效應(yīng)子功能已消除的抗體Fc區(qū)突變體的制作方法

專利名稱：效應(yīng)子功能已消除的抗體Fc區(qū)突變體的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及突變的人源性抗體IgG2恒定區(qū)(Fe區(qū))，由于突變而使其基本上失去通過(guò)Fe受體介導(dǎo)的表面靶抗原的交聯(lián)作用來(lái)特異性結(jié)合Fe Y受體或激活免疫細(xì)胞的促有絲分裂反應(yīng)的能力。本發(fā)明還提供了可復(fù)合突變的lgG2恒定區(qū)的新型抗體。關(guān)于本領(lǐng)域的討論靶向細(xì)胞表面抗原的抗體可對(duì)免疫細(xì)胞誘發(fā)不必要的免疫刺激以及與Fe受體(FcR)結(jié)合相關(guān)的效應(yīng)子功能及補(bǔ)體活化。由于治療性抗體和Fe融合構(gòu)建體往往需要靶向和活化或中和靶配體功能區(qū)，但又不能破壞或損害所需的局部細(xì)胞或組織，因此一直在尋求效應(yīng)子功能已消除的Fe突變體。人IgG同種型(成熟的Y球蛋白類G抗體的亞類；IgGl、IgG2、IgG3和IgG4)顯示具有不同的能力來(lái)發(fā)揮免疫功能，例如抗體依賴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(ADCC，例如IgGl和IgG3)、抗體依賴細(xì)胞吞噬作用(ADCP，例如IgGl、IgG2、IgG3和IgG4)，以及補(bǔ)體依賴細(xì)胞毒性(CDC，例如IgGl、IgG3)。此類免疫功能的同種型特異性結(jié)合是基于對(duì)不同免疫細(xì)胞上Fe受體的選擇性以及結(jié)合Clq和活化膜攻擊復(fù)合物(MAC)裝配的能力。在各種同種型中，F(xiàn)e Y 受體(例如 Fe Y RI、Fe Y RIIa/b/c、Fe y RIIIa/b)對(duì) IgGl 和 IgG3 的相對(duì)親和力較高，然而對(duì)IgG2的親和力最低(僅限于Fe Y RIIa 131H多態(tài)性)，IgG4只對(duì)Fe Y RI具有可測(cè)量的親和力。利用序列比較分析和共結(jié)晶結(jié)構(gòu)，目前已將用于受體結(jié)合的關(guān)鍵接觸殘基定位到跨越下鉸鏈區(qū)和CH2區(qū)的氨基酸殘基。自采用標(biāo)準(zhǔn)蛋白工程技術(shù)后，已在一定程度上成功增加或降低抗體制品對(duì)Fe受體和補(bǔ)體的Clq成分的親和力。在這些同種型中，IgG2與Fe受體家族的結(jié)合能力最弱。以IgG2作為起點(diǎn)，已試圖研發(fā)出效應(yīng)子功能削弱但仍保留FcRn結(jié)合能力、長(zhǎng)期穩(wěn)定性和低免疫原性的突變?cè)＿@種特性的改良型突變體不僅能提高抗體藥物療效，而且還能確保安全性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了經(jīng)過(guò)修飾、糖基化的免疫球蛋白恒定域的組合物，其可用于工程化改造抗體或抗體類治療劑，例如包含F(xiàn)e區(qū)并且祀向細(xì)胞表面配體的抗體或抗體類治療劑。本發(fā)明的組合物為IgG2Fc突變體，所述突變體顯示其Fe Y結(jié)合能力已削弱但仍保留FcRn結(jié)合。這些IgG Fe突變體可使治療劑靶向可溶性抗原或細(xì)胞表面抗原，同時(shí)最大限度降低產(chǎn)生免疫效應(yīng)子功能的Fe相關(guān)結(jié)合以及補(bǔ)體介導(dǎo)的細(xì)胞毒性。在一個(gè)方面，IgG2Fc突變體包含V234A、G237A、P238S(以EU編號(hào)系統(tǒng)為依據(jù))。在另一方面，IgG2Fc突變體包含V234A、G237A、H268Q 或 H268A、V309L、A330S、P331S (以 EU 編號(hào)系統(tǒng)為依據(jù))。在某一特定方面，IgG2Fc 突變體包含 V234A、G237A、P238S、H268A、V309L、A330S、P331S，以及任選的P233S (以EU編號(hào)系統(tǒng)為依據(jù))。 在一個(gè)實(shí)施例中，IgG2Fc突變體組合物用于指示哪個(gè)位點(diǎn)通過(guò)與FcRn相互作用可保持治療性抗體(或Fe融合物)的半衰期保持，同時(shí)最大限度降低或消除與免疫和效應(yīng)子功能相關(guān)的Fe Y活化所產(chǎn)生的潛在毒性，例如i)抗體依賴性的細(xì)胞毒性(ADCC)，ii)補(bǔ)體依賴細(xì)胞毒性(CDC)，iii)抗體依賴細(xì)胞吞噬作用(ADCP)，iV)FcR介導(dǎo)的細(xì)胞活化(例如通過(guò)FcR交聯(lián)作用的細(xì)胞因子釋放)，以及V) FcR介導(dǎo)的血小板活化/減少。在一個(gè)方面，將IgG2Fc突變引入到治療性抗體或結(jié)合物(例如多價(jià)結(jié)合物)的Fe融合物內(nèi)，從而使配體靶向涉及神經(jīng)障礙的細(xì)胞(例如基底細(xì)胞神經(jīng)節(jié))；涉及免疫系統(tǒng)紊亂的細(xì)胞(例如與B細(xì)胞或T細(xì)胞活化相關(guān)的細(xì)胞)，或祀向涉及組織修復(fù)或愈合的細(xì)胞(例如成纖維細(xì)胞或干細(xì)胞)。在另一個(gè)實(shí)施例中，IgG2Fc突變體構(gòu)成藥物組 合物。在另一個(gè)實(shí)施例中，IgG2Fc突變體構(gòu)成藥物活性分子的一部分。包含IgG2Fc突變體的藥物組合物或包含活性IgG2Fc突變體的分子可用于治療通過(guò)巨噬細(xì)胞或單核細(xì)胞的遷移和濃度來(lái)表征的疾病。在一個(gè)方面，包含IgG2Fc突變體的分子可用于結(jié)合下列組織內(nèi)的靶標(biāo)神經(jīng)組織、內(nèi)分泌組織、血管組織、心肌組織、滑膜組織、皮膚組織或粘膜組織。本發(fā)明IgG2Fc突變體的眾多用途之一是治療移植物抗宿主疾病；宿主抗移植物疾病；器官移植排斥；骨髓移植排斥；自身免疫，例如血管炎、自身免疫性溶血性貧血、自身免疫性血小板減少癥和關(guān)節(jié)炎；同種異體免疫，例如胎兒/新生兒同種異體免疫血小板減少癥；哮喘和過(guò)敏癥；慢性或急性炎性疾病,例如克羅恩病或硬皮?。话柎暮Ｄ?、冠狀動(dòng)脈血管閉塞。


圖I 示出了野生型人 IgG2 (SEQ ID NO : I)、IgG4 (SEQ ID NO :2)和 IgGl (SEQ IDNO 3)的氨基酸序列比對(duì)圖，其中顯示了各個(gè)殘基對(duì)應(yīng)的EU編號(hào)；IgG2的鉸鏈區(qū)從EU第218位殘基開(kāi)始。圖2示出了 Fe片段的結(jié)構(gòu)，其中示出了已修飾殘基的表面位置(EU編號(hào))。圖3A-C中的坐標(biāo)圖示出了構(gòu)建為抗Her2/neu結(jié)合抗體的各個(gè)同種型和突變體與人IgGl野生型同種型抗體的競(jìng)爭(zhēng)結(jié)果(采用AlphaScreen微珠測(cè)定平臺(tái))=FcgRI (未示出)、FcgRIIa (A)、FcgRIIb (B)、FcgRIIIa (未示出)和 FcRn(C)。圖4A-C中的坐標(biāo)圖示出了構(gòu)建為抗Her2/neu結(jié)合抗體的各個(gè)同種型和突變體的直接結(jié)合(采用 AlphaScreen 微珠測(cè)定平臺(tái))FcgRIIIa (A)、FcgRI (B)和 FcgRIIa(C)。圖5示出了 ADCC測(cè)定結(jié)果和構(gòu)造為抗Her2/neu結(jié)合抗體的所選同種型和突變體，并且使用人PBMC (25倍過(guò)量的)和SK-Br3乳腺癌細(xì)胞作為靶標(biāo)。圖6示出了所選抗⑶20構(gòu)建體的⑶C測(cè)定結(jié)果，使用人補(bǔ)體和WIL2-S淋巴瘤細(xì)胞作為靶標(biāo)。圖7示出了使用Sk-Br3靶細(xì)胞和GM-CSF分化巨噬細(xì)胞對(duì)所選抗Her2/neu構(gòu)建體進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)分析所得出的ADCP測(cè)定結(jié)果。圖8中的坐標(biāo)圖示出了使用微珠刺激PBMC后24小時(shí)內(nèi)細(xì)胞因子(TNF α )的釋放情況，所述微珠結(jié)合了不同構(gòu)建體的IgG同種型，包括IgG2野生型和六個(gè)突變體。圖9中的坐標(biāo)圖是注射了抗CD20結(jié)合域抗體構(gòu)建體的食蟹猴組中隨時(shí)間變化所含有的平均循環(huán)B細(xì)胞數(shù)量，所述抗體構(gòu)建體具有不同的Fe區(qū)或缺失Fe區(qū)(Fab' )2。序列表簡(jiǎn)述
SEOID 說(shuō)明特性
NO:___
1IgG2 - Fe;人IgY類、亞型殘基I對(duì)應(yīng)EU 218，殘基13-17可為
2 的鉸鏈、CH2 和 CH3 域 PVAGP (野生型)、PAAAP、PAAAS
和SAAAS;殘基47可為H (野生型)、Q或A;殘基109-110可為AP___(野生型)或SS _
2IgG4- Fe；人IgY類、亞型4 殘基I對(duì)應(yīng)EU 218 __的鉸鏈、CH2和CH3域__
3IgGl- Fe；人Igy類、亞型I殘基I對(duì)應(yīng)EU 218
__的鉸鏈、CH2和CH3域__
4PAAAP 突變的IgG恒定區(qū)殘基233、234、235、___237 和 238_
5PAAAS 突變的IgG恒定區(qū)殘基233、234、235、___237 和 238_
6SAAAS 突變的IgG恒定區(qū)殘基233、234、235、__ 237 和 238_
具體實(shí)施例方式ADCC =抗體依賴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性；ADCP，抗體依賴細(xì)胞吞噬作用KDC =補(bǔ)體依賴細(xì)胞毒性；IgG =免疫球蛋白G ；ITAM =免疫受體酪氨酸活化基序；ITIM =免疫受體酪氨酸抑制基序;Mab =單克隆抗體；FDCR = Fe依賴細(xì)胞因子釋放；Fc y R、FcgR或FcgammaR=Fe Y受體定義&術(shù)語(yǔ)解釋“抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性”(即ADCC)是一種細(xì)胞毒性形式，其中，所分泌的Ig與某些細(xì)胞毒性細(xì)胞(例如自然殺傷(NK)細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞)上存在的Fe受體(FcR)結(jié)合，使這些細(xì)胞毒性效應(yīng)細(xì)胞特異性結(jié)合到抗原附著的靶細(xì)胞上，然后借助細(xì)胞毒素將靶細(xì)胞殺死。指向靶細(xì)胞表面的配體特異高親和性IgG抗體可刺激細(xì)胞毒性細(xì)胞，是完成此類毒殺作用所必需的。靶細(xì)胞的溶解過(guò)程發(fā)生于細(xì)胞外，其需要細(xì)胞與細(xì)胞的直接接觸，此過(guò)程不需要補(bǔ)體。可對(duì)任何具體抗體通過(guò)ADCC方式介導(dǎo)靶細(xì)胞溶解的能力進(jìn)行檢測(cè)。要檢測(cè)ADCC的活性，將所關(guān)注的抗體加入到展示靶配體的靶細(xì)胞內(nèi)，使靶配體與免疫效應(yīng)子細(xì)胞結(jié)合，所述免疫效應(yīng)細(xì)胞可由抗原抗體復(fù)合物激活，從而使靶細(xì)胞發(fā)生細(xì)胞溶解。通常根據(jù)從溶解細(xì)胞中釋放的標(biāo)記物(例如放射性底物、熒光染料或天然胞內(nèi)蛋白)來(lái)檢測(cè)細(xì)胞溶解?？捎糜诖祟悪z測(cè)的效應(yīng)細(xì)胞包括外周血單核細(xì)胞(PBMC)和自然殺傷(NK)細(xì)胞。體外ADCC檢測(cè)的具體例子在如下文獻(xiàn)中有所描述Wisecarver et al, 1985,19 :211 (Wisecarver等人，1985 年，第 19 卷，第 211 頁(yè))；Bruggemann et al, 1987, J Exp Med 166 1351 (Bruggemann等人，1987年,《實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志》,第166卷,第1351頁(yè))；ffilkinson et al, 2001, J ImmunolMethods258 :183 (Wilkinson 等人，2001 年，《免疫法雜志》，第 258 卷，第 183 頁(yè))；Patel etal, 1995 J Tmmunol Methods 184 :29 (Patel 等人，1995 年,《免疫法雜志》,第 184 卷,第 29頁(yè))(每個(gè)文獻(xiàn)均以引用方式并入)。作為另外一種選擇或除此之外，可在體內(nèi)評(píng)估所關(guān)注的抗體的ADCC活性，例如在動(dòng)物模型內(nèi)，例如Clynes等人、1998，PNAS USA 95 :652中所公開(kāi)的，該文獻(xiàn)內(nèi)容全文以引用方式并入本文?！把a(bǔ)體引導(dǎo)的細(xì)胞毒性”或CDC是指通過(guò)使補(bǔ)體成分Clq與抗體Fe結(jié)合來(lái)激活補(bǔ)體級(jí)聯(lián)的細(xì)胞毒性形式。本文所用的術(shù)語(yǔ)“Fe”、“含F(xiàn)e的蛋白質(zhì)”或“含F(xiàn)e的分子”是指具有至少一個(gè)免疫球蛋白CH2和CH3域的單體、二聚體或異二聚體蛋白質(zhì)。CH2和CH3域可以形成蛋白質(zhì)/分子(例如抗體)的二聚體區(qū)域的至少一部分。本文所用的術(shù)語(yǔ)“單克隆抗體”是特定形式的含F(xiàn)e的蛋白，所述蛋白包含至少一個(gè)配體結(jié)合域，所述結(jié)合域保持與至少一種動(dòng)物抗體的至少一個(gè)重鏈或輕鏈抗體可變域的 實(shí)質(zhì)同源性?！耙吧腿薎gG2Fc區(qū)”是指包含SEQ ID NO 1的氨基酸序列或其片段的人IgGFe區(qū)，所述區(qū)域從人IgG重鏈的殘基K218至殘基K447(以Kabat EU編號(hào)為依據(jù))。通過(guò)與人IgGl抗體EU IgGl (SEQ ID NO 3)比對(duì)來(lái)對(duì)恒定區(qū)的氨基酸編號(hào)(參見(jiàn)Cunninghamet al.，1970 J. Biol. Chem.，9 :3161-70 (Cunningham 等人，1970 年，《生物化學(xué)雜志》，第 9卷，第3161-3170頁(yè)))。也就是說(shuō)，將抗體的重鏈和輕鏈與EU的重鏈和輕鏈進(jìn)行排列，以達(dá)到最大的氨基酸序列同一性，然后給抗體的各個(gè)氨基酸分配與EU中對(duì)應(yīng)的氨基酸相同的編號(hào)。本領(lǐng)域習(xí)慣上使用EU編號(hào)系統(tǒng)(通常參見(jiàn)Kabat et al, Sequences of Proteinof Immunological Interest, NIH Publication No. 91-3242, US Department of Healthand Human Services (1991) (Kabat等人，《具有免疫學(xué)重要性的蛋白序列》，NIH出版物No. 91-3242，美國(guó)衛(wèi)生與公共服務(wù)部，1991年))。根據(jù)該約定，所述的“野生型IgG2”恒定區(qū)在第236位上缺少氨基酸(圖1，SEQ ID NO :1)。MM本發(fā)明的目的在于鑒定出Fe域以用于生產(chǎn)治療性抗體、Fe融合物和類似生物藥品，使其不引發(fā)細(xì)胞因子的釋放或破壞或殺死展示靶配體的細(xì)胞和靶細(xì)胞周?chē)慕M織，由此提高安全性。人IgG4同種型抗體和Fe融合蛋白不會(huì)引發(fā)顯著的ADCC(經(jīng)由NK細(xì)胞進(jìn)行，專門(mén)表達(dá)FcgRIIIa)，但保留通過(guò)巨噬細(xì)胞(表達(dá)FcYl、IIa和IIIa)誘發(fā)吞噬作用(ADCP)的能力，并且當(dāng)形成免疫復(fù)合物時(shí)，由于特異免疫細(xì)胞上活化Fe Y的分布而可能激活單核細(xì)胞。為了盡可能降低殘基活性，因此在野生型IgG4Fc (SEQ ID NO 2)中開(kāi)發(fā)和使用了包含V234A.L235A(ala/ala)的突變體。Armour等人在lgG2中進(jìn)行多點(diǎn)突變，目的在于最大限度降低與FcgRI (Armour等人，1999年)和FcgRIIa及IIIa(Armour等人,2003年)的結(jié)合能力。Mueller等人的專利申請(qǐng)(PCTW097/11971)中公開(kāi)的附加突變衍生自IgG2/IgG4的雜交體，其由IgG2CH2和IgG4CH3域組成，具體地講，本發(fā)明的IgG2突變體中殘基330和331來(lái)自IgG4。同時(shí)還采用抑制或沉默作用來(lái)消除免疫刺激作用。IgG2或IgG4或這兩個(gè)亞型之間交換的域用于在IgGl (SEQ ID NO 3)中生產(chǎn)效應(yīng)子功能最弱的mAb (Tao等人，1991年)。Strohl的專利申請(qǐng)(US2007/0148167)公開(kāi)了 IgG2 第 268、309、330 和 331EU位殘基上的四個(gè)突變。Shields等人(2001)公開(kāi)了附加的取代，即H268A。本發(fā)明首次展示了 IgG4殘基在IgG2恒定區(qū)(Fe)的多個(gè)位點(diǎn)的取代，即H268Q或A、V309L、A330S和P331S(以Kabat/EU編號(hào)系統(tǒng)為依據(jù))。通過(guò)對(duì)多個(gè)殘基取代的定向選擇出乎意料獲得了在抗體工程中用作融合多肽的功能性Fe域，同時(shí)還可提供缺乏可測(cè)量的效應(yīng)子功能的治療性實(shí)體。根據(jù)其對(duì)人FcR(Fe Y I、Fe Y Ila、Fe Y IIb、Fe Y IIIa和FcRn)的相對(duì)親和力來(lái)選擇多點(diǎn)取代IgG2突變體，所述親和力是通過(guò)Alpha Screen競(jìng)爭(zhēng)性測(cè)定和SPR/Biacore分析進(jìn)行評(píng)估。再進(jìn)一步在適當(dāng)?shù)募?xì)胞系統(tǒng)內(nèi)測(cè)試這些突變體在誘發(fā)CDC、ADCC和ADCP以及引發(fā)PBMC分泌TNF-α方面的能力并進(jìn)行評(píng)級(jí)。在本文提供的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)集中，將IgG2突變體與已知的制劑或突變體進(jìn)行比較，所述制劑或突變體包括除了野生型IgGl和IgG2外，還有IgGlag和IgG4Ala/Ala。采用多次體外生物測(cè)定對(duì)這些突變體進(jìn)一步分析，結(jié)果表明，其活性低至無(wú)法檢測(cè)，對(duì)FcR的結(jié)合親和力大大減弱。根據(jù)這些篩選結(jié)果，已鑒定出一種指 定為IgG2c4d的IgG2Fc突變體，其在上述各種效應(yīng)子/免疫刺激生物測(cè)定中對(duì)FcR(單體與雙多聚體配體結(jié)合)沒(méi)有可測(cè)的親和力或親合力，并且缺乏活性。IgG2c4d Fe包含丙氨酸、絲氨酸和亮氨酸取代V234A、G237A、P238S、H28A、V309L、A330S、P331S (EU 編號(hào))。這七個(gè)殘基取代的IgG2即IgG2c4d可被視為第一個(gè)真正的“沉默” Fe，因?yàn)槠錈o(wú)法結(jié)合FcR、介導(dǎo)效應(yīng)子功能或參與Fe介導(dǎo)的細(xì)胞因子釋放。根據(jù)當(dāng)前的發(fā)現(xiàn)，可應(yīng)用lgG2c4d的七個(gè)突變亞群或?qū)⑵渑c其他氨基酸突變體結(jié)合，或可對(duì)另一 IgG同種型進(jìn)行此類突變以獲得類似或可選擇性的效應(yīng)子功能沉默(如本文所述)并與本領(lǐng)域已知的突變體結(jié)合。正如本文所特別例證的，三聯(lián)體V234A、G237A、P238S取代降低了 Fe YRIIa結(jié)合親和力和Fe Y RIIa結(jié)合親合力并消除了 ADCP和Fe依賴性細(xì)胞因子釋放，同時(shí)保留該分子的FcRn結(jié)合親和力。表I. Biacore相對(duì)結(jié)合親和力的'匯總表。
權(quán)利要求
1.一種含F(xiàn)e的分子，相比野生型Fe，所述分子對(duì)至少一種Fcy受體的親和力下降并且包含帶有突變的IgG恒定區(qū)的抗體Fe域，其中由EU編號(hào)系統(tǒng)定義的第233、234、235、237和238位氨基酸殘基包含選自下列的序列=PAAAP (SEQ ID NO :4)、PAAAS (SEQ ID NO 5)和SAAAS(SEQ ID NO 6)。
2.根據(jù)權(quán)利要求 I所述的含F(xiàn)e的分子，其中所述Fe域還包含突變H268A或H268Q、V309L、A330S和P331S，如EU編號(hào)系統(tǒng)所定義。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的含F(xiàn)e的分子，其中所述域能夠特異性結(jié)合FcRn。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的含F(xiàn)e的分子，其中所述Fe域序列與人IgG2重鏈CH2域具有至少90%的同一性。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的含F(xiàn)e的分子，其中所述含F(xiàn)e的分子是抗體或Fe融合蛋白。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的含F(xiàn)e的分子，其中第228位殘基從S突變?yōu)镻。
7.一種基于重組多肽的結(jié)合分子，包含(i)能夠結(jié)合靶分子的結(jié)合域，以及(ii)氨基酸序列與人免疫球蛋白重鏈的CH2和CH3恒定域的全部或部分基本同源的Fe域，并且其中由EU編號(hào)系統(tǒng)定義的第233、234、235、237和238位殘基包含選自下列的氨基酸序列PAAAP、PAAAS和SAAAS ;其中所述結(jié)合分子能夠結(jié)合所述靶分子，而不會(huì)引發(fā)顯著的補(bǔ)體依賴性溶解或細(xì)胞介導(dǎo)的所述靶標(biāo)降解。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的結(jié)合分子，其中所述Fe域能夠特異性結(jié)合FcRn。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的結(jié)合分子，其中所述結(jié)合域選自如下物質(zhì)的結(jié)合部位抗體；酶；激素；受體；細(xì)胞因子；免疫細(xì)胞表面抗原；配體和粘附分子。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的結(jié)合分子，其中所述分子顯示具有親合力。
11.根據(jù)權(quán)利要求7至10中任一項(xiàng)所述的結(jié)合分子，其中所述結(jié)合域特異性結(jié)合神經(jīng)組織、內(nèi)分泌組織、血管組織、心肌組織、滑膜組織、皮膚組織或粘膜組織內(nèi)的靶標(biāo)。
12.—種治療由巨噬細(xì)胞的遷移和濃度表征的疾病的方法，包括向受試者或患者施用根據(jù)權(quán)利要求I至7中任一項(xiàng)所述的含F(xiàn)e的蛋白制劑。
13.一種治療如下疾病的方法移植物抗宿主疾?。凰拗骺挂浦参锛膊。黄鞴僖浦才懦?；骨髓移植排斥；自身免疫、血管炎、自身免疫性溶血性貧血、自身免疫性血小板減少癥和關(guān)節(jié)炎；同種異體免疫，例如胎兒/新生兒同種異體免疫血小板減少癥；哮喘和過(guò)敏癥；慢性或急性炎性疾病、克羅恩病或硬皮病；阿爾茨海默病或冠狀動(dòng)脈血管閉塞，所述方法包括向受試者或患者施用根據(jù)權(quán)利要求I至7中任一項(xiàng)所述的含F(xiàn)e的分子。
14.一種治療病癥的方法，包括向受試者或患者施用根據(jù)權(quán)利要求I至7中任一項(xiàng)所述的含F(xiàn)e的分子，其中將所述結(jié)合分子施用于患者，或任選地，其中所述患者為未出生的嬰兒，則施用于所述患者的母親。
15.一種含F(xiàn)e的分子，相比野生型Fe，所述分子對(duì)Fe Y受體的親和力下降并且包含基于IgG2恒定區(qū)的抗體Fe域，其中由EU編號(hào)系統(tǒng)定義的第233、234、235、237和238位氨基酸殘基包含選自下列的序列PAAAP、PAAAS和SAAAS，同時(shí)還包含突變H268A或H268Q、V309L、A330S和P331S，如EU編號(hào)系統(tǒng)所定義。
16.一種相比于基于IgG2的野生型Fe，對(duì)含基于IgG2的Fe的分子與Fe y受體的結(jié)合進(jìn)行改變的方法，所述方法包括改變基于IgG2恒定區(qū)的Fe域中由EU編號(hào)系統(tǒng)定義的第·233、234、235、237和238位殘基的序列，從而包含選自下列的序列PAAAP、PAAAS和SAAAS，并且包含突變 H268A 或 H268Q、V309L、A330S 和 P331S。
17.本文描述的任何發(fā)明。
全文摘要
本發(fā)明提供了Fc區(qū)發(fā)生變化的抗體和其他含F(xiàn)c的分子，所述抗體和含F(xiàn)c的分子降低了自身與Fcγ受體的結(jié)合及最終活性，并且可用于治療各種疾病和障礙。
文檔編號(hào)C12P21/08GK102711810SQ201080055151
公開(kāi)日2012年10月3日 申請(qǐng)日期2010年11月29日 優(yōu)先權(quán)日2009年11月30日
發(fā)明者O·瓦法, W·斯特羅爾 申請(qǐng)人:詹森生物科技公司