專利名稱：應用磁珠捕獲去除殺菌后殘留消毒劑的方法
技術領域：
本發明涉及一種應用磁珠捕獲去除殺菌后殘留消毒劑的方法，主要應用于消毒劑 (殺菌劑)殺菌性能的檢測、鑒定和評價。
背景技術：
為了準確檢測、鑒定和評價消毒劑(殺菌劑)殺菌性能，經過一定的殺菌時間后，都需要有去除殘留消毒劑步驟。目前，最常用的去除殘留消毒劑方法是中和劑法。常用的中和劑有以下幾種5g/L硫代硫酸鈉針對氯型消毒劑；3g/L卵磷脂+20g/L吐溫80 ； 10g/L 硫代硫酸鈉+20g/L吐溫80，針對氧化型消毒劑。每次檢測，需要去除殘留消毒劑方法需鑒定合格后，方可應用。(引用《消毒技術規范》和QB/T2738-2005《日化產品抗菌抑菌效果的評價方法》)
但是中和劑法有如下缺點1.針對復方型消毒劑，上述中和劑成分是不夠的，中和劑成分篩選復雜。2.不同的消毒劑有效物濃度不一致，上述常用中和劑成分的濃度不一定合理。3.中和劑成分本身不能對微生物有害。磁珠分離技術用于細菌的定性分離濃集等，包括特異性磁分離(免疫磁分離)和非特異性磁分離兩種形式。由于免疫磁分離能特異性地吸附目標細菌，受到微生物學等學術界關注，但該技術的應用受到了包被抗體種類的限制。有研究表明，具有超順磁性的裸磁珠能非特異性的吸附細菌，能對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌、沙門菌、志賀菌、 副溶血性弧菌進行吸附。目前磁珠分離技術中所應用的磁珠對微生物的吸附率不夠高，不適合微生物的定量檢測。
發明內容
為了克服去除殘留消毒劑步驟中，中和劑篩選復雜和困難的不足，本發明提供一種應用磁珠捕獲去除殺菌后殘留消毒劑的方法。本發明所采取的技術方案是應用磁珠捕獲去除殺菌后殘留消毒劑的方法是向無菌塑料管中加入含殘留消毒劑的殺菌后液體和裸磁珠，輕輕搖勻，后靜置5-15min ；再將該無菌塑料管放入磁力架上，靜置吸附5-10 min，然后將無菌塑料管中的液體吸干；向無菌塑料管中加入0. 5 ml滅菌生理鹽水并與裸磁珠混勻吸入平板；再加入0. 5 ml滅菌生理鹽水清洗殘留菌液，混勻后吸入平板。殺菌后液體和裸磁珠比例為5 0.2 1。與現有技術相比，本發明的有益效果是本發明使用裸磁珠對殺菌后處理液的殘留消毒劑進行微生物吸附，吸附率> 99% ；本發明不僅可以有效去除殘留消毒劑，同時避免對殺菌中所用中和劑成分進行篩選和濃度調配，方法更為簡單、有效。本發明方法可適用于微生物的定量分離檢測，從而能夠應用于消毒劑中檢測、鑒定和評價消毒劑(殺菌劑)殺菌性能。
具體實施例方式下面結合具體實施例對本發明做進一步闡述，但并非對本發明做任何限定。本發明應用磁珠捕獲去除殺菌后殘留消毒劑的方法如下向無菌塑料管中加入含殘留消毒劑的殺菌后液體和裸磁珠，輕輕搖勻，后靜置5-15min ；再將該無菌塑料管放入磁力架上，靜置吸附5-10 min，然后將無菌塑料管中的液體吸干；向無菌塑料管中加入0.5 ml 滅菌生理鹽水并與裸磁珠混勻后吸入平板；再加入0. 5 ml滅菌生理鹽水清洗殘留菌液，混勻后吸入平板。殺菌后液體和裸磁珠比例為5 0.2 1。以下以具體實施例進一步說明本發明方法及其效果。
實施例1 本實施例針對裸磁珠1111 #加入量的不同對大腸桿菌吸附率的影響進行了比較。1. 1材料和試劑包括裸磁珠1111 #、指示菌和磁力架。其中，裸磁珠1111 #由杭州博日科技有限公司提供。指示菌為大腸桿菌(ATCC 25922)，中國工業菌種保藏中心提供。磁力架由英國MATRIX公司生產。1.2 方法
1. 2. 1菌懸液制備將大腸桿菌經過分離培養，取單個典型菌落接種營養瓊脂培養基斜面，經培養后，取對h培養的新鮮斜面培養物，用胰蛋白胨生理鹽水洗脫，稀釋成含菌量為3X103 3X104 cfu/ml的菌懸液。1. 2. 2磁珠捕獲菌數測定在2 ml無菌試管中分別加入20 ul、50 ulUOO ul裸磁珠1111 #，以及1. 2. 1制備的菌懸液體0. 5 ml(液體與裸磁珠比例分別為5:0. 2,5:0. 5、 5:1)，輕輕搖勻，靜置10 min,期間間歇取出輕輕搖動。取出試管放入磁力架上，靜置吸附 10 min，吸干液體于A空白平板中，A平板培養計數為殘留菌數。吸干液體后立即向試管中加入0. 5 ml滅菌生理鹽水，混勻磁珠，吸入B空白平板；再加入0. 5 ml滅菌生理鹽水清洗殘留菌液，混勻后吸入B平板，B平板培養計數為吸附菌數。吸附率(％)=吸附菌數X 100/菌懸液總菌數(菌懸液菌數為吸附菌數+殘留菌數)。1.3 結果
結果顯示，20 ul,50 ulUOO ul裸磁珠1111 #的殘留菌數均小于1，均適用于微生物的定量檢測。待處理液與裸磁珠的比例范圍在5:0. 2 1之間均可。表1磁珠不同加入量對大腸桿菌吸附率比較
實施例2 本實施例中，對放入磁力架之前靜置時間的不同對大腸桿菌吸附率的影響進行比較。 2. 1材料和試劑裸磁珠1111 # 由杭州博日科技有限公司提供。指示菌為大腸桿菌(ATCC 25922)，由中國工業菌種保藏中心提供。磁力架英國MATRIX公司生產。2.2 方法
磁珠捕獲菌數測定在2 ml無菌試管中分別加入20 ul裸磁珠1111 #，以及1. 2. 1制備的菌懸液0.5 ml，輕輕搖勻，靜置5min、10 min，15min，期間間歇取出輕輕搖動。取出試管放入磁力架上，靜置吸附10 min，吸干液體于A空白平板中，培養計數為殘留菌數。吸干液體后立即向試管中加入0.5 ml滅菌生理鹽水，混勻磁珠，吸入B空白平板；再加入0.5 ml 滅菌生理鹽水清洗殘留菌液，混勻后吸入B平板，培養計數為吸附菌數。吸附率(％)=吸附菌數X 100/菌懸液總菌數(菌懸液菌數為吸附菌數+殘留菌數)。2.3 結果
結果顯示，靜置5min、10 min，15min后，磁珠對微生物的吸附率均大于99 %。因此，靜置 5min、10 min, 15min 均可。表2放入磁力架之前靜置時間的不同對大腸桿菌吸附率影響比較
實施例3 本實施例中，對放入磁力架上的靜置時間的不同對大腸桿菌吸附率的影響進行比較。
權利要求
1. 一種應用磁珠捕獲去除殺菌后殘留消毒劑的方法，其特征是向無菌塑料管中加入含殘留消毒劑的殺菌后液體和裸磁珠，輕輕搖勻，后靜置5-15min ；再將該無菌塑料管放入磁力架上，靜置吸附5-10 min，然后將無菌塑料管中的液體吸干；向無菌塑料管中加入0. 5 ml滅菌生理鹽水并與裸磁珠1111 #混勻吸入平板；再加入0. 5 ml滅菌生理鹽水清洗殘留菌液，混勻后吸入平板。
全文摘要
本發明公開一種應用磁珠捕獲去除殺菌后殘留消毒劑的方法向無菌塑料管中加入含殘留消毒劑的殺菌后液體和裸磁珠，輕輕搖勻,后靜置5-15min；再將該無菌塑料管放入磁力架上，靜置吸附5-10min，然后將無菌塑料管中的液體吸干；向無菌塑料管中加入0.5ml滅菌生理鹽水并與裸磁珠1111＃混勻吸入平板；再加入0.5ml滅菌生理鹽水清洗殘留菌液，混勻后吸入平板。本發明使用裸磁珠對含殘留消毒劑的殺菌后處理液進行微生物吸附，吸附率＞99%；本發明不僅可以有效去除殘留消毒劑，同時避免對殺菌中所用中和劑成分進行篩選和濃度調配，方法更為簡單、有效。本發明方法可適用于微生物的定量分離檢測，從而能夠應用于消毒劑中檢測、鑒定和評價消毒劑(殺菌劑)殺菌性能。
文檔編號C12Q1/06GK102154440SQ201110000010
公開日2011年8月17日 申請日期2011年1月1日 優先權日2011年1月1日
發明者厲永剛, 姜侃, 金燕飛 申請人:浙江省質量技術監督檢測研究院