 (VLDL)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)的樣本。此外，本發(fā)明涉及測量體液中低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)的方法，其包括用具有烯丙胺或二烯丙胺單元的聚合物化合物處理體液，并使用(a)膽固醇酯酶和(b)膽固醇氧化酶或者膽固醇脫氫酶測量低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)。血液、血清、血漿、尿等等可以用作體液。這樣的血液、血清、血漿或者尿可以直接用作體液樣品。另外，也可以使用已經(jīng)適當(dāng)?shù)仡A(yù)處理的血液、血清、血漿或者尿。構(gòu)成本發(fā)明所用的具有烯丙胺或二烯丙胺單元的聚合物化合物的單體的實(shí)施例包括烯丙胺(伯胺)、二烯丙胺(仲胺)、烷基二烯丙胺(叔胺)和二烷基二烯丙胺(季胺)。 胺既可以是游離形式，也可以是鹽，如鹽酸鹽、乙酸鹽或硫酸鹽。氨基基團(tuán)可以由烷基基團(tuán) (例如甲基基團(tuán)、乙烷基團(tuán)等)、烷氧羰基基團(tuán)(例如甲氧羰基基團(tuán))或其它基團(tuán)保護(hù)。多胺可以是多胺的均聚物、或多胺和二氧化硫、順丁烯二酸等等形成的共聚物。所述具有烯丙胺或二烯丙胺單元的聚合物化合物優(yōu)選是聚(烯丙胺)、聚(烯丙胺)鹽酸鹽、烯丙胺鹽酸鹽共聚物、二烯丙胺鹽酸鹽聚合物和二烯丙胺鹽酸鹽共聚物中的任何，條件是根據(jù)需要任選修飾烯丙胺和二烯丙胺。應(yīng)當(dāng)指出，本發(fā)明中使用的術(shù)語“鹽酸鹽聚合物或者共聚物”，不是指單體鹽酸鹽聚合形成的產(chǎn)物，而是指單體聚合后形成的聚合物的胺的部分是鹽酸鹽，與生產(chǎn)方法無關(guān)。具有烯丙胺或二烯丙胺單元的聚合物化合物的分子量優(yōu)選是從300至200000，更優(yōu)選是從1000至50000，以及進(jìn)一步優(yōu)選從1000至10000。本發(fā)明使用的具有烯丙胺或二烯丙胺單元的聚合物化合物的具體實(shí)施例包括 Nitto Boseki Co.，LTD的PAA系列和PAS系列。可以用于本發(fā)明的Nitto Boseki Co., LTD的PAA系列和PAS系列聚合物化合物的性質(zhì)將在下面描述。然而，可以用于本發(fā)明的化合物的類型并不受限于此。表 權(quán)利要求
1.一種用于減少或除去樣本中極低密度脂蛋白(VLDL)和高密度脂蛋白(HDL)的方法， 其包括用具有烯丙胺或二烯丙胺單元的聚合物化合物處理含有極低密度脂蛋白(VLDL)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)的樣本。
2.一種測量體液中低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)的方法，其包括用具有烯丙胺或二烯丙胺單元的聚合物化合物處理體液，以及使用(a)膽固醇酯酶和(b)膽固醇氧化酶或膽固醇脫氫酶測量低密度脂蛋白膽固醇(LHL-C)。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的方法，其中使用具有烯丙胺或二烯丙胺單元的聚合物化合物，其和脂蛋白中極低密度脂蛋白(VLDL)形成復(fù)合物。
4.根據(jù)權(quán)利要求2的方法，其中使用具有烯丙胺或二烯丙胺單元的聚合物化合物，其和脂蛋白中高密度脂蛋白(HDL)形成復(fù)合物。
5.根據(jù)權(quán)利要求2的方法，其中所述具有烯丙胺或二烯丙胺單元的聚合物化合物是聚 (烯丙胺)、聚(烯丙胺)鹽酸鹽、烯丙胺鹽酸鹽共聚物、二烯丙胺鹽酸鹽聚合物和二烯丙胺鹽酸鹽共聚物中的任何，條件是根據(jù)需要任選修飾烯丙胺和二烯丙胺。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的方法，其中所述烯丙胺鹽酸鹽共聚物和二烯丙胺鹽酸鹽共聚物分別是烯丙胺鹽酸鹽和-S02-的共聚物以及二烯丙胺鹽酸鹽和-S02-的共聚物。
7.根據(jù)權(quán)利要求4的方法，其中所述具有烯丙胺或二烯丙胺單元的聚合物化合物是聚 (烯丙胺)或者二烯丙胺鹽酸鹽和-S02-的共聚物。
8.根據(jù)權(quán)利要求2的方法，其中所述低密度脂蛋白膽固醇通過使得過氧化物酶和色原體作用于從低密度脂蛋白膽固醇產(chǎn)生的過氧化氫以實(shí)施顯色反應(yīng)而測量，所述過氧化氫是由于膽固醇酯酶和膽固醇氧化酶的作用而從所述低密度脂蛋白膽固醇產(chǎn)生的。
9.用于測量低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)的試劑，其包括(a)膽固醇酯酶、(b)膽固醇氧化酶或者膽固醇脫氫酶和(c)具有烯丙胺或二烯丙胺單元的聚合物化合物。
10.用于測量低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)的試劑盒，其包括(a)膽固醇酯酶、(b)膽固醇氧化酶、(c)過氧化物酶、(d)色原體和(e)具有烯丙胺或二烯丙胺單元的聚合物化合物。
11.用于測量低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)的干燥分析元件，其包括(a)膽固醇酯酶、 (b)膽固醇氧化酶、(c)過氧化物酶、(d)色原體和(e)具有烯丙胺或二烯丙胺單元的聚合物化合物。
全文摘要
本發(fā)明提供用于測量低密度脂蛋白膽固醇的方法。具體地說，本發(fā)明提供能夠高選擇性地測量體液中低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)的方法，其包括用具有烯丙胺或二烯丙胺單元的聚合物化合物處理體液，以及使用(a)膽固醇酯酶和(b)膽固醇氧化酶或膽固醇脫氫酶測量低密度脂蛋白膽固醇(LHL-C)。
文檔編號C12Q1/60GK102162005SQ20111004511
公開日2011年8月24日 申請日期2011年2月22日 優(yōu)先權(quán)日2010年2月23日
發(fā)明者M·朱馬維德, 豬股弘子 申請人:富士膠片株式會社