通過調(diào)節(jié)聚絲蛋白(flg)的表達(dá)和活性而治療flg相關(guān)疾病的制作方法
                            
            
                            
            文檔序號：392837閱讀：2470來源：國知局
            
                            
                        
            
                        
            
                        
            
                            專利名稱：通過調(diào)節(jié)聚絲蛋白(flg)的表達(dá)和活性而治療flg相關(guān)疾病的制作方法
            
技術(shù)領(lǐng)域：
            本申請要求2009年9月25日提交的美國臨時專利申請No. 61/246，080和2010年2月24日提交的美國臨時專利申請No. 61/307，654的優(yōu)先權(quán)，其通過引用全文并入本文。本發(fā)明的實施方案包括調(diào)節(jié)FLG和相關(guān)分子的表達(dá)和/或功能的寡核苷酸。背景聚絲蛋白是一種高度帶電的陽離子蛋白，有助于角質(zhì)蛋白絲的募集以及隨后的二硫鍵鍵合。其來源于聚絲蛋白原，所述聚絲蛋白原是一種很大(4400kD)的經(jīng)磷酸化的前體，表示為在表皮的顆粒層中的透明角質(zhì)顆粒。在從顆粒層轉(zhuǎn)移至角質(zhì)層的過程中，聚絲蛋
            
白原通過位點特異性的蛋白質(zhì)水解作用和去磷酸化作用而變?yōu)榫劢z蛋白。除了聚絲蛋白原加工成聚絲蛋白之外,從顆粒細(xì)胞向角質(zhì)形成細(xì)胞的轉(zhuǎn)變還具有以下特征細(xì)胞核及其他細(xì)胞器的降解、角質(zhì)化包膜的組裝、以及角蛋白中間纖維網(wǎng)絡(luò)重組成二維層狀結(jié)構(gòu)。聚絲蛋白對于產(chǎn)生和保持彈性且含水的角質(zhì)層起著關(guān)鍵的作用，并且聚絲蛋白的水解被密切地調(diào)控，以便產(chǎn)生形成天然保濕因子(NMF)重要部分的游離氨基酸。在響應(yīng)于仍未知的啟動信號而從顆粒層向角質(zhì)層的轉(zhuǎn)變時，顆粒狀前體(聚絲蛋白原)迅速變?yōu)閺浬⒎植嫉牡鞍住＞劢z蛋白原表示為前體，而不是成熟的蛋白，這表明必須調(diào)控聚絲蛋白表達(dá)以防止細(xì)胞毒性作用。很多炎癥性皮膚狀況以伴有角化不全的顆粒層衰退為特征，即在角質(zhì)層的角質(zhì)形成細(xì)胞中保留有細(xì)胞核。雖然在這些炎癥性狀況中破壞終末分化的信號可以是不同的，但共同的最終主題是顆粒層的消失及隨后的不完整的終末分化。在聚絲蛋白原減少(如過敏性皮炎)，或者實質(zhì)上沒有聚絲蛋白原(如尋常型魚鱗病)的情況中，由于NMF-耗盡的角質(zhì)層在環(huán)境的變干作用下沒有能力保持含水，因而角質(zhì)層的品質(zhì)受到危害。天然保濕因子(NMF)在維持角質(zhì)層的水分含量中執(zhí)行著重要的功能。有報道指出，形成NMF重要成分的氨基酸由源自透明角質(zhì)顆粒的經(jīng)蛋白水解切割的聚絲蛋白產(chǎn)生。聚絲蛋白是一種由317個氨基酸組成的蛋白。由于已經(jīng)闡明形成NMF重要成分的氨基酸源自于聚絲蛋白，因此一直推進(jìn)對呈現(xiàn)干性皮膚的病態(tài)狀態(tài)與聚絲蛋白的關(guān)系的研究。近年來，已經(jīng)闡明如在老年性干燥癥、特應(yīng)性疾病等中所見那樣，在此類干性皮膚中角質(zhì)層的氨基酸含量有所減少，并且在這種干性皮膚中聚絲蛋白的表達(dá)有所減少。進(jìn)而，眾所周知皮膚問題例如皮膚粗糙是由于干燥環(huán)境所導(dǎo)致的。聚絲蛋白基因在建立皮膚屏障層中發(fā)揮作用，該基因的突變會導(dǎo)致一些狀況，如濕疹。聚絲蛋白在皮膚最外層中是一種豐富蛋白，并且由聚絲蛋白基因產(chǎn)生。聚絲蛋白的功能是有助于產(chǎn)生位于皮膚最外層的不透性皮膚屏障層以及保持這些含水。皮膚固有的屏障功能類似于塑料膜或保鮮膜-用于防止皮膚的失水，重要的是保護(hù)身體免受來自環(huán)境中異物的侵害，如過敏原。缺乏完整的皮膚屏障會導(dǎo)致過敏原進(jìn)入身體引起一系列的過敏反應(yīng)，包括濕疹、哮喘、花粉熱及其他的過敏癥。DNA-RNA雜交和RNA-RNA雜交對于核酸功能的許多方面是重要的，包括DNA復(fù)制、轉(zhuǎn)錄和翻譯。雜交對于檢測特定核酸或改變其表達(dá)的多種技術(shù)也是關(guān)鍵的。反義核苷酸，例如通過與靶RNA雜交從而干擾RNA剪接、轉(zhuǎn)錄、翻譯和復(fù)制來破壞基因表達(dá)。反義DNA具有額外的特性，即DNA-RNA雜合體用作被核糖核酸酶H消化的底物，這是在大多數(shù)細(xì)胞類型中存在的活性。反義分子可被遞送到細(xì)胞中，如寡脫氧核苷酸(ODN)的情形，或反義分子可從內(nèi)源基因表達(dá)為RNA分子。FDA最近批準(zhǔn)了一種反義藥物VITRAVENE (用于治療巨細(xì)胞病毒視網(wǎng)膜炎)，反映了反義藥物具有治療效用。發(fā)明概述提供本概述以展示本發(fā)明的概述，以簡要地指出本發(fā)明的性質(zhì)和實質(zhì)。提交本概述應(yīng)理解的是，其不會用來解釋或限制權(quán)利要求書的范圍或含義。在一個實施方案中，本發(fā)明提供通過利用靶向天然反義轉(zhuǎn)錄物任何區(qū)域的反義寡核苷酸，導(dǎo)致相應(yīng)有義基因的上調(diào)而抑制天然反義轉(zhuǎn)錄物作用的方法。本文還預(yù)期，天然反義轉(zhuǎn)錄物的抑制可由siRNA、核酶和小分子實現(xiàn)，認(rèn)為這些在本發(fā)明的范圍中?！獋€實施方案提供體內(nèi)或體外調(diào)節(jié)患者細(xì)胞或組織中FLG多核苷酸的功能和/或表達(dá)的方法，包括將所述細(xì)胞或組織與長度為5至30個核苷酸的反義寡核苷酸接觸，其中所述寡核苷酸與包括SEQ IDNO 2的核苷酸I至4629中的5至30個連續(xù)核苷酸的多核苷酸的反向互補序列具有至少50%序列同一性，從而體內(nèi)或體外調(diào)節(jié)患者細(xì)胞或組織中FLG多核苷酸的功能和/或表達(dá)。在一個實施方案中，寡核苷酸靶向FLG多核苷酸的天然反義序列，例如，SEQ IDNO :2所列的核苷酸，和其任何變體、等位基因、同系物、突變體、衍生物、片段和互補序列。反義寡核苷酸的實例如SEQ ID NO :3至13所列。另一實施方案提供體內(nèi)或體外調(diào)節(jié)患者細(xì)胞或組織中FLG多核苷酸的功能和/或表達(dá)的方法，包括將所述細(xì)胞或組織與長度為5至30個核苷酸的反義寡核苷酸接觸，其中所述寡核苷酸與FLG多核苷酸的反義的反向互補序列具有至少50%序列同一'丨生；從而體內(nèi)或體外調(diào)節(jié)患者細(xì)胞或組織中FLG多核苷酸的功能和/或表達(dá)。另一實施方案提供體內(nèi)或體外調(diào)節(jié)患者細(xì)胞或組織中FLG多核苷酸的功能和/或表達(dá)的方法，包括將所述細(xì)胞或組織與長度為5至30個核苷酸的反義寡核苷酸接觸，其中所述寡核苷酸與FLG反義多核苷酸的反義寡核苷酸具有至少50%序列同一性；從而體內(nèi)或體外調(diào)節(jié)患者細(xì)胞或組織中FLG多核苷酸的功能和/或表達(dá)。在一個實施方案中，組合物包括一種或多種結(jié)合有義和/或反義FLG多核苷酸的反義寡核苷酸。在一個實施方案中，組合物包括一種或多種結(jié)合有義和/或反義FLG多核苷酸的反義寡核苷酸、一種或多種FLG調(diào)節(jié)分子、藥學(xué)上可接受的載體和其組合。在一個實施方案中，寡核苷酸包括一種或多種修飾或取代的核苷酸。在一個實施方案中，寡核苷酸包括一種或多種修飾的鍵。在又一實施方案中，修飾的核苷酸包括包含硫代磷酸酯、膦酸甲酯、肽核酸、2’ -O-甲基、氟-或碳、亞甲基或其它鎖核酸(LNA)分子的修飾的堿基。優(yōu)選地，修飾的核苷酸是鎖核酸分子，包括(α -L-LNA。在一個實施方案中，寡核苷酸被皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)或腹膜內(nèi)地施用于患者。在一個實施方案中，寡核苷酸以藥物組合物施用。治療方案包括向患者施用反義化合物至少一次；然而，可修改該治療以包括經(jīng)一段時間的多個劑量。該治療可與一種或多種其它類型的治療聯(lián)合。在一個實施方案中，寡核苷酸以藥物組合物施用。治療方案包括向患者施用包含一種或多種反義化合物和一種或多種FLG調(diào)節(jié)分子的組合物至少一次；可修改該治療以在一段時間內(nèi)包括多個劑量。該治療可與一種或多種其它類型的治療聯(lián)合。在一個實施方案中，寡核苷酸被封裝在脂質(zhì)體中或被連接于載體分子(如，膽固醇、TAT肽)。其它方面在以下描述。附圖
            
簡述圖I是實時PCR結(jié)果的圖,用利用Lipofectamine 2000引入的硫代磷酸酯寡核苷酸處理HepG2細(xì)胞后與對照相比FLGl mRNA的倍數(shù)變化+標(biāo)準(zhǔn)差。實時PCR結(jié)果顯示，用
            
針對FLGl反義AK056431設(shè)計的兩種寡核苷酸，HepG2細(xì)胞中FLGl mRNA的水平顯著增加。標(biāo)為 CUR-1157、CUR-1158、CUR-1159、CUR-1160 和 CUR-1161 的條柱分別對應(yīng)用 SEQ ID NO 3、4、5、6和7處理的樣品。圖2顯示用利用Lipofectamine 2000引入的帶有3’反向T和2’ O甲基gapmer磷酸二酯寡核苷酸的磷酸二酯寡核苷酸處理518A2細(xì)胞后與對照相比FLGl mRNA的變化倍數(shù)+標(biāo)準(zhǔn)差。實時PCR結(jié)果顯示，用針對FLGl反義AK056431設(shè)計的兩種寡核苷酸，518A2細(xì)胞中FLGmRNA的水平顯著增加。標(biāo)為⑶R-1128、⑶R-1129、⑶R-1130和⑶R-1131的條柱分別對應(yīng)用SEQ ID NO :8、9、10和11處理的樣品。圖3顯示用利用Lipofectamine 2000引入的磷酸二酯寡核苷酸處理518A2細(xì)胞后與對照相比FLGl mRNA的倍數(shù)變化+標(biāo)準(zhǔn)差。實時PCR結(jié)果顯示，用針對FLGl反義AK056431設(shè)計的兩種寡核苷酸，518A2細(xì)胞中FLG mRNA的水平顯著增加。標(biāo)為⑶R-1396和CUR-1397的條柱分別對應(yīng)用SEQ ID NO 12和13處理的樣品。圖4顯示與未處理細(xì)胞相比，用化合物-吡格列酮、洛美利嗪、安非他酮、苯丙氨酯、貝尼地平、批羅昔康、托吡酯、伊拉地平、尼可地爾、吡貝地爾、奧沙普秦、格隆溴銨、格拉司瓊、美金剛胺、尼莫地平和氨氯地平處理的518A2細(xì)胞和原代角質(zhì)形成細(xì)胞中聚絲蛋白mRNA表達(dá)的倍數(shù)變化。序列表描述SEQ ID NO 1 :智人聚絲蛋白(FLG)，mRNA(NCBI 登記號NM_002016) ；SEQ ID NO 
            
2:天然FLG反義序列AK056431 ；SEQ IDNO :3至13 :反義寡核苷酸。*指示硫代磷酸酯鍵且‘m’指不2’ O me修飾。詳述下面參考用于示例的實例應(yīng)用來描述本發(fā)明的多個方面。應(yīng)理解的是，列出許多具體細(xì)節(jié)、關(guān)聯(lián)和方法以提供對本發(fā)明的完全理解。然而，相關(guān)領(lǐng)域普通技術(shù)人員將容易認(rèn)識到，可沒有一種或多種具體細(xì)節(jié)地實踐本發(fā)明或以其它方法實踐本發(fā)明。本發(fā)明不限于行為或事件的順序，因為一些行為可以不同順序進(jìn)行和/或與其它行為或事件同時進(jìn)行。而且，并非所有列舉的行為或事件都是實施根據(jù)本發(fā)明的方法所需的。本文公開的所有基因、基因名稱和基因產(chǎn)物意為對應(yīng)來自本文公開的組合物和方法可適用的任何物種的同系物。因此，這些術(shù)語包括但不限于來自人和小鼠的基因和基因產(chǎn)物。應(yīng)理解的是，當(dāng)公開來自具體物種的基因或基因產(chǎn)物時，這一公開意為僅是示例，不解釋為限制，除非其存在的上下文清楚地指明。因此，例如，對于本文公開的基因，其在一些實施方案中涉及哺乳動物核酸和氨基酸序列，意為涵蓋來自其它動物的同源和/或直系同源基因和基因產(chǎn)物，所述其它動物包括但不限于其它哺乳動物、魚、兩棲類、爬行動物和鳥類。在一個實施方案中，基因或核酸序列是人的。定義本文所用的術(shù)語僅是為了描述具體實施方案的目的，不意為限制本發(fā)明。除非上下文另外清楚地指明，否則本文所用的單數(shù)形式"一(a)"、" 一個/種(an)"和"該(the)"意為包括復(fù)數(shù)形式。而且，在詳述和/或權(quán)利要求書中使用術(shù)語"包括(including)"、"包括(includes)"、"具有(having)"、"具有(has)"、"帶有(with)"或其變化形式的程度上，這些術(shù)語以類似于術(shù)語"包含(comprising)"的方式意圖為內(nèi)含式的。術(shù)語"約"或"大約"是指對于由本領(lǐng)域普通技術(shù)人員確定的特定數(shù)值在可接受的誤差范圍內(nèi)，其將部分地取決于如何測量或確定該數(shù)值，即，測量系統(tǒng)的限度。例如，按照本領(lǐng)域中的實踐，"約"可表示在I個或多于I個標(biāo)準(zhǔn)差內(nèi)。可選地，"約"可表示給定數(shù)值的達(dá)20%、優(yōu)選地達(dá)10%、更優(yōu)選地達(dá)5%、仍更優(yōu)選地達(dá)1%的范圍?？蛇x地，尤其是有關(guān)生物系統(tǒng)或方法，術(shù)語可表示在數(shù)值的數(shù)量級內(nèi)，優(yōu)選地在5倍內(nèi)，更優(yōu)選地在2倍內(nèi)。當(dāng)在本申請和權(quán)利要求書中描述特定數(shù)值時，除非另外指明，否則應(yīng)假設(shè)術(shù)語"約"對特定數(shù)值表示在可接受的誤差范圍內(nèi)。本文所用的術(shù)語"mRNA"是指靶基因的目前已知的mRNA轉(zhuǎn)錄物、和可能說明的任何進(jìn)一步的轉(zhuǎn)錄物。"反義寡核苷酸"或"反義化合物"是指結(jié)合另一RNA或DNA (靶RNA、DNA)的RNA或DNA分子。例如，如果其是RNA寡核苷酸，其借助于RNA-RNA相互作用結(jié)合另一 RNA靶并改變靶RNA的活性。反義寡核苷酸可上調(diào)或下調(diào)特定多核苷酸的表達(dá)和/或功能。該定義意為包括從治療、診斷或其它觀點有用的任何外來RNA或DNA分子。這種分子包括，例如，反義RNA或DNA分子、干擾RNA(RNAi)、微RNA、誘餌RNA分子、siRNA、酶促RNA、治療性編輯RNA和激動劑與拮抗劑RNA、反義寡聚化合物、反義寡核苷酸、外部指導(dǎo)序列(EGS)寡核苷酸、可選剪接體、引物、探針、和與靶核酸的至少一部分雜交的其它寡聚化合物。如此，這些化合物可以單鏈、雙鏈、部分單鏈或環(huán)狀寡聚化合物的形式被引入。在本發(fā)明的范疇中，術(shù)語"寡核苷酸"是指核糖核酸(RNA)或脫氧核糖核酸(DNA)或其模擬物的寡聚物或聚合物。術(shù)語"寡核苷酸"還包括天然和/或修飾的單體或鍵合的線性或環(huán)狀寡聚物，包括脫氧核糖核苷、核糖核苷、取代形式和其α-異頭形式、肽核酸(PM)、鎖核酸(LNA)、硫代磷酸酯、膦酸甲酯、和類似物。寡核苷酸能夠經(jīng)由規(guī)則方式的單體間相互作用，諸如Watson-Crick型堿基配對、Ho0gsteen或逆Ho0gsteen型堿基配對或類似物特異性結(jié)合靶多核苷酸。寡核苷酸可以是"嵌合的"，即，包括不同區(qū)域。在本發(fā)明的范疇中，"嵌合"化合物是寡核苷酸，其包含兩個或多個化學(xué)區(qū)域，例如，DNA區(qū)域、RNA區(qū)域、PNA區(qū)域等等。每個化學(xué)區(qū)域由至少一個單體單位構(gòu)成，在寡核苷酸化合物的情形中所述單體單位即為核苷酸。這些寡核苷酸通常包括至少一個區(qū)域，其中寡核苷酸被修飾以表現(xiàn)一種或多種期望特性。寡核苷酸的期望特性包括但不限于，例如，對核酸酶降解增加的耐受性、增加的細(xì)胞攝取、和/或?qū)Π泻怂嵩黾拥慕Y(jié)合親和力。因此，寡核苷酸的不同區(qū)域可具有不同特性。如上所述，本發(fā)明的嵌合寡核苷酸可形成為兩種或多種寡核苷酸的混合結(jié)構(gòu)、修飾的寡核苷酸、寡核苷和/或寡核苷酸類似物。寡核苷酸可包括可被"成行(register)"地連接(即當(dāng)單體被連續(xù)地連接時，如在天然DNA中)的區(qū)域，或經(jīng)由間隔物連接的區(qū)域。預(yù)期間隔物構(gòu)成區(qū)域之間的共價"橋"，在優(yōu)選情形中具有不超過約100個碳原子的長度。間隔物可攜帶不同功能性，例如，具有正電荷或負(fù)電荷，攜帶特殊的核酸結(jié)合特性(嵌入劑、槽溝結(jié)合物、毒素、熒光團等等)，為親脂的，誘導(dǎo)特殊的二級結(jié)構(gòu)，如例如，誘導(dǎo)α -螺旋的含丙氨酸的肽。本文所用的"FLG"和“聚絲蛋白"包括所有家族成員、突變體、等位基因、片段、種類(species)、編碼和非編碼序列、有義和反義多核苷酸鏈等等。本文所用的詞語‘聚絲蛋白’、FLG、FLGl和AT0D2被認(rèn)為在文獻(xiàn)中是相同的，并且在本申請中可交換地使用。本文所用的術(shù)語"對...有特異性的寡核苷酸"或"靶向...的寡核苷酸"是指具有(i)能夠與靶基因的一部分形成穩(wěn)定復(fù)合體，或(ii)能夠與靶基因的mRNA轉(zhuǎn)錄物的一部分形成穩(wěn)定雙鏈體的序列的寡核苷酸。復(fù)合體和雙鏈體的穩(wěn)定性可通過理論計算和/或體外測定來確定。用于確定雜交復(fù)合體和雙鏈體的穩(wěn)定性的示例測定在以下實施例中描述。本文所用的術(shù)語"靶核酸"涵蓋DNA、從這種DNA轉(zhuǎn)錄的RNA (包括premRNA和mRNA)、還有從這種RNA衍生的cDNA、編碼序列、非編碼序列、有義或反義多核苷酸。寡聚化合物與其靶核酸的特異性雜交干擾核酸的正常功能。特異性地與靶核酸雜交的化合物對靶核酸功能的這一調(diào)節(jié)通常稱為"反義"。待干擾的DNA功能包括，例如，復(fù)制和轉(zhuǎn)錄。待干擾的RNA功能包括所有重要功能，諸如例如，RNA向蛋白翻譯位置的移位，從RNA翻譯蛋白，剪接RNA以產(chǎn)生一種或多種mRNA物質(zhì)，可能由RNA參與或促進(jìn)的催化活性。這種干擾靶核酸功能的總效果是調(diào)節(jié)編碼產(chǎn)物或寡核苷酸的表達(dá)。RNA干擾"RNAi"由對其"靶"核酸序列具有序列特異性的同源性的雙鏈RNA(dsRNA)分子介導(dǎo)。在本發(fā)明的某些實施方案中，介導(dǎo)物是5-25個核苷酸的"小干擾"RNA雙鏈體(siRNA)。siRNA來源于稱為Dicer的RNase酶對dsRNA的加工。siRNA雙鏈體產(chǎn)物被募集到稱為RISC(RNA誘導(dǎo)沉默復(fù)合體)的多蛋白siRNA復(fù)合體中。不希望受任何特定理論束縛，認(rèn)為隨后RISC被引導(dǎo)至靶核酸(適當(dāng)?shù)貫閙RNA)，在那里siRNA雙鏈體以序列特異性方式相互作用來以催化方式介導(dǎo)裂解。根據(jù)本發(fā)明可使用的小干擾RNA可根據(jù)本領(lǐng)域公知并且本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟悉的方案合成和使用。用于本發(fā)明方法的小干擾RNA適當(dāng)?shù)匕sI至約50個核苷酸(nt)。在非限制性實施方案的實例中，siRNA可包括約5至約40nt、約5至約30nt、約10至約30nt、約15至約25nt或約20-25個核苷酸。通過利用自動比對核酸序列并指明同一性或同源性的區(qū)域的計算機程序來便于選擇適當(dāng)?shù)墓押塑账帷＿@種程序用來比較獲得的核酸序列，例如通過搜尋數(shù)據(jù)庫諸如GenBank或通過對PCR產(chǎn)物測序。比較來自一定物種范圍的核酸序列允許選擇在物種之間展示適當(dāng)?shù)耐恍猿潭鹊暮怂嵝蛄?。在未被測序的基因的情形中，進(jìn)行Southern印跡以允許確定靶物種與其它物種的基因之間的同一性程度。如本領(lǐng)域所熟知的，通過以不同的嚴(yán)格性程度進(jìn)行Southern印跡，可能獲得近似的同一性測量。這些方案允許選擇展現(xiàn)與待控制的受治療者中的靶核酸序列的高程度互補性和與其它物種中的相應(yīng)核酸序列的較低程度互補性的寡核苷酸。本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識到，在選擇用于本發(fā)明的基因的適當(dāng)區(qū)域方面存在相當(dāng)大的自由。"酶促RNA "是指具有酶促活性的 RNA 分子(Cech，(1988) J. American. Med.Assoc. 260,3030-3035)。酶促核酸(核酶)通過首先結(jié)合靶RNA來作用。這種結(jié)合經(jīng)由被保持在鄰近用于裂解靶RNA的分子的酶促部分處的酶促核酸的靶結(jié)合部分來進(jìn)行。如此，酶促核酸首先識別靶RNA然后經(jīng)由堿基配對結(jié)合靶RNA，結(jié)合到正確位置時，酶促地作用以切割靶RNA。"誘餌RNA"是指模擬對配體的天然結(jié)合結(jié)構(gòu)域的RNA分子。因此，誘餌RNA與天然結(jié)合靶競爭結(jié)合特定配體。例如，已經(jīng)顯示HIV反式激活響應(yīng)(TAR) RNA的過表達(dá)可作為"誘餌"起作用并有效地結(jié)合HIV tat蛋白，從而阻止其結(jié)合HIV RNA中編碼的TAR序
            
列。這表示一個特定的實例。本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識到，這僅是一個實例，利用本領(lǐng)域通常已知的技術(shù)可容易地產(chǎn)生其它實施方案。本文所用的術(shù)語"單體"通常是指被磷酸二酯鍵或其類似物連接以形成大小從數(shù)個單體單位如約3-4個至約數(shù)百個單體單位的寡核苷酸的單體。磷酸二酯鍵合的類似物包括硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、甲基膦酸酯、硒代磷酸酯、氨基磷酸酯和類似物，如以下更完全地描述。術(shù)語“核苷酸”涵蓋天然存在的核苷酸以及非天然存在的核苷酸。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)清楚的是，此前被認(rèn)為是"非天然存在的"各種核苷酸后來已在自然界中發(fā)現(xiàn)。如此，"核苷酸"不僅包括已知的含嘌呤和嘧啶雜環(huán)的分子，還包括其雜環(huán)類似物和互變異構(gòu)體。其它類型的核苷酸的示例性實例是含腺嘌呤、鳥嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶、尿嘧啶、嘌呤、黃嘌呤、二氨基嘌呤、8-氧代-N6-甲基腺嘌呤、7-脫氮黃嘌呤、7-脫氮鳥嘌呤、N4, N4-橋亞乙基胞嘧啶、N6，N6-橋亞乙基-2，6- 二氨基嘌呤、5-甲基胞嘧啶、5- (C3-C6)-炔基胞嘧啶、
            
5-氟尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、假異胞嘧啶、2-羥基-5-甲基-4-三唑并吡啶、異胞嘧啶、異鳥嘌呤、肌苷的分子，和Benner等，美國專利No. 5，432，272中描述的"非天然存在的"核苷酸。術(shù)語"核苷酸"預(yù)期涵蓋這些實例的每一種和所有以及其類似物和互變異構(gòu)體。尤其感興趣的核苷酸是包含腺嘌呤、鳥嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶和尿嘧啶的那些，它們被認(rèn)為是與在人的治療和診斷應(yīng)用有關(guān)的天然存在的核苷酸。核苷酸包括天然2'-脫氧糖和2'-輕基糖，如，在 Kornberg 和 Baker, DNA Replication (DNA 復(fù)制)，第 2 版·(Freeman,San Francisco, 1992)中描述的，以及它們的類似物。提及核苷酸的"類似物"包括具有修飾的堿基部分和/或修飾的糖部分的合成的核苷酸(參見如，通常描述于Scheit, Nucleotide Analogs (核苷酸類似物)，JohnWiley, New York, 1980 ；Freier&Altmann, (1997)Nucl. Acid. Res. ,25(22),4429-4443,Toulme,J. J. ,(2001)Nature Biotechnology 19 :17-18 ；Manoharan M. , (1999)Biochemicaet Biophysica Acta 1489 :117-139 ;Freier S.M. , (1997)Nucleic Acid Research,25 :4429-4443, UhIman, E. (2000)Drug Discovery&Development, 3 :203-213, HerdewinP. (2000)Antisense&Nucleic Acid DrugDev. , 10 :297-310) '2' -0，3'-C-連接的[3.2.0]二環(huán)阿拉伯糖核苷。這種類似物包括被設(shè)計以增強結(jié)合特性，如，雙鏈體或三鏈體穩(wěn)定性、特異性、或類似特性的合成的核苷酸。
            
本文所用的"雜交"是指寡聚化合物的大致互補鏈的配對。配對的一種機制包括寡聚化合物的鏈的互補核苷或核苷酸堿基(核苷酸)之間的氫鍵合，其可以是Watson-Crick、Ho0gsteen或逆H00gsteen氫鍵合。例如，腺嘌呤和胸腺嘧啶是經(jīng)由氫鍵形成而配對的互補核苷酸。雜交可在不同情況下發(fā)生。當(dāng)反義化合物與靶核酸的結(jié)合干擾靶核酸的正常功能以導(dǎo)致功能和/或活性的調(diào)節(jié)時，該化合物是"可特異性雜交的"，且在期望特異性結(jié)合的條件下(即，在體內(nèi)測定或治療性治療的情形中的生理條件下，和在體外測定的情形中進(jìn)行測定的條件下)存在足夠程度的互補性以避免反義化合物與非靶核酸序列的非特異性結(jié)合。本文所用的短語"嚴(yán)格雜交條件"或"嚴(yán)格條件"是指本發(fā)明化合物將與其靶序列雜交，但與最小數(shù)目的其它序列雜交的條件。嚴(yán)格條件是序列依賴性的且在不同情況中將是不同的，并且在本發(fā)明范疇中，寡聚化合物與靶序列雜交的"嚴(yán)格條件"由寡聚化合物的性質(zhì)和組成以及研究它們的測定決定。通常，嚴(yán)格雜交條件包括低濃度(< O. 15M)
            
的帶有無機陽離子諸如Na++或K++的鹽(即，低離子強度)、比寡聚化合物靶序列復(fù)合體的Tm高20°C _25°C的溫度、和存在變性劑諸如甲酰胺、二甲基甲酰胺、二甲亞砜、或去垢劑十二烷基硫酸鈉(SDS)。例如，對于每種I %甲酰胺，雜交率降低1.1%。高嚴(yán)格雜交條件的一個實例是在60°C，O. I X氯化鈉-檸檬酸鈉緩沖液(SSC) /0. I % (w/v) SDS進(jìn)行30分鐘。本文所用的"互補"是指一條或兩條寡聚鏈上的兩個核苷酸之間準(zhǔn)確配對的能力。例如，如果在反義化合物某一位置的核堿基能夠與在靶核酸某一位置的核堿基成氫鍵，所述靶核酸為DNA、RNA或寡核苷酸分子，則認(rèn)為寡核苷酸與靶核酸之間的氫鍵合位置是互補位置。當(dāng)每個分子的足夠數(shù)目的互補位置被可彼此成氫鍵的核苷酸占據(jù)時，寡聚化合物和另外的DNA、RNA或寡核苷酸分子是彼此互補的。因此，"可特異性雜交"和"互補"是用來表示經(jīng)足夠數(shù)目的核苷酸足夠程度的準(zhǔn)確配對或互補性，從而在寡聚化合物和靶核酸之間發(fā)生穩(wěn)定和特異性結(jié)合的術(shù)語。本領(lǐng)域應(yīng)理解的是，寡聚化合物的序列不必與待可特異性雜交的其靶核酸的序列100%互補。而且，寡核苷酸可經(jīng)一個或多個區(qū)段雜交，從而其間的或相鄰區(qū)段不牽涉在雜交事件中(如，環(huán)結(jié)構(gòu)、錯配或發(fā)夾結(jié)構(gòu))。本發(fā)明的寡聚化合物包括與其所靶向的靶核酸序列中靶區(qū)域的至少約70%、或至少約75%、或至少約80%、或至少約85%、或至少約90 %、或至少約95 %、或至少約99 %序列互補性。例如，其中反義化合物的20個核苷酸中的18個與靶區(qū)域互補從而將特異性雜交的反義化合物將表示90%互補性。在這一實例中，其余非互補核苷酸可成串或散布互補核苷酸，不必彼此連續(xù)或與互補核苷酸連續(xù)。如此，具有側(cè)翼為與靶核酸具有完全互補性的兩個區(qū)域的4(四)個非互補核苷酸的長度為18個核苷酸的反義化合物將與靶核酸具有77. 8%總互補性，因此落入本發(fā)明的范圍中。反義化合物與靶核酸的區(qū)域的互補性百分比可常規(guī)地利用本領(lǐng)域已知的BLAST程序(基本局部比對搜索工具)和PowerBLAST程序來確定。同源性、序列同一性或互補性的百分比可通過例如使用 Smith 和 Waterman 的算法(Adv. Appl. Math.，(1981) 2,482-489)的 Gap 程序(Wisconsin序列分析軟件包，用于 Unix 的版本 8, Genetics Computer Group, University ResearchPark, Madison ffis.)確定，并使用默認(rèn)設(shè)置。本文所用的術(shù)語"熱熔點(Tm)"是指在指定離子強度、pH和核酸濃度下，與靶序列互補的寡核苷酸的50%平衡地與靶序列雜交的溫度。通常，嚴(yán)格條件將是其中鹽濃度為至少約O. Ol至I. OM Na離子濃度(或其它鹽)、pH 7. O至8. 3，且對于短寡核苷酸(如，10至50個核苷酸)溫度為至少約30°C的條件。嚴(yán)格條件還可通過加入去穩(wěn)定劑諸如甲酰胺來實現(xiàn)。本文所用的"調(diào)節(jié)"是指基因表達(dá)的增加(刺激)或減少(抑制)。術(shù)語"變體"當(dāng)在多核苷酸序列的上下文中使用時，可涵蓋相對于野生型基因的多核苷酸序列。這一定義還可包括，例如，"等位"、"剪接"、"物種"或"多態(tài)"變體。剪接變體可具有與參考分子顯著的同一性，但由于在mRNA加工期間外顯子的可選剪接通常將具有更大數(shù)目或更小數(shù)目的多核苷酸。相應(yīng)的多肽可具有另外的功能結(jié)構(gòu)域或缺少結(jié)構(gòu)域。物種變體是在物種之間不同的多核苷酸序列。本發(fā)明中特別有用的是野生型基因產(chǎn)物的變體。變體可來源于核酸序列中至少一種突變，并可產(chǎn)生改變的mRNA或產(chǎn)生結(jié)構(gòu)或功能可能改變或可能不改變的多肽。任何給定的天然或重組基因可具有O種、一種或多種等位基因形式。產(chǎn)生變體的常見突變改變通常歸因于核苷酸的天然缺失、插入或取代。在
            
給定序列中，這些類型改變的每一種可單獨發(fā)生，或聯(lián)合其它類型改變發(fā)生一次或多次。所得的多肽通常將具有相對于彼此顯著的氨基酸同一性。多態(tài)變體是指定物種的個體之間特定基因的多核苷酸序列的變化。多態(tài)變體還可涵蓋"單核苷酸多態(tài)性"(SNP)或其中多核苷酸序列差異為一個堿基的單堿基突變。SNP的存在可能指示，例如，具有對疾病狀態(tài)的傾向的某一群體，所述傾向相比于耐受性為易感性。衍生物多核苷酸包括經(jīng)受化學(xué)修飾，例如以烷基、酰基或氨基代替氫的核酸。衍生物如，衍生物寡核苷酸，可包括非天然存在的部分，諸如改變的糖部分或糖間鍵合。這些中示例的有硫代磷酸酯和本領(lǐng)域已知的其它含硫物質(zhì)。衍生物核酸還可包含標(biāo)記，包括放射性核苷酸、酶、熒光劑、化學(xué)發(fā)光劑、顯色劑、底物、輔因子、抑制劑、磁性粒子和類似物。"衍生物"多肽或肽是被修飾的多肽或肽，所述修飾例如糖基化、聚乙二醇化、磷酸化、硫酸化、還原/烷基化、酰化、化學(xué)偶合或適度福爾馬林處理。衍生物還可被修飾以包含直接或間接可檢測的標(biāo)記，包括但不限于，放射性同位素、熒光和酶標(biāo)記。本文所用的術(shù)語"藥學(xué)上可接受的鹽"是指由藥學(xué)上可接受的無毒性堿或酸制備的鹽。當(dāng)本發(fā)明的化合物是酸性的時，其相應(yīng)的鹽可以容易地由藥學(xué)上可接受的無毒性堿(包括無機堿和有機堿)制備。來源于這種無機堿的鹽包括鋁、銨、鈣、銅(高價和低價)、鐵、亞鐵、鋰、鎂、錳(高價和低價)、鉀、鈉、鋅等鹽。來源于藥學(xué)上可接受的有機無毒性堿包括伯胺、仲胺和叔胺的鹽，以及環(huán)胺和取代的胺，例如自然生成和合成的取代胺。可形成鹽的其他藥學(xué)上可接受的有機無毒性堿包括離子交換樹脂，例如精氨酸、甜菜堿、咖啡因、膽堿、N，N' - 二芐基乙二胺、二乙胺、2-二乙基氨基乙醇、2-二甲基氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基嗎啉、N-乙基哌啶、葡糖胺、葡萄糖胺、組氨酸、哈胺、異丙胺、賴氨酸、葡甲胺、嗎啉、哌嗪、哌啶、多胺樹脂、普魯卡因、嘌呤、可可堿、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨丁三醇等。當(dāng)本發(fā)明的化合物是堿性的時，其相應(yīng)的鹽可以容易地由藥學(xué)上可接受的無毒性酸(包括無機酸和有機酸)制備。這種酸包括例如醋酸、苯磺酸、苯甲酸、樟腦磺酸、檸檬酸、乙磺酸、富馬酸、葡糖酸、谷氨酸、氫溴酸、鹽酸、羥乙磺酸、乳酸、馬來酸、蘋果酸、扁桃酸、甲磺酸、粘液酸、硝酸、雙羥萘酸、泛酸、磷酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、對甲苯磺酸等。藥學(xué)上可接受的鹽的例子包括但不限于如胺類等堿性殘基的礦物酸鹽或有機酸鹽；如羧酸等酸性殘基的堿鹽或有機鹽等。所述藥學(xué)上可接受的鹽包括常用的無毒性鹽或者例如由無毒性的無機酸或有機酸所形成的母體化合物的季銨鹽。例如，這種常用的無毒性鹽包括那些源自如鹽酸、氫溴酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸等無機酸的鹽；以及由例如醋酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、抗壞血酸、雙羥萘酸、馬來酸、羥基馬來酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水楊酸、磺胺酸、2-乙酰氧苯甲酸、富馬酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙烷二磺酸、草酸、羥乙磺酸等有機酸制備的鹽。本發(fā)明的藥學(xué)上可接受的鹽可通過常規(guī)的化學(xué)方法合成。一般來說，所述鹽通過在適當(dāng)溶劑或溶劑組合物中使游離堿或酸與化學(xué)計量的或過量的形成所需鹽的無機酸或堿或者有機酸或堿反應(yīng)來制備。本發(fā)明的化合物可以具有不對稱中心，并且以外消旋物、外消旋混合物和單獨的非對映異構(gòu)體的形式出現(xiàn)。所有這些異構(gòu)體(包括光學(xué)異構(gòu)體)均包括在本發(fā)明內(nèi)。護(hù)膚產(chǎn)品的例子包括但不限于保濕劑、防曬制品、防曬乳液、按摩油、沐浴油、香水、香脂、面霜、面膜、剃須泡沫和凝膠劑?；瘖y品的例子包括但不限于唇膏、粉底霜、眼影、
            
眼線筆、腮紅(blusher)和遮瑕膏(concealer)。清潔產(chǎn)品的例子包括但不限于洗發(fā)劑(特別是去頭皮屑洗發(fā)劑)、香阜、個人清洗用品(包括沐浴露(shower gel)、泡沫劑(bubblebath)、織物去污劑、碗盤去污劑)。護(hù)發(fā)產(chǎn)品的例子包括但不限于頭發(fā)定型摩絲、頭發(fā)定型噴霧劑、頭發(fā)定型凝膠劑、護(hù)發(fā)素(hair conditioner)或染發(fā)劑(hair colourant)。通過評估個體的聚絲蛋白原基因型，可以確定該個體相對于皮膚狀況的易患病體質(zhì)。“聚絲蛋白原基因型”是指所述個體的基因組中聚絲蛋白原等位基因的同一性。通過本發(fā)明的方法測試的個體典型地為哺乳類動物。在一個實施方案中，所述哺乳類動物可以是嚙齒類動物。在另一個實施方案中，所述哺乳類動物可以是人類。因此，通過本發(fā)明的方法測試的個體是二倍體并由此在它們的基因組中包含聚絲蛋白原基因的兩個拷貝。如果個體具有聚絲蛋白原基因的兩個相同的拷貝，則對于等位基因來說它們是純合的。如果個體具有聚絲蛋白原基因的兩個不同的拷貝，即一個對于另一個是多態(tài)的，則對于等位基因來說它們是雜合的?！耙谆疾◇w質(zhì)”是指個體基因組中存在的個別聚絲蛋白原等位基因或個體基因組中存在的聚絲蛋白原等位基因組合與皮膚狀況有關(guān)或者是皮膚狀況的先兆。本文所用的術(shù)語"皮膚狀況"是指在其含義內(nèi)包括皮膚(包括頭皮)的所有物理參數(shù)，例如保濕、物質(zhì)產(chǎn)生或屏障形成。在一個實施方案中，術(shù)語"皮膚狀況"是指皮膚維持NMF產(chǎn)量的健康水平的能力。因此，本發(fā)明提供確定個體的易患病體質(zhì)以維持NMF產(chǎn)量健康水平的方法。換而言之，本發(fā)明提供確定個體對異常NMF產(chǎn)量相關(guān)狀況的敏感性的方法。典型地說，由異常的NMF產(chǎn)量所導(dǎo)致或加重的皮膚狀況是由于少于健康皮膚的NMF產(chǎn)量所導(dǎo)致的。與異常聚絲蛋白和NMF產(chǎn)量有關(guān)的狀況包括尋常型魚鱗病。在另一個實施方案中，術(shù)語"皮膚狀況"是指干性皮膚。干性皮膚狀況包括老年性干燥癥/停經(jīng)后干燥癥、表面活性劑導(dǎo)致的干燥癥、冬季干燥癥、曬傷。在另一個實施方案中，術(shù)語"皮膚狀況"是指頭皮的狀況，例如頭皮屑。在另一個實施方案中，術(shù)語"皮膚狀況"是指紅斑，例如去污劑引起的紅斑。表述"角質(zhì)基質(zhì)的護(hù)理"是指用于保護(hù)或修復(fù)皮膚和/或頭發(fā)和/或指甲的健康功能的所有行為；或者提供用于保護(hù)或提高它們的外觀和/或質(zhì)地的手段的任何方法。因此，護(hù)理包括保濕、安撫、保護(hù)免受所有類型的侵害、顯著地防曬以及抵抗和預(yù)防衰老體征。短語“皮膚衰老的體征”是指由于衰老在皮膚外觀方面的所有改變。這些改變的例子包括皺紋和細(xì)紋、皮膚柔軟(limp skin)、皮膚松弛、皮膚變薄、缺少彈性和/或膚色、皮膚暗沉、皮膚缺少光彩。其還包括不直接轉(zhuǎn)化成外部皮膚外觀的變化的內(nèi)部皮膚改變。這些內(nèi)部改變的一個例子是由于連續(xù)暴露于UV輻射下而在皮膚內(nèi)部產(chǎn)生的退化。表述“用于提高皮膚外觀”包括可能具有皮膚外觀的視覺提高作為后果的所有現(xiàn)象。皮膚看起來更好，例如更加漂亮、緊實和/或光滑。減少或除去了所有的小缺點。皮膚如紙一樣薄的外觀會有所減弱。而且，根據(jù)本發(fā)明的活性劑或者含有該活性劑的組合物可用于保護(hù)角質(zhì)基質(zhì)，特別是保護(hù)皮膚、頭發(fā)和指甲免受所有類型的外部侵害。這些活性劑或者含有該活性劑的組合物的使用可以使得角質(zhì)基質(zhì)受到保護(hù)，進(jìn)而更好地抵抗環(huán)境對它們所造成的應(yīng)激。短語"外部侵害"是指環(huán)境所產(chǎn)生的侵害。它們可以是化學(xué)來源、物理來源、生物來源或熱量來源。表述"皮膚病學(xué)疾病或病癥"是指可能有或者沒有明顯后果的所有影響皮膚的疾病。因而，作為例子來說，可以提及分化和細(xì)胞增殖紊亂、角質(zhì)化紊亂、皮膚衰老的體征、
            
炎癥或過敏反應(yīng)、分泌脂質(zhì)的功能紊亂、真皮或表皮的增生(惡性的或非惡性的)、由于UV線暴露所導(dǎo)致的皮膚病癥、與時間性老化或光化性老化有關(guān)的病狀。本文所用的術(shù)語"動物"或"患者"意為包括，例如，人、綿羊、麋鹿、鹿、長耳鹿、貂、哺乳動物、猴、馬、牛、豬、山羊、犬、貓、大鼠、小鼠、鳥類、雞、爬行動物、魚、昆蟲和蛛形綱。"哺乳動物"涵蓋通常處于醫(yī)療護(hù)理下的溫血哺乳動物(如，人和家養(yǎng)動物)。實例包括貓科動物、犬科動物、馬科動物、?？苿游锖腿?，以及僅僅人。"治療(Treating)"或"治療(treatment)"涵蓋治療哺乳動物的疾病狀態(tài)，并包括(a)阻止疾病狀態(tài)在哺乳動物中發(fā)生，尤其是當(dāng)所述哺乳動物傾向于疾病狀態(tài)但還未被診斷為患有其的時候；(b)抑制疾病狀態(tài)，如，阻止其發(fā)展；和/或(c)緩解疾病狀態(tài)，如，導(dǎo)致疾病狀態(tài)消退，直到達(dá)到期望端點。治療還包括疾病癥狀的改善(如，減輕疼痛或不適)，其中所述改善可或不可直接影響疾病(如，起因、傳染、表達(dá)等等)。本文所用的"癌癥"是指見于哺乳動物的所有類型的癌癥或贅生物或惡性腫瘤，包括但不限于白血病、淋巴瘤、黑素瘤、癌和肉瘤。癌癥本身表現(xiàn)為"腫瘤"或包括癌癥惡性細(xì)胞的組織。腫瘤的實例包括肉瘤和癌，諸如但不限于纖維肉瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、軟骨肉瘤、成骨肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、內(nèi)皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管內(nèi)皮肉瘤、滑膜瘤、間皮瘤、尤因氏瘤、平滑肌肉瘤、橫紋肌肉瘤、結(jié)腸癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、鱗狀細(xì)胞癌、基底細(xì)胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭狀癌、乳頭狀腺癌、囊腺癌、髓樣癌、支氣管癌、腎細(xì)胞癌、肝細(xì)胞瘤、膽管癌、絨毛膜癌、精原細(xì)胞瘤、胚胎性癌、腎母細(xì)胞瘤、宮頸癌、睪丸腫瘤、肺癌、小細(xì)胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、星形細(xì)胞瘤、髓母細(xì)胞瘤、顱咽管瘤、室管膜瘤、松果體瘤、血管母細(xì)胞瘤、聽神經(jīng)瘤、少突神經(jīng)膠質(zhì)瘤、腦膜瘤、黑素瘤、神經(jīng)母細(xì)胞瘤和視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤?？捎酶鶕?jù)本發(fā)明公開的組合物治療的其它癌癥包括但不限于，例如，霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、乳腺癌、卵巢癌、肺癌、橫紋肌肉瘤、原發(fā)性血小板增多癥、原發(fā)性巨球蛋白血癥、小細(xì)胞肺腫瘤、原發(fā)性腦瘤、胃癌、結(jié)腸癌、惡性胰島腫瘤、惡性類癌瘤、膀胱癌、胃癌、惡變前皮膚損傷、睪丸癌、淋巴瘤、甲狀腺癌、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、食管癌、泌尿生殖道癌、惡性高鈣血癥、宮頸癌、子宮內(nèi)膜癌、腎上腺皮質(zhì)癌和前列腺癌。
            
"神經(jīng)病學(xué)疾病或病癥"是指神經(jīng)系統(tǒng)和/或視覺系統(tǒng)的任何疾病或病癥。"神經(jīng)病學(xué)疾病或病癥"包括牽涉中樞神經(jīng)系統(tǒng)(腦、腦干和小腦)、外周神經(jīng)系統(tǒng)(包括顱神經(jīng))和自主神經(jīng)系統(tǒng)(其部分位于中樞神經(jīng)系統(tǒng)和外周神經(jīng)系統(tǒng)二者中)的疾病或病癥。神經(jīng)病學(xué)病癥的實例包括但不限于，頭痛、麻痹和昏迷、癡呆、中風(fēng)、睡眠障礙、外傷、感染、贅生物、神經(jīng)眼科學(xué)、運動障礙、神經(jīng)脫髓鞘病、脊髓病癥、和外周神經(jīng)、肌肉和神經(jīng)肌肉接頭的病癥。成癮和精神疾病，包括但不限于，雙相性精神障礙和精神分裂癥，也包括在神經(jīng)病學(xué)病癥的定義中。以下是可利用根據(jù)本發(fā)明的組合物和方法治療的多種神經(jīng)病學(xué)病癥、癥狀、跡象和綜合征的列表獲得性癲癇樣失語癥；急性播散性腦脊髓炎；腦白質(zhì)腎上腺萎縮癥；年齡相關(guān)的黃斑變性；胼胝體發(fā)育不全；失認(rèn)癥；艾卡迪綜合征；亞力山大??；阿爾佩斯??；交替性偏癱；血管性癡呆；肌萎縮性側(cè)索硬化；無腦；An凝膠man綜合征；血管瘤??；缺氧癥；失語癥；失用癥；蛛網(wǎng)膜囊腫；蛛網(wǎng)膜炎；阿-基氏腦畸形；動靜脈畸形；阿斯佩各綜合征；共濟病癥毛細(xì)血管擴張；注意力缺乏過動癥；孤獨癥；自主神經(jīng)病癥；背痛；巴藤??；白塞?。回惗楸裕涣夹宰园l(fā)性瞼痙攣；良性局灶性肌萎縮；良性顱內(nèi)高壓；賓斯旺格氏??；瞼疫攣；Bloch Sulzberger綜合征；臂叢損傷；腦膿腫；腦損傷；腦腫瘤(包括多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤)；脊髓腫瘤；布朗-塞卡爾綜合征；卡納萬?。煌蠊芫C合癥；
            
灼痛；中樞性疼痛綜合癥；腦橋中部髓鞘溶解；頭部障礙；腦動脈瘤；腦動脈硬化；腦萎縮；大腦性巨人癥；大腦性麻痹；夏-馬-圖三氏??；化療引起的神經(jīng)病和神經(jīng)性疼痛；基氏腦畸形；舞蹈癥；慢性炎癥性脫髓鞘多神經(jīng)?。宦酝?；慢性局部疼痛綜合征；科-勒二氏綜合征；昏迷，包括持續(xù)性植物人狀態(tài)；先天性面癱；皮質(zhì)基底節(jié)變性；顱動脈炎；顱縫早閉；克雅氏??；積累性損傷錯亂；柯興綜合征；巨細(xì)胞包涵體病；巨細(xì)胞病毒感染；眼舞蹈-足舞蹈綜合征；丹-沃二氏綜合征；DaWSon病；德摩西埃氏綜合征；下臂叢麻痹；癡呆；皮肌炎；糖尿病性神經(jīng)病；彌漫性硬化癥；家族性自主神經(jīng)異常；書寫困難；閱讀困難；張力障礙；早期幼兒癲癇性腦?。豢盏熬C合征；腦炎；腦膨出；腦三叉神經(jīng)血管瘤??；癲癇；歐勃氏麻痹；特發(fā)性震顫；法布里氏??；法爾氏綜合征；昏厥；家族性痙攣麻痹癥；熱性癲癇發(fā)作；菲希爾綜合征；弗里德賴希氏共濟病癥；額顳癡呆和其它"tau病變"；高歇??；格斯特曼氏綜合征；巨細(xì)胞性動脈炎；巨細(xì)胞性包涵體??；球樣細(xì)胞腦白質(zhì)營養(yǎng)不良；格-巴二氏綜合征；HTLV-1相關(guān)的骨髓?。还?斯二氏病；頭部損傷；頭痛；半面痙攣；遺傳性痙攣性截癱；多神經(jīng)炎型遺傳性共濟病癥；耳部帶狀皰疹；帶狀皰疹；Hirayama綜合征；HIV相關(guān)的癡呆和神經(jīng)病(也是AIDS的神經(jīng)病學(xué)表現(xiàn))；前腦無裂畸形；亨延頓氏舞蹈病和其它多谷氨酰胺重復(fù)序列?。环e水性無腦畸形；腦積水；皮質(zhì)醇過多癥；低氧；免疫介導(dǎo)的腦脊髓炎；包涵體肌炎；色素病癥癥；嬰兒植烷酸貯積?。粙雰豪追驍⒛凡。粙雰函d攣；炎性肌??；盧頁內(nèi)囊腫；盧頁內(nèi)高壓Joubert綜合征；卡恩斯-塞爾綜合征；Kennedy病；金斯布林納綜合征；克-費二氏綜合征；克拉貝??；庫-韋二氏病；庫魯??；拉福拉病；Lambert-Eaton肌無力綜合征；LandaU-Kleffner綜合征；側(cè)髓(瓦倫伯格氏)綜合征；學(xué)習(xí)障礙；利氏?。籐ennox-Gustaut綜合征；萊-萘二氏綜合征；腦白質(zhì)病變；路易體癡呆；無腦回癥；閉鎖綜合征；Lou Gehrig病(B卩，運動神經(jīng)元病或肌萎縮性側(cè)索硬化)；椎間盤退變；萊姆病-神經(jīng)病學(xué)后遺癥；Machad0-J0S印h?。痪揞^；巨腦；梅_羅二氏綜合征；美尼爾癥；腦膜炎；門克斯??；異染性腦白質(zhì)營養(yǎng)不良；頭小畸形；偏頭痛；Miller Fisher綜合征；小中風(fēng)；線粒體肌??；默比厄斯氏綜合征；單肢肌萎縮；運動神經(jīng)元??；M0yam0ya?。徽扯嗵琴A積癥；多發(fā)梗塞性癡呆；多灶性運動神經(jīng)?。欢喟l(fā)性硬化和其它脫髓鞘病癥；伴有體位性低血壓的多系統(tǒng)萎縮癥；肌肉萎縮癥；重癥肌無力；腦脫髓鞘彌散性硬化；嬰兒肌陣攣性腦病；肌陣攣；肌??；先天性肌強直；嗜睡?。簧窠?jīng)纖維瘤?。豢咕癫∷幍膼盒跃C合征；AIDS的神經(jīng)病學(xué)表現(xiàn)；狼瘡的神經(jīng)病學(xué)后遺癥；神經(jīng)性肌強直；神經(jīng)元蠟樣脂褐質(zhì)沉積癥；神經(jīng)元移行異常；尼-皮二氏??；0' SulIivan-McLeod綜合征；枕神經(jīng)痛；隱性脊柱神經(jīng)管閉合不全序列征；大田原綜合征；橄欖體腦橋小腦萎縮；眼陣攣-肌陣攣；視神經(jīng)炎；直立性低血壓；過度使用綜合征；感覺異常；神經(jīng)變性疾病或病癥(帕金森病、亨延頓氏舞蹈病、阿爾茨海默氏病、肌萎縮性側(cè)索硬化(ALS)、癡呆、多發(fā)性硬化和與神經(jīng)元細(xì)胞死亡相關(guān)的其它疾病和病癥)；先天性肌強直?。桓蹦[瘤性疾病；突發(fā)性癲癇；帕_羅二氏綜合征；佩_梅氏病；周期性麻痹；外周神經(jīng)?。煌葱陨窠?jīng)病和神經(jīng)性疼痛；持續(xù)性植物人狀態(tài)；全身性發(fā)育遲緩；光噴嚏反射；植烷酸貯積??；皮克氏?。簧窠?jīng)挾捏；垂體腫瘤；多肌炎；孔洞腦；小兒麻痹癥后期綜合癥；帶狀皰疹后神經(jīng)痛；感染后腦脊髓炎；體位性低血壓；帕_魏二氏綜合征；原發(fā)性脊髓側(cè)索硬化；朊病毒病；進(jìn)行性面偏側(cè)萎縮癥；進(jìn)行性多灶性白質(zhì)腦病；進(jìn)行性硬化性灰質(zhì)萎縮；進(jìn)行性核上性麻痹；假性腦瘤；Ramsay-Hunt綜合征(I型和II型);Rasmussen
            
腦炎；反射性交感神經(jīng)營養(yǎng)不良綜合征；雷夫敘姆?。恢貜?fù)性運動損傷；重復(fù)性壓力損傷；多動腿綜合征；逆轉(zhuǎn)錄病毒相關(guān)的脊髓病；Rett綜合征；雷依氏綜合征；圣維特斯舞蹈?。簧５禄舴虿?；謝耳德氏??；腦裂；視隔發(fā)育不全；搖晃嬰兒綜合癥；帶狀皰疹；希-德二氏綜合征；斯耶格倫氏綜合征；睡眠窒息；Soto綜合征；僵直；脊柱裂；脊髓損傷；脊髓腫瘤；脊髓性肌萎縮；僵人綜合征；中風(fēng)；斯特奇-韋伯綜合征；亞急性硬化全腦炎；動脈硬化性皮層下腦病；西德納姆舞蹈；暈厥；脊髓空洞癥；遲發(fā)性運動障礙；泰-薩二氏??；顳動脈炎；脊髓拴系綜合征；肌強直性白內(nèi)障；胸部出口綜合征；三叉神經(jīng)痛；托德氏麻痹；圖雷特綜合癥；暫時性缺血性發(fā)作；傳染性海綿狀腦??；橫貫性脊髓炎；外傷性腦損傷；震顫；三叉神經(jīng)痛；熱帶痙攣性輕截癱；結(jié)節(jié)性腦硬化；血管性癡呆(多發(fā)梗塞性癡呆)；血管炎(包括顳動脈炎)；希-林二氏病；瓦倫伯格氏綜合征；韋-霍二氏病；韋斯特綜合征；鞭抽式損傷；威廉斯綜合征；Wildon病和澤韋格綜合征。"炎癥"是指系統(tǒng)性炎癥疾患和局部地伴有單核細(xì)胞、粒細(xì)胞和/或中性白細(xì)胞的遷移和吸引的疾患。炎癥的實例包括但不限于，病原生物體(包括革蘭氏陽性細(xì)菌、革蘭氏陰性細(xì)菌、病毒、真菌和寄生蟲諸如原生動物和蠕蟲)感染引起的炎癥、移植排斥(包括排斥實體器官諸如腎臟、肝臟、心臟、肺或角膜、以及排斥骨髓移植物包括移植物抗宿主病(GVHD))、或局部的慢性或急性自身免疫或變應(yīng)性反應(yīng)引起的炎癥。自身免疫疾病包括急性腎小球性腎炎；類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎或反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎；慢性腎小球性腎炎；炎性腸病諸如克羅恩氏病、潰瘍性結(jié)腸炎和壞死性小腸結(jié)腸炎；肝炎；敗血癥；酒精性肝病；非酒精性脂肪肝；粒細(xì)胞輸血相關(guān)的綜合征；炎癥性皮膚病諸如接觸性皮炎、特應(yīng)性皮炎、銀屑??；全身性紅斑狼瘡(SLE)、自身免疫性甲狀腺炎、多發(fā)性硬化、和一些形式的糖尿病、或其中受治療者自身免疫系統(tǒng)的攻擊導(dǎo)致病理學(xué)組織破壞的任何其它自身免疫狀態(tài)。變應(yīng)性反應(yīng)包括變應(yīng)性哮喘、慢性支氣管炎、急性和延遲的過敏癥。系統(tǒng)性炎癥疾病狀態(tài)包括外傷、燒傷、缺血事件后再灌注(如，心臟、腦、腸或外周脈管系統(tǒng)中的血栓形成事件，包括心肌梗塞和中風(fēng))相關(guān)的炎癥、敗血癥、ARDS或多器官功能障礙綜合征。炎性細(xì)胞募集也發(fā)生在動脈粥樣硬化斑塊中。炎癥包括但不限于，非霍奇金淋巴瘤、韋格納氏肉芽腫、橋本氏甲狀腺炎、肝細(xì)胞癌、胸腺萎縮、慢性胰腺炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、反應(yīng)性淋巴樣增生、骨關(guān)節(jié)炎、潰瘍性結(jié)腸炎、乳頭狀癌、克羅恩氏病、潰瘍性結(jié)腸炎、急性膽囊炎、慢性膽囊炎、肝硬化、慢性涎腺炎、腹膜炎、急性胰腺炎、慢性胰腺炎、慢性胃炎、內(nèi)在性子宮內(nèi)膜異位癥、子宮內(nèi)膜異位癥、急性宮頸炎、慢性宮頸炎、淋巴樣增生、多發(fā)性硬化、特發(fā)性血小板減少性紫癜繼發(fā)性的肥大、原發(fā)性IgA腎病、全身性紅斑狼瘡、銀屑病、肺氣腫、慢性腎盂腎炎和慢性膀胱炎。心血管疾病或病癥包括可導(dǎo)致缺血或由心臟再灌注引起的那些病癥。實例包括但不限于，動脈硬化、冠狀動脈病、巨細(xì)胞性心肌炎、慢性心肌炎(非肉芽腫性)、原發(fā)性肥大型心肌病、外周動脈病(PAD)、外周血管病、靜脈血栓栓塞癥、肺栓塞、中風(fēng)、心絞痛、心肌梗塞、心搏停止造成的心血管組織損傷、心臟旁路造成的心血管組織損傷、心源性休克、和本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的相關(guān)疾患或包括心臟或脈管系統(tǒng)的功能障礙或組織損傷的相關(guān)疾患，尤其是但不限于，F(xiàn)LG活化相關(guān)的組織損傷。CVS疾病包括但不限于，動脈硬化、肉芽腫性心肌炎、心肌梗塞、瓣膜性心臟病繼發(fā)性心肌纖維化、無梗塞的心肌纖維化、原發(fā)性肥大性心肌病和慢性心肌炎(非肉芽腫性)。"神經(jīng)退行性疾病或病癥"是指中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)的范圍廣泛的疾病和病癥，包括例如帕金森病、亨廷頓氏舞蹈癥、阿爾茨海默氏病、肌萎縮性側(cè)索硬化癥(ALS)、多發(fā)性硬化癥及與神經(jīng)細(xì)胞死亡有關(guān)的其他疾病和病癥。多核苷酸和寡核苷酸組合物和分子靶在一個實施方案中，靶包括聚絲蛋白(FLG)的核酸序列，包括但不限于FLG相關(guān)的有義和/或反義的非編碼和/或編碼序列。聚絲蛋白基因在建立皮膚屏障層中發(fā)揮作用，并且該基因的突變會導(dǎo)致一些狀況，如濕疹。聚絲蛋白在皮膚最外層中是一種豐富蛋白，并且由聚絲蛋白基因產(chǎn)生。聚絲蛋白的功能是有助于產(chǎn)生位于皮膚最外層的不透性皮膚屏障層以及保持這些含水。皮膚固有的屏障功能類似于塑料膜或保鮮膜-用于防止皮膚的失水，重要的是保護(hù)身體免受來自環(huán)境中異物的侵害，如過敏原。缺乏完整的皮膚屏障會導(dǎo)致過敏原進(jìn)入身體引起一系列的過敏反應(yīng)，導(dǎo)致濕疹、哮喘、花粉熱及其他的過敏癥。聚絲蛋白的表達(dá)缺乏會導(dǎo)致個體傾向于發(fā)展成尋常型魚鱗病，更多地是發(fā)展成異位性濕疹或皮膚炎。聚絲蛋白基因定位于表皮分化復(fù)合物中的人類染色體lq21上，一種還包含對表皮的正常屏障功能重要的數(shù)種其他蛋白質(zhì)的基因的區(qū)域。聚絲蛋白的主要功能看上去是聚集表皮細(xì)胞骨架以便形成密集的蛋白-脂質(zhì)基質(zhì)，從而調(diào)節(jié)皮膚對水和外部顆粒例如過敏原的滲透性。吡格列酮_ACT0S(鹽酸吡格列酮)是一種口服的抗糖尿病藥，主要通過降低胰島素抵抗性而發(fā)揮作用。ACTOS用于控制II型糖尿病(也稱為非胰島素依賴性糖尿病[NIDDM]或成年發(fā)作型糖尿病)。藥理學(xué)研究表明ACTOS改善肌肉和脂肪組織中胰島素的敏感性并抑制肝臟糖異生。ACTOS改善血糖控制、同時降低循環(huán)胰島素水平。相比較于磺酰脲類藥物、二甲雙胍或α-葡萄糖苷酶抑制劑，吡格列酮[(±)-5-[[4-[2-(5_乙基-2-吡啶基)乙氧基]苯基]甲基]-2，4_]噻唑烷二酮單鹽酸鹽屬于不同的化學(xué)類別并且具有不同的藥理作用。該分子包含一個不對稱碳原子，該化合物被合成為且用為外消旋混合物。批格列酮的兩個對映異構(gòu)體在體內(nèi)互變。發(fā)現(xiàn)所述兩個對映異構(gòu)體在藥理活性方面上沒有差別。
            
鹽酸吡格列酮是一種無味的白色晶體粉末，分子式為C19H2tlN2O3S · HC1，分子量為392. 90道爾頓。其可溶于N，N-二甲基甲酰胺，微溶于無水乙醇，極微溶于丙酮和乙腈，幾乎不溶于水和不溶于乙醚。ACTOS被用作飲食和運動的助劑以改善具有II型糖尿病的成人的血糖控制。吡格列酮還被用于治療非酒精性脂肪性肝炎(脂肪肝)，但是這種使用最近被認(rèn)為是試驗性的。然而，還沒有對吡格列酮在皮膚病學(xué)領(lǐng)域中的使用進(jìn)行研究。洛美利嗪是一種鈣通道阻滯劑，具有抗偏頭痛藥性質(zhì)和選擇性抑制腦動脈的壓縮。已知洛美利嗪具有神經(jīng)保護(hù)作用、并且在試驗中用于青光眼。洛美利嗪的副作用包括極微的心血管副作用、嗜睡和潮紅。然而，還沒有對洛美利嗪在皮膚病學(xué)領(lǐng)域中的使用進(jìn)行研究。安非他酮-也被稱作Wellbutrin、Zyban> Voxra、Budeprion 或 Aplenzin ;之前被稱作安非布他酮，其為一種氨基酮類的抗抑郁藥，與三環(huán)類、四環(huán)類、選擇性5-羥色胺重吸收抑制劑或者其他已知的抗抑郁藥在化學(xué)上無關(guān)。其結(jié)構(gòu)與安非拉酮非常相似；其與苯乙胺相關(guān)。安非他酮命名為(±)-1-(3_氯苯基)-2-[(1，1_ 二甲基乙基)氨基]-I-丙酮鹽酸鹽。分子量為276.2。分子式為C13H18ClNO ·Η(1。安非他酮鹽酸鹽粉末是白色晶體，且于水中具有高溶解性。其具有苦味，且在口腔黏膜上產(chǎn)生一種局部麻醉的感覺。安非他酮被用于治療重度抑郁癥。嚴(yán)重抑郁發(fā)作(DSM-IV)意味著存在以下情況I)情緒低落或者2)失去興趣或快樂；另外，以下癥狀中的至少5個已在相同2周內(nèi)存在并且表示之前功能的變化情緒低落、在平常活動中明顯失去興趣或快樂、在體重和/或食欲上有明顯的改變、失眠或嗜睡、精神運動興奮或遲緩、疲勞增加、內(nèi)疚感或無用感、思維遲鈍或注意力不集中、企圖自殺或有自殺意念。安非他酮在治療社交恐懼癥和伴有抑郁的焦慮中有一些成功，但是在伴有廣場恐怖癥的驚恐障礙的治療中并無成功。其抗焦慮潛力曾經(jīng)與舍曲林和多慮平進(jìn)行過比較。然而，在一些患者中其能導(dǎo)致激動不安、特別是在更高劑量作用下，并且經(jīng)常增加焦慮、與哌醋甲酯非常類似。作為精神興奮藥，其固有地為抗焦慮化合物，相反的利益知之甚少且看上去是矛盾的。安非他酮減輕尼古丁成癮和戒斷癥狀的嚴(yán)重性。安非他酮的其他適應(yīng)癥是肥胖癥和注意力缺失過動癥(ADHD)。經(jīng)FDA證實，安非他酮用于預(yù)防季節(jié)性情緒紊亂。根據(jù)數(shù)個案例研究和初步研究，安非他酮降低炎癥介質(zhì)TNF-α的水平且在自發(fā)炎癥狀況(如克羅恩病和牛皮癬)中可能有用。然而，還沒有對安非他酮在皮膚病學(xué)領(lǐng)域中的使用進(jìn)行研究。苯丙氨酯-是一種中樞作用骨骼肌松弛劑，具有額外的鎮(zhèn)靜劑和抗痙攣劑作用。服藥過量則與巴比妥酸鹽類似。其作用機理可能與甲丙氨酯類似。苯丙氨酯之前作為抗焦慮藥被用于人類，目前仍然有時用于全身麻醉和用于治療抽筋和強直。苯丙氨酯仍在一些歐洲國家中使用，但是其已經(jīng)普遍地被更新的藥物所取代。苯丙氨酯通過酰胺基的氧化降解和苯環(huán)的鄰位羥基化被代謝，并且通過腎臟在尿液中被清除。然而，還沒有對苯丙氨酯在皮膚病學(xué)領(lǐng)域中的使用進(jìn)行研究。貝尼地平-也被稱作Benidipinum或貝尼地平鹽酸鹽，其為用于治療高血壓(血壓過高)的二氫吡啶類鈣通道阻滯劑。貝尼地平是一種不僅阻滯L-型鈣通道而且阻滯T-型鈣通道的二氫吡啶類鈣通道阻滯劑。貝尼地平的化學(xué)名是(4R)-rel-l，4-二氫-2，
            
6-二甲基-4-(3-硝基苯基)-3，5-吡啶二甲酸3-甲基酯5-[ (3R)-1-(苯基甲基)_3_哌啶基]酯鹽酸鹽。是在體外和體內(nèi)表現(xiàn)出多種活性的口服有效的抗高血壓藥。阻滯L-型、N-型和T-型的鈣離子通道。還抑制醛固酮誘導(dǎo)的鹽皮質(zhì)激素受體活性。呈現(xiàn)心臟保護(hù)作用和抗動脈粥樣硬化效應(yīng)。然而，還沒有對貝尼地平在皮膚病學(xué)領(lǐng)域中的使用進(jìn)行研究。吡羅昔康-是非甾體抗炎藥物(NSAID)的昔康類藥物的成員之一。每粒褐紅色和藍(lán)色膠囊含有IOmg吡羅昔康，每粒褐紅色膠囊含有20mg吡羅昔康，用于口服施用。吡羅昔康的化學(xué)名是4-羥基-2-甲基-N-2-吡啶基-2H-1，2，-苯并噻嗪-3-甲酰胺1，I- 二氧
            
化物。吡羅昔康呈白色結(jié)晶固體，略溶于水、稀酸和大多數(shù)的有機溶劑。微溶于乙醇和水溶液。其呈現(xiàn)弱酸性的4-羥基質(zhì)子(pKa 5. I)和弱堿性的吡啶基氮(pKal.8)。吡羅昔康的分子量為331. 35。其分子式為C15H13N304S。吡羅昔康是一種非留體抗炎藥物，用于減輕類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎和骨關(guān)節(jié)炎、原發(fā)性痛經(jīng)、術(shù)后疼痛的癥狀；并且作為止痛藥起作用，特別是在有炎性組份的情況下。其還在用于治療表達(dá)環(huán)氧合酶(COX)受體的某些瘤形成(例如膀胱癌、結(jié)腸癌和前列腺癌)的獸藥中使用。然而，還沒有對吡羅昔康在皮膚病學(xué)領(lǐng)域中的使用進(jìn)行研究。托吡酯-是一種氨基磺酸酯取代的單糖。TOPAMAX  (托吡酯)片可作為25mg、50mg、100mg和200mg的圓形片劑來使用，用于口服施用。TOPAMAX  (托吡酯膠囊)分散型膠囊(Sprinkle Capsule)可作為15mg和25mg的分散型膠囊來使用，作為整個膠囊或打開并灑在軟食品上以用于口服施用。托吡酯是一種白色結(jié)晶粉末，稍帶苦味。托吡酯大部分溶于包含氫氧化鈉或磷酸鈉、具有PH 9 10的堿性溶液中。易溶于丙酮、氯仿、二甲基亞砜和乙醇。水中的溶解度為9. 8mg/mL。其飽和溶液的pH為6. 3。托吡酯的分子式為C12H21NO8S、分子量為339. 36。托批酯的化學(xué)命名為2, 3 -A, 5- 二 -O-異丙叉基_ β -D-批喃果糖氨基橫酸酯。托吡酯單獨使用或者與其他藥物聯(lián)用，用于治療患有癲癇的人的某些類型的癲癇發(fā)作。托批酯還與其他藥物一起使用以控制患有Lennox-Gastaut綜合癥(導(dǎo)致發(fā)作和發(fā)育遲緩的病癥)的人的癲癇痙攣。托吡酯還被用于治療那些即便服用其他抗癲癇發(fā)作藥物時仍繼續(xù)出現(xiàn)癲癇發(fā)作的患者。托吡酯還被用于預(yù)防偏頭痛，但不會減輕出現(xiàn)偏頭痛發(fā)生時的疼痛。托吡酯是被稱作抗驚厥藥的藥物中的一類。其通過減少大腦的異常興奮而發(fā)揮作用。托吡酯治療兒童和成人的癲癇癥，最初作為抗驚厥藥在市場上銷售。在兒童中，托吡酯用于治療Lennox-Gastaut綜合癥，即一種導(dǎo)致癲癇發(fā)作和發(fā)育遲緩的病癥。其還經(jīng)美國食品和藥物管理局(FDA)批準(zhǔn)用于、并且最頻繁地被開處方用于預(yù)防偏頭痛。精神病醫(yī)生使用托吡酯治療雙相性精神障礙，且經(jīng)常使用托吡酯來增強擬精神藥物或抵抗與很多抗抑郁藥有關(guān)的體重增加。已經(jīng)研究將托吡酯用于治療酒精中毒和肥胖癥、特別是減輕暴食癥。托批酷還在臨床試驗中被用于治療創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙。初步研究表明，托批酷有效地抵抗嬰兒性痙攣。另一項研究推薦，托吡酯是一種對于預(yù)防早產(chǎn)兒在缺氧缺血性損傷后的腦室周圍白質(zhì)軟化癥有效的治療藥物。托吡酯的其他標(biāo)簽外和研究的用途包括對特發(fā)性震顫、神經(jīng)性貪食癥、強迫癥、酒精中毒、戒煙、先天顱內(nèi)高血壓、神經(jīng)性疼痛、叢集性頭痛和可卡因依賴性的治療。還對托吡酯與苯丁胺的混合物進(jìn)行了研究，該混合物形成用于治療肥胖癥的被稱作“Qnexa”的藥物。然而，還沒有對托吡酯在皮膚病學(xué)領(lǐng)域中的使用進(jìn)行研究。伊拉地平-是一種鈣拮抗劑?；瘜W(xué)上，伊拉地平是4-(4-苯并呋咱基)-1，4- 二氫-2，6-二甲基-3，5-吡啶二羧酸甲基酯I-甲基乙基酯。伊拉地平是一種黃色、細(xì)小的結(jié)晶粉末，無味或者帶有微弱的特征氣味。伊拉地平幾乎不溶于水(371下< 10mg/L)，但溶于乙醇，且易溶于丙酮、氯仿和二氯甲烷。伊拉地平被用于治療高血壓?？蓡为毷褂没蛘吲c噻嗪類利尿劑同時使用。經(jīng)常被
            
開處方用于治療高血壓以便減少中風(fēng)和心臟病發(fā)作的風(fēng)險。動物模型中的最近研究表明，伊拉地平有潛在的治療帕金森病的用途。然而，還沒有對伊拉地平在皮膚病學(xué)領(lǐng)域中的使用進(jìn)行研究。尼可地爾-是用于治療心絞痛的常規(guī)藥物。該藥物可被分類為血管舒張藥。尼可地爾的作用應(yīng)理解為是通過對血管的平滑肌進(jìn)行光滑處理的過程。該作用在靜脈系統(tǒng)的情形下尤為顯著。尼可地爾通過激活鉀通道、且通過提供一氧化氮來激活鳥苷酸環(huán)化酶來發(fā)揮作用。所述鳥苷酸環(huán)化酶導(dǎo)致cGMP的活化，cGMP通過肌球蛋白輕鏈的去磷酸化作用依次引起動脈和靜脈的血管舒張。由于尼可地爾對于血管鉀通道具有選擇性，所以對心臟收縮力和傳導(dǎo)沒有顯著的作用。尼可地爾能夠擴張健康個體的冠狀血管，然而其對于患有缺血性心臟病的某些患者的冠狀血管的作用卻很小，其原因在于冠狀血管已經(jīng)被完全地擴張。然而，其會擴張靜脈系統(tǒng)，減少心臟的預(yù)負(fù)荷和工作。然而，還沒有對尼可地爾在皮膚病學(xué)領(lǐng)域中的使用進(jìn)行研究。吡貝地爾-是一種D2激動劑，主要用于治療帕金森病。其通過刺激多巴胺受體從而減輕例如顫抖等癥狀來發(fā)揮作用。由于其D2拮抗作用，其還被用于治療循環(huán)系統(tǒng)問題等其他情況。該藥還以商標(biāo)名Trivastal出現(xiàn)，Trivastal以應(yīng)該經(jīng)口服用的延長釋放膠囊的形式出現(xiàn)。在早期和晚期的帕金森病中，吡貝地爾能夠以單一療法或者與左旋多巴療法一起使用。由于其在認(rèn)知能力(如治療受損的記憶、注意力和集中力)的相對作用，所以很多老年患者從中受￡fL。吡貝地爾通過刺激腦中存在的多巴胺受體而發(fā)揮作用，實際上其治療中腦邊緣及中腦皮層通路的突觸后D2和D3受體的缺乏。該藥物還具有血管舒張的作用(從而提高不同的認(rèn)知癥狀)，并且加強去甲腎上腺素傳導(dǎo)來改善集中力、注意力和記憶。吡貝地爾被用于治療老年人的病理性認(rèn)知缺陷(受損的注意力、積極性、記憶等)、治療老年人的眩暈、治療視網(wǎng)膜缺血性臨床表現(xiàn)、輔助治療由于下肢的外周血管疾病所導(dǎo)致的間歇性跛行(階段2)、治療單極性抑郁癥和雙極性抑郁癥中的快感缺失和治療抗性抑郁癥(標(biāo)簽外使用)。然而，還沒有對吡貝地爾在皮膚病學(xué)領(lǐng)域中的使用進(jìn)行研究。
            
奧沙普秦-是非留體抗炎藥物(NSAID)的丙酸類的成員之一。奧沙普秦鉀的化學(xué)名是4，5-二苯基-2-噁唑丙酸鉀鹽。其經(jīng)驗式為C18H14N03K，分子量為331。奧沙普秦鎂是白色至灰白色粉末，熔點215°C。微溶于乙醇、易溶于水。水中的PK值為9. 7。奧沙普秦用于減輕與骨關(guān)節(jié)炎和類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎有關(guān)的炎癥、腫脹、僵硬和關(guān)節(jié)疼痛。然而，還沒有對奧沙普秦在皮膚病學(xué)領(lǐng)域中的使用進(jìn)行研究。格隆溴銨-是一種季銨鹽，化學(xué)名為3 [(環(huán)戊基羥基苯基乙?；?氧基]-I，I- 二甲基吡咯烷鎗溴化物。分子式為C19H28BrN03，分子量為398. 33。格隆溴銨注射劑被用作術(shù)前的抗毒蕈堿劑，以減少唾液、支氣管和咽部的分泌；減
            
少胃液分泌的體積和游離酸度；以及在誘導(dǎo)麻醉和插管時阻滯心臟-迷走神經(jīng)的抑制反射。必要時，Robinul注射劑可在手術(shù)期間使用，以抵抗手術(shù)或藥物導(dǎo)致的或者與迷走神經(jīng)反射有關(guān)的心律失常。格隆溴銨保護(hù)機體免受擬膽堿藥的外周毒蕈堿作用(如心動過緩和過度分泌)，所述擬膽堿藥例如有用于逆轉(zhuǎn)由于非去極化型肌松藥所導(dǎo)致的神經(jīng)肌肉阻滯的新斯的明和吡斯的明。格隆溴銨被用于消化道潰瘍，在期望快速的抗膽堿能作用或者無法進(jìn)行口服給藥時用作成人消化性潰瘍治療的輔助治療。在麻醉時，格隆溴銨注射劑可用作術(shù)前用藥，以減少唾液、支氣管和咽部的分泌，以及降低胃液分泌的酸度。其還可以與新斯的明(一種神經(jīng)肌肉阻滯逆轉(zhuǎn)劑)結(jié)合使用，以預(yù)防新斯的明的毒蕈堿作用，例如心動過緩。其還用于減少過多的唾液(流涎)。其降低胃中的酸分泌，因而可與其他藥物聯(lián)合用于治療胃潰瘍。其在治療哮喘和CCffD中的用途已有描述。其已經(jīng)局部地和口服地用于治療多汗癥。然而，還沒有對格隆溴銨在皮膚病學(xué)領(lǐng)域中的使用進(jìn)行研究。格拉司瓊-格拉司瓊鹽酸鹽，一種止惡心藥和止吐藥。化學(xué)上，其為內(nèi)-N_(9-甲基-9-氮雜雙環(huán)[3.3.1]壬-3-基)-1-甲基-IH-吲唑-3-甲酰胺鹽酸鹽，分子量為348. 9(312. 4 游離堿)。其經(jīng)驗式為 C18H24N40 · HCl。格拉司瓊適應(yīng)癥格拉司瓊鹽酸鹽用于預(yù)防與包括嘔吐發(fā)生性癌癥療法(包括高劑量順鉬)的最初和重復(fù)過程有關(guān)的惡心和嘔吐。化學(xué)療法所引起的惡心和嘔吐。5-HT3受體拮抗劑是用于治療和預(yù)防化學(xué)療法所引起的惡心和嘔吐的主要藥物。這種藥物經(jīng)常在開始治療前約30分鐘靜脈注射給藥。術(shù)后和輻射后的惡心和嘔吐。是用于由急性或慢性疾病或者急性胃腸炎所導(dǎo)致的惡心和嘔吐的合理療法。周期性嘔吐癥狀的治療，盡管還沒有證實療效的正式試驗。與輻射(包括全身輻射和分割腹部輻射)有關(guān)的惡心和嘔吐。然而，還沒有對格拉司瓊在皮膚病學(xué)領(lǐng)域中的使用進(jìn)行研究。美金剛胺-是一種口服有效的NMDA受體拮抗劑。美金剛胺鹽酸鹽的化學(xué)名是I-氨基_3，5- 二甲基金剛燒鹽酸鹽。美金剛胺鹽酸鹽被用于治療來減輕阿爾茨海默氏病的嚴(yán)重癡呆。美金剛胺還嘗試被用于廣泛性焦慮癥、癲癇癥、阿片類藥物依賴、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、抑郁、強迫癥、妥瑞癥、問題賭博、注意力缺失過動癥(ADHD)、青光眼、耳鳴、包括復(fù)雜性局部疼痛綜合癥的神經(jīng)痛、廣泛性發(fā)展障礙、與HIV有關(guān)的癡呆、眼球震顫、多發(fā)性硬化癥和自閉癥。然而，還沒有對美金剛胺在皮膚病學(xué)領(lǐng)域中的使用進(jìn)行研究。
            
尼莫地平-屬于被稱為鈣通道阻滯劑的藥理學(xué)活性劑種類。尼莫地平是1，4_ 二氫-2，6- 二甲基-4-(間硝基苯基)-3，5-吡啶二羧酸異丙基酯2-甲氧基乙基酯。其分子量為418. 5，分子式為C21H26N207。尼莫地平被用于通過減小患有由破裂的顱內(nèi)果漿狀動脈瘤(與它們的發(fā)作后的神經(jīng)學(xué)狀況無關(guān))(即Hunt和Hess I-V級)所導(dǎo)致的蛛網(wǎng)膜下腔出血的患者的缺血損害發(fā)生率和嚴(yán)重性，來改善神經(jīng)學(xué)結(jié)果。尼莫地平的主要用途是預(yù)防腦血管痙攣和由此導(dǎo)致的局部缺血，一種特別是由于破裂的顱內(nèi)果漿狀動脈瘤(與患者的發(fā)作后的神經(jīng)學(xué)狀況無關(guān))所導(dǎo)致的蛛網(wǎng)膜下腔出血(一種腦出血形式)的并發(fā)癥。其在蛛網(wǎng)膜下腔出血的4天內(nèi)開始施用并持續(xù)3周。如果血壓下降超過5%，則調(diào)整劑量。雖然目前尼莫地平并未被用于頭部損傷，但在臨床研究中其已經(jīng)顯示是有希望的。2009年的研究(Aslan A等人，F(xiàn)ebruary 2009 Pharmacol.Res. 59(2) :120-4)發(fā)現(xiàn)，與標(biāo)準(zhǔn)程序一起通過外周靜脈注射給予尼莫地平的患有嚴(yán)重頭
            
部外傷的患者具有明顯更高的腦灌注壓和頸靜脈血氧飽和度，而顱內(nèi)壓、頸靜脈乳酸鹽、頸靜脈葡萄糖更低。該研究的結(jié)論是格拉斯哥結(jié)果評分值更高且腦代謝得以改善。然而，還沒有對尼莫地平在皮膚病學(xué)領(lǐng)域中的使用進(jìn)行研究。氨氯地平-苯磺酸氨氯地平在化學(xué)上被描述為(±)-2-[(2_氨基乙氧基)甲基]-4-(2-氯苯基)-1,4-二氫-6-甲基-3, 5-卩比唳二羧酸3-乙基-5-甲基酯單苯磺酸鹽。其經(jīng)驗式為 C20H25CIN2O5 · C6H6035。氨氯地平堿(作為苯磺酸鹽、甲磺酸鹽或馬來酸鹽)是一種長效的鈣通道阻滯劑(二氫吡啶類)，用于抗高血壓和治療心絞痛。像其他鈣通道阻滯劑一樣，氨氯地平通過松弛動脈壁的平滑肌而發(fā)揮作用，降低總外周阻力且由此降低血壓。氨氯地平被用于治療高血壓?？蓡为毷褂没蛘吲c其他抗高血壓藥聯(lián)合使用。其還被用于治療冠狀動脈疾病。氨氯地平被用于慢性穩(wěn)定性心絞痛的對癥治療。氨氯地平可單獨使用或者與其他抗高心絞痛藥聯(lián)合使用。氨氯地平還被用于治療確證的或疑似的血管痙攣性心絞痛。氨氯地平可以以單一療法使用或者與其他抗心絞痛藥聯(lián)合使用。對于患有最近通過血管造影術(shù)證明的冠狀動脈疾病、沒有心力衰竭或射血分?jǐn)?shù)<40%的患者而言，氨氯地平被用于減少由于心絞痛導(dǎo)致的住院治療的風(fēng)險以及減少冠狀動脈血管重建術(shù)過程的風(fēng)險。然而，還沒有對氨氯地平在皮膚病學(xué)領(lǐng)域中的使用進(jìn)行研究。在一個實施方案中，本發(fā)明的反義寡核苷酸和組合物被用于預(yù)防或治療FLG家族成員相關(guān)的疾病或病癥。能夠被由干細(xì)胞(使用所述反義化合物獲得)再生的細(xì)胞/組織治療的典型的示例性聚絲蛋白(FLG)介導(dǎo)的疾病和病癥包含F(xiàn)LG的異常功能和/或表達(dá)相關(guān)的疾病或病癥、皮膚病學(xué)疾病或病癥、皮膚裳老的體征、由于外部侵害所導(dǎo)致的皮膚狀況、過敏癥、牛皮癬、哮喘、濕疹、花粉熱、尋常型魚鱗病、異位性皮炎(AD)、皰疹樣濕疹、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、心血管疾病或病癥、癌癥、炎癥性疾病、免疫介導(dǎo)性疾病或病癥、免疫力過高性或免疫低免疫力低下性的下性疾病或病癥、自身免疫疾病或病癥、哮喘、牛皮癬、過敏癥(例如過敏性鼻炎、接觸型過敏癥、食物過敏癥等)、乳糜瀉、神經(jīng)病學(xué)疾病或病癥、神經(jīng)退行性疾病或病癥(例如阿爾茨海默氏病、帕金森病、ALS等)、AIDS消瘦癥、與皮膚屏障功能相關(guān)的疾病或病癥、慢性炎癥性皮膚病、臨床性干性皮膚。在一個實施方案中，將一種或多種反義寡核苷酸和/或本發(fā)明的組合物對FLG的調(diào)節(jié)向需要其的患者施用以預(yù)防或治療與正常對照相比的FLG異常表達(dá)、功能、活性相關(guān)的任何疾病或病癥。在一個實施方案中，本發(fā)明的組合物包括一種或多種對聚絲蛋白(FLG)多核苷酸有特異性的寡核苷酸，該多核苷酸包括但不限于反義序列、互補序列、等位基因、同系物、亞型、變體、衍生物、突變體、片段或其組合。在一個實施方案中，本發(fā)明的組合物包括一種或多種對一種或多種聚絲蛋白(FLG)多核苷酸和一種或多種FLG調(diào)節(jié)分子有特異性的寡核苷酸，該多核苷酸包括反義序列、互補序列、等位基因、同系物、亞型、變體、衍生物、突變體、片段或其組合。本發(fā)明的一個實施方案提供一種組合物，其中所述分子選自吡格列酮、洛美利嗪、
            
安非他酮、苯丙氨酯、貝尼地平、吡羅昔康、托吡酯、伊拉地平、尼可地爾、吡貝地爾、奧沙普秦、格隆溴銨、格拉司瓊、美金剛胺、尼莫地平和氨氯地平。本發(fā)明的一個實施方案提供一種用于治療皮膚病學(xué)疾病或病癥的組合物，該組合物包括一種或多種FLG調(diào)節(jié)分子和藥學(xué)上可接受的載體。本發(fā)明的一個實施方案提供一種組合物，其中化合物選自吡格列酮、洛美利嗪、安非他酮、苯丙氨酯、貝尼地平、吡羅昔康、托吡酯、伊拉地平、尼可地爾、吡貝地爾、奧沙普秦、格隆溴銨、格拉司瓊、美金剛胺、尼莫地平和氨氯地平。本發(fā)明的一個實施方案提供一種組合物，其中該組合物進(jìn)一步包括調(diào)節(jié)FLG表達(dá)和活性的反義寡核苷酸。本發(fā)明的一個實施方案提供一種組合物，其中該組合物進(jìn)一步包括聚絲蛋白天然反義序列的一種反義寡核苷酸，其中所述反義寡核苷酸在受治療者中調(diào)節(jié)FLG表達(dá)。本發(fā)明的一個實施方案提供一種組合物，其中該寡核苷酸包括如SEQ ID NO :3至13所列的核苷酸序列。本發(fā)明的一個實施方案提供一種組合物，其中如SEQ ID NO :3至13所列的寡核苷酸包括一種或多種修飾或取代。本發(fā)明的一個實施方案提供一種治療受治療者的FLG相關(guān)疾病或病癥的方法,所述方法包括向該受治療者施用包含一種或多種FLG調(diào)節(jié)分子和藥學(xué)上可接受的載體的組合物。本發(fā)明的一個實施方案提供一種方法，其中所述化合物選自吡格列酮、洛美利嗪、安非他酮、苯丙氨酯、貝尼地平、吡羅昔康、托吡酯、伊拉地平、尼可地爾、吡貝地爾、奧沙普秦、格隆溴銨、格拉司瓊、美金剛胺、尼莫地平和氨氯地平。本發(fā)明的一個實施方案提供一種方法，其中所述組合物進(jìn)一步包括一種調(diào)節(jié)FLG表達(dá)或活性的反義寡核苷酸。本發(fā)明的一個實施方案提供一種方法，其中所述組合物進(jìn)一步包括聚絲蛋白天然反義序列的一種反義寡核苷酸，其中所述反義寡核苷酸在受治療者中調(diào)節(jié)FLG表達(dá)。本發(fā)明的一個實施方案提供一種方法，其中與至少一種聚絲蛋白多核苷酸相關(guān)的疾病選自皮膚病學(xué)疾病或病癥、皮膚衰老的體征、由于外部侵害所導(dǎo)致的皮膚狀況、過敏癥、牛皮癬、哮喘、濕疹、花粉熱、尋常型魚鱗病、異位性皮炎(AD)、皰疹樣濕疹、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、心血管疾病或病癥、癌癥、炎癥性疾病、免疫介導(dǎo)性疾病或病癥、免疫力過高性或免疫力低下性疾病或病癥、自身免疫疾病或病癥、哮喘、牛皮癬、過敏癥(例如過敏性鼻炎、接觸型過敏癥、食物過敏癥等)、乳糜瀉、神經(jīng)病學(xué)疾病或病癥、神經(jīng)退行性疾病或病癥(例如阿爾茨海默氏病、帕金森病、ALS等)、AIDS消瘦癥、與皮膚屏障功能相關(guān)的疾病或病癥、慢性炎癥性皮膚病、臨床性干性皮膚。本發(fā)明的一個實施方案提供一種預(yù)防或治療與至少一種聚絲蛋白(FLG)多核苷酸和/或其至少一種編碼產(chǎn)物相關(guān)的皮膚狀況的方法，其包括向具有皮膚狀況或有發(fā)展成皮膚狀況的風(fēng)險的患者施用治療有效劑量的聚絲蛋白上調(diào)化合物、至少一種結(jié)合所述至少一種聚絲蛋白(FLG)多核苷酸的天然反義序列并調(diào)節(jié)所述至少一種聚絲蛋白(FLG)多核苷酸的表達(dá)的反義寡核苷酸、和藥學(xué)上可接受的載體；從而預(yù)防或治療至少一種聚絲蛋白(FLG)多核苷酸和/或其至少一種編碼產(chǎn)物相關(guān)的疾病皮膚狀況。本發(fā)明的一個實施方案提供一種方法，其中所述化合物選自吡格列酮、洛美利嗪、安非他酮、苯丙氨酯、貝尼地平、吡羅昔康、托吡酯、伊拉地平、尼可地爾、吡貝地爾、奧沙普
            
秦、格隆溴銨、格拉司瓊、美金剛胺、尼莫地平和氨氯地平。本發(fā)明的一個實施方案提供一種方法，其中所述皮膚狀況是由炎癥、光損傷和衰老導(dǎo)致的。本發(fā)明的一個實施方案提供一種方法，其中所述皮膚狀況是起皺紋、接觸性皮炎、異位性皮炎、光化性角化病、角質(zhì)化病癥、大皰性表皮松解癥、剝脫性皮炎、脂溢性皮炎、紅斑、盤狀紅斑狼瘡、皮肌炎、皮膚癌或自然衰老效應(yīng)。本發(fā)明的一個實施方案提供根據(jù)權(quán)利要求30所述的組合物在制造用于治療皮膚病學(xué)疾病或病癥的藥物中的用途。本發(fā)明的一個實施方案提供一種用途，其中所述組合物進(jìn)一步包括一種調(diào)節(jié)FLG表達(dá)或活性的反義寡核苷酸。本發(fā)明的一個實施方案提供一種用途，其中所述組合物進(jìn)一步包括聚絲蛋白天然反義序列的一種反義寡核苷酸，其中所述反義寡核苷酸在受治療者中調(diào)節(jié)FLG表達(dá)。本發(fā)明的一個實施方案提供一種用途，其中所述化合物選自吡格列酮、洛美利嗪、安非他酮、苯丙氨酯、貝尼地平、吡羅昔康、托吡酯、伊拉地平、尼可地爾、吡貝地爾、奧沙普秦、格隆溴銨、格拉司瓊、美金剛胺、尼莫地平和氨氯地平。本發(fā)明的一個實施方案提供一種用途，其中所述皮膚狀況是起皺紋、接觸性皮炎、異位性皮炎、光化性角化病、角質(zhì)化病癥、大皰性表皮松解癥、剝脫性皮炎、脂溢性皮炎、紅斑、盤狀紅斑狼瘡、皮肌炎、皮膚癌或自然衰老效應(yīng)。在本發(fā)明的實施方案中，向需要皮膚治療或者處于將會需要皮膚治療的發(fā)展中狀況的危險中的受治療者提供治療性方案和/或美容方案以及相關(guān)的特定治療。可根據(jù)例如受治療者的FLG狀態(tài)進(jìn)行診斷?；颊叩慕o定組織(例如皮膚)中的FLG表達(dá)水平可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法或者本文他處描述的方法例如通過使用PCR或基于抗體的檢測方法分析組織來確定。本發(fā)明的優(yōu)選實施方案提供一種用于皮膚治療和/或美容應(yīng)用的組合物，該組合物包含本發(fā)明的化合物，例如用于調(diào)節(jié)皮膚中的FLG表達(dá)。在實施方案中，通過本發(fā)明化合物的局部治療來增加細(xì)胞壽命、預(yù)防細(xì)胞凋亡。例如，如本文所述，通過處理皮膚(例如上皮細(xì)胞)可以保護(hù)皮膚避免衰老，例如起皺紋。在一個示例性實施方案中，使皮膚與本發(fā)明的藥物組合物或美容組合物相接觸。示例性皮膚折磨或皮膚狀況包括與炎癥、曬傷或自然衰老有關(guān)的病癥或疾病或者由炎癥、曬傷或自然衰老所導(dǎo)致的病癥或疾病。例如，所述組合物在預(yù)防和治療接觸性皮炎(包括刺激性接觸性皮炎和過敏性接觸性皮炎)、異位性皮炎(也稱作過敏性濕疹)、光化性角化病、角質(zhì)化病癥(包括濕疹)、大皰性表皮松解癥(包括天皰瘡)、剝脫性皮炎、脂溢性皮炎、紅斑(包括多形性紅斑和結(jié)節(jié)性紅斑)、由于太陽或其他光源所導(dǎo)致的損傷、盤狀紅斑狼瘡、皮肌炎、皮膚癌以及自然衰老效應(yīng)中有效。在本發(fā)明的實施方案中，將所述組合物摻合至包含通常適于局部藥物施用的局部載體以及包括本領(lǐng)域內(nèi)公知的任何此類物質(zhì)的局部制劑中。所述局部載體可以如此選擇以便以所需形式(例如以軟膏劑、洗劑、乳膏劑、微乳劑、凝膠劑、油劑、溶液等形式)提供組合物，并且可以由天然存在或合成來源的物質(zhì)組成。優(yōu)選的是所選載體不會對局部制劑中的
            
有效劑或其他組份造成不利影響。適于本文使用的局部載體的例子包括水、醇、其他的無毒有機溶劑、甘油、礦物油、硅酮、石油膏、羊毛脂、脂肪酸、植物油、尼泊金類、蠟類等。制劑可以是無色無味的軟膏劑、洗劑、乳膏劑、微乳劑和凝膠劑。本發(fā)明的組合物可以摻入到軟膏劑中，所述軟膏劑通常為代表性地基于凡士林和其他凡士林衍生物的半固體制劑。如那些本領(lǐng)域技術(shù)人員所領(lǐng)會到的，所使用的特定的軟膏劑基質(zhì)用于提供最適宜的藥物遞送，優(yōu)選是提供其他所需要的特性(例如柔潤性等)。如同其他載體或媒介物那樣，軟膏劑基質(zhì)應(yīng)該是惰性的、穩(wěn)定的、無刺激性的和非致敏性的。如Remington' s Pharmaceutical Sciences (Mack Pub. Co.)中解釋的那樣，軟膏劑基質(zhì)可分為四類油性基質(zhì)；可乳化基質(zhì)；乳劑基質(zhì)；和水溶性基質(zhì)。油性軟膏劑基質(zhì)包括例如植物油、源自動物的脂肪和源自石油的半固體烴類?？扇榛浉鄤┗|(zhì)也稱作可吸收的軟膏劑基質(zhì)，包含很少的水或者不含水，并且包括例如硫酸羥基硬脂精、無水羊毛脂和吸水性凡士林。乳劑軟膏劑基質(zhì)是油包水(W/0)乳劑或水包油(0/W)乳劑中的任一種，并且包括例如鯨蠟醇、單硬脂酸甘油酯、羊毛脂和硬脂酸。示例性水溶性軟膏劑基質(zhì)由不同分子量(例如參見Remington' s,同上)的聚乙二醇(PEG)制備。本發(fā)明的組合物可以摻合到洗劑中，所述洗劑通常是沒有摩擦地應(yīng)用于皮膚表面的制劑，并且典型地為液體或半液體制劑，其中包括活性劑的固體顆粒存在于水或醇基質(zhì)中。洗劑經(jīng)常是固體的混懸劑，可以包括水包油型的液體-油狀乳劑。由于易于應(yīng)用更多液體的組合物，因而洗劑優(yōu)選是用于治療大身體面積的制劑。通常需要洗劑中的不溶物質(zhì)被很好地分開。洗劑典型地包含用于產(chǎn)生良好分散的助懸劑以及對于局部化活性劑并保持其與皮膚接觸有用的化合物，例如甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉等。與目前方法結(jié)合使用的示例性洗劑制劑包含混合有吸水性凡士林的丙二醇，其可以以商標(biāo)Aquaphor 由拜爾斯道夫公司(Beiersdorf, Inc.) (Norwalk, Conn.)獲得。本發(fā)明的組合物可以摻合到乳膏劑中，所述乳膏劑通常為粘性的液體或者半固體乳劑，可以是水包油或油包水乳劑的任一種。乳膏劑基質(zhì)是可水洗的，并且包含油相、乳化劑和水相。該油相通常由凡士林和脂肪醇如鯨蠟醇或硬脂醇構(gòu)成；該水相經(jīng)常但并非必須在體積上超過油相，并且通常包含潤濕劑。如Remington' s，同上所解釋的那樣，乳膏劑制劑中的乳化劑通常是非離子型、陰離子型、陽離子型或兩性表面活性劑。本發(fā)明的組合物可以摻合到微乳劑中，所述微乳劑通常是熱力學(xué)上穩(wěn)定的、兩種不混溶液體(如油和水)的各向同性地透明的分散體，通過表面活性劑分子的界面膜得以穩(wěn)定(Encyclopedia of Pharmaceutical Technology (New York Marcel Dekker, 1992),卷9)。對于微乳劑的制備，需要表面活性劑(乳化劑)、共表面活性劑(共乳化劑)、油相和水相。適合的表面活性劑包括任何在制備乳劑中有用的表面活性劑，例如典型地用于制備乳膏劑的乳化劑。所述共表面活性劑(或"共乳化劑")通常選自聚甘油衍生物、丙三醇衍生物和脂肪醇。優(yōu)選的乳化劑/共乳化劑組合通常但并非必須選自單硬脂酸甘油酯和聚氧乙烯硬脂酸酯；聚乙二醇和硬脂酸棕櫚酸乙二醇酯；辛酸甘油三酯和癸酸甘油三酯以及油?；垡叶几视王ァＫ嗖粌H包括水，還典型地包括緩沖液、葡萄糖、丙二醇、聚乙二醇，優(yōu)選低分子量聚乙二醇(例如PEG 300和PEG 400)和/或丙三醇等，而油相通常包括如脂肪酸酯、改性植物油、硅酮油、甘油單酯和甘油二酯和甘油三酯的混合物、PEG的單酯和二酯(例如油?；垡叶几视王?等。本發(fā)明的組合物可以摻合到凝膠制劑中，所述凝膠制劑通常是包含由小的無機顆粒構(gòu)成的懸浮液(雙相系統(tǒng))或基本上均勻地分布在載體溶液中的大的有機分子(單相凝
            
膠)的半固體系統(tǒng)。單相凝膠可如下制作例如通過將所述活性劑、載體液體、適合的膠凝齊U，如黃蓍膠(2-5% )、藻酸鈉(2-10% )、明膠(2-15% )、甲基纖維素(3-5% )、羧甲基纖維素鈉(2-5% )、卡波姆(0. 3-5% )或聚乙烯醇(10-20% )組合在一起并且混合直至產(chǎn)生特征性半固體產(chǎn)物。其他適合的膠凝劑包括羥甲基纖維素、聚氧乙烯-聚氧丙烯、羥乙基纖維素和明膠。盡管凝膠通常采用水性載體液體，但醇和油也可用作載體液體。本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的各種添加劑也可包括在制劑中，例如局部制劑。添加劑的例子包括但不限于增溶劑、透皮促滲劑、遮光劑、防腐劑(例如抗氧化劑)、膠凝劑、緩沖齊U、表面活性劑(特別是非離子型和兩性表面活性劑)、乳化劑、軟化劑、增稠劑、穩(wěn)定劑、潤濕劑、著色劑、芳香劑(fragrance)等。特別優(yōu)選與乳化劑、軟化劑和防腐劑一起,含有增溶劑和/或透皮促滲劑。最佳的局部制劑主要包括約2wt. % 60wt. %、優(yōu)選2wt. % 50wt. %的增溶劑和/或透皮促滲劑；2wt. % 50wt. %、優(yōu)選2wt. % 20wt. %的乳化劑；2wt. % 20wt. %的軟化劑；和0. 01 0. 2wt. %防腐劑，以及制備所述制劑剩余部分的活性劑和載體(例如水)。透皮促滲劑對促進(jìn)治療水平的活性劑通過合理大小面積的完整皮膚有用。適合的促進(jìn)劑在本領(lǐng)域是熟知的，包括例如鏈烷醇(如甲醇、乙醇和2-丙醇)；烷基甲基亞砜(如二甲基亞砜(DMSO)、癸基甲基亞砜(CltlMSO)和十四烷基甲基亞砜)；吡咯烷酮(如2-吡咯烷酮，N-甲基-2-吡咯烷酮和N-(-羥基乙基)吡咯烷酮)dHN-二乙基-間甲苯酰胺；C2-C6鏈烷二醇；混溶性溶劑(如二甲基甲酰胺(DMF)、N，N-二甲基乙酰胺(DMA)和四氫呋喃甲醇)；I-取代的氮雜環(huán)庚烷-2-酮，特別是I-正十二烷基環(huán)氮雜環(huán)庚烷-2-酮(月桂氮酮)；以商標(biāo)AzoneR 可由Whitby Research股份有限公司(Richmond, Va)獲得。增溶劑的例子包括但不限于以下物質(zhì)親水性醚，如二乙二醇單乙醚(乙氧基二甘醇，可以Transcutol 市售可得)和二乙二醇單乙醚油酸酯(可以Soficutol 市售可得)；聚乙烯蓖麻油衍生物，如聚氧乙烯(35)蓖麻油、聚氧乙烯(40)氫化蓖麻油等；聚乙二醇，特別是低分子量聚乙二醇，如PEG 300和PEG 400，以及聚乙二醇衍生物，如PEG-8辛酸/癸酸甘油酯(可以Labrasol 市售可得)；燒基甲基亞砜，如DMSO ;卩比咯烷酮，如2_吡咯烷酮、N-甲基-2-吡咯烷酮；和DMA。很多增溶劑還可作為吸收促進(jìn)劑發(fā)揮作用。可將單獨的增溶劑摻合至制劑中，或者可以將增溶劑的混合物摻合至制劑中。合適的乳化劑和共乳化劑包括但不限于那些關(guān)于微乳劑制劑所描述的乳化劑和共乳化劑。軟化劑包括例如丙二醇、丙三醇、肉豆蘧酸異丙酯、聚丙二醇-2 (PPG-2)肉豆蘧
            
基釀丙酸酷等。其他的活性劑也可包含在制劑中，例如其它抗炎藥、止痛藥、抗菌劑、抗真菌劑、抗生素、維生素、抗氧化劑、以及通常在防曬制劑中發(fā)現(xiàn)的防曬劑，所述防曬劑包括但不限于鄰氨基苯甲酸鹽、二苯甲酮(特別是二苯甲酮-3)、樟腦衍生物、肉桂酸酯(例如甲氧基肉桂酸辛酯)、二苯甲酰甲烷(例如丁基甲氧基二苯甲酰甲烷)、對氨基苯甲酸PABA)及其衍生物、以及水楊酸鹽(例如水楊酸辛酯)。最為明顯的是，根據(jù)本發(fā)明的組合物可用作在皮膚、黏膜和/或半黏液性膜上使
            
用的美容組合物或藥物組合物。該組合物可用作皮膚防護(hù)產(chǎn)品和/或皮膚護(hù)理產(chǎn)品或者用作抗皺紋和/或抗衰老組合物。我們也可預(yù)想在例如與其他活性劑組合的組合物的領(lǐng)域內(nèi)的其他應(yīng)用。我們還可在用于身體和頭發(fā)健康的美容組合物中使用根據(jù)本發(fā)明的化合物。而且，根據(jù)本發(fā)明的化合物(如之前定義的)刺激皮膚細(xì)胞的代謝功能。通過顯著地增加細(xì)胞外基質(zhì)的結(jié)構(gòu)蛋白的合成來允許蛋白質(zhì)合成增多，這對于其發(fā)揮作用是必不可少的。因此，根據(jù)本發(fā)明的化合物或者包含所述化合物的組合物在組織再生方面具有積極作用。根據(jù)本發(fā)明的化合物特別高效以便治療創(chuàng)傷愈合病癥。旨在活化之前定義的FLG蛋白的內(nèi)源性合成的組合物被用于制造局部使用的藥物組合物和/或美容組合物。它們將以更為普通的方式使用以便治療皮膚病學(xué)病癥。而且，根據(jù)另一個方面，旨在活化皮膚細(xì)胞的FLG蛋白的內(nèi)源性合成的根據(jù)本發(fā)明之前定義的化合物被用于制造用于治療皮膚狀況的藥物。本發(fā)明還涉及之前定義為藥物的化合物的用途。而且，根據(jù)另一個方面，本發(fā)明涉及用于皮膚護(hù)理和/或頭發(fā)及指甲護(hù)理的治療的美容過程，所述美容過程包含將有效量的如之前所定義的活性劑涂抹在皮膚表面，由此獲得所需要的作用。特別地，該過程不但可用于以治愈和/或預(yù)防的方式治療皮膚衰老的體征，而且還可用于保護(hù)皮膚和/或頭發(fā)和/或指甲免受外部侵害，如輻射的副作用、特別是UV輻射，或者用于與皮膚炎癥和刺激的體征作斗爭。特別地，本發(fā)明的美容治療過程可根據(jù)組合物經(jīng)常使用的方法通過施用上述定義的美容組合物得以實現(xiàn)，如在皮膚或頭發(fā)上施用乳膏劑、凝膠劑、精華液、洗劑、乳狀物、洗發(fā)劑和防曬霜，和以牙膏的形式施用于牙齦。該美容治療過程的實施方案的特定模式也由之前的描述引起。本發(fā)明的化合物在治療性和非治療性的應(yīng)用中均有用。在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物用于治療性的應(yīng)用。在另一個實施方案中，本發(fā)明的化合物用于非治療性的應(yīng)用，例如美容應(yīng)用。本發(fā)明的方法的治療性應(yīng)用包括診斷醫(yī)學(xué)皮膚狀況的原因的手段。因此，醫(yī)學(xué)皮膚狀況的治療方法可以調(diào)整為補充個體的表型。本發(fā)明的方法的治療性應(yīng)用還包括確定個體的皮膚是否有可能與藥物制劑(如局部給藥的藥物制劑)不利地反應(yīng)的手段。在這種情況下，可將該個體與特定藥物制劑相匹配，以便提供最大的治療作用，同時最小化或消除對個體皮膚的狀況的任何不希望的副作用。本發(fā)明的非治療性應(yīng)用的方法包括為了對藥劑、例如化妝品或任何其他引入身體的制劑形式進(jìn)行試驗而對個體進(jìn)行分組的手段。這有助于解釋獲自這種試驗的結(jié)果，例如在試驗過程中不同個體的皮膚的反應(yīng)是不一致的?？梢酝ㄟ^根據(jù)個體對皮膚狀況的易患病體質(zhì)而對個體進(jìn)行分組或分類來更清晰地解釋反應(yīng)的不均一性。技術(shù)人員將理解，使用該方法將會可能開發(fā)出適用于一些個體、但不適用于其他個體的藥劑。因此可以建立一組藥劑，該組中包括對不同個體具有適合性的不同藥劑。根據(jù)該試驗，希望使用這種藥劑的個體可以使用本發(fā)明的方法來確定在基于他們自身對皮膚狀況的易患病體質(zhì)下哪種藥劑最適于使用。因而，本發(fā)明的方法使得個體能夠與個人護(hù)理產(chǎn)品(例如上文列出的那些產(chǎn)品)相匹配。鑒定個體的聚絲蛋白原基因型的方法在該個體的生物學(xué)物質(zhì)上進(jìn)行。優(yōu)選在進(jìn)行鑒定方法之前，將該生物學(xué)物質(zhì)從該個體身上移除。也就是說，通常該生物學(xué)物質(zhì)是離體的。該離體物質(zhì)可在進(jìn)行所述方法之前進(jìn)一步在體外進(jìn)行培養(yǎng)。離體樣品可包括取自身體任何部分的組織或細(xì)胞。優(yōu)選的離體樣品包括取自循環(huán)
            
系統(tǒng)的物質(zhì)、或者取自體腔(如口腔)的物質(zhì)。最優(yōu)選的離體樣品是唾液樣品。個體內(nèi)存在的等位基因可以使用本領(lǐng)域公知的方法由唾液樣品確定，所述方法如在 Schie 和 Wilson (1997, Journal of Immunological Methods, 208,91-101)中描述的方法。因此，所述離體樣品由個體提供，而不需要專業(yè)采集手段。例如，在測試之前唾液樣品或頰拭子可簡單地由該個體提供。聚絲蛋白原基因和蛋白在本領(lǐng)域內(nèi)是熟知的，且描述于Gan等人(1990，Biochemistry, 29,9432-9440)中。許多聚絲蛋白原序列被儲存于公共可訪問的數(shù)據(jù)庫中。聚絲蛋白原基因包括多種聚絲蛋白重復(fù)，常為10、11或12個重復(fù)。聚絲蛋白重復(fù)通常具有彼此相同的長度(人體中為972bp，324個氨基酸)，盡管這對在mRNA的5'-和3'-端的聚絲蛋白不太常見。該聚絲蛋白重復(fù)可以表現(xiàn)相當(dāng)多的序列差異，典型地在相同等位基因上的重復(fù)之間或在不同等位基因之間有0-50%、更典型地有2-30%、進(jìn)一步典型地有10-15%的差異。通常來說，差異可歸因于單堿基變化，但也可包含電荷變化(Gan等人(1990)Biochemistry，29，9432-9440)。人聚絲蛋白重復(fù)的共有氨基酸序列圖是已知的(Gan 等人(1990) Biochemistry, 29,9432-9440),并且優(yōu)選聚絲蛋白重復(fù)與 Gan 等人(1990,Biochemistry, 29,9432-9440)中所示的該共有序列或該共有序列的變體具有至少50%、更優(yōu)選至少75 %、進(jìn)一步優(yōu)選90 %、更加優(yōu)選至少95 %的序列同一性。正常情況下，編碼氨基端和羧基端的氨基酸序列是更保守的，如同5'和3' DNA序列的兩側(cè)為基因的編碼部分(Presland 等人(1992) J Biol Chew，267 (33)，23772-23781)。在一個實施方案中，寡核苷酸是對FLG多核苷酸有特異性,該多核苷酸包括但不限于非編碼區(qū)。FLG靶包括FLG的變體；FLG的突變體，包括SNP ；FLG的非編碼序列；等位基因、片段和類似物。優(yōu)選地寡核苷酸是反義RNA分子。根據(jù)本發(fā)明的實施方案，靶核酸分子不限于僅FLG多核苷酸，還延伸到FLG的任何同種型、受體、同系物、非編碼區(qū)和類似物。在一個實施方案中，寡核苷酸靶向FLG靶的天然反義序列(與編碼區(qū)和非編碼區(qū)天然反義)，包括但不限于，其變體、等位基因、同系物、突變體、衍生物、片段和互補序列。優(yōu)選地寡核苷酸是反義RNA或DNA分子。在一個實施方案中，本發(fā)明的寡聚化合物還包括變體，其中在化合物中一個或多個核苷酸位置存在不同堿基。例如，如果第一個核苷酸是腺嘌呤，可產(chǎn)生在這一位置包含胸苷、鳥苷、胞苷或其它天然或非天然核苷酸的變體。這可在反義化合物的任何位置進(jìn)行。隨后利用本文所述的方法測定這些化合物以確定它們抑制靶核酸表達(dá)的能力。在一些實施方案中，反義化合物與靶之間的同源性、序列同一性或互補性是從約50%至約60%。在一些實施方案中，同源性、序列同一性或互補性是從約60%至約70%。在一些實施方案中，同源性、序列同一性或互補性是從約70%至約80%。在一些實施方案中，同源性、序列同一性或互補性是從約80%至約90%。在一些實施方案中，同源性、序列同一性或互補性是約90%、約92%、約94%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%或約 100%。當(dāng)反義化合物與靶核酸的結(jié)合干擾靶核酸的正常功能以導(dǎo)致活性的喪失時，該化合物是可特異性雜交的，且在期望特異性結(jié)合的條件下存在足夠程度的互補性以避免反義化合物與非靶核酸序列的非特異性結(jié)合。這種條件包括，即，在體內(nèi)測定或治療性治療的情
            
形中的生理條件，和在體外測定的情形中進(jìn)行測定的條件。當(dāng)反義化合物(無論是DNA、RNA、嵌合、取代的等等)與靶DNA或RNA分子的結(jié)合干擾靶DNA或RNA的正常功能以導(dǎo)致效用的喪失時，該化合物是可特異性雜交的，且在期望特異性結(jié)合的條件下(即，在體內(nèi)測定或治療性治療的情形中的生理條件下，和在體外測定的情形中進(jìn)行測定的條件下)存在足夠程度的互補性以避免反義化合物與非靶序列的非特異性結(jié)合。在一個實施方案中，F(xiàn)LG的靶向包括但不限于，利用例如PCR、雜交等鑒定和擴展的反義序列、一種或多種如SEQ ID NO :2所列的序列、和調(diào)節(jié)FLG表達(dá)或功能的類似物。在一個實施方案中，與對照相比表達(dá)或功能被上調(diào)。在一個實施方案中，與對照相比表達(dá)或功能被下調(diào)。在一個實施方案中，寡核苷酸包括如SEQ ID NO 3至13所列的核酸序列，包括利用例如PCR、雜交等鑒定和擴展的反義序列。這些寡核苷酸可包括一種或多種修飾的核苷酸、更短或更長的片段、修飾的鍵和類似物。修飾的鍵或核苷酸間鍵合的實例包括硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯或類似物。在一個實施方案中，核苷酸包括磷衍生物?？筛郊佑诒景l(fā)明的修飾的寡核苷酸中的糖或糖類似物部分的磷衍生物(或修飾的磷酸酯基團)可以是單磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、磷酸烷基酯、磷酸烷烴酯、硫代磷酸酯和類似物。上述磷酸酯類似物的制備、和將其向核苷酸、修飾的核苷酸和寡核苷酸的摻入本身是已知的，不必在此描述。反義的特異性和靈敏性還由本領(lǐng)域技術(shù)人員利用以用于治療用途。反義寡核苷酸已在動物和人的疾病狀態(tài)的治療中用作治療部分。反義寡核苷酸已經(jīng)安全且有效地施用于人，目前正在進(jìn)行許多臨床試驗。因此已經(jīng)確定，寡核苷酸可以是有用的治療形態(tài)，可被配置以用于治療細(xì)胞、組織和動物，尤其是人的治療方案。在本發(fā)明的實施方案中，寡聚反義化合物，尤其是寡核苷酸，結(jié)合靶核酸分子并調(diào)節(jié)靶基因編碼的分子的表達(dá)和/或功能。待干擾的DNA功能包括，例如，復(fù)制和轉(zhuǎn)錄。待干擾的RNA功能包括所有重要功能，諸如例如，RNA向蛋白翻譯位置的移位，從RNA翻譯蛋白，剪接RNA以產(chǎn)生一種或多種mRNA物質(zhì)，和可能由RNA參與或促進(jìn)的催化活性。取決于期望的功能，功能可被上調(diào)或抑制。
            
反義化合物包括，反義寡聚化合物、反義寡核苷酸、外部指導(dǎo)序列(EGS)寡核苷酸、可選剪接體、引物、探針、和與靶核酸的至少一部分雜交的其它寡聚化合物。如此，這些化合物可以單鏈、雙鏈、部分單鏈或環(huán)狀寡聚化合物的形式被引入。在本發(fā)明范疇中，將反義化合物靶向特定核酸分子可以是多步驟的過程。該過程通常開始于鑒定待調(diào)節(jié)其功能的靶核酸。這一靶核酸可以是，例如，其表達(dá)與特定病癥或疾病狀態(tài)相關(guān)的細(xì)胞基因(或從基因轉(zhuǎn)錄的mRNA)、或來自感染物的核酸分子。在本發(fā)明中，靶核酸編碼聚絲蛋白(FLG)。靶向過程通常還包括確定靶核酸中發(fā)生反義相互作用從而產(chǎn)生期望作用如調(diào)節(jié)表達(dá)的至少一個靶區(qū)域、區(qū)段或位置。在本發(fā)明范疇中，術(shù)語"區(qū)域"定義為具有至少一種可鑒定結(jié)構(gòu)、功能或特征的靶核酸的一部分。靶核酸區(qū)域中是區(qū)段。"區(qū)段"定義為靶核酸中較小區(qū)域或區(qū)域的亞部分。本發(fā)明中使用的"位置"定義為靶核酸中的位置。在一個實施方案中，反義寡核苷酸結(jié)合聚絲蛋白(FLG)的天然反義序列并調(diào)節(jié)FLG(SEQ ID NO 1)的表達(dá)和/或功能。反義序列的實例包括SEQ ID NO 2至13。在一個實施方案中，反義寡核苷酸結(jié)合聚絲蛋白(FLG)多核苷酸的一個或多個區(qū)并調(diào)節(jié)FLG的表達(dá)和/或功能。區(qū)段包括FLG的有義或反義多核苷酸的至少五個連續(xù)核苷酸。在一個實施方案中，反義寡核苷酸是對FLG的天然反義序列有特異性，其中寡核苷酸對FLG的天然反義序列的結(jié)合調(diào)節(jié)FLG的表達(dá)和/或功能。在一個實施方案中，寡核苷酸化合物包括如SEQ ID NO 3至13所列的序列、利用例如PCR、雜交等鑒定和擴展的反義序列。這些寡核苷酸可包括一種或多種修飾的核苷酸、更短或更長的片段、修飾的鍵和類似物。修飾的鍵或核苷酸間鍵合的實例包括硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯或類似物。在一個實施方案中，核苷酸包括磷衍生物。可附加于本發(fā)明的修飾的寡核苷酸中的糖或糖類似物部分的磷衍生物(或修飾的磷酸酯基團)可以是單磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、磷酸烷基酯、磷酸烷烴酯、硫代磷酸酯和類似物。上述磷酸酯類似物的制備、和將其向核苷酸、修飾的核苷酸和寡核苷酸的摻入本身是已知的，不必在此描述。如本領(lǐng)域已知的，因為翻譯起始密碼子通常是Y -AUG(在轉(zhuǎn)錄的mRNA分子中；在相應(yīng)DNA分子中是5' -ATG)，翻譯起始密碼子也稱為"AUG密碼子"、"起始密碼子"或"AUG起始密碼子"。少數(shù)基因具有具有RNA序列5' -GUG、5' -UUG或5' -CUG的翻譯起始密碼子；且Y _AUA、5' -ACG和Y -CUG已顯示在體內(nèi)起作用。因此，術(shù)語"翻譯起始密碼子"和"起始密碼子"可涵蓋許多密碼子序列，盡管每種情形中的起始氨基酸通常是甲硫氨酸(真核細(xì)胞中)或甲酰甲硫氨酸(原核細(xì)胞中)。真核基因和原核基因可具有兩個或多個替代性起始密碼子，其任何一個可在特定細(xì)胞類型或組織中或在特定條件設(shè)置下優(yōu)先地用于翻譯起始。在本發(fā)明范疇中，"起始密碼子"和"翻譯起始密碼子"是指體內(nèi)用于起始從編碼聚絲蛋白(FLG)的基因轉(zhuǎn)錄的mRNA的翻譯的一種或多種密碼子，而不論這種密碼子的序列?；虻姆g終止密碼子(或"終止密碼子")可具有三種序列即，5' -UAA、5' -UAG和5' -UGA之一(目應(yīng)的DNA序列分別是5' -TAA、5' -TAG和5' -TGA)。術(shù)語"起始密碼子區(qū)"和"翻譯起始密碼子區(qū)"是指這種mRNA或基因的一部分，涵蓋以任一方向(即，5'或3')從翻譯起始密碼子的約25至約50個連續(xù)核苷酸。類似地，術(shù)語"終止密碼子區(qū)"和"翻譯終止密碼子區(qū)"是指這種mRNA或基因的一部分，涵蓋以任一方向(即，5'或3')從翻譯終止密碼子的約25至約50個連續(xù)核苷酸。因此，"起始密碼子區(qū)"(或"翻譯起始密碼子區(qū)")和"終止密碼子區(qū)"(或"翻譯終止密碼子區(qū)")都是可以本發(fā)明的反義化合物有效地靶向的區(qū)域。本領(lǐng)域已知開放讀碼框(ORF)或"編碼區(qū)"是指翻譯起始密碼子與翻譯終止密碼子之間的區(qū)域，也是可被有效地靶向的區(qū)域。在本發(fā)明范疇中，靶向的區(qū)域是涵蓋基因開放讀碼框(ORF)的翻譯起始或終止密碼子的基因內(nèi)區(qū)域。另一靶區(qū)域包括5'非翻譯區(qū)(5' UTR)，本領(lǐng)域已知是指mRNA以5'方向從翻譯起始密碼子的部分，因此包括mRNA的5,帽位置與翻譯起始密碼子之間的核苷酸(或基因上相應(yīng)的核苷酸)。又一靶區(qū)域包括3'非翻譯區(qū)(3' UTR)，本領(lǐng)域已知是指mRNA以3'方向從翻譯終止密碼子的部分，因此包括mRNA的翻譯終止密碼子與3'端之間的核苷酸(或基因上相應(yīng)的核苷酸)。mRNA的Y帽位置包括經(jīng)由Y -5^三磷酸酯鍵合與mRNA的最
            
 殘基連接的N7-甲基化鳥苷殘基。認(rèn)為mRNA的5'帽區(qū)域包括5'帽結(jié)構(gòu)本身以及與帽位置相鄰的前50個核苷酸。本發(fā)明的另一靶區(qū)域是5'帽區(qū)域。盡管一些真核mRNA轉(zhuǎn)錄物被直接翻譯，但是許多包含一個或多個稱為"內(nèi)含子"的區(qū)域，在翻譯前從轉(zhuǎn)錄物切除。剩余(因此被翻譯的)區(qū)域稱為"外顯子"，被剪接在一起以形成連續(xù)的mRNA序列。在一個實施方案中，靶向剪接位置，即，內(nèi)含子-外顯子結(jié)點或外顯子-內(nèi)含子結(jié)點在其中疾病中牽涉異常剪接的情形、或其中疾病中牽涉特定剪接產(chǎn)物的過度產(chǎn)生的情形尤其有用。由于重排或缺失的異常融合結(jié)點是靶位置的另一形式。由剪接來自不同基因來源的兩個(或多個)mRNA的過程產(chǎn)生的mRNA轉(zhuǎn)錄物稱為"融合轉(zhuǎn)錄物"。利用靶向例如DNA或pre-mRNA的反義化合物可有效地靶向內(nèi)含子。在一個實施方案中，反義寡核苷酸結(jié)合靶多核苷酸的編碼區(qū)和/或非編碼區(qū)并調(diào)節(jié)革G分子的表達(dá)和/或功能。在一個實施方案中，反義寡核苷酸結(jié)合天然反義多核苷酸并調(diào)節(jié)靶分子的表達(dá)和/或功能。在一個實施方案中，反義寡核苷酸結(jié)合有義多核苷酸并調(diào)節(jié)靶分子的表達(dá)和/或功能。可從DNA的相同基因組區(qū)域產(chǎn)生可選RNA轉(zhuǎn)錄物。這些可選轉(zhuǎn)錄物通常稱為"變體"。更具體地，"pre-mRNA變體"是從相同基因組DNA產(chǎn)生的轉(zhuǎn)錄物，在其起始或終止位置與從相同基因組DNA產(chǎn)生的其它轉(zhuǎn)錄物不同，并包含內(nèi)含子序列和外顯子序列二者。在剪接期間切除一個或多個外顯子或內(nèi)含子區(qū)域或其部分后，pre-mRNA變體產(chǎn)生更小的"mRNA變體"。因此，mRNA變體是加工的pre-mRNA變體,且每個獨特的pre-mRNA變體必定因為剪接而產(chǎn)生獨特的mRNA變體。這些mRNA變體還稱為"可選剪接變體"。如果不進(jìn)行pre-mRNA變體的剪接，則pre-mRNA變體與mRNA變體相同。變體可經(jīng)由可選信號產(chǎn)生以起始或終止轉(zhuǎn)錄。Pre-mRNA和mRNA可具備多于一個起始密碼子或終止密碼子。來源于使用可選起始密碼子的pre-mRNA或mRNA的變體稱為該pre-mRNA或mRNA的"可選起始變體"。使用可選終止密碼子的那些轉(zhuǎn)錄物稱為該pre-mRNA或mRNA的"可選終止變體"。一種特殊類型的可選終止變體是"polyA變體"，其中產(chǎn)生的多個轉(zhuǎn)錄物由"PolyA終止信號"之一被轉(zhuǎn)錄機制可選選擇所致，從而產(chǎn)生在獨特polyA位點終止的轉(zhuǎn)錄物。在本發(fā)明范疇中，本文所述的變體類型也是靶核酸的實施方案。靶核酸上與反義化合物雜交的位置定義為活性反義化合物靶向的靶區(qū)域的至少5-核苷酸長的部分。盡管本文列出了某些示例性靶區(qū)段的具體序列，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解，這些用于闡釋和描述在本發(fā)明范圍中的具體實施方案。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員考慮到本公開內(nèi)容可容易地鑒定另外的靶區(qū)段。認(rèn)為包括選自示例性優(yōu)選的靶區(qū)段中的至少五個(5)連續(xù)核苷酸的段的長度為5-100個核苷酸的靶區(qū)段也適合于靶向。靶區(qū)段可包括包括從示例性優(yōu)選的靶區(qū)段之一的5'-末端的至少5個連續(xù)核苷酸的DNA或RNA序列(其余核苷酸為從靶區(qū)段5'-末端的緊鄰上游開始的相同DNA或RNA的連續(xù)段并延伸直到DNA或RNA包含約5至約100個核苷酸)。類似地優(yōu)選的靶區(qū)段由包括從示例性優(yōu)選的靶區(qū)段之一的3'-末端的至少5個連續(xù)核苷酸的DNA或RNA序列代表(其余核苷酸為從靶區(qū)段3'-末端的緊鄰下游開始的相同DNA或RNA的連續(xù)段并延伸直到DNA或RNA包含約5至約100個核苷酸)。借助本文所示例的靶區(qū)段的本領(lǐng)域技術(shù)人員將能夠鑒定另外的優(yōu)選的靶區(qū)段而不需過度試驗。已經(jīng)鑒定出一種或多種靶區(qū)域、區(qū)段或位置后，選擇與靶足夠地互補，S卩，充分地并以足夠特異性雜交的反義化合物以獲得期望作用。在本發(fā)明的實施方案中，寡核苷酸結(jié)合特定靶的反義鏈。寡核苷酸長度為至少5個核苷酸并可被合成以使每個寡核苷酸靶向重疊序列，從而寡核苷酸被合成以覆蓋靶多核苷酸的整個長度。靶還包括編碼區(qū)以及非編碼區(qū)。在一個實施方案中，將反義寡核苷酸靶向特定核酸是優(yōu)選的。將反義化合物靶向特定核酸是多步驟的過程。該過程通常開始于鑒定待調(diào)節(jié)其功能的核酸序列。這一核酸序列可以是，例如，其表達(dá)與特定病癥或疾病狀態(tài)相關(guān)的細(xì)胞基因(或從基因轉(zhuǎn)錄的mRNA)、或非編碼多核苷酸，諸如例如，非編碼RNA(ncRNA)。RNA可分為⑴信使RNA (mRNA)，其被翻譯為蛋白，和⑵非蛋白-編碼RNA(ncRNA)。ncRNA包括microRNA、反義轉(zhuǎn)錄物和包含高密度終止密碼子和缺少任何廣泛的"開放讀碼框"的其它轉(zhuǎn)錄單位(TU)。許多ncRNA表現(xiàn)為從蛋白-編碼基因座的3'非翻譯區(qū)(3' UTR)中的起始位點開始。ncRNA通常是罕見的，已被FANTOM財團測序的ncRNA的至少一半似乎不是多腺苷酸化的。出于明顯的原因，大多數(shù)研究者集中于被加工并輸出到細(xì)胞質(zhì)的多腺苷酸化mRNA。最近，顯示非多腺苷酸化的核RNA的組可能是非常大的，且許多這樣的轉(zhuǎn)錄物來源于所謂的基因間區(qū)。ncRNA可調(diào)節(jié)基因表達(dá)的機制是通過與靶轉(zhuǎn)錄物的堿基配對。通過堿基配對起作用的RNA可分為(I)順式編碼的RNA，其在它們所作用的RNA的相同遺傳位置但在相對鏈上被編碼，因此與其靶展示極佳的互補性，和(2)反式編碼的RNA，其在不同于它們所作用的RNA的染色體位置被編碼，通常不與其靶展示極佳的堿基-配對可能。不希望受限于理論，反義多核苷酸被本文所述的反義寡核苷酸的擾動可改變相應(yīng)有義信使RNA的表達(dá)。然而，這一調(diào)節(jié)可以是不一致的(反義敲低導(dǎo)致信使RNA升高)或一致的(反義敲低導(dǎo)致相伴的信使RNA減少)。在這些情形中，反義寡核苷酸可靶向于反義轉(zhuǎn)錄物的重疊或非重疊部分，導(dǎo)致其敲低或隔離。編碼以及非編碼反義可以相同方式靶向，任一種類能夠調(diào)節(jié)相應(yīng)的有義轉(zhuǎn)錄物-以一致的或不一致的方式。鑒定針對靶使用的新寡核苷酸中采用的策略可基于反義RNA轉(zhuǎn)錄物被反義寡核苷酸的敲低或調(diào)節(jié)期望靶的任何其它手段。策略I :在不一致調(diào)節(jié)的情形下，敲低反義轉(zhuǎn)錄物升高常規(guī)(有義)基因的表達(dá)。如果后者基因編碼已知或推測的藥物靶，則其反義對應(yīng)物的敲低能夠可設(shè)想地模擬受體激動劑或酶刺激劑的作用。策略2 :在一致調(diào)節(jié)的情形下，人們可以協(xié)同地敲低反義轉(zhuǎn)錄物和有義轉(zhuǎn)錄物二者，從而實現(xiàn)常規(guī)(有義)基因表達(dá)的協(xié)同減少。例如，如果反義寡核苷酸用來實現(xiàn)敲低，則這一策略可用來施加靶向有義轉(zhuǎn)錄物的一種反義寡核苷酸和靶向相應(yīng)反義轉(zhuǎn)錄物的另一反義寡核苷酸，或同時靶向重疊的有義轉(zhuǎn)錄物和反義轉(zhuǎn)錄物的單個有力地對稱的反義寡核苷酸。根據(jù)本發(fā)明，反義化合物包括反義寡核苷酸、核酶、外部指導(dǎo)序列(EGS)寡核苷
            
酸、siRNA化合物、單鏈或雙鏈RNA干擾(RNAi)化合物諸如siRNA化合物、和雜交于靶核酸的至少一部分并調(diào)節(jié)其功能的其它寡聚化合物。如此，它們可以是DNA、RNA、DNA-樣、RNA-樣、或其混合物，或可以是一種或多種這些的模擬物。這些化合物可以是單鏈、雙鏈、環(huán)狀或發(fā)夾寡聚化合物，并可包含結(jié)構(gòu)元件，諸如內(nèi)部凸出或末端凸出、錯配或環(huán)。常規(guī)線性地制備反義化合物，但可被連接或以其它方式制備為環(huán)狀和/或分支的。反義化合物可包括構(gòu)建體，諸如例如，兩條鏈雜交以形成完全或部分雙鏈的化合物，或具有足夠自互補性的單鏈以允許雜交和形成完全或部分雙鏈的化合物。兩條鏈可在內(nèi)部被連接，留下自由的3'或5'末端，或可被連接以形成連續(xù)的發(fā)夾結(jié)構(gòu)或環(huán)。發(fā)夾結(jié)構(gòu)可包含在5'或3'末端的懸垂，產(chǎn)生單鏈特征的延伸段。雙鏈化合物任選地可包括在末端的懸垂。進(jìn)一步的修飾可包括附加于末端之一、所選的、核苷酸位置、糖位置或核苷間鍵合之一的綴合物基團?？蛇x地，兩條鏈可經(jīng)由非核酸部分或接頭基團連接。當(dāng)從僅一條鏈形成時，dsRNA可采取自互補發(fā)夾型分子的形式，其與自身對折以形成雙鏈體。如此，dsRNA可以是完全或部分雙鏈的?；虮磉_(dá)的特異性調(diào)節(jié)可通過在轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系中穩(wěn)定表達(dá)dsRNA發(fā)夾來實現(xiàn)，然而在一些實施方案中，基因表達(dá)或功能被上調(diào)。當(dāng)從兩條鏈、或采取與自身對折以形成雙鏈體的自互補發(fā)夾型分子形式的單鏈形成時，兩條鏈(或單鏈的雙鏈體形成區(qū))是以Watson-Crick方式堿基配對的互補RNA鏈。被引入系統(tǒng)中后，本發(fā)明的化合物可引發(fā)一種或多種酶或結(jié)構(gòu)蛋白的作用以實現(xiàn)靶核酸的裂解或其它修飾，或可經(jīng)由基于占位性的機制作用。通常，核酸(包括寡核苷酸)可描述為"DNA-樣"(即，通常具有一個或多個2'-脫氧糖，且通常具有T而不是U堿基)或"RNA-樣"(即，通常具有一個或多個2'-羥基或2'-修飾的糖，且通常具有U而不是T堿基)。核酸螺旋可采用多于一種類型的結(jié)構(gòu)，最通常是A-和B-形式。通常認(rèn)為，具有B-形式-樣結(jié)構(gòu)的寡核苷酸是"DNA-樣"，且具有A-形式樣結(jié)構(gòu)的是"RNA-樣"。在一些(嵌合)實施方案中，反義化合物可包含A-形式區(qū)域和B-形式區(qū)域二者。在一個實施方案中，期望寡核苷酸或反義化合物包括以下至少一種反義RNA、反義DNA、嵌合反義寡核苷酸(包括修飾的鍵的反義寡核苷酸)、干擾RNA(RNAi)、短干擾RNA(siRNA);微、干擾RNA(miRNA);小、臨時RNA(stRNA);或短、發(fā)夾RNA(shRNA) yj、RNA-誘導(dǎo)的基因活化(RNAa);小活化RNA(saRNA)、或其組合。dsRNA還可活化基因表達(dá)，這是已被稱為"小RNA-誘導(dǎo)的基因活化"或RNAa的機制。dsRNA靶向基因啟動子誘導(dǎo)相關(guān)基因的有效的轉(zhuǎn)錄活化。RNAa在人細(xì)胞中利用合成的dsRNA證實，稱為"小活化RNA' (saRNA)。目前未知RNAa在其它生物體中是否是保守的。已發(fā)現(xiàn)小雙鏈RNA (dsRNA)，諸如小干擾RNA (siRNA)和微RNA (miRNA)是稱為RNA干擾(RNAi)的進(jìn)化保守機制的觸發(fā)物。RNAi不變性經(jīng)由重建染色質(zhì)導(dǎo)致基因沉默，從而阻遏轉(zhuǎn)錄，降解互補mRNA，或阻滯蛋白翻譯。然而在以下實施例部分詳細(xì)描述的情況中，寡核苷酸顯示增加聚絲蛋白FLG多核苷酸和其編碼產(chǎn)物的表達(dá)和/或功能。dsRNA還可作為小活化RNA(saRNA)作用。不希望受理論束縛，通過靶向基因啟動子中的序列，saRNA將以稱為dsRNA-誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄活化(RNAa)的現(xiàn)象誘導(dǎo)靶基因表達(dá)。在進(jìn)一步的實施方案中，本文鑒定的"優(yōu)選的靶區(qū)段"可用于篩選調(diào)節(jié)聚絲蛋白(FLG)多核苷酸表達(dá)的另外的化合物。"調(diào)節(jié)劑"是減少或增加編碼FLG的核酸分子表達(dá)
            
的那些化合物，且包括與優(yōu)選的靶區(qū)段互補的至少5-核苷酸部分。篩選方法包括以下步驟將編碼FLG的有義或天然反義多核苷酸的核酸分子的優(yōu)選的靶區(qū)段與一種或多種候選調(diào)節(jié)劑接觸，并選擇減少或增加編碼FLG多核苷酸的核酸分子如，SEQ ID NO 3至13的表達(dá)的一種或多種候選調(diào)節(jié)劑。顯示一種或多種候選調(diào)節(jié)劑能夠調(diào)節(jié)(如，減少或增加)編碼FLG多核苷酸的核酸分子的表達(dá)后，隨后調(diào)節(jié)劑可用于FLG多核苷酸功能的進(jìn)一步研究性研究，或用作根據(jù)本發(fā)明的研究劑、診斷劑或治療劑。靶向天然反義序列優(yōu)選地調(diào)節(jié)靶基因的功能。例如，F(xiàn)LG基因(如，登錄號NM_002016)。在一個實施方案中，靶是FLG基因的反義多核苷酸。在一個實施方案中，反義寡核苷酸靶向FLG多核苷酸(如，登錄號NM_002016)的有義和/或天然反義序列、其變體、等位基因、同種型、同系物、突變體、衍生物、片段和互補序列。優(yōu)選地寡核苷酸是反義分子且靶包括反義和/或有義FLG多核苷酸的編碼區(qū)和非編碼區(qū)。本發(fā)明優(yōu)選的靶區(qū)段還可與本發(fā)明的其各自的互補反義化合物組合形成穩(wěn)定的雙鏈(雙鏈體)寡核苷酸。在本領(lǐng)域中，這種雙鏈寡核苷酸部分已顯示經(jīng)由反義機制調(diào)節(jié)靶表達(dá)和調(diào)節(jié)翻譯以及RNA加工。而且，可對雙鏈部分進(jìn)行化學(xué)修飾。例如，這種雙鏈部分已經(jīng)顯示通過雙鏈體的反義鏈與靶經(jīng)典雜交，從而觸發(fā)靶的酶促降解來抑制靶。在一個實施方案中，反義寡核苷酸靶向聚絲蛋白(FLG)多核苷酸(如，登錄號NM_002016)、其變體、等位基因、同種型、同系物、突變體、衍生物、片段和互補序列。優(yōu)選地寡核苷酸是反義分子。根據(jù)本發(fā)明的實施方案，靶核酸分子不限于僅FLG，還延伸到FLG分子的同種型、受體、同系物和類似物的任一種。在一個實施方案中，寡核苷酸靶向FLG多核苷酸的天然反義序列，例如，如SEQ IDNO :2所列的多核苷酸，和其任何變體、等位基因、同系物、突變體、衍生物、片段和互補序列。反義寡核苷酸的實例列在SEQ ID N0:3至13。在一個實施方案中，寡核苷酸與FLG反義的核酸序列互補或結(jié)合，包括但不限于FLG多核苷酸相關(guān)的非編碼有義和/或反義序列，并調(diào)節(jié)FLG分子的表達(dá)和/或功能。在一個實施方案中，寡核苷酸與如SEQ ID NO 2所列的FLG天然反義的核酸序列互補或結(jié)合，并調(diào)節(jié)FLG分子的表達(dá)和/或功能。在一個實施方案中，寡核苷酸包括SEQ ID NO 3至13的至少5個連續(xù)核苷酸的序列，并調(diào)節(jié)FLG分子的表達(dá)和/或功能。多核苷酸靶包括FLG，包括其家族成員、FLG的變體；FLG的突變體，包括SNP ；FLG的非編碼序列；FLG的等位基因；物種變體、片段和類似物。優(yōu)選地寡核苷酸是反義分子。在一個實施方案中，靶向FLG多核苷酸的寡核苷酸包括反義RNA、干擾RNA(RNAi)、短干擾 RNA(siRNA);微干擾 RNA(miRNA);小、臨時 RNA(stRNA);或短、發(fā)夾RNA(shRNA);小RNA誘導(dǎo)的基因活化(RNAa);或小活化RNA(saRNA)。在一個實施方案中，靶向聚絲蛋白(FLG)多核苷酸如，SEQ ID NO :2，調(diào)節(jié)這些靶的表達(dá)或功能。在一個實施方案中，與對照相比表達(dá)或功能被上調(diào)。在一個實施方案中，與對
            
照相比表達(dá)或功能被下調(diào)。在一個實施方案中，反義化合物包括如SEQ ID NO :3至13所列的序列。這些寡核苷酸可包括一種或多種修飾的核苷酸、更短或更長片段、修飾的鍵和類似物。在一個實施方案中，SEQ ID NO 3至13包括一種或多種LNA核苷酸。期望靶核酸的調(diào)節(jié)可以本領(lǐng)域已知的多種方式進(jìn)行。例如，反義寡核苷酸、siRNA等。酶促核酸分子(如，核酶)是能夠催化多種反應(yīng)的一種或多種，包括以核苷酸堿基序列特異性方式重復(fù)地裂解其它單獨核酸分子的能力的核酸分子。這種酶促核酸分子可用于，例如，靶向幾乎任何RNA轉(zhuǎn)錄物。由于其序列特異性，反式裂解酶促核酸分子顯示用作人疾病的治療劑的希望(Usman&McSwiggen, (1995) Ann. Rep. Med. Chem. 30, 285-294 ；Christoffersen 和 Marr,(1995) J. Med. Chem. 38，2023-2037)?？稍O(shè)計酶促核酸分子以裂解細(xì)胞RNA背景中的特定RNA靶。這種裂解事件使得mRNA無功能并消除從該RNA的蛋白表達(dá)。以這種方式，可選擇性地抑制疾病狀態(tài)相關(guān)的蛋白的合成。通常，具有RNA裂解活性的酶促核酸通過首先結(jié)合靶RNA來作用。這種結(jié)合經(jīng)由被保持在鄰近用于裂解靶RNA的分子的酶促部分的酶促核酸的靶結(jié)合部分來進(jìn)行。如此，酶促核酸首先識別靶RNA然后經(jīng)由互補堿基配對結(jié)合靶RNA，結(jié)合到正確位置時，酶促地作用以切割靶RNA。對這種靶RNA的關(guān)鍵裂解將破壞其指導(dǎo)編碼蛋白合成的能力。在酶促核酸已經(jīng)結(jié)合和裂解其RNA靶后，其從該RNA釋放以搜尋另一靶并可重復(fù)地結(jié)合和裂解新的靶。多種方法諸如體外選擇(進(jìn)化)策略(Orgel,(1979)Proc. R. Soc. London,B 205,435)已經(jīng)用于進(jìn)化能夠催化多種反應(yīng)，諸如磷酸二酯鍵合和酰胺鍵合的裂解和連接的新核酸催化劑。催化活性最佳的核酶的開發(fā)將顯著有助于為了調(diào)節(jié)基因表達(dá)的目的采用RNA-裂解核酶的任何策略。例如，錘頭核酶在飽和(IOmM)濃度的Mg2+輔因子存在下以約ImirT1的催化速率(kcat)作用。人工的"RNA連接酶"核酶已經(jīng)顯示以約IOOmirT1的速率催化相應(yīng)的自修飾反應(yīng)。此外，已知具有DNA制成的底物結(jié)合臂的某些修飾的錘頭核酶以接近IOOmirT1的多倍周轉(zhuǎn)率催化RNA裂解。最后，用某些核苷酸類似物代替錘頭的催化核心中的特定殘基獲得顯示催化速率改進(jìn)多達(dá)10倍的修飾的核酶。這些發(fā)現(xiàn)證明，核酶可促進(jìn)化學(xué)轉(zhuǎn)化，伴隨催化速率顯著大于大多數(shù)天然自裂解核酶體外展示的催化速率。那么可能可優(yōu)化某些自裂解核酶的結(jié)構(gòu)以獲得最大催化活性，或可能可制備對于RNA磷酸二酯裂解展示顯著更快速率的完全新的RNA基序。符合"錘頭"模型的RNA催化劑對RNA底物的分子間裂解首次在1987年顯示(Uhlenbeck, O. C. (1987) Nature, 328 :596-600)?；厥?RNA 催化劑并與多種 RNA 分子反應(yīng)，證實其真正是催化性的。通過在催化性RNA中進(jìn)行適當(dāng)?shù)膲A基改變以保持與靶序列必需的堿基配對，基于"錘頭"基序設(shè)計的催化性RNA已用于裂解特定靶序列。這已經(jīng)允許使用催化性RNA來裂解特定靶序列并指示，按照"錘頭"模型設(shè)計的催化性RNA可能可體內(nèi)裂解特定底物RNA。RNA干擾(RNAi)已經(jīng)變成在哺乳動物和哺乳動物細(xì)胞中調(diào)節(jié)基因表達(dá)的強有力工具。這一方法要求利用表達(dá)質(zhì)?；虿《竞捅患庸閟iRNA的小發(fā)夾RNA的編碼序列遞送作為RNA本身或作為DNA的小干擾RNA(siRNA)。這一系統(tǒng)使得能夠有效地運輸pre_siRNA
            
到細(xì)胞質(zhì)，在那里它們是活性的，并允許使用為了基因表達(dá)的受控型啟動子和組織特異性啟動子。在一個實施方案中，寡核苷酸或反義化合物包括核糖核酸(RNA)和/或脫氧核糖核酸(DNA)的寡聚物或聚合物、或其模擬物、嵌合體、類似物或同系物。這一術(shù)語包括包括天然存在的核苷酸、糖和共價核苷間(主鏈)鍵的寡核苷酸以及具有類似地起作用的非天然存在的部分的寡核苷酸。因為期望特性諸如例如，對增加的細(xì)胞攝取、對靶核酸增加的親和力和在核酸酶存在下增加的穩(wěn)定性，這種修飾的或取代的寡核苷酸通常相比于天然形式是期望的。根據(jù)本發(fā)明，寡核苷酸或"反義化合物"包括反義寡核苷酸(如，RNA、DNA、其模擬物、嵌合體、類似物或同系物)、核酶、外部指導(dǎo)序列(EGS)寡核苷酸、siRNA化合物、單鏈或雙鏈RNA干擾(RNAi)化合物諸如siRNA化合物、saRNA、aRNA和與靶核酸的至少一部分雜交并調(diào)節(jié)其功能的其它寡聚化合物。如此，它們可以是DNA、RNA、DNA-樣、RNA-樣、或其混合物，或可以是一種或多種這些的模擬物。這些化合物可以是單鏈、雙鏈、環(huán)狀或發(fā)夾寡聚化合物，并可包含結(jié)構(gòu)元件，諸如內(nèi)部凸出或末端凸出、錯配或環(huán)。常規(guī)線性地制備反義化合物，但可被連接或以其它方式制備為環(huán)狀和/或分支的。反義化合物可包括構(gòu)建體，諸如例如，兩條鏈雜交以形成完全或部分雙鏈的化合物，或具有足夠自互補性的單鏈以允許雜交和形成完全或部分雙鏈的化合物。兩條鏈可在內(nèi)部被連接，留下自由的3'或5'末端，或可被連接以形成連續(xù)的發(fā)夾結(jié)構(gòu)或環(huán)。發(fā)夾結(jié)構(gòu)可包含在5'或3'末端的懸垂，產(chǎn)生單鏈特征的延伸段。雙鏈化合物任選地可包括在末端的懸垂。進(jìn)一步的修飾可包括附加于末端之一、所選的核苷酸位置、糖位置或核苷間鍵合之一的綴合物基團?？蛇x地，兩條鏈可經(jīng)由非核酸部分或接頭基團連接。當(dāng)從僅一條鏈形成時，dsRNA可采取自互補發(fā)夾型分子的形式，其與自身對折以形成雙鏈體。如此，dsRNA可以是完全或部分雙鏈的?；虮磉_(dá)的特異性調(diào)節(jié)可通過在轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系中穩(wěn)定表達(dá)dsRNA發(fā)夾來實現(xiàn)。當(dāng)從兩條鏈、或采取與自身對折以形成雙鏈體的自互補發(fā)夾型分子形式的單鏈形成時，兩條鏈(或單鏈的雙鏈體形成區(qū))是以Watson-Crick方式堿基配對的互補RNA鏈。被引入系統(tǒng)中后，本發(fā)明的化合物可引發(fā)一種或多種酶或結(jié)構(gòu)蛋白的作用以實現(xiàn)靶核酸的裂解或其它修飾，或可經(jīng)由基于占位性的機制作用。通常，核酸(包括寡核苷酸)可描述為"DNA-樣"(即，通常具有一個或多個2'-脫氧糖，且通常具有T而不是U堿基)或"RNA-樣"(即，通常具有一個或多個2'-羥基或2'-修飾的糖，且通常具有U而不是T堿基)。核酸螺旋可采用多于一種類型的結(jié)構(gòu)，最通常是A-和B-形式。通常認(rèn)為，具有B-形式-樣結(jié)構(gòu)的寡核苷酸是"DNA-樣"，且具有A-形式樣結(jié)構(gòu)的是"RNA-樣"。在一些(嵌合)實施方案中，反義化合物可包含A-形式區(qū)域和B-形式區(qū)域二者。根據(jù)本發(fā)明的反義化合物可包括長度為從約5至約80個核苷酸(即，從約5至約80個連接的核苷)的反義部分。這是指反義化合物的反義鏈或部分的長度。換言之，本發(fā)明的單鏈反義化合物包括從5至約80個核苷酸，且本發(fā)明的雙鏈反義化合物(例如諸如dsRNA)包括長度為5至約80個核苷酸的有義和反義鏈或部分。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將理解，這包括長度為 5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79或80個核苷酸、或其中的任何范圍的反義部分。在一個實施方案中，本發(fā)明的反義化合物具有長度為10至50個核苷酸的反義部分。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將理解，這包括具有長度為10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50個核苷酸、或其中的任何范圍的反義部分的寡核苷酸。在一些實施方案中，寡核苷酸長度為15個核苷酸。在一個實施方案中，本發(fā)明的反義或寡核苷酸化合物具有長度為12或13至30個核苷酸的反義部分。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將理解，這包括具有長度為12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30個核苷酸、或其中的任何范圍的反義部分的反義化合物。在一個實施方案中，本發(fā)明的寡聚化合物還包括變體，其中在化合物中一個或多個核苷酸位置存在不同堿基。例如，如果第一個核苷酸是腺嘌呤，可產(chǎn)生在這一位置包含胸苷、鳥苷或胞苷的變體。這可在反義或dsRNA化合物的任何位置進(jìn)行。隨后利用本文所述的方法測定這些化合物以確定它們抑制靶核酸表達(dá)的能力。在一些實施方案中，反義化合物與靶之間的同源性、序列同一性或互補性是從約40%至約60%。在一些實施方案中，同源性、序列同一性或互補性是從約60%至約70%。在一些實施方案中，同源性、序列同一性或互補性是從約70%至約80%。在一些實施方案中，同源性、序列同一性或互補性是從約80%至約90%。在一些實施方案中，同源性、序列同一性或互補性是約90%、約92%、約94%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%或約 100%。在一個實施方案中，反義寡核苷酸，諸如例如SEQ ID NO :2至13所列的核酸分子，包括一種或多種取代或修飾。在一個實施方案中，核苷酸是以鎖核酸(LNA)取代的。在一個實施方案中，寡核苷酸靶向與FLG和如SEQ ID NO :1和2所列的序列相關(guān)的編碼和/或非編碼序列的有義和/或反義的核酸分子的一個或多個區(qū)域。寡核苷酸還靶向于SEQ ID NO :1和2的重疊區(qū)域。本發(fā)明某些優(yōu)選的寡核苷酸是嵌合寡核苷酸。在本發(fā)明范疇中，"嵌合寡核苷酸"或"嵌合體"是包含兩個或多個化學(xué)不同區(qū)域的寡核苷酸，每個區(qū)域由至少一個核苷酸組成。這些寡核苷酸通常包含賦予一種或多種有益特性(諸如例如，增加的核酸酶耐受性、增加的攝取入細(xì)胞、增加的對靶的結(jié)合親和力)的修飾的核苷酸的至少一個區(qū)域和為能夠裂解RNA = DNA或RNA = RNA雜合體的酶的底物的區(qū)域。例如，RNA酶H是裂解RNA = DNA雙鏈體的RNA鏈的細(xì)胞核酸內(nèi)切酶。因此，RNA酶H的活化導(dǎo)致RNA靶的裂解，從而大大增強基因表達(dá)的反義調(diào)節(jié)的效力。因此，與雜交于相同靶區(qū)域的硫代磷酸酯脫氧寡核苷酸相比，當(dāng)使用嵌合寡核苷酸時以較短寡核苷酸通?？色@得可比較的結(jié)果。RNA靶的裂解可常規(guī)地通過凝膠電泳來檢測，如果需要，通過本領(lǐng)域已知的相關(guān)核酸雜交技術(shù)來檢測。在一個實施方案中，嵌合寡核苷酸包括被修飾以增加靶結(jié)合親和性的至少一個區(qū)域和通常作用為RNA酶H底物的區(qū)域。寡核苷酸對其靶(在這一情形中是編碼ras的核酸)的親和性常規(guī)地通過測量寡核苷酸/靶配對的Tm來確定，Tm是寡核苷酸與靶解離的溫度；分光光度地檢測解離。Tm越高，寡核苷酸對靶的親和性越大。本發(fā)明的嵌合反義化合物可形成為兩種或多種寡核苷酸、如上所述的修飾的寡核苷酸、寡核苷和/或寡核苷酸模擬物的復(fù)合結(jié)構(gòu)。這種化合物在本領(lǐng)域中也已稱為雜合體或gapmer。教導(dǎo)這種雜合體結(jié)構(gòu)的制備的代表性美國專利包括但不限于，美國專利
            
No. 5，013，830 ;5，149，797 ;5，220，007 ;5，256，775 ;5，366，878 ;5，403，711 ;5，491，，33 ；5，565，350 ;5，623，065 ;5，652，355 ;5，652，356 和 5，700，922，其每一個通過引用并入本文。在一個實施方案中，被修飾的寡核苷酸的區(qū)域包括在糖的Y位置修飾的至少一個核苷酸，最優(yōu)選地2' -O烷基、2' -O-烷基-O-烷基或2'-氟-修飾的核苷酸。在另一個實施方案中，RNA修飾包括在RNA 3'端的嘧啶、脫堿基殘基或反向堿基的核糖上的2'-氟、2'-氨基和2' O-甲基修飾。這種修飾常規(guī)地?fù)饺牍押塑账?，這些寡核苷酸已經(jīng)顯示對指定靶具有比2'-脫氧寡核苷酸更高的Tm (B卩，更高的靶結(jié)合親和性)。這種增加的親和性的作用是大大增強基因表達(dá)的RNAi寡核苷酸抑制。RNA酶H是裂解RNA = DNA雙鏈體的RNA鏈的細(xì)胞核酸內(nèi)切酶；因此該酶的活化導(dǎo)致RNA靶的裂解，從而可大大增強RNAi抑制的效力。RNA靶的裂解可常規(guī)地通過凝膠電泳來證實。在一個實施方案中，嵌合寡核苷酸還被修飾以增強核酸酶耐受性的。細(xì)胞包含多種可降解核酸的核酸外切酶和核酸內(nèi)切酶。多種核苷酸和核苷修飾已經(jīng)顯示使得摻入它們的寡核苷酸比天然寡脫氧核苷酸對核酸酶消化更耐受。核酸酶耐受性常規(guī)地通過如下測量培養(yǎng)寡核苷酸與細(xì)胞提取物或分離的核酸酶溶液，并隨著時間測量剩余的完整寡核苷酸的程度，通常通過凝膠電泳測量。已被修飾以增強其核酸酶耐受性的寡核苷酸比未修飾的寡核苷酸保持完整更長時間。多種寡核苷酸修飾已被證實增強或賦予核酸酶耐受性。包含至少一種硫代磷酸酯修飾的寡核苷酸目前是更優(yōu)選的。在一些情形中，增強靶結(jié)合親和性的寡核苷酸修飾也獨立地能夠增強核酸酶耐受性。本發(fā)明預(yù)期的一些優(yōu)選的寡核苷酸的具體實例包括包括修飾的主鏈的那些，例如，硫代磷酸酯、磷酸三酯、膦酸甲基酯、短鏈烷基或環(huán)烷基糖間鍵合或短鏈雜原子或雜環(huán)糖間鍵合。更優(yōu)選的是具有硫代磷酸酯主鏈的寡核苷酸和具有雜原子主鏈的那些，尤其是CH2—NH—0—CH2、CH、一N(CH3)—0—CH2 [稱為亞甲基(甲基亞氨基)或MMI主鏈]、CH2--0—N(CH3)—CH2、CH2-N (CH3)—N (CH3)—CH2 和 0—N (CH3)—CH2—CH2 主鏈，其中天然憐酸二酯主鏈表不為 O—P—O—CH。由 De Mesmaeker 等(1995)Acc. Chem. Res. 28 366-374公開的酰胺主鏈也是優(yōu)選的。還優(yōu)選的是具有嗎啉代主鏈結(jié)構(gòu)的寡核苷酸(Summerton和Weller，美國專利No. 5，034, 506)。在另一個實施方案中，諸如肽核酸(PNA)主鏈，寡核苷酸的磷酸二酯主鏈被聚酰胺主鏈代替，核苷酸被直接或間接地結(jié)合于聚酰胺主鏈的氮雜氮原子。寡核苷酸還可包括一種或多種取代的糖部分。優(yōu)選的寡核苷酸在2'位置包括以下之一 0H、SH、SCH3、F、0CN、0CH30CH3、0CH30(CH2)n CH3、0(CH2)n NH2 或 0(CH2)n CH3，其中η是I至約10 ;C1至ClO低級烷基、烷氧基烷氧基、取代的低級烷基、烷芳基或芳烷基；C1 ；Br ；CN ；CF3 ；0CF3 ;0—、S—或N-烷基；0—、S—或N-烯基；S0CH3 ；S02CH3 ；0N02 ；N02 ；N3 ；NH2 ;雜環(huán)烷基；雜環(huán)烷芳基；氨基烷基氨基；聚烷基氨基；取代的甲硅烷基；RNA裂解基團；報告基團；嵌入劑；用于改善寡核苷酸藥代動力學(xué)特性的基團；或用于改善寡核苷酸藥效學(xué)特性的基團、和具有類似特性的其它取代基。優(yōu)選的修飾包括2,-甲氧基乙氧基[2' -0-CH2CH20CH3，還稱為2' _0_(2-甲氧乙基)]。其它優(yōu)選的修飾包括2'-甲氧基(2' -O—CH3),2/ -丙氧基(2' -0CH2CH2CH3)和W -氟(2' -F)。還可在寡核苷酸上的其它位置進(jìn)行類似修飾，尤其是3,末端核苷酸上糖的3,位置和5,末端核苷酸的5,位置。寡核苷酸還可具有糖模擬物諸如環(huán)丁基來代替戊呋喃糖基。另外或可選地，寡核苷酸還可包括核堿基(本領(lǐng)域中通常簡稱為"堿基")修飾或取代。本文所用的"未修飾"或"天然"核苷酸包括腺嘌呤(A)、鳥嘌呤(G)、胸腺嘧啶(T)、胞嘧啶(C)和尿嘧啶(U)。修飾的核苷酸包括天然核酸中僅僅罕見或短暫出現(xiàn)的核苷酸，如，次黃嘌呤、6-甲基腺嘌呤、5-Me嘧啶、尤其是5-甲基胞嘧啶(也稱為5-甲基-2'脫氧胞嘧啶，本領(lǐng)域中通常稱為5-Me-C)、5_羥基甲基胞嘧啶(HMC)、糖基HMC和龍膽二糖基HMC、以及合成的核苷酸，如，2-氨基腺嘌呤、2-(甲基氨基)腺嘌呤、2-(咪唑基烷基)腺嘌呤、2-(氨烷基氨基)腺嘌呤或其它雜取代的烷基腺嘌呤、2-硫代尿嘧啶、2-硫代胸腺嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-羥基甲基尿嘧啶、8-氮雜鳥嘌呤、7-脫氮鳥嘌呤、N6 (6-氨基己基)腺嘌呤和2，6_ 二氨基嘌呤?？砂ū绢I(lǐng)域中已知的"通用"堿基，如，肌苷。5-Me-C取代已顯示增加核酸雙鏈體的穩(wěn)定性O(shè). 6-1. 2°C，是目前優(yōu)選的堿基取代。本發(fā)明寡核苷酸的另一修飾包括向該寡核苷酸化學(xué)連接增強寡核苷酸的活性或細(xì)胞攝取的一種或多種部分或綴合物。這種部分包括但不限于脂質(zhì)部分諸如膽固醇部分、膽固醇基部分、脂肪族鏈如十二烷二醇或十一烷基殘基、聚胺或聚乙二醇鏈、或金剛烷乙酸。包括親脂部分的寡核苷酸和制備這種寡核苷酸的方法是本領(lǐng)域已知的，例如，美國專利No. 5，138，045,5, 218，105 和 5，459，255。指定寡核苷酸中的所有位置不必一致地被修飾，事實上多于一個上述修飾可被摻入單個寡核苷酸中或甚至在寡核苷酸中的單個核苷中。本發(fā)明還包括為上文定義的嵌合寡核苷酸的寡核苷酸。在另一實施方案中，本發(fā)明的核酸分子綴合于另一部分，該另一部分包括但不限于脫堿基核苷酸、聚醚、聚胺、聚酰胺、肽、碳水化合物、脂質(zhì)或聚烴化合物。本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識到，這些分子可在糖、堿基或磷酸酯基團上的多個位置連接于一種或多種任何核苷酸(包括核酸分子)。根據(jù)本發(fā)明使用的寡核苷酸可方便和常規(guī)地通過公知的固相合成技術(shù)制備。用于這種合成的設(shè)備由包括Applied Biosystems的多個供應(yīng)商出售。還可采用用于這種合成的任何其它手段；寡核苷酸的實際合成充分地在本領(lǐng)域普通技術(shù)人員的才能范圍內(nèi)。還公知的是使用類似技術(shù)來制備其它寡核苷酸諸如硫代磷酸酯和烷基化衍生物。還公知的是使用類似技術(shù)和市售可獲得的修飾的亞酰胺化物(amidite)和可控孔度玻璃(CPG)產(chǎn)物諸如生物素、熒光素、吖啶或補骨脂素-修飾的亞酰胺化物和/或CPG(可從Glen Research,Sterling VA獲得)來合成熒光標(biāo)記的、生物素化的或其它修飾的寡核苷酸，諸如膽固醇-修飾的寡核苷酸。根據(jù)本發(fā)明，使用修飾諸如使用LNA單體來增強包括本發(fā)明化學(xué)性質(zhì)諸如Μ0Ε、ANA、FANA、PS等的寡核苷酸的效力、特異性和作用持續(xù)時間并增寬所述寡核苷酸施用途徑。這可通過以LNA單體取代本發(fā)明寡核苷酸中的一些單體來實現(xiàn)。LNA修飾的寡核苷酸可具有與親本化合物相似的大小，或可更大或優(yōu)選地更小。優(yōu)選地，這種LNA-修飾的寡核苷酸包含少于約70%、更優(yōu)選地少于約60%、最優(yōu)選地少于約50%的LNA單體，且其大小為約5至25個核苷酸，更優(yōu)選地約12至20個核苷酸。優(yōu)選的修飾的寡核苷酸主鏈包括但不限于，硫代磷酸酯、手性硫代磷酸酯、二硫代
            
磷酸酯、磷酸三酯、氨烷基磷酸三酯、膦酸甲基酯和其它膦酸烷基酯(包括膦酸3'亞烷基酯和手性膦酸酯)、亞膦酸酯、氨基磷酸酯(包括3'-氨基氨基磷酸酯和氨烷基氨基磷酸酯)、硫羰氨基磷酸酯、硫羰磷酸烷基酯、硫羰烷基磷酸三酯、和具有正常3' -5'鍵合的硼磷酸酯、這些的2' -5'連接的類似物、和具有倒轉(zhuǎn)極性的那些，其中相鄰的核苷單元對是3' -5'至5' -3'或2' -5'至5' -2'連接的。還包括多種鹽、混合鹽和游離酸形式。教導(dǎo)以上含磷鍵合的制備的代表性美國專利包括但不限于，美國專利No. 3，687，808 ;4，469，863 ;4，476，301 ;5，023，243 ;5，177，196 ;5，188，897 ;5，264，423 ；5，276，019 ;5，278，302 ;5，286，717 ;5，321，131 ;5，399，676 ;5，405，939 ;5，453，496 ；5，455，233 ;5，466，677 ;5，476，925 ;5，519，126 ;5，536，821 ;5，541，306 ;5，550, 111 ；5，563，253 ;5，571，799 ;5，587，361 和 5，625，050，其每一個通過引用并入本文。其中不包含磷原子的優(yōu)選的修飾的寡核苷酸主鏈具有由短鏈烷基或環(huán)烷基核苷間鍵合、混合的雜原子和烷基或環(huán)烷基核苷間鍵合、或一種或多種短鏈雜原子或雜環(huán)核苷間鍵合形成的主鏈。這些包括具有嗎啉代鍵合(部分地從核苷的糖部分形成)的那些；硅氧烷主鏈；硫化物、亞砜和砜主鏈；甲?；?form乙?；?和硫代甲?；麈?；亞甲基甲?；土虼姿峄麈?；含鏈稀的主鏈；氣基橫酸酷主鏈；亞甲基亞胺基和亞甲基餅基主鏈；磺酸酯和磺胺主鏈；酰胺主鏈；和具有混合的N、O、S和CH2組成部分的其余主鏈。教導(dǎo)以上寡核苷的制備的代表性美國專利包括但不限于，美國專利No. 5，034，506 ;5，166，315 ;5，185，444 ;5，214，134 ;5，216，141 ;5，235，033 ;5，264，562 ；5，264，564 ;5，405，938 ;5，434，257 ;5，466，677 ;5，470，967 ;5，489，677 ;5，541，307 ；5，561，225 ;5，596，086 ;5，602, 240 ;5，610, 289 ;5，602, 240 ;5，608, 046 ;5，610, 289 ；5，618，704 ;5，623，070 ;5，663，312 ;5，633，360 ;5，677，437 和 5，677，439，其每一個通過引用并入本文。在其它優(yōu)選的寡核苷酸模擬物中，核苷酸單元的糖和核苷間鍵合二者即主鏈被新的基團代替。堿基單元被保留用于與適當(dāng)?shù)暮怂岚谢衔镫s交。一種這樣的寡聚化合物，即已顯示具有極佳的雜交特性的寡核苷酸稱為肽核酸(PNA)。在PNA化合物中，寡核苷酸的糖-主鏈被包含酰胺的主鏈，特別是氨基乙基甘氨酸主鏈代替。核堿基被保留，并直接或間接與主鏈的酰胺部分的氮雜氮原子結(jié)合。教導(dǎo)PNA化合物的制備的代表性美國專利包括但不限于，美國專利No. 5，539，082 ;5，714，331和5，719，262，其每一個通過引用并入本文。PNA 化合物的進(jìn)ー步教導(dǎo)可見于 Nielsen 等(1991) Science 254，1497-1500。在本發(fā)明的一個實施方案中，具有硫代磷酸酯主鏈的寡核苷酸和具有雜原子主鏈的寡核苷，尤其是-CH2-NH-0-CH2、稱為亞甲基(甲基亞氨基)或MMI主鏈的-CH2_N(CH3)-
            
0-CH2-、-CH2-0-N (CH3) _CH2、_CH2N (CH3) -N (CH3) CH2 和 _0_N (CH3) -CH2-CH2，其中天然磷酸ニ酯主鏈表示為以上引用的美國專利No. 5，489，677的-0-P-0-CH2-、和以上引用的美國專利No. 5，602, 240的酰胺主鏈。還優(yōu)選的是具有以上引用的美國專利No. 5，034, 506的嗎啉代主鏈結(jié)構(gòu)的寡核苷酸。修飾的寡核苷酸還可包含一種或多種取代的糖部分。優(yōu)選的寡核苷酸在2'位置包括以下之一 0H ；F ;0-、S-或N-烷基；0-、S-或N-烯基；0-、S-或N-炔基；或0烷基-0-烷基，其中烷基、烯基和炔基可以是取代或未取代的C至CO烷基或C2至CO烯基和炔基。尤其優(yōu)選的是 0(CH2)n 0mCH3、0(CH2)n、0CH3、0(CH2)nNH2、0(CH2)nCH3、0(CH2)
            
n0NH2和0(CH2n0N(CH2)nCH3)2，其中n和m可以為I至約10。其它優(yōu)選的寡核苷酸包括在2'位置包括以下之一 C至CO低級烷基、取代的低級烷基、烷芳基、芳烷基、0-烷芳基或
            
0-芳烷基、SH、SCH3、0CN、Cl、Br、CN、CF3、0CF3、S0CH3、S02CH3、0N02、N02、N3、NH2、雜環(huán)烷基、雜環(huán)燒芳基、氣基燒基氣基、聚燒基氣基、取代的甲娃燒基、RNA裂解基團、報告基團、嵌入劑、用于改善寡核苷酸藥代動力學(xué)特性的基團、或用于改善寡核苷酸藥效學(xué)特性的基團、具有類似特性的其它取代基。優(yōu)選的修飾包括2'-甲氧基こ氧基(2' -0-CH2CH20CH3,還稱為'-0-(2-甲氧こ基)或2' -M0E) S卩，烷氧基烷氧基基團。另外優(yōu)選的修飾包括如在本文以下實施例中描述的2' - ニ甲基氨基氧こ氧基，即0 (CH2) 20N (CH3) 2基團，還稱為2' -DMA0E，和2' - ニ甲基氨基こ氧基こ氧基(本領(lǐng)域還稱為2' _0_ ニ甲基氨基こ氧基こ基或 2' -DMAE0E)，SP，2' -0-CH2-0-CH2-N(CH2)2。其它優(yōu)選的修飾包括2 ' _甲氧基(2 ' _0—CH3)ヽ2 ' _氛基丙氧基(2' -0CH2CH2CH3)和2 '-氟(2 ' -F)。還可在寡核苷酸上的其它位置進(jìn)行類似修飾，尤其是3'末端核苷酸或2' -5'連接的寡核苷酸上糖的3'位置和5'末端核苷酸的5'位置。寡核苷酸還可具有糖模擬物諸如環(huán)丁基部分來代替戊呋喃糖基糖。教導(dǎo)這種修飾的糖結(jié)構(gòu)的制備的代表性美國專利包括但不限于，美國專利No. 4，981,957 ;5，118，800 ;5，319，080 ;5，359，044 ;5，393，878 ;5，446，137 ;5，466，786 ;5，514，785 ;5，519，134 ;5，567，811 ;5，576，427 ;5，591，722 ;5，597，909 ;5，610，300 ;5，627，053 ;5，639，873 ；5，646，265 ;5，658，873 ;5，670，633 和 5，700，920，其每ー個通過引用并入本文。寡核苷酸還可包括核堿基(本領(lǐng)域中通常簡稱為"堿基")修飾或取代。本文所用的"未修飾"或"天然"核苷酸包括嘌呤堿基腺嘌呤(A)和鳥嘌呤(G)、和嘧啶堿基胸腺嘧啶(T)、胞嘧啶(C)和尿嘧啶(U)。修飾的核苷酸包括其它合成的和天然核苷酸諸如
            
5-甲基胞嘧啶(5-me-C)、5_羥甲基胞嘧啶、黃嘌呤、次黃嘌呤、2-氨基腺嘌呤、腺嘌呤和鳥嘌呤的6-甲基和其它烷基衍生物、腺嘌呤和鳥嘌呤的2-丙基和其它烷基衍生物、2-硫尿嘧啶、2-硫胸腺嘧啶和2-硫胞嘧啶、5-鹵代尿嘧啶和胞嘧啶、5-丙炔基尿嘧啶和胞嘧啶、
            
6-偶氮尿嘧啶、胞嘧啶和胸腺嘧啶、5-尿嘧啶(假-尿嘧啶)、4_硫尿嘧啶、8-鹵代、8-氨基、8-硫氫基、8-硫烷基、8-羥基和其它8-取代的腺嘌呤和鳥嘌呤、5-鹵代尤其是5-溴、5_三氟甲基和其它5-取代的尿嘧啶和胞嘧啶、7-甲基鳥嘌呤和7-甲基腺嘌呤、8-氮雜鳥嘌呤和8-氮雜腺嘌呤、7-脫氮鳥嘌呤和7-脫氮腺嘌呤和3-脫氮鳥嘌呤和3-脫氮腺嘌呤。
            
此外，核苷酸包括美國專利No.3，687，808中公開的那些、'The ConciseEncyclopedia of Polymer Science And Engineering(聚合物科學(xué)和工程的簡明百科全書)'，第 858-859 頁，Kroschwitz, J. I.編著.John Wiley&Sons, 1990 中公開的那些、Englisch 等，1 Angewandle Chemie, International Edition 1 ,1991, 30,第 613 頁中公開的那些、和 Sanghvi, Y. S ,第 15 章，'Antisense Research and Applications (反義研究和應(yīng)用),，第 289-302 頁，Crooke, S. T.和 Lebleu, B.編著，CRC Press, 1993 中公開的那些。這些核苷酸的某些尤其有用于增加本發(fā)明寡聚化合物的結(jié)合親和性。這些包括5-取代的嘧啶、6-氮雜嘧啶、N-2、N-6和0-6取代的嘌呤，包括2-氨丙基腺嘌呤、5-丙炔基尿嘧啶和5-丙炔基胞嘧啶。5-甲基胞嘧啶取代已顯示増加核酸雙鏈體穩(wěn)定性0. 6-1. 2°C (Sanghvi, Y. S. , Crooke, S. T.和 Lebleu,B.編著，1 Antisense Research andApplications (反義研究和應(yīng)用)'，CRC Press, Boca Raton, 1993, pp. 276-278),并且是目前優(yōu)選的堿基取代，甚至更尤其是當(dāng)與2' -0甲氧こ基糖修飾組合吋。教導(dǎo)上述修飾的核苷酸以及其它修飾的核苷酸的制備的代表性美國專利包括
            
但不限于，美國專利 No. 3，687，808、以及 4，845，205 ;5，130，302 ;5，134，066 ;5，175，273 ；5，367，066 ;5，432，272 ;5，457，187 ;5，459，255 ;5，484，908 ;5，502，177 ;5，525，711 ；5，552，540 ;5，587，469 ;5，596，091 ;5，614，617 ;5，750，692 和 5，681，941，其每ー個通過引用并入本文。本發(fā)明寡核苷酸的另一修飾包括將寡核苷酸化學(xué)連接于增強寡核苷酸的活性、細(xì)胞分布或細(xì)胞攝取的ー種或多種部分或綴合物。這種部分包括但不限于，脂質(zhì)部分諸如膽固醇部分、膽酸、硫醚，如，己基-S-三苯甲基硫醇、硫膽固醇、脂肪族鏈，如，十_■焼_■醇或十一燒基殘基、憐脂，如，_■ _十TK燒基-rac-甘油或I，2- ニ-0-十六烷基-rac-甘油-3-H-膦酸三こ基銨、聚胺或聚こニ醇鏈、或金剛烷こ酸、棕櫚?；糠帧⒒蚴税坊蚣夯被?羰基_t羥膽固醇部分。教導(dǎo)這種寡核苷酸綴合物的制備的代表性美國專利包括但不限于，美國專利No. 4，828，979 ;4，948，882 ;5，218，105 ;5，525，465 ;5，541，313 ;5，545，730 ;5，552，538 ；5，578，717,5, 580，731 ;5，580，731 ;5，591，584 ;5，109，124 ;5，118，802 ;5，138，045 ；5，414，077 ;5，486，603 ;5，512，439 ;5，578，718 ;5，608，046 ;4，587，044 ;4，605，735 ；4，667，025 ;4，762，779 ;4，789，737 ;4，824，941 ;4，835，263 ;4，876，335 ;4，904，582 ；4，958，013 ;5，082，830 ;5，112，963 ;5，214，136 ;5，082，830 ;5，112，963 ;5，214，136 ；5，245，022 ;5，254，469 ;5，258，506 ;5，262，536 ;5，272，250 ;5，292，873 ;5，317，098 ；5，371，241,5, 391，723 ;5，416，203,5, 451，463 ;5，510，475 ;5，512，667 ;5，514，785 ；5，565，552 ;5，567，810 ;5，574，142 ;5，585，481 ;5，587，371 ;5，595，726 ;5，597，696 ；5，599，923 ;5，599，928和5，688，941，其每ー個通過引用并入本文。藥物發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的化合物還可應(yīng)用于藥物發(fā)現(xiàn)和靶確認(rèn)的領(lǐng)域。本發(fā)明涵蓋本文鑒定的化合物和優(yōu)選的靶區(qū)段在藥物發(fā)現(xiàn)嘗試中使用以闡明聚絲蛋白(FLG)多核苷酸與疾病狀態(tài)、表型或疾患之間存在的關(guān)聯(lián)。這些方法包括檢測或調(diào)節(jié)FLG多核苷酸，包括將樣品、組織、細(xì)胞或生物體與本發(fā)明化合物接觸，在處理后某一時間測量FLG多核苷酸的核酸或蛋白水平和/或相關(guān)的表型或化學(xué)端點，和任選地將測量值與未處理樣品或用本發(fā)明另外化合物處理的樣品比較。這些方法還可與其它試驗平行或聯(lián)合進(jìn)行，以為靶確認(rèn)方法確定未知基因的功能，或確定特定基因產(chǎn)物作為治療或預(yù)防特定疾病、疾患或表型的靶的有效性。評價基因表達(dá)的上調(diào)或抑制外源核酸向宿主細(xì)胞或生物體中的轉(zhuǎn)移可通過直接檢測細(xì)胞或生物體中該核酸的存在來評價。這種檢測可通過本領(lǐng)域公知的多種方法來實現(xiàn)。例如，外源核酸的存在可通過Southern印跡或利用特異性地擴增與該核酸相關(guān)的核苷酸序列的引物通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù)來檢測。外源核酸的表達(dá)還可利用包括基因表達(dá)分析的常規(guī)方法測量。例如，從外源核酸產(chǎn)生的mRNA可利用Northern印跡和逆轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)來檢測和定量。RNA從外源核酸的表達(dá)還可通過測量酶促活性或報告蛋白活性來檢測。例如，反義調(diào)節(jié)活性可間接地作為靶核酸表達(dá)的減少或增加來測量，靶核酸表達(dá)的減少或增加作為外源核酸在產(chǎn)生效應(yīng)RNA的指示。基于序列保守性，可設(shè)計引物并用于擴增靶基因的編碼區(qū)
            
域。最初，來自每個基因的最高度表達(dá)的編碼區(qū)域可用于構(gòu)建模式對照基因，盡管可使用任何編碼或非編碼區(qū)域。通過在報告基因編碼區(qū)域和其poly (A)信號之間插入每個編碼區(qū)域來組裝每個對照基因。這些質(zhì)粒將產(chǎn)生報告基因在基因的上游部分且可能的RNAi靶在3'非編碼區(qū)域的mRNA。単獨反義寡核苷酸的效果將通過報告基因的調(diào)節(jié)來測定。可用于本發(fā)明方法的報告基因包括こ酰羥酸合酶(AHAS)、堿性磷酸酶(AP)、P半乳糖苷酶(LacZ)、3葡糖醛酸酶(GUS)、氯霉素こ酰轉(zhuǎn)移酶(CAT)、綠色熒光蛋白(GFP)、紅色熒光蛋白(RFP)、黃色熒光蛋白(YFP)、青色熒光蛋白(CFP)、辣根過氧化物酶(HRP)、熒光素酶(Luc)、胭脂堿合酶(NOS)、章魚堿合酶(OCS)、和其衍生物。賦予對氨芐西林、博來霉素、氯霉素、慶大霉素、潮霉素、卡那霉素、林可霉素、甲氨蝶呤、草丁膦、嘌呤霉素和四環(huán)素抗性的多種選擇標(biāo)記是可得的。確定報告基因的調(diào)節(jié)的方法是本領(lǐng)域公知的，包括但不限于，熒光方法(如，熒光光譜學(xué)、熒光激活細(xì)胞分選術(shù)(FACS)、熒光顯微鏡檢術(shù))、抗生素抗性確定。FLG蛋白和mRNA表達(dá)可利用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知和在本文別處描述的方法來測定。例如，免疫測定諸如ELISA可用于測量蛋白水平。FLG ELISA測定試劑盒是市售可獲得的，如，從 R&DSystems (Minneapolis, MN)。在實施方案中，利用本發(fā)明反義寡核苷酸處理的樣品(如，體內(nèi)或體外的細(xì)胞或組織)中的FLG表達(dá)(如，mRNA或蛋白)通過與對照樣品中的FLG表達(dá)比較來評價。例如，蛋白或核酸的表達(dá)可利用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法與模擬處理或未處理樣品中的比較?？蛇x地，取決于期望的信息，可與以對照反義寡核苷酸(如，具有改變的或不同序列的反義寡核苷酸)處理的樣品進(jìn)行比較。在另ー實施方案中，處理樣品vs.未處理樣品中FLG蛋白或核酸的表達(dá)差異可與處理樣品vs.未處理樣品中不同核酸(包括研究者認(rèn)為適當(dāng)?shù)娜魏螛?biāo)準(zhǔn)，如，看家基因)的表達(dá)差異比較。觀察到的差異可如期望地表示，如，比率或分?jǐn)?shù)的形式，用于與對照比較。在實施方案中，以本發(fā)明反義寡核苷酸處理的樣品中FLGmRNA或蛋白的水平相對于未處理樣品或以對照核酸處理的樣品增加或減少約I. 25倍至約10倍或更多。在實施方案中，F(xiàn)LG mRNA或蛋白的水平增加或減少至少約I. 25倍、至少約I. 3倍、至少約I. 4倍、至少約I. 5倍、至少約I. 6倍、至少約I. 7倍、至少約I. 8倍、至少約2倍、至少約2. 5倍、至少約3倍、至少約3. 5倍、至少約4倍、至少約4. 5倍、至少約5倍、至少約5. 5倍、至少約6倍、至少約6. 5倍、至少約7倍、至少約7. 5倍、至少約8倍、至少約8. 5倍、至少約9倍、至少約9. 5倍、或至少約10倍或更多。試劑盒、研究試劑、診斷和治療本發(fā)明的化合物可用于診斷、治療和預(yù)防，和作為研究試劑和試劑盒的成分。而且，能夠以強烈特異性抑制基因表達(dá)的反義寡核苷酸通常被本領(lǐng)域技術(shù)人員用來闡明特定基因的功能或區(qū)分生物途徑的不同組件的功能。對于在試劑盒和診斷和不同生物系統(tǒng)中使用，本發(fā)明的化合物，単獨或與其它化合物或治療組合地，可用作差異和/或組合分析中的工具來闡明細(xì)胞和組織中表達(dá)的基因的一部分或完全互補序列的表達(dá)模式。本文所用的術(shù)語"生物系統(tǒng)"或"系統(tǒng)"定義為表達(dá)或被使得能夠表達(dá)聚絲蛋白(FLG)基因產(chǎn)物的任何生物體、細(xì)胞、細(xì)胞培養(yǎng)物或組織。這些包括但不限于，人、轉(zhuǎn)基因
            
動物、細(xì)胞、細(xì)胞培養(yǎng)物、組織、異種移植物、移植物和其組合。作為ー個非限制性實例，將以ー種或多種反義化合物處理的細(xì)胞或組織中的表達(dá)模式與未被反義化合物處理的對照細(xì)胞或組織比較，并按照其屬于所檢查的基因的例如疾病關(guān)聯(lián)、信號傳導(dǎo)途徑、細(xì)胞定位、表達(dá)水平、大小、結(jié)構(gòu)或功能分析所產(chǎn)生的模式的基因表達(dá)差異水平。這些分析可對刺激或未刺激的細(xì)胞進(jìn)行，并在影響表達(dá)模式的其它化合物存在或不存在下。本領(lǐng)域已知的基因表達(dá)分析方法的實例包括DNA陣列或微陣列、SAGE (基因表達(dá)系列分析)、READS(消化的cDNA的限制性酶擴增)、T0GA(總基因表達(dá)分析)、蛋白陣列和蛋白質(zhì)組學(xué)、表達(dá)的序列標(biāo)簽(EST)測序、消減RNA指紋技術(shù)(SuRF)、消減克隆、差異展示(DD)、比較基因組雜交、FISH(熒光原位雜交)技術(shù)和質(zhì)譜方法。本發(fā)明的化合物可用于研究和診斷，因為這些化合物雜交于編碼聚絲蛋白(FLG)的核酸。例如，在本文公開的這種條件下以這種效カ雜交的為有效的FLG調(diào)節(jié)劑的寡核苷酸，在有利基因擴增或檢測的條件下分別是有效的引物或探針。這些引物和探針可用于需要特異性檢測編碼FLG的核酸分子的方法，和可用于擴增用于檢測或用于進(jìn)一歩研究FLG的所述核酸分子。本發(fā)明的反義寡核苷酸，尤其是引物和探針與編碼FLG的核酸的雜交可通過本領(lǐng)域已知的手段檢測。這種手段可包括將酶綴合于寡核苷酸、放射性標(biāo)記寡核苷酸、或任何其它適當(dāng)?shù)臋z測手段。還可制備利用這種檢測手段來檢測樣品中FLG水平的試劑盒。本領(lǐng)域技術(shù)人員還利用反義的特異性和靈敏性用于治療用途。反義化合物已經(jīng)在動物包括人的疾病狀態(tài)的治療中用作治療部分。反義寡核苷酸藥物已經(jīng)安全且有效地施用于人，目前正在進(jìn)行許多臨床試驗。因此已經(jīng)確定，反義化合物可以是有用的治療形態(tài)，可被配置以用于治療細(xì)胞、組織和動物，尤其是人的治療方案。對于治療，通過施用根據(jù)本發(fā)明的反義化合物來治療懷疑具有可通過調(diào)節(jié)FLG多核苷酸的表達(dá)來治療的疾病或病癥的動物，優(yōu)選地人。例如，在一個非限制性實施方案中，方法包括向需要治療的動物施用治療有效量的FLG調(diào)節(jié)劑的步驟。本發(fā)明的聚絲蛋白(FLG)調(diào)節(jié)劑有效地調(diào)節(jié)FLG的活性或調(diào)節(jié)FLG蛋白的表達(dá)。在一個實施方案中，與對照相比，動物中FLG的活性或表達(dá)被抑制約10%。優(yōu)選地，動物中FLG的活性或表達(dá)被抑制約30 %。更優(yōu)選地，動物中FLG的活性或表達(dá)被抑制50 %或更多。因此，與對照相比，寡聚化合物調(diào)節(jié)聚絲蛋白(FLG)mRNA的表達(dá)至少10%、至少50%、至少25%、至少30%、至少40%、至少50 %、至少60 %、至少70 %、至少75 %、至少80 %、至少85 %、至少90 %、至少95 %、至少98%、至少99%或100%。在一個實施方案中，與對照相比，動物中聚絲蛋白(FLG)的活性或表達(dá)增加約10%。優(yōu)選地，動物中FLG的活性或表達(dá)增加約30%。更優(yōu)選地，動物中FLG的活性或表達(dá)增加50%或更多。因此，與對照相比，寡聚化合物調(diào)節(jié)FLG mRNA的表達(dá)至少10 %、至少50%、至少25%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%。例如，可測量動物的血清、血液、脂肪組織、肝臟或任何其它體液、組織或器官中聚絲蛋白(FLG)表達(dá)的減少。優(yōu)選地，被分析的所述體液、組織或器官中包含的細(xì)胞包含編碼FLG肽和/或FLG蛋白本身的核酸分子。通過向適當(dāng)?shù)乃帉W(xué)上可接受的稀釋劑或載體加入有效量的本發(fā)明化合物，本發(fā)明
            
的化合物可以藥物組合物利用。本發(fā)明的化合物和方法的用途還可以是預(yù)防上有用的。綴合物本發(fā)明寡核苷酸的另一修飾包括將該寡核苷酸化學(xué)連接至增強寡核苷酸的活性、細(xì)胞分布或細(xì)胞攝取的ー種或多種部分或綴合物。這些部分或綴合物可包括共價結(jié)合官能團諸如伯羥基或仲羥基基團的綴合物基團。本發(fā)明的綴合物基團包括嵌入劑、報告分子、聚胺、聚酰胺、聚こニ醇、聚醚、增強寡聚物藥代動力學(xué)特性的基團、增強寡聚物藥效學(xué)特性的基團。典型綴合物基團包括膽固醇、脂質(zhì)、磷脂、生物素、吩嗪、葉酸、菲啶、蒽醌、吖啶、熒光素、羅丹明、香豆素和染料。在本發(fā)明范疇中，增強藥效學(xué)特性的基團包括改進(jìn)攝取、增強對降解的耐受性、和/或加強與靶核酸序列特異性雜交的基團。在本發(fā)明范疇中，增強藥代動力學(xué)特性的基團包括改進(jìn)本發(fā)明化合物的攝取、分布、代謝或排泄的基團。代表性綴合物基團公開在1992年10月23日提交的國際專利申請NO.PCT/US92/09196和美國專利No. 6, 287, 860中，其通過引用并入本文。綴合物部分包括但不限于，脂質(zhì)部分諸如膽固醇部分、膽酸、硫醚，如，己基-5_三苯甲基硫醇、硫膽固醇、脂肪族鏈，如，十二烷ニ醇或i^ 一燒基殘基、憐脂，如，ニ -十六燒基-rac-甘油或I, 2- ニ -0-十六燒基-rac-甘油-3-H勝酸三こ基銨、聚胺或聚こニ醇鏈、或金剛烷こ酸、棕櫚?；糠帧⒒蚴税坊蚣夯被?羰基-羥膽固醇部分。本發(fā)明的寡核苷酸還可綴合于活性藥物物質(zhì)，例如，阿斯匹林、華法林、苯基丁氮酮、布洛芬、舒洛芬、芬布芬、酮洛芬、(S)-(+)_普拉洛芬、卡洛芬、丹肌氨酸、2，3，5-三碘苯甲酸、氟滅酸、亞葉酸、苯并噻ニ嗪、氯噻嗪、ニ氮雜環(huán)庚三烯、吲哚美辛、巴比妥酸鹽、頭孢菌素、磺胺藥物、抗糖尿病藥、抗菌藥或抗生素。教導(dǎo)這種寡核苷酸綴合物的制備的代表性美國專利包括但不限于，美國專利No. 4，828，979 ;4，948，882 ;5，218，105 ;5，525，465 ;5，541，313 ;5，545，730 ;5，552，538 ；5，578，717,5, 580，731 ;5，580，731 ;5，591，584 ;5，109，124 ;5，118，802 ;5，138，045 ；5，414，077 ;5，486，603 ;5，512，439 ;5，578，718 ;5，608，046 ;4，587，044 ;4，605，735 ；4，667，025 ;4，762，779 ;4，789，737 ;4，824，941 ;4，835，263 ;4，876，335 ;4，904，582 ；4，958，013 ;5，082，830 ;5，112，963 ;5，214，136 ;5，082，830 ;5，112，963 ;5，214，136 ；5，245，022 ;5，254，469 ;5，258，506 ;5，262，536 ;5，272，250 ;5，292，873 ;5，317，098 ；5，371，241,5, 391，723 ;5，416，203,5, 451，463 ;5，510，475 ;5，512，667 ;5，514，785 ；5，565，552 ;5，567，810 ;5，574，142 ;5，585，481 ;5，587，371 ;5，595，726 ;5，597，696 ；5，599，923 ；5, 599，928 和 5，688，941。制劑為了輔助攝取、分布和/或吸收，本發(fā)明的化合物還可與其它分子、分子結(jié)構(gòu)或化合物的混合物混合、包封、綴合或以其它方式關(guān)聯(lián)，例如脂質(zhì)體、受體靶向分子、ロ服、直腸、局部或其它制劑。教導(dǎo)這種攝取、分布和/或吸收輔助制劑的制備的代表性美國專利包括但不限于，美國專利 No. 5，108，921 ;5，354，844 ;5，416，016 ;5，459，127 ;5，521，291 ；5，543，165 ;5，547，932 ;5，583，020 ;5，591，721 ;4，426，330 ;4，534，899 ;5，013，556 ；5，108，921 ;5，213，804 ;5，227，170 ;5，264，221 ;5，356，633 ;5，395，619 ;5，416，016 ；5，417，978 ;5，462，854 ;5，469，854 ;5，512，295 ;5，527，528 ;5，534，259 ;5，543，152 ；5，556，948 ;5，580，575和5，595，756，其每ー個通過引用并入本文。盡管反義寡核苷酸不必以載體的背景施用以便調(diào)節(jié)靶表達(dá)和/或功能，但是本發(fā)
            
明的實施方案涉及用于表達(dá)反義寡核苷酸的表達(dá)載體構(gòu)建體，包括啟動子、雜合體啟動子基因序列，并具備強的組成型啟動子活性、或在期望情形中可被誘導(dǎo)的啟動子活性。在一個實施方案中，發(fā)明實踐包括以適當(dāng)?shù)暮怂徇f送系統(tǒng)施用至少ー種上述反義寡核苷酸。在一個實施方案中，該系統(tǒng)包括可操作地連接于多核苷酸的非病毒載體。這種非病毒載體的實例包括単獨寡核苷酸(如，SEQ ID NO 3至13的任何ー種或多種)或寡核苷酸以及適當(dāng)?shù)牡鞍?、多糖或脂質(zhì)制劑。另外適當(dāng)?shù)暮怂徇f送系統(tǒng)包括病毒載體，通常序列來自以下的至少ー種腺病毒、腺病毒相關(guān)病毒(MV)、輔助病毒依賴型腺病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒、或日本血凝病毒-脂質(zhì)體(HVJ)復(fù)合體。優(yōu)選地，病毒載體包括可操作地連接于多核苷酸的強的真核啟動子，如巨細(xì)胞病毒(CMV)啟動子。另外優(yōu)選的載體包括病毒載體、融合蛋白和化學(xué)綴合物。逆轉(zhuǎn)錄病毒載體包括莫洛尼氏鼠白血病病毒和基于HIV的病毒。一種優(yōu)選的基于HIV的病毒載體包括至少兩種載體，其中g(shù)ag和pol基因來自HIV基因組且env基因來自另ー病毒。DNA病毒載體是優(yōu)選的。這些載體包括痘病毒載體諸如正痘病毒或禽痘病毒載體、皰疹病毒載體諸如I型單純皰疫病毒(HSV)載體、腺病毒載體和腺相關(guān)病毒載體。本發(fā)明的反義化合物涵蓋任何藥學(xué)上可接受的鹽、酷或這種酯的鹽、或當(dāng)施用于包括人的動物時能夠提供(直接或間接)生物活性代謝物的任何其它化合物、或其殘留物。術(shù)語"藥學(xué)上可接受的鹽"是指本發(fā)明化合物的生理上和藥學(xué)上可接受的鹽即，保留親本化合物的期望生物活性且不對其賦予不期望的毒物學(xué)作用的鹽。對于寡核苷酸，藥學(xué)上可接受的鹽和其用途的優(yōu)選的實例進(jìn)一歩描述于美國專利No. 6，287，860，其通過引用并入本文。本發(fā)明還包括包含本發(fā)明反義化合物的藥物組合物和制劑。取決于期望局部還是系統(tǒng)治療和待治療的區(qū)域，本發(fā)明的藥物組合物可以多種方式施用。施用可以是局部的(包括眼睛和向粘膜，包括陰道和直腸遞送)、肺部，如，通過吸入或噴入粉末或氣霧劑，包括通過噴霧器；氣管內(nèi)、鼻內(nèi)、表皮和經(jīng)皮)、ロ服或腸胃外。腸胃外施用包括靜脈內(nèi)、動脈內(nèi)、皮下、腹膜內(nèi)或肌內(nèi)注射或輸注；或顱內(nèi)，如鞘內(nèi)或心室內(nèi)的施用。對于治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的組織，施用可通過如，注射或輸注到腦脊液中來進(jìn)行。反義RNA向腦脊液的施用描述在如，美國專利申請公布No. 2007/0117772 “Methods forslowing familial ALS disease progression (減慢家族性 ALS 病進(jìn)展的方法)”中，通過引用全文并入本文。當(dāng)預(yù)期本發(fā)明的反義寡核苷酸被施用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的細(xì)胞時，可以能夠促進(jìn)本發(fā)明反義寡核苷酸跨越血腦屏障的滲透的一種或多種試劑施用。注射可在如內(nèi)嗅皮質(zhì)或海馬中進(jìn)行。通過向肌肉組織中的運動神經(jīng)元施用腺病毒載體來遞送神經(jīng)營養(yǎng)因子描述在如，美國專利 No. 6，632，427 “Adenoviral-vector-mediated gene transfer intomedullary motor neurons (腺病毒載體介導(dǎo)的向脊髓運動神經(jīng)兀的基因轉(zhuǎn)移)”中，通過引用并入本文。向腦如，紋狀體、丘腦、海馬或黑質(zhì)直接遞送載體是本領(lǐng)域已知的，描述在如，美國專利 No. 6，756，523 “Adenovirus vectors for the transfer of foreign genesinto 細(xì)胞 of the central nervous system particularly in brain (用于向中樞神經(jīng)糸統(tǒng)尤其是腦的細(xì)胞轉(zhuǎn)移外來基因的腺病毒載體)”中，通過引用并入本文。施用可以是快速的，如通過注射，或經(jīng)一段時間進(jìn)行，如通過緩慢輸注或施用緩釋制劑。本發(fā)明反義寡核苷酸可還連接或綴合于提供期望的藥物或藥效學(xué)特性的試劑。例如，反義寡核苷酸可偶聯(lián)于本領(lǐng)域已知的促進(jìn)跨血腦屏障滲透或運輸?shù)娜魏挝镔|(zhì)，諸如轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的抗體，并通過靜脈內(nèi)注射施用。反義化合物可連接于病毒載體，例如，使得反義化合物更有效和/或増加反義化合物跨血腦屏障的運輸?shù)牟《据d體。滲透血腦屏障破壞還可通過如，輸注以下物質(zhì)來實現(xiàn)糖，包括但不限于，赤蘚糖醇、木糖醇、D(+)半乳糖、D⑴乳糖、D⑴木糖、衛(wèi)矛醇、肌醇、L(-)果糖、D㈠甘露醇、D(+)葡萄糖、D(+)阿拉伯糖、D(-)阿拉伯糖、纖維ニ糖、D(+)麥芽糖、D(+)棉子糖、L⑴鼠李糖、D⑴蜜ニ糖、DB核糖、側(cè)金盞花醇、D(+)阿拉伯糖醇、L(-)阿拉伯糖醇、D(+)巖藻糖、L(-)巖藻糖、DB來蘇糖、L(+)來蘇糖和L(-)來蘇糖、或氨基酸包括但不限于，谷氨酰胺、賴氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、甘氨酸、組氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸、纈氨酸和牛磺酸。用于增強血腦屏障滲透的方法和材料描述在，如，美國專利 No. 4，866，042 “Method for the delivery of genetic materialacross the blood brain barrier (用于跨血腦屏障遞送遺傳材料的方法)”,美國專利No. 6, 294, 520 “Material for passage through the blood-brain barrier(用于穿過血腦屏障的材料)”和美國專利No. 6，936，589 “Parenteral delivery systems (腸胃外遞送系統(tǒng))”，都通過引用全文并入本文。為了幫助攝取、分布和/或吸收，本發(fā)明反義化合物可與其它分子、分子結(jié)構(gòu)或化合物混合物，例如，脂質(zhì)體、受體靶向分子、ロ服、直腸、局部或其它制劑混合、包封、綴合或以其它方式關(guān)聯(lián)。例如，陽離子脂質(zhì)可被包括在制劑中以促進(jìn)寡核苷酸攝取。顯示促進(jìn)攝取的ー種這樣的組合物是LIP0FECTIN(可從GIBC0-BRL，Bethesda, MD獲得)。認(rèn)為具有至少ー種2' -0-甲氧こ基修飾的寡核苷酸尤其可用于ロ服施用。用于局部施用的藥物組合物和制劑可包括經(jīng)皮貼片、軟膏、洗剤、乳膏、凝膠、滴劑、栓劑、噴霧齊U、液體和粉末。常規(guī)藥物載體、水性、粉狀、或油性基質(zhì)、增稠劑和類似物可以是必需或期望的。涂覆的避孕套、手套和類似物也是可用的?？煞奖愕匾詥挝粍┬统尸F(xiàn)的本發(fā)明的藥物制劑，可按照制藥エ業(yè)中公知的常規(guī)技術(shù)制備。這種技術(shù)包括將有效成分與藥物載體或賦形劑關(guān)聯(lián)的步驟。通常，制劑通過以下制備均勻且密切地將有效成分與液態(tài)載體或磨碎的固態(tài)載體或二者關(guān)聯(lián)，然后，如果需要，將產(chǎn)品成型。本發(fā)明的組合物可配制為任何的許多可能劑型，諸如但不限于，片劑、膠囊、凝膠膠囊、液體糖漿劑、軟凝膠、栓劑和灌腸劑。本發(fā)明的組合物還可配制為在含水、不含水或混合介質(zhì)中的懸浮劑。含水懸浮劑可進(jìn)ー步包含増加懸浮劑粘度的物質(zhì)，包括例如，羧甲基纖維素鈉、山梨醇和/或葡聚糖。懸浮劑還可包含穩(wěn)定劑。本發(fā)明的藥物組合物包括但不限于，溶液、乳液、泡沫劑和含脂質(zhì)體制劑。本發(fā)明的藥物組合物和制劑可包括一種或多種滲透促進(jìn)劑、載體、賦形劑或其它活性或無活性配料。乳劑通常是ー種液體以直徑通常超過0. I y m的液滴形式分散在另ー液體中的非均勻系統(tǒng)。除了分散相和可作為以水相、油相或本身作為單獨相的溶液存在的活性藥物以夕卜，乳劑可包含另外的成分。包括微乳劑作為本發(fā)明的實施方案。乳劑和其用途是本領(lǐng)域公知的，進(jìn)ー步描述在美國專利No. 6，287，860。本發(fā)明的制劑包括脂質(zhì)體制劑。本發(fā)明所用的術(shù)語"脂質(zhì)體"是指包括以ー個或多個球形雙層排列的兩親性脂質(zhì)的囊泡。脂質(zhì)體是單層或多層囊泡，具有從親脂性材料形成的膜和包含待遞送的組合物的含水內(nèi)部。陽離子脂質(zhì)體是帶正電荷的脂質(zhì)體，認(rèn)為其與帶負(fù)電荷的DNA分子相互作用形成穩(wěn)定復(fù)合體。認(rèn)為pH-敏感或帶負(fù)電荷的脂質(zhì)體捕獲DNA而不是與其復(fù)合。陽離子和非陽離子脂質(zhì)體二者已經(jīng)用于向細(xì)胞遞送DNA。脂質(zhì)體還包括"空間上穩(wěn)定的"脂質(zhì)體，本文所用的該術(shù)語是指包括ー種或多種特化的脂質(zhì)的脂質(zhì)體。當(dāng)被摻入脂質(zhì)體時，這些特化的脂質(zhì)產(chǎn)生相對于松散這種特化脂質(zhì)的脂質(zhì)體具有增強的循環(huán)生命周期的脂質(zhì)體。空間上穩(wěn)定的脂質(zhì)體的實例是其中脂質(zhì)體的形成囊泡的脂質(zhì)部分的部分包括一種或多種糖脂或以ー種或多種親水性聚合物諸如聚こニ醇(PEG)部分衍生化的脂質(zhì)體。脂質(zhì)體和其用途進(jìn)ー步描述在美國專利No. 6，287，860中。本發(fā)明的藥物制劑和組合物還可包括表面活性剤。表面活性劑在藥物產(chǎn)物、制劑和乳劑中的使用是本領(lǐng)域公知的。表面活性劑和其用途進(jìn)ー步描述在美國專利No. 6，287，860中，其通過引用并入本文。在一個實施方案中，本發(fā)明采用多種滲透促進(jìn)劑來實現(xiàn)核酸尤其是寡核苷酸的有效遞送。除了幫助非親脂性藥物跨細(xì)胞膜的擴散，滲透促進(jìn)劑還增強親脂性藥物的滲透性。滲透促進(jìn)劑可分為屬于五個寬的分類之一，即，表面活性剤、脂肪酸、膽酸、螯合劑和非螯合非表面活性剤。滲透促進(jìn)劑和其用途進(jìn)ー步描述在美國專利No. 6，287，860中，其通過引用并入本文。本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識到，制劑常規(guī)地根據(jù)其預(yù)期用途，即施用途徑來設(shè)計。用于局部施用的優(yōu)選的制劑包括其中本發(fā)明的寡核苷酸與局部遞送劑諸如脂質(zhì)、脂質(zhì)體、脂肪酸、脂肪酸酷、類固醇、螯合劑和表面活性劑混合的制劑。優(yōu)選的脂質(zhì)和脂質(zhì)體包括中性(如，ニ油酰基-磷脂酰DOPEこ醇胺、ニ肉豆蘧酰磷脂酰膽堿DMPC、ニ硬脂酰磷脂酰膽堿)、陰性(如，ニ肉豆蘧酰磷脂酰甘油DMPG)和陽離子(如，ニ油?；募谆被鵇OTAP和ニ油酰基-磷脂酰こ醇胺D0TMA)。對于局部或其它施用，本發(fā)明的寡核苷酸可被脂質(zhì)體封裝或可與其形成復(fù)合體，尤其是陽離子脂質(zhì)體?？蛇x地，寡核苷酸可與脂質(zhì)，尤其是陽離子脂質(zhì)復(fù)合。優(yōu)選的脂肪酸和酷、其藥學(xué)上可接受的鹽、和其用途進(jìn)ー步描述在美國專利No. 6，287，860中。用于ロ服施用的組合物和制劑包括粉末劑或顆粒劑、微顆粒、納米顆粒、水或非水介質(zhì)中的懸浮劑或溶液、膠囊、凝膠膠囊、囊劑、片劑或小片劑。增稠劑、芳香剤、稀釋劑、乳化劑、分散助劑或粘合劑可以是期望的。優(yōu)選的ロ服制劑是其中本發(fā)明的寡核苷酸連同一種或多種滲透促進(jìn)劑、表面活性劑和螯合劑一起施用的那些。優(yōu)選的表面活性劑包括脂肪酸和/或其酯或鹽、膽酸和/或其鹽。優(yōu)選的膽酸/鹽和脂肪酸和其用途進(jìn)ー步描述在美國專利No. 6，287, 860中，其通過引用并入本文。還優(yōu)選的是滲透促進(jìn)劑的組合，例如，脂肪酸/鹽以及膽酸/鹽。尤其優(yōu)選的組合是月桂酸的鈉鹽、癸酸和UDCA。進(jìn)ー步的滲透促進(jìn)劑包括聚氧こ烯-9-月桂基醚、聚氧こ烯-20-十六烷基醚。本發(fā)明的寡核苷酸可以包括噴霧干燥顆粒的粒狀形式ロ服遞送，或被復(fù)合以形成微顆?；蚣{米顆粒。寡核苷酸絡(luò)合劑和其用途進(jìn)ー步描述在美國專利No. 6，287，860中，其通過引用并入本文。用于腸胃外、鞘內(nèi)或心室內(nèi)施用的組合物和制劑可包括還可包含緩沖劑、稀釋劑
            
和其它適當(dāng)?shù)奶砑觿?諸如但不限于滲透促進(jìn)劑、載體化合物和其它藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑)的無菌水溶液。本發(fā)明的某些實施方案提供包含一種或多種寡聚化合物和通過非反義機制起作用的一種或多種其它化療劑的藥物組合物。這種化療劑的實例包括但不限于，癌癥化療藥物諸如柔紅霉素、道諾霉素、放線菌素、多柔比星、表柔比星、伊達(dá)比星、依索比星、博來霉素、馬磷酰胺、異環(huán)磷酰胺、阿糖胞苷、雙氯こ亞硝基脲、白消安、絲裂霉素C、放線菌素D、光神霉素、潑尼松、羥孕酮、睪酮、他莫昔芬、達(dá)卡巴嗪、丙卡巴肼、六甲蜜胺、五甲蜜胺、米托蒽醌、安吖啶、苯丁酸氮芥、甲基環(huán)己亞硝基脲、氮芥、美法侖、環(huán)磷酰胺、6-巰嘌呤、6-硫鳥嘌呤、阿糖胞苷、5-氮雜胞苷、羥基脲、脫氧柯福霉素、4-羥基過氧環(huán)磷酰胺、5-氟尿嘧啶(5-FU)、5-氟脫氧尿苷(5-FUdR)、甲氨蝶呤(MTX)、秋水仙堿、泰素、長春新堿、長春堿、依托泊苷(VP-16)、三甲曲沙、伊立替康、托泊替康、吉西他濱、替尼泊苷、順鉬和己烯雌酚(DES) 0當(dāng)與本發(fā)明的化合物一起使用時，這種化療劑可単獨地使用(如，5-FU和寡核苷酸)，順序地使用(如，5-FU和寡核苷酸持續(xù)一段時間，隨后是MTX和寡核苷酸)，或聯(lián)合一種或多種其它這種化療劑使用(如，5-FU、MTX和寡核苷酸，或5-FU、放療和寡核苷酸)。包括但不限于非留體藥物和皮質(zhì)激素的抗炎藥物，和抗病毒藥物，包括但不限于利巴韋林、阿糖腺苷、無環(huán)鳥苷和更昔洛韋，也可組合在本發(fā)明的組合物中。反義化合物與其它非反義藥物的組合也在本發(fā)明的范圍中。兩種或多種組合的化合物可一起或順序地使用。在另ー相關(guān)實施方案中，本發(fā)明的組合物可包含靶向第一核酸的一種或多種反義化合物，尤其是寡核苷酸，和靶向第二核酸靶的ー種或多種另外的反義化合物。例如，第一靶可以是聚絲蛋白(FLG)的特定反義序列，第二靶可以是來自另ー核苷酸序列的區(qū)域?？蛇x地，本發(fā)明的組合物可包含靶向同一聚絲蛋白(FLG)核酸靶的不同區(qū)域的兩種或多種反義化合物。本文闡述了反義化合物的許多實例，其它的可選自本領(lǐng)域已知的適當(dāng)?shù)幕衔铩煞N或多種組合的化合物可一起或順序地使用。給藥相信治療性組合物的配制和其隨后的施用(給藥)在本領(lǐng)域技術(shù)人員的能力范圍內(nèi)。給藥依賴于待治療的疾病狀態(tài)的嚴(yán)重度和響應(yīng)性，治療的時期持續(xù)數(shù)天到數(shù)月，或直到實現(xiàn)治愈或?qū)崿F(xiàn)疾病狀態(tài)的減少。最佳給藥計劃可從患者體內(nèi)藥物積累的測量來計算。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可容易地確定最佳劑量、給藥方法和重復(fù)率。最佳劑量可取決于單獨寡核苷酸的相對效カ而變化，通?？苫谠谟行У捏w外和體內(nèi)動物模型中有效的EC50來估算。通常，劑量是姆kg體重從0. 01 u g至IOOg,可姆天、姆周、姆月或姆年一次或多次,或甚至每2至20年一次地提供。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可基于測量的藥物在體液或組織中的停留時間和濃度容易地估算重復(fù)率。在成功治療之后，可能期望對患者進(jìn)行維持療法以阻止疾病狀態(tài)復(fù)發(fā)，其中寡核苷酸以維持劑量施用，范圍從每kg體重0. 01 ii g至100g，每天一次或多次，至每20年一次。在實施方案中，患者以至少約I、至少約2、至少約3、至少約4、至少約5、至少約6、至少約7、至少約8、至少約9、至少約10、至少約15、至少約20、至少約25、至少約30、至少約35、至少約40、至少約45、至少約50、至少約60、至少約70、至少約80、至少約90或至少約100mg/kg體重的藥物劑量治療。反義寡核苷酸的某些注射劑量描述于，如，美國專利No. 7，563，884 “Antisense modulation of PTPlB expression (PTP1B 表達(dá)的反義調(diào)節(jié))”,通過引用全文并入本文。盡管以上已經(jīng)描述了本發(fā)明多種實施方案，應(yīng)理解的是，它們僅以示例而非限制的方式呈現(xiàn)。可根據(jù)本公開內(nèi)容對公開的實施方案進(jìn)行多種改變而不偏離本發(fā)明的主旨或范圍。因此，本發(fā)明的寬度和范圍不應(yīng)限于任何上述的實施方案。本文提及的所有文件通過引用并入本文。本申請中提及的所有出版物和專利文件為了所有目的通過引用并入本文，其程度如同每個單獨出版物或?qū)＠募粎g獨地提及。通過在本文件中提及多個參考文獻(xiàn)，申請人不承認(rèn)任何特定參考文獻(xiàn)是本發(fā)明的"現(xiàn)有技木"。本發(fā)明組合物和方法的實施方案在以下實施例中闡述。
            
實施例以下非限制性實施例用于闡述本發(fā)明的選定實施方案。應(yīng)理解的是，所示組分的成分比例和其它選擇方面的改變對于本領(lǐng)域技術(shù)人員是明顯的，并且在本發(fā)明實施方案范圍中。實施例I :對與聚絲蛋白(FLG)反義的核酸分子和/或FLG多核苷酸的有義鏈有特異性的反義寡核苷酸的設(shè)計如上所述，術(shù)語"對...有特異性的寡核苷酸"或"寡核苷酸靶"是指具有(i)能夠與靶向基因的一部分形成穩(wěn)定雙鏈體，或(ii)能夠與靶基因的mRNA轉(zhuǎn)錄物的一部分形成穩(wěn)定雙鏈體的序列的寡核苷酸。通過利用自動比對核酸序列井指明同一性或同源性的區(qū)域的計算機程序來便于選擇適當(dāng)?shù)墓押塑账?。這種程序用來比較獲得的核酸序列，例如通過搜尋數(shù)據(jù)庫諸如GenBank或通過對PCR產(chǎn)物測序。比較來自一定范圍物種的核酸序列允許選擇在物種之間展示適當(dāng)?shù)耐恍猿潭鹊暮怂嵝蛄小Ｔ谖幢粶y序的基因的情形中，進(jìn)行Southern印跡以允許確定靶物種與其它物種的基因之間的同一性程度。如本領(lǐng)域已知的，通過以不同的嚴(yán)格性程度進(jìn)行Southern印跡，可能獲得近似的同一性測量。這些方案允許選擇展現(xiàn)與待控制的受治療者中的靶核酸序列的高程度互補性和與其它物種中的相應(yīng)核酸序列的較低程度互補性的寡核苷酸。本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識到，在選擇用于本發(fā)明的基因的適當(dāng)區(qū)域方面存在相當(dāng)大的自由。
            
當(dāng)反義化合物與靶核酸的結(jié)合干擾靶核酸的正常功能以導(dǎo)致功能和/或活性的調(diào)節(jié)時，該化合物是"可特異性雜交的"，且在期望特異性結(jié)合的條件下(即，在體內(nèi)測定或治療性治療的情形中的生理條件下，和在體外測定的情形中進(jìn)行測定的條件下)存在足夠程度的互補性以避免反義化合物與非靶核酸序列的非特異性結(jié)合。本文所述寡核苷酸的雜交特性可通過本領(lǐng)域已知的ー種或多種體外測定確定。例如，本文所述寡核苷酸的特性可利用解鏈曲線測定確定靶天然反義與可能的藥物分子之間的結(jié)合強度來獲得。靶天然反義與可能的藥物分子(分子)之間的結(jié)合強度可利用測量分子間相互作用強度的任何已建立的方法例如解鏈曲線測定來估算。對于天然反義/分子復(fù)合體，解鏈曲線測定確定雙鏈向單鏈構(gòu)象的快速轉(zhuǎn)變發(fā)生的溫度。這ー溫度被廣泛接受作為兩種分子之間相互作用強度的可靠量度。解鏈曲線測定可利用對應(yīng)分子結(jié)合位置的實際天然反義RNA分子或合成的DNA或RNA核苷酸的cDNA拷貝進(jìn)行。多種包含所有進(jìn)行這一測定所必需的試劑的試劑盒是可獲得的(如，Applied Biosystems Inc. MeltDoctor試劑盒)。這些試劑盒包括包含雙鏈DNA(dsDNA)結(jié)合染料之一(諸如ABI HRM染料，SYBR Green，SYT0，等等)的適當(dāng)?shù)木彌_溶液。dsDNA染料的特性是使得它們在自由形式幾乎不發(fā)出熒光，，但當(dāng)結(jié)合dsDNA時是高度突光的。為了進(jìn)行測定，將cDNA或相應(yīng)的寡核苷酸與具體制造商的說明書規(guī)定的濃度的分子混合。將混合物加熱到95°C以使所有預(yù)形成的dsDNA復(fù)合體解離，然后緩慢冷卻到室溫或試劑盒制造商規(guī)定的其它較低溫度以允許DNA分子退火。然后將新形成的復(fù)合體緩慢加熱到95°C，同時連續(xù)收集反應(yīng)產(chǎn)生的熒光的量的數(shù)據(jù)。熒光強度與反應(yīng)中存在的dsDNA的量成反比。數(shù)據(jù)可利用與試劑盒相容的實時PCR儀器(如ABI ’ s StepOne Plus實時PCR糸統(tǒng)LightTyper instrument, Roche Diagnostics, Lewes, UK)來收集。利用適當(dāng)?shù)能浖?例如LightTyper(Roche)或 SDS Dissociation Curve,ABI)將熒光相對于溫度的負(fù)導(dǎo)函數(shù)(y軸上的-d(熒光)/dT))對溫度(X軸)繪圖來構(gòu)造熔融峰。分析數(shù)據(jù)以確定dsDNA復(fù)合體向單鏈分子快速轉(zhuǎn)變的溫度。這ー溫度稱為Tm，與兩種分子之間相互作用的強度成正比。通常，Tm將超過40°C。實施例2 =FLG多核苷酸的調(diào)節(jié)以反義寡核苷酸處理HEPG2細(xì)胞在37 °C和5 % CO2下將來自ATCC (目錄號HB-8065)的H印G2細(xì)胞生長在生長培養(yǎng)基(MEM/EBSS(Hyclone 目錄號 SH30024，或 Mediatech 目錄號 MT-10-010-CV)+10 %FBS (Mediatech 目錄號 MT35-011-CV) + 青霉素/鏈霉素(Mediatech 目錄號 MT30-002-CI))中。在實驗當(dāng)天，將6孔板中的培養(yǎng)基更換為新鮮的生長培養(yǎng)基。將所有反義寡核苷酸稀釋到20 ii M的濃度。將此溶液的2 ill與400 ii IOpti-MEM培養(yǎng)基(Gibco目錄號31985-070)和 4 u I Lipofectamine2000 (Invitrogen 目錄號 11668019)在室溫下一起培養(yǎng) 20min,施加到帶有HEPG2細(xì)胞的6孔板的每個孔中。代替寡核苷酸溶液的包括2 u I水的類似混合物用于模擬轉(zhuǎn)染的對照。在37°C和5% CO2培養(yǎng)3-18h后，將培養(yǎng)基更換為新鮮的生長培養(yǎng)基。加入反義寡核苷酸48h后，去除培養(yǎng)基且利用來自Promega的SV總RNA分離系統(tǒng)(目錄號Z3105)或來自Qiagen的RNeasy總RNA分離試劑盒(目錄號74181)按照制造商的說明書從細(xì)胞提取RNA。將600ng RNA加入到利用來自Thermo Scientific的Verso cDNA試劑盒(目錄號AB1453B)或高容量cDNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(目錄號4368813)如制造商的說明書所述地進(jìn)行的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)中。來自這ー逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)的cDNA用于利用ABITaqman基因表達(dá)混合物(目錄號 4369510)和由 ABI (由 Applied Biosystems Inc.，F(xiàn)oster City CA的Applied Biosystems Taqman基因表達(dá)測定Hs00856927_gl)設(shè)計的引物/探針通過實時PCR監(jiān)控基因表達(dá)。利用Mx4000熱循環(huán)儀(Stratagene)使用以下PCR循環(huán)50°C持續(xù)2min、95°C持續(xù)10min、40個循環(huán)的(95°C持續(xù)15秒、60°C持續(xù)Imin)。以反義寡核苷酸處理后的基因表達(dá)倍數(shù)變化基于處理樣品和模擬轉(zhuǎn)染樣品之間18S-標(biāo)準(zhǔn)化的dCt值的差異來計算。結(jié)果實時PCR結(jié)果顯示，用針對FLGl反義AK056431設(shè)計的兩種寡核苷酸，IfepG2細(xì)胞中FLGl mRNA的水平顯著增加(圖I)。用反義寡核苷酸處理518A2細(xì)胞在37°C和 5% CO2 下將獲自 Albert Einstein-Montefiore Cancer Center,NY 的518A2細(xì)胞生長在生長培養(yǎng)基(MEM/EBSS(Hyclone目錄號SH30024，或Mediatech目錄號MT-IO-010-CV)+10% FBS (Mediatech 目錄號 MT35-011-CV) + 青霉素/鏈霉素(Mediatech目錄號MT30-002-CI))中。實驗前一天，將細(xì)胞以I. 5X 105/ml的密度重新鋪板到6孔板中，在37°C和5% CO2下培養(yǎng)。在實驗當(dāng)天，將6孔板中的培養(yǎng)基更換成新鮮的生長培養(yǎng)基。將所有反義寡核苷酸稀釋到20 ii M的濃度。將此溶液的2 ill與400 ill Opti-MEM培養(yǎng)基(Gibco 目錄號 31985-070)和 4 y I Lipofectamine 2000 (Invitrogen 目錄號 11668019)在室溫下一起培養(yǎng)20min，施加到帶有518A2細(xì)胞的6孔板的每個孔中。代替寡核苷酸溶液的包括2 u I水的類似混合物用于模擬轉(zhuǎn)染的對照。在37°C和5% CO2培養(yǎng)3-18h后，將培養(yǎng)基更換為新鮮的生長培養(yǎng)基。加入反義寡核苷酸48h后，去除培養(yǎng)基且利用來自Promega的SV總RNA分離系統(tǒng)(目錄號Z3105)或來自Qiagen的RNeasy總RNA分離試劑盒(目錄號74181)按照制造商的說明書從細(xì)胞提取RNA。將600ng RNA加入到利用來自ThermoScientific的Verso cDNA試劑盒(目錄號AB1453B)或高容量cDNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(目錄號4368813)如制造商的說明書所述地進(jìn)行的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)中。來自這ー逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)的cDNA用于利用ABI Taqman基因表達(dá)混合物(目錄號4369510)和由ABI (由Applied BiosystemsInc. , Foster City CA 進(jìn)行的 Applied Biosystems Taqman 基因表達(dá)測定Hs00856927_gl)設(shè)計的引物/探針通過實時PCR監(jiān)控基因表達(dá)。利用St印One Plus Real Time PCRMachine (Applied Biosystems)使用以下 PCR 循環(huán)50°C持續(xù) 2min、95°C持續(xù) 10min、40 個循環(huán)的(95°C持續(xù)15秒、60°C持續(xù)lmin)。以反義寡核苷酸處理后的基因表達(dá)倍數(shù)變化基于處理樣品和模擬轉(zhuǎn)染樣品之間18S-標(biāo)準(zhǔn)化的dCt值的差異來計算。結(jié)果實時PCR結(jié)果顯示，用針對FLGl反義AK056431設(shè)計的兩種寡核苷酸，518A2細(xì)胞中FLGl mRNA的水平顯著增加(圖2)。另ー組實時PCR結(jié)果顯示，用針對FLGl反義AK056431設(shè)計的兩種寡核苷酸，518A2細(xì)胞中FLG mRNA的水平顯著增加(圖3)。實施例3 =FLG表達(dá)和活性的調(diào)節(jié)用小分子化合物處理518A2細(xì)胞在37°C和5% CO2下將518A2細(xì)胞生長在生長培養(yǎng)基[DMEM(Mediatech目錄號10-013-CV) +5% FBS(Mediatech 目錄號MT35-011-CV) +青霉素/鏈霉素(Mediatech 目錄號MT30-002-CI)]中。實驗前一天，將細(xì)胞以I XlOVml (或者由90%匯合，約1/5稀釋)的密度重新鋪板到6孔板中，在37°C和5% CO2下培養(yǎng)過夜。在實驗當(dāng)天，將6孔板中的培養(yǎng)基更換成2ml新鮮的生長培養(yǎng)基。將小分子化合物在DMSO中稀釋到1000 u M的濃度。在實驗當(dāng)天，用新鮮生長培養(yǎng)基將該溶液稀釋I : 100。以相同比例(I  100)用培養(yǎng)基稀釋純DMSO以處理媒介物對照樣品。對每孔進(jìn)行給藥，將200ul該化合物或純DMSO溶液直接施加到6孔板的孔中。化合物的終濃度為1UM。若需要不同濃度的化合物，則調(diào)整給藥體積。給藥后，將板置于37°C、5% CO2下培養(yǎng)過夜。加入小分子化合物24h后，將培養(yǎng)基更換為新鮮的生長培養(yǎng)基，如上所述那樣重復(fù)進(jìn)行給藥。在第二次給藥24h后，利用來自Promega的SV總RNA分離系統(tǒng)(目錄號Z3105)按照制造商的說明書從細(xì)胞提取RNA。將600ng總RNA加入到利用來自Applied Biosystems的高容量cDNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(目錄號4368813)如制造商的說明書所述地進(jìn)行的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)中。來自這ー逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)的cDNA用于利用ABITaqman基因表達(dá)混合物(目錄號4369510)和由ABI (例如測定FLG的ID#Hs00856927_gl)
            
設(shè)計的引物/探針通過實時PCR監(jiān)控基因表達(dá)。利用St印One熱循環(huán)儀(ABI)使用以下PCR循環(huán)50°C持續(xù)2min、95°C持續(xù)10min、40個循環(huán)的(95°C持續(xù)15秒、60°C持續(xù)lmin)。用于標(biāo)準(zhǔn)化mRNA水平的18S的測定由ABI (目錄號4319413E)制造。以小分子化合物處理后的基因表達(dá)倍數(shù)變化基于處理樣品和模擬轉(zhuǎn)染樣品之間18S-標(biāo)準(zhǔn)化的dCt值的差異來計算。結(jié)果實時PCR結(jié)果顯示，用小分子化合物處理后，518A2細(xì)胞中聚絲蛋白mRNA表達(dá)的倍數(shù)變化(圖4)。用小分子化合物處理原代角質(zhì)形成細(xì)胞在37°C和5% CO2下將原代角質(zhì)形成細(xì)胞(獲自Promocell)生長在生長培養(yǎng)基(Keratinocyte Growth Media, Promocell 目錄號 C-20011)中。實驗前一天，將細(xì)胞以5X 104/ml (或者由90%匯合，約1/3稀釋)的密度重新鋪板到包被有膠原的24孔板中(Beckton Dickinson BioCoat plates 目錄號 356408)，在 37°C、5% CO2 下培養(yǎng)過夜。在實驗當(dāng)天，將24孔板中的培養(yǎng)基更換成Iml新鮮的生長培養(yǎng)基。將小分子化合物在DMSO中稀釋到1000 PM的濃度。在實驗當(dāng)天，用新鮮生長培養(yǎng)基將該溶液稀釋I :100。以相同比例(I  100)用培養(yǎng)基稀釋純DMSO以處理媒介物對照樣品。對每孔進(jìn)行給藥，將IOOul該化合物或純DMSO溶液直接施加到24孔板的孔中。化合物的終濃度為I U M0若需要不同濃度的化合物，則調(diào)整給藥體積。給藥后，將板置于37°C、5% CJ下培養(yǎng)過夜。加入小分子化合物24h后，將培養(yǎng)基更換為新鮮的生長培養(yǎng)基，如上所述那樣重復(fù)進(jìn)行給藥。在第二次給藥24h后,利用來自Promega的SV總RNA分離系統(tǒng)(目錄號Z3105)按照制造商的說明書從細(xì)胞提取RNA。將600ng總RNA加入到利用來自Applied Biosystems的高容量cDNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(目錄號4368813)如制造商的說明書所述地進(jìn)行的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)中。來自這ー逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)的cDNA用于利用ABI Taqman基因表達(dá)混合物(目錄號4369510)和由ABI (例如測定FLG的ID#Hs00856927_gl)設(shè)計的引物/探針通過實時PCR監(jiān)控基因表達(dá)。利用St印One熱循環(huán)儀(ABI)使用以下PCR循環(huán)50°C持續(xù)2min、95°C持續(xù)10min、40個循環(huán)的(95°C持續(xù)15秒、60°C持續(xù)lmin)。用于標(biāo)準(zhǔn)化mRNA水平的18S的測定由ABI (目錄號4319413E)制造。以小分子化合物處理后的基因表達(dá)倍數(shù)變化基于處理樣品和模擬轉(zhuǎn)染樣品之間18S-標(biāo)準(zhǔn)化的dCt值的差異來計算。結(jié)果實時PCR結(jié)果顯示，用小分子化合物處理后的原代角質(zhì)形成細(xì)胞中聚絲蛋白mRNA表達(dá)的倍數(shù)變化(圖4)。另ー組實時PCR結(jié)果顯示，用小分子化合物安非他酮、貝尼地平和托吡酯處理后，原代角質(zhì)形成細(xì)胞的FLG天然反義轉(zhuǎn)錄物水平顯著降低(圖5)。盡管已經(jīng)參照一種或多種實現(xiàn)來說明和描述了本發(fā)明，本領(lǐng)域技術(shù)人員在閱讀和理解說明書和附圖后將進(jìn)行等價的改變和修飾。此外，盡管僅關(guān)于多種實現(xiàn)之一公開了本發(fā)明的特定特征，這種特征可如所需地與其它實現(xiàn)的一種或多種其它特征聯(lián)合，如對于任何給定或特定應(yīng)用可能是期望和有利的。本公開內(nèi)容的摘要將允許閱讀者快速地確定技術(shù)公開內(nèi)容的性質(zhì)。提交其應(yīng)理解的是，其將不用于解釋或限制所附權(quán)利要求書的范圍或含義。
            
權(quán)利要求
            
1.一種體內(nèi)或體外調(diào)節(jié)患者細(xì)胞或組織中聚絲蛋白(FLG)多核苷酸的功能和/或表達(dá)的方法，所述方法包括  將所述細(xì)胞或組織與長度為5至30個核苷酸的至少一種反義寡核苷酸接觸，其中所述至少一種寡核苷酸與包括SEQ ID NO 2的核苷酸I至4629中的5至30個連續(xù)核苷酸的多核苷酸的反向互補序列具有至少50%序列同一性；從而體內(nèi)或體外調(diào)節(jié)患者細(xì)胞或組織中聚絲蛋白(FLG)多核苷酸的功能和/或表達(dá)。
            
2.—種體內(nèi)或體外調(diào)節(jié)患者細(xì)胞或組織中聚絲蛋白(FLG)多核苷酸的功能和/或表達(dá)的方法，所述方法包括  將所述細(xì)胞或組織與長度為5至30個核苷酸的至少一種反義寡核苷酸接觸，其中所述至少一種寡核苷酸與聚絲蛋白(FLG)多核苷酸的天然反義的反向互補序列具有至少50%序列同一性；從而體內(nèi)或體外調(diào)節(jié)患者細(xì)胞或組織中聚絲蛋白(FLG)多核苷酸的功能和/或表達(dá)。
            
3.一種體內(nèi)或體外調(diào)節(jié)患者細(xì)胞或組織中聚絲蛋白(FLG)多核苷酸的功能和/或表達(dá)的方法，所述方法包括  將所述細(xì)胞或組織與長度為5至30個核苷酸的至少一種反義寡核苷酸接觸，其中所述寡核苷酸與聚絲蛋白(FLG)多核苷酸的反義寡核苷酸具有至少50%序列同一丨丨生；從而體內(nèi)或體外調(diào)節(jié)患者細(xì)胞或組織中聚絲蛋白(FLG)多核苷酸的功能和/或表達(dá)。
            
4.一種體內(nèi)或體外調(diào)節(jié)患者細(xì)胞或組織中聚絲蛋白(FLG)多核苷酸的功能和/或表達(dá)的方法，所述方法包括  將所述細(xì)胞或組織與靶向聚絲蛋白(FLG)多核苷酸的天然反義寡核苷酸的區(qū)域的至少一種反義寡核苷酸接觸；從而體內(nèi)或體外調(diào)節(jié)患者細(xì)胞或組織中聚絲蛋白(FLG)多核苷酸的功能和/或表達(dá)。
            
5.如權(quán)利要求4所述的方法，其中聚絲蛋白(FLG)的功能和/或表達(dá)相對于對照體內(nèi)或體外增加。
            
6.如權(quán)利要求4所述的方法，其中所述至少一種反義寡核苷酸靶向聚絲蛋白(FLG)多核苷酸的天然反義序列。
            
7.如權(quán)利要求4所述的方法，其中所述至少一種反義寡核苷酸靶向包括聚絲蛋白(FLG)多核苷酸的編碼核酸序列和/或非編碼核酸序列的核酸序列。
            
8.如權(quán)利要求4所述的方法，其中所述至少一種反義寡核苷酸靶向聚絲蛋白(FLG)多核苷酸的重疊序列和/或非重疊序列。
            
9.如權(quán)利要求4所述的方法，其中所述至少一種反義寡核苷酸包括選自以下的一種或多種修飾至少一種修飾的糖部分、至少一種修飾的核苷間鍵合、至少一種修飾的核苷酸、和其組合。
            
10.如權(quán)利要求9所述的方法，其中所述一種或多種修飾包括選自以下的至少一種修飾的糖部分2' -O-甲氧乙基修飾的糖部分、2'-甲氧基修飾的糖部分、2' -0-烷基修飾的糖部分、二環(huán)的糖部分、和其組合。
            
11.如權(quán)利要求9所述的方法，其中所述一種或多種修飾包括選自以下的至少一種修飾的核苷間鍵合硫代磷酸酯、2' -0甲氧乙基(MOE)、2'-氟、膦酸烷基酯、二硫代磷酸酯、烷基硫代膦酸酯、氨基磷酸酯、氨基甲酸酯、碳酸酯、磷酸三酯、乙酰胺酯、羧甲基酯、和其組合。
            
12.如權(quán)利要求9所述的方法，其中所述一種或多種修飾包括選自以下的至少一種修飾的核苷酸肽核酸(PNA)、鎖核酸(LNA)、阿拉伯糖-核酸(FANA)、類似物、衍生物、和其組合。
            
13.如權(quán)利要求I所述的方法，其中所述至少一種寡核苷酸包括如SEQID N0:3至13所列的至少一種寡核苷酸序列。
            
14.一種體內(nèi)或體外調(diào)節(jié)哺乳動物細(xì)胞或組織中聚絲蛋白(FLG)基因的功能和/或表達(dá)的方法，所述方法包括  將所述細(xì)胞或組織與長度為5至30個核苷酸的至少一種短干擾RNA (siRNA)寡核苷酸接觸，所述至少一種siRNA寡核苷酸是對聚絲蛋白(FLG)多核苷酸的反義多核苷酸有特異性的，其中所述至少一種siRNA寡核苷酸與聚絲蛋白(FLG)多核苷酸的反義核酸分子和/或有義核酸分子的至少約五個連續(xù)核酸的互補序列具有至少50%序列同一性；以及，體內(nèi)或體外調(diào)節(jié)哺乳動物細(xì)胞或組織中聚絲蛋白(FLG)的功能和/或表達(dá)。
            
15.如權(quán)利要求14所述的方法，其中所述寡核苷酸與聚絲蛋白(FLG)多核苷酸的反義核酸分子和/或有義核酸分子互補的至少約五個連續(xù)核酸的序列具有至少80%序列同一性。
            
16.一種體內(nèi)或體外調(diào)節(jié)哺乳動物細(xì)胞或組織中聚絲蛋白(FLG)的功能和/或表達(dá)的方法，所述方法包括  將所述細(xì)胞或組織與長度為5至30個核苷酸的至少一種反義寡核苷酸接觸，所述至少一種反義寡核苷酸是對聚絲蛋白(FLG)多核苷酸的有義和/或天然反義鏈的非編碼序列和/或編碼序列特異性的，其中所述至少一種反義寡核苷酸與如SEQ ID NO :1和2所列的至少一種核酸序列具有至少50%序列同一性；以及，體內(nèi)或體外調(diào)節(jié)哺乳動物細(xì)胞或組織中聚絲蛋白(FLG)的功能和/或表達(dá)。
            
17.一種合成的、修飾的寡核苷酸，所述寡核苷酸包括至少一種修飾，其中所述至少一種修飾選自至少一種修飾的糖部分；至少一種修飾的核苷酸間鍵合；至少一種修飾的核苷酸、和其組合；其中所述寡核苷酸是與聚絲蛋白(FLG)基因雜交并與正常對照相比體內(nèi)或體外調(diào)節(jié)其功能和/或表達(dá)的反義化合物。
            
18.如權(quán)利要求17所述的寡核苷酸，其中所述至少一種修飾包括選自以下組成的組的核苷酸間鍵合硫代磷酸酯、膦酸烷基酯、二硫代磷酸酯、烷基硫代膦酸酯、氨基磷酸酯、氨基甲酸酯、碳酸酯、磷酸三酯、乙酰胺酯、羧甲基酯、和其組合。
            
19.如權(quán)利要求17所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包括至少一種硫代磷酸酯核苷酸間鍵合。
            
20.如權(quán)利要求17所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包括硫代磷酸酯核苷酸間鍵合的主鏈。
            
21.如權(quán)利要求17所述的寡核苷酸,其中所述寡核苷酸包括至少一種修飾的核苷酸，所述修飾的核苷酸選自肽核酸、鎖核酸(LNA)、類似物、衍生物、和其組合。
            
22.如權(quán)利要求17所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包括多個修飾，其中所述修飾包括選自以下的修飾的核苷酸硫代磷酸酯、膦酸烷基酯、二硫代磷酸酯、烷基硫代膦酸酯、 氨基磷酸酯、氨基甲酸酯、碳酸酯、磷酸三酯、乙酰胺酯、羧甲基酯、和其組合。
            
23.如權(quán)利要求17所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包括多個修飾，其中所述修飾包括選自以下的修飾的核苷酸肽核酸、鎖核酸(LNA)、類似物、衍生物、和其組合。
            
24.如權(quán)利要求17所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包括選自以下的至少一種修飾的糖部分2' -O-甲氧乙基修飾的糖部分、2'-甲氧基修飾的糖部分、2' -0-烷基修飾的糖部分、二環(huán)的糖部分、和其組合。
            
25.如權(quán)利要求17所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包括多個修飾，其中所述修飾包括選自以下的修飾的糖部分2' -0-甲氧乙基修飾的糖部分、2'-甲氧基修飾的糖部分、2' -0-烷基修飾的糖部分、二環(huán)的糖部分、和其組合。
            
26.如權(quán)利要求17所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸長度為至少約5至30個核苷酸并與聚絲蛋白(FLG)多核苷酸的反義和/或有義鏈雜交，其中所述寡核苷酸與聚絲蛋白(FLG)多核苷酸的反義和/或有義編碼和/或非編碼核酸序列的至少約五個連續(xù)核酸的互補序列具有至少約20%序列同一性。
            
27.如權(quán)利要求17所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸與聚絲蛋白(FLG)多核苷酸的反義和/或有義編碼和/或非編碼核酸序列的至少約五個連續(xù)核酸的互補序列具有至少約80%序列同一性。
            
28.如權(quán)利要求17所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸與至少一種聚絲蛋白(FLG)多核苷酸雜交并與正常對照相比體內(nèi)或體外調(diào)節(jié)其表達(dá)和/或功能。
            
29.如權(quán)利要求17所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包括如SEQID NO :3至13所列的序列。
            
30.一種組合物，所述組合物包括對一種或多種聚絲蛋白(FLG)多核苷酸有特異性的一種或多種寡核苷酸，所述多核苷酸包括反義序列、互補序列、等位基因、同系物、同種型、變體、衍生物、突變體、片段、或其組合。
            
31.如權(quán)利要求30所述的組合物，其中所述組合物進(jìn)一步包括一種或多種FLG調(diào)節(jié)分子和藥學(xué)上可接受的載體。
            
32.如權(quán)利要求31所述的組合物，其中所述分子選自吡格列酮、洛美利嗪、安非他酮、苯丙氨酯、貝尼地平、吡羅昔康、托吡酯、伊拉地平、尼可地爾、吡貝地爾、奧沙普秦、格隆溴銨、格拉司瓊、美金剛胺、尼莫地平和氨氯地平。
            
33.如權(quán)利要求30所述的組合物，其中所述寡核苷酸與如SEQIDNO 3至13所列的任一種核苷酸序列相比具有至少約40%序列同一性。
            
34.如權(quán)利要求30所述的組合物，其中所述寡核苷酸包括如SEQIDNO :3至13所列的核苷酸序列。
            
35.如權(quán)利要求34所述的組合物，其中如SEQID NO 3至13所列的寡核苷酸包括一種或多種修飾或取代。
            
36.如權(quán)利要求35所述的組合物，其中所述一種或多種修飾選自硫代磷酸酯、膦酸甲酯、肽核酸、鎖核酸(LNA)分子、和其組合。
            
37.一種用于治療皮膚病學(xué)疾病或病癥的組合物,所述組合物包括一種或多種FLG調(diào)節(jié)分子和藥學(xué)上可接受的載體。
            
38.如權(quán)利要求37所述的組合物，其中所述化合物選自吡格列酮、洛美利嗪、安非他酮、苯丙氨酯、貝尼地平、吡羅昔康、托吡酯、伊拉地平、尼可地爾、吡貝地爾、奧沙普秦、格隆溴銨、格拉司瓊、美金剛胺、尼莫地平和氨氯地平。
            
39.如權(quán)利要求37所述的組合物，其中所述組合物進(jìn)一步包括一種調(diào)節(jié)FLG表達(dá)或活性的反義寡核苷酸。
            
40.如權(quán)利要求37所述的組合物，其中所述組合物進(jìn)一步包括聚絲蛋白天然反義序列的一種反義寡核苷酸，其中所述反義寡核苷酸在受治療者中調(diào)節(jié)FLG表達(dá)。
            
41.如權(quán)利要求40所述的組合物，其中所述寡核苷酸包括如SEQIDNO 3至13所列的核苷酸序列。
            
42.如權(quán)利要求40所述的組合物，其中所述如SEQID NO :3至13所列的寡核苷酸包括一種或多種修飾或取代。
            
43.一種預(yù)防或治療至少一種聚絲蛋白(FLG)多核苷酸和/或其至少一種編碼產(chǎn)物相關(guān)的疾病的方法，所述方法包括  向患者施用治療有效劑量的結(jié)合所述至少一種聚絲蛋白(FLG)多核苷酸的天然反義序列并調(diào)節(jié)所述至少一種聚絲蛋白(FLG)多核苷酸的表達(dá)的至少一種反義寡核苷酸；從而預(yù)防或治療至少一種聚絲蛋白(FLG)多核苷酸和/或其至少一種編碼產(chǎn)物相關(guān)的疾病。
            
44.如權(quán)利要求43所述的方法，其中至少一種聚絲蛋白(FLG)多核苷酸相關(guān)的疾病選自=FLG的異常功能和/或表達(dá)相關(guān)的疾病或病癥、皮膚病學(xué)疾病或病癥、皮膚衰老的體征、由于外部侵害所導(dǎo)致的皮膚狀況、過敏癥、牛皮癬、哮喘、濕疹、花粉熱、尋常型魚鱗病、異位性皮炎(AD)、皰疹樣濕疹、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、心血管疾病或病癥、癌癥、炎癥性疾病、免疫介導(dǎo)性疾病或病癥、免疫力過高性或免疫力低下性疾病或病癥、自身免疫疾病或病癥、哮喘、牛皮癬、過敏癥(例如過敏性鼻炎、接觸型過敏癥、食物過敏癥等)、乳糜瀉、神經(jīng)病學(xué)疾病或病癥、神經(jīng)退行性疾病或病癥(例如阿爾茨海默氏病、帕金森病、ALS等)、AIDS消瘦癥、與皮膚屏障功能相關(guān)的疾病或病癥、慢性炎癥性皮膚病、臨床性干性皮膚。
            
45.一種鑒定和選擇用于體內(nèi)施用的至少一種寡核苷酸的方法，所述方法包括選擇與疾病狀態(tài)相關(guān)的靶多核苷酸；鑒定包括與所選靶多核苷酸或與所選靶多核苷酸的反義多核苷酸互補的至少五個連續(xù)核苷酸的至少一種寡核苷酸；測量反義寡核苷酸和所述靶多核苷酸或與所選靶多核苷酸反義的多核苷酸在嚴(yán)格雜交條件下的雜合體的熱熔點；和基于所獲得的信息選擇用于體內(nèi)施用的至少一種寡核苷酸。
            
46.—種治療受治療者的FLG相關(guān)的疾病或病癥的方法,所述方法包括向所述受治療者施用組合物，所述組合物包括一種或多種FLG調(diào)節(jié)分子和藥學(xué)上可接受的載體。
            
47.如權(quán)利要求46所述的方法，其中所述化合物選自吡格列酮、洛美利嗪、安非他酮、苯丙氨酯、貝尼地平、吡羅昔康、托吡酯、伊拉地平、尼可地爾、吡貝地爾、奧沙普秦、格隆溴銨、格拉司瓊、美金剛胺、尼莫地平和氨氯地平。
            
48.如權(quán)利要求46所述的方法，其中所述組合物進(jìn)一步包括調(diào)節(jié)FLG表達(dá)或活性的反義寡核苷酸。
            
49.如權(quán)利要求46所述的方法，其中所述組合物進(jìn)一步包括聚絲蛋白天然反義序列的一種反義寡核苷酸，其中所述反義寡核苷酸在受治療者中調(diào)節(jié)FLG表達(dá)。
            
50.如權(quán)利要求46所述的方法，其中至少一種聚絲蛋白多核苷酸相關(guān)的疾病選自皮膚病學(xué)疾病或病癥、皮膚衰老的體征、由于外部侵害所導(dǎo)致的皮膚狀況、過敏癥、牛皮癬、哮喘、濕疹、花粉熱、尋常型魚鱗病、異位性皮炎(AD)、皰疹樣濕疹、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、心血管疾病或病癥、癌癥、炎癥性疾病、免疫介導(dǎo)性疾病或病癥、免疫力過高性或免疫力低下性疾病或病癥、自身免疫疾病或病癥、哮喘、牛皮癬、過敏癥(例如過敏性鼻炎、接觸型過敏癥、食物過敏癥等)、乳糜瀉、神經(jīng)病學(xué)疾病或病癥、神經(jīng)退行性疾病或病癥(例如阿爾茨海默氏病、帕金森病、ALS等)、AIDS消瘦癥、與皮膚屏障功能相關(guān)的疾病或病癥、慢性炎癥性皮膚病、臨床性干性皮膚。
            
51.一種預(yù)防或治療至少一種聚絲蛋白(FLG)多核苷酸和/或其至少一種編碼產(chǎn)物相關(guān)的皮膚狀況的方法，所述方法包括向具有皮膚狀況或有發(fā)展成皮膚狀況的風(fēng)險的患者施用治療有效劑量的聚絲蛋白上調(diào)化合物、至少一種結(jié)合于所述至少一種聚絲蛋白(FLG)多核苷酸的天然反義序列并調(diào)節(jié)所述至少一種聚絲蛋白(FLG)多核苷酸的表達(dá)的反義寡核苷酸和藥學(xué)上可接受的載體；從而預(yù)防或治療與至少一種聚絲蛋白(FLG)多核苷酸和/或其至少一種編碼產(chǎn)物相關(guān)的疾病皮膚狀況。
            
52.如權(quán)利要求51所述的方法，其中所述化合物選自吡格列酮、洛美利嗪、安非他酮、苯丙氨酯、貝尼地平、吡羅昔康、托吡酯、伊拉地平、尼可地爾、吡貝地爾、奧沙普秦、格隆溴銨、格拉司瓊、美金剛胺、尼莫地平和氨氯地平。
            
53.如權(quán)利要求51所述的方法，其中所述皮膚狀況是由炎癥、光損傷和衰老導(dǎo)致的。
            
54.如權(quán)利要求51所述的方法，其中所述皮膚狀況為起皺紋、接觸性皮炎、異位性皮炎、光化性角化病、角質(zhì)化病癥、大皰性表皮松解癥、剝脫性皮炎、脂溢性皮炎、紅斑、盤狀紅斑狼瘡、皮肌炎、皮膚癌或自然裳老效應(yīng)。
            
55.如權(quán)利要求30所述的組合物在制造用于治療皮膚病學(xué)疾病或病癥的藥物中的用途。
            
56.如權(quán)利要求55所述的用途，其中所述組合物進(jìn)一步包括一種調(diào)節(jié)FLG表達(dá)或活性的反義寡核苷酸。
            
57.如權(quán)利要求55所述的用途，其中所述組合物進(jìn)一步包括聚絲蛋白天然反義序列的一種反義寡核苷酸，其中所述反義寡核苷酸在受治療者中調(diào)節(jié)FLG表達(dá)。
            
58.如權(quán)利要求55所述的用途，其中所述化合物選自吡格列酮、洛美利嗪、安非他酮、苯丙氨酯、貝尼地平、吡羅昔康、托吡酯、伊拉地平、尼可地爾、吡貝地爾、奧沙普秦、格隆溴銨、格拉司瓊、美金剛胺、尼莫地平和氨氯地平。
            
59.如權(quán)利要求55所述的用途，其中所述皮膚病學(xué)疾病或病癥為起皺紋、接觸性皮炎、異位性皮炎、光化性角化病、角質(zhì)化病癥、大皰性表皮松解癥、剝脫性皮炎、脂溢性皮炎、紅斑、盤狀紅斑狼瘡、皮肌炎、皮膚癌或自然衰老效應(yīng)。
            
全文摘要
            
本發(fā)明涉及調(diào)節(jié)聚絲蛋白(FLG)的表達(dá)和/或功能的反義寡核苷酸和/或化合物，尤其是，通過靶向聚絲蛋白(FLG)的天然反義多核苷酸。本發(fā)明還涉及這些反義寡核苷酸和/或化合物的鑒定以及它們在治療FLG表達(dá)相關(guān)的疾病和病癥中的用途。
            
文檔編號C12N15/63GK102791861SQ201080044917 
            
公開日2012年11月21日 申請日期2010年9月24日 優(yōu)先權(quán)日2009年9月25日
            
發(fā)明者C·科伊托, J·克拉德, O·霍克瓦舍曼 申請人:OPKOCuRNA公司
            


                        
            
                        
            
                        
            
                            
                        
            

                        
                            
                    
            
                    
                    


                     
                        
                        
                    

                
            

                
                
            
                    
            
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