專利名稱：乳桿菌屬乳酸菌的增殖促進劑和/或存活性提高劑的制作方法
技術領域：
本發明涉及乳桿菌屬乳酸菌的增殖促進劑和/或存活性提高劑，其以κ -酪蛋白糖巨肽(κ -caseinoglycomacropeptide)含有物作為有效成分。相關技術能夠引起消化道內的細菌菌群改善等對宿主有益的作用的有用微生物稱為益生菌而受到關注。作為這樣的有用微生物之一的是乳酸菌。最近，盛行對乳酸菌的功能性研究，也在開發利用該乳酸菌而加進了新穎功能性的商品。作為這樣的乳酸菌，可以例舉乳桿菌屬(Lactobacillus)乳酸菌等。作為乳酸菌的經口攝入方法，存在各種各樣的食品形式。在以發酵乳等為代表的發酵食品中，變成低PH環境，從而對乳酸菌的增殖及生存不合適的情形也是多的。在食品中促進乳酸菌的增殖或提高其存活性對于乳酸菌具有上述那樣的益生菌功能的情形而言， 是對預防醫學的巨大貢獻。關于促進食品中的乳酸菌增殖和/或提高其存活性，提出了若干方法。文獻 (R.I.Dave 等(R.I.Dave 禾口 N. P. Shah) , “ Ingredient Supplementation Effects on Viability of Probiotic Bacteria in Yogurt”，J. Dairy Sci 81,2804-2816(1998))中報道了通過添加半胱氨酸、乳清粉末、WPC、酪蛋白水合物、或胰蛋白胨，在保存含有雙歧桿菌和/或嗜酸菌的酸乳時改善了對于這些細菌數的維持。另外，文獻(R.I. Dave 等(Rajiv I. Dave 和 Negendra P. Shah)，"Effectiveness of Ascorbic Acid as an Oxygen Scavenger in Improving Viability of Probiotic bacteria in Yoghurts Made with Commercial Starter Cultures，，，Int. Dairy Journal 7,435-443(1997))中報道了通過添加作為活性氧除去劑的抗壞血酸，改善了益生菌(嗜酸菌)的細菌數消長。另一方面，在日本專利第3447358號公報中公開了作為“乳酸菌存活性提高劑” 的、通過對乳或乳材料(例如，〃夕一力一，△、酪乳)進行特定的處理而獲得的含有特定量脂質的物質。具體而言，公開了將所述提高劑添加至乳酸菌的培養基中使用。另外，特開2007-097447號公報公開了改善雙歧桿菌存活性的方法，其特征在于， 使用丙酸菌和/或具有萘醌環的化合物產生菌的培養物、溶劑提取物和/或其處理物。具體而言，公開了丙酸菌產生促進雙歧桿菌增殖的物質。在現有技術中，通過添加乳蛋白質和/或活性氧除去劑等來改良微生物的存活性。但是，這些物質對酸乳的風味和/或物性的影響是大的，限制了其使用。特別地，作為抗氧化劑的活性氧除去劑，由于通過自氧化發揮效果，如果不使用相當量，則不能期待其效果的持續性。另外，對于乳或乳材料，有必要進行特定的處理，因此其制備是麻煩的、甚至是引起成本提高的。雖然已知κ -酪蛋白糖巨肽具有雙歧桿菌的增殖促進效果，但是對其作用機制還不清楚。而且，就本發明者們所知，迄今完全不知道κ-酪蛋白糖巨肽具有乳酸菌的增殖促進效果和/或存活性提高效果。發明概述本發明者們此次實驗研究了，不影響含有乳桿菌屬乳酸菌的食品組合物的風味和 /或物性，且促進該食品組合物中含有的該乳酸菌的增殖且提高其存活性的方法。結果表明，通過使用源自乳的材料，即κ-酪蛋白糖巨肽，在不影響含有乳桿菌屬乳酸菌的食品組合物的風味和/或物性下，成功地促進了該乳酸菌的增殖和提高了其存活性。進一步獲知了在這種情況下，效果的持續性高且優異，在食品組合物的保存中也能夠維持其品質。本發明基于這些見解。現有的抗氧化劑等存活性提高劑，由于是通過自氧化而發揮效果的，因此缺乏效果的持續性。另外，對風味和/或物性存在不希望有的影響。與現有技術中通過添加抗氧化劑等而提高乳酸菌的存活性和/或活力的方法完全不同，本發明提供了新的觀點。因此，根據本發明，其目的在于提供乳桿菌屬乳酸菌的增殖促進劑和/或存活性提高劑，所述增殖促進劑和/或存活性提高劑不影響含有乳桿菌屬乳酸菌的食品組合物的風味和/或物性、能促進該乳酸菌的增殖且能提高其存活性、而且效果的持續性優異，在食品保存中能夠對品質維持有貢獻。即，根據本發明，提供了以下發明。[1]乳桿菌屬乳酸菌的增殖促進劑和/或存活性提高劑，其含有κ -酪蛋白糖巨肽作為有效成分。[2]上述[1]中所述的乳桿菌屬乳酸菌的增殖促進劑和/或存活性提高劑，其中乳桿菌屬乳酸菌屬于格氏乳桿菌(Lactobacillus gasseri)種。[3]上述[1]或[2]中所述的乳桿菌屬乳酸菌的增殖促進劑和/或存活性提高劑， 其中乳桿菌屬乳酸菌是選自格氏乳桿菌0LL2716株和格氏乳桿菌0LU959株的1種以上的菌種。[4]促進含有乳桿菌屬乳酸菌的組合物中的乳桿菌屬乳酸菌增殖和/或提高其存活性的方法，特征在于，將上述[1] [3]中任一項所述的乳桿菌屬乳酸菌的增殖促進劑和 /或存活性提高劑添加至含有乳桿菌屬乳酸菌的組合物。[5]上述[4]所述的方法，所述方法包括在發酵上述含有乳酸菌的組合物之前，將上述的乳酸菌增殖促進劑和/或存活性提高劑添加至上述含有乳酸菌的組合物。[6]食品組合物，其包含上述[1] [3]中任一項所述的乳桿菌屬乳酸菌的增殖促進劑和/或存活性提高劑、以及乳桿菌屬乳酸菌。[7] κ -酪蛋白糖巨肽的用途，用于促進含有乳桿菌屬乳酸菌的組合物中的乳桿菌屬乳酸菌增殖和/或提高存活性。本發明的乳桿菌屬乳酸菌增殖促進劑和/或存活性提高劑通過使用κ -酪蛋白糖巨肽，能夠促進食品或食品組合物等含有乳桿菌屬乳酸菌的組合物中乳桿菌屬乳酸菌的增殖和/或提高所述菌的存活性。另外，根據本發明，通過使用κ-酪蛋白糖巨肽，能夠促進在以發酵乳等為代表的低PH環境的發酵食品中乳桿菌屬乳酸菌的增殖和/或提高所述菌的存活性，進而在攝入體內后，能夠促進乳桿菌屬乳酸菌的增殖和/或提高其存活性。進一步地，本發明通過使用κ-酪蛋白糖巨肽，能夠在不影響含有乳桿菌屬乳酸菌的食品或食品組合物的風味和/或物性下促進該乳酸菌的增殖和/或提高所述菌的存活性。特別地，根據本發明，能夠促進近年來其優異效能正在被獲知的格氏乳桿菌這種乳酸菌的增殖和/或提高其存活性。因此，根據本發明，能夠對食品或食品組合物在不損害其本來具有的風味和/或物性下，在長期保存后也能夠維持賦予作為益生菌的高功能性。附圖簡述[
圖1]是顯示實驗例1中格氏乳桿菌0LL2716株細菌數的存活率(保存天數之后的活菌數/保存開始時的活菌數(％ ))的圖。[圖2]是顯示實驗例2中格氏乳桿菌0LU959株細菌數的存活率(保存天數之后的活菌數/保存開始時的活菌數(％ ))的圖。[圖3]是顯示實驗例3中格氏乳桿菌0LL2716株細菌數(cfu/g)的圖。發明的具體說明乳酸菌的增殖促進劑和/或存活性提高劑本發明的乳酸菌增殖促進劑和/或存活性提高劑含有以κ -酪蛋白糖巨肽作為有效成分。即，本發明通過使用κ-酪蛋白糖巨肽，促進酸乳等中含有的乳桿菌屬乳酸菌等益生菌的增殖和/或提高存活性。本文中，“乳酸菌的增殖促進劑和/或存活性提高劑”意指包含具有促進乳酸菌增殖和提高存活性這兩種性能的藥劑、以及只發揮促進乳酸菌增殖、提高乳酸菌存活性中的一種性能的藥劑。其中，作為包含這些意思的表述，“乳酸菌的增殖促進劑和/或存活性提高齊 ”能夠與乳酸菌的增殖促進及存活性提高劑、或者乳酸菌的增殖促進及存活性提高用組合物、或者乳酸菌的增殖促進及存活性提高用添加劑互換。本文中，乳酸菌的“增殖促進”是指乳酸菌在適于乳酸菌成長或維持的環境下，謀求作用于乳酸菌，促進乳酸菌的增殖，謀求提高其菌數等。本發明優選地是指在含有乳酸菌的組合物中，在其規定的保存環境下，促進了乳酸菌的增殖。本文中，乳酸菌的“存活性提高”是指在適于乳酸菌成長或維持的環境下，作用于乳酸菌，抑制乳酸菌的死亡，維持、提高生存的殘余乳酸菌數。本發明優選地是指在含有乳酸菌的組合物中，在其規定的保存環境下，乳酸菌的生存殘留數提高。本文中，κ -酪蛋白糖巨肽(CGMP)是一種乳蛋白質即κ -酪蛋白的片段，是κ _酪蛋白的含有糖肽的C末端肽。κ-酪蛋白糖巨肽通常是酪蛋白膠束的一部分，位于膠束的外緣部。κ-酪蛋白糖巨肽通常能以κ-酪蛋白糖巨肽含有物的形式獲得。κ -酪蛋白糖巨肽含有物能夠通過多種方法分離制備。例如，能夠將凝乳酶作用于乳蛋白質，取出而制備。另外，例如，將胃蛋白酶作用于κ-酪蛋白然后加入酸，沉淀副 κ -酪蛋白級分，透析得到的上清部分、脫鹽后，根據需要冷凍干燥等而制備。進一步地，例如，將粗制凝乳酶或胃蛋白酶或者這兩者作用于酸酪蛋白，進行凝乳處理，形成粗制凝乳酶酪蛋白凝乳狀物，此時利用生成的乳清而制備。具體而言，該乳清含有磷酸鈣，通過調節PH 和溫度(例如，調節ρΗ為8 9，溫度為50 60°C )，沉淀磷酸鈣并除去，將得到的上清部分調節回中性區域后，用逆浸透膜濃縮、脫鹽后，根據需要噴霧干燥等而制備。
或者，如果κ-酪蛋白糖巨肽有市售品，也能利用市售品。對于本發明的乳桿菌屬乳酸菌增殖促進劑和/或存活性提高劑，能夠原樣使用上述的κ -酪蛋白糖巨肽含有物或其處理物；或者將用溶劑稀釋得到的可溶級分或不溶級分原樣使用。作為所述溶劑，可以單獨使用水或常用的溶劑，例如，醇類、烴類、有機酸、有機堿、無機酸、無機堿、超臨界流體等，或者將多種溶劑組合使用。另外，本發明的乳桿菌屬乳酸菌增殖促進劑和/或存活性提高劑也能將上述的κ-酪蛋白糖巨肽自身或其處理物組合水、蛋白質、糖質、脂質、維生素類、礦物質類、有機酸、有機堿、果汁、調味料類等食品組合物而獲得。能夠向上述含有乳酸菌的組合物添加本發明的乳酸菌增殖促進劑和/或存活性提高劑，所述乳酸菌增殖促進劑和/或存活性提高劑以κ -酪蛋白糖巨肽濃度換算，優選地包含0. 05 0. 6重量％，更優選地是0. 1 0. 4重量％，進一步更優選地是0. 2 0. 3重量％的κ -酪蛋白糖巨肽。此時，上述含有乳酸菌的組合物能夠在優選地是105CFU/g以上、 更優選地是IO6 109CFU/g的范圍、進一步更優選地是IO7 108CFU/g的范圍包含乳桿菌屬乳酸菌。根據本發明者們的研究，本發明的乳桿菌屬乳酸菌增殖促進劑和/或存活性提高劑是能夠在低PH環境下發揮促進該乳酸菌的增殖和/或提高其存活性的功能的物質。以發酵乳等為代表的含有乳酸菌的食品或食品組合物，一般是具有低PH環境，對乳酸菌的增殖和/或生存不適合的情形也多。由于本發明的增殖促進劑和/或存活性提高劑即使在低PH環境，也能夠發揮促進乳酸菌的增殖和/或提高其存活性的功能，因此在促進以發酵乳等為代表的含有乳酸菌的食品或食品組合物中的乳酸菌增殖和/或提高其存活性上是有用的。本發明的乳酸菌增殖促進劑和/或存活性提高劑考慮了含有乳酸菌的食品或食品組合物的PH等，在與現有技術不同的低pH環境下，能更有效地發揮功能。此時，作為該低 PH環境，優選地是pH 2. 5 6. 5、更優選地是pH 3. 0 5. 5、進一步更優選地是pH 3. 5 5. 0、最優選地是pH3. 8 4. 8。本發明的乳桿菌屬乳酸菌增殖促進劑和/或存活性提高劑優選地應用于作為乳桿菌屬乳酸菌的特別地其優異效能正在被獲知的格氏乳桿菌種。于是，格氏乳桿菌種是例如格氏乳桿菌 0LL2716 (Lactobacillus gasseri 0LL2716 =FERM BP-6999)株、格氏乳桿菌 0LL2959 株(Lactobacillus gasseri 0LL2959 =NITE BP—224)。另外，如后所述，在本發明中，通過實驗確認了本發明的乳酸菌增殖促進劑和/或存活性提高劑對這些菌株的效果。本文中，這些乳酸菌的相關保藏信息如下。格氏乳桿菌0LL2716株保藏在獨立行政法人產業技術綜合研究所專利生物保藏中心。說明該保藏的內容如下。(1)保藏機構名稱獨立行政法人產業技術綜合研究所專利生物保藏中心(2)聯系地址〒305-8566茨城縣筑波市東1 丁目1番1中央第6(3)保藏號FERM BP-6999(4)用于識別的標識格氏乳桿菌0LL2716(5)原保藏日1999年5月24日(6)向基于布達佩斯條約的保藏的移管日2000年1月14日
上述的格氏乳桿菌0LL2716是自人糞便分離的。所述菌是革蘭氏陽性桿菌，不自葡萄糖產生氣體、顯示為過氧化氫酶陰性。同化利用葡萄糖、甘露糖、果糖、半乳糖、蔗糖、纖維素二糖、乳糖、海藻糖、淀粉、糊精而生成酸。另一方面，格氏乳桿菌0LU959株保藏在獨立行政法人制品評價技術基礎機構專利微生物保藏中心。說明該保藏的內容如下。(1)保藏機構名稱獨立行政法人制品評價技術基礎機構專利微生物保藏中心(2)聯系地址〒292-0818千葉縣木更津市上總鐮足2_5_8(3)保藏號NITE BP-224(4)用于識別的標識格氏乳桿菌0LL2959(5)原保藏日2006年3月31日(6)向基于布達佩斯條約的保藏的移管日2007年11月21日上述的格氏乳桿菌0LU959株是自人糞便分離的。所述菌是革蘭氏陽性桿菌，不自葡萄糖產生氣體。同化利用葡萄糖、甘露糖、果糖、半乳糖、蔗糖、纖維素二糖。本發明的促進乳桿菌屬乳酸菌增殖和/或提高存活性的方法是通過將以上述 κ-酪蛋白糖巨肽含有物作為有效成分的乳桿菌屬乳酸菌增殖促進劑和/或存活性提高劑添加至含有乳桿菌屬乳酸菌的組合物而進行的。作為該添加的時期，可以是在含有乳桿菌屬乳酸菌的組合物的發酵前、發酵中、發酵后的任一時期，但是從易于統一管理全部制品的效果和/或作用等考慮，優選地是在含有該乳酸菌的組合物的發酵前添加；從易于衛生地管理κ -酪蛋白糖巨肽含有物考慮，更優選地是在含有該乳酸菌的組合物的滅菌前添加。根據本發明，進一步地，本發明的增殖促進劑和/或存活性提高劑也能夠用于食品或食品組合物。即，本發明的增殖促進劑和/或存活性提高劑能夠用于上述含有乳酸菌的食品或食品組合物。作為所述食品或食品組合物，能夠列舉例如各種飲食品(清涼飲料、 發酵乳、酸乳等)。含有本發明的增殖促進劑和/或存活性提高劑以及上述乳酸菌的食品或食品組合物可以直接使用，也可以與其它的食品或食品成分混合等，按照通常的食品組合物的常規方法使用。另外，關于其性狀，也可以是飲食品通常使用的狀態和/或形態，例如，固體狀 (粉末、顆粒狀等)、糊狀、液體狀或懸浮狀中的任一。對于其它的成分也沒有特別的限定，上述的食品或食品組合物中能夠使用水、蛋白質、糖質、脂質、維生素類、礦物質類、有機酸、有機堿、果汁、調味料類等作為成分。這些成分能夠以2種以上的組合使用，也可以使用合成品和/或大量含有它們的食品或食品組合物。
實施例以下對本發明列舉實施例進行說明，但是本發明不限于所述實施例。另外，在本說明書中，如不明示，則％表示重量％。研究了 κ-酪蛋白糖巨肽(CGMP)對作為酸乳的益生菌株的格氏乳桿菌0LL2716 株(FERM BP-6999)以及作為相同菌種的益生菌株的格氏乳桿菌0LL2959株(NITE BP-244) 在酸乳中的存活性的影響。另外，對于CGMP，使用Arla Foods Ingredients Japan株式會社的 CGMP-10。
實驗例1向添加了 0. 2% CGMP的酸乳混合物中同時添加2%的發酵菌母(保加利亞乳桿菌 (Lactobacillus bulgaricus)禾口口譽熱鏈球菌(Streptococcus thermophilus)白勺t昆合;t音養物)和0.025%的格氏乳桿菌0LL2716株濃縮菌液0X1O11 CFU/g)進行發酵，制備酸乳。 另一方面，除了沒有添加CGMP其他完全同樣地制備酸乳，作為對照。將這些酸乳在5°C，于16天的評定期限保存。在所述保存期間，是否添加CGMP不引起風味、物性、乳酸酸度和PH的差別。進一步地，保存開始時(緊挨制備后)、8天后和16 天后測定格氏乳桿菌0LL2716株的細菌數。該細菌數和存活率(保存天數后的活菌數/保存開始時的活菌數(％))示于表1。另外，格氏乳桿菌0LL2716株的細菌數的存活率(保存天數后的活菌數/保存開始時的活菌數(％ ))示于圖1。[表1]
保存開始時8 ^16天后格氏乳杵菌 OLL2716(xlO cfu/g)存活率 (%)格氏乳桿菌 OLL2716(xlO cfu/g)存活率 (%)格氏乳桿菌 C)LL2716(xl07 cfu/g)存活率(％)對照108.510037.034.124.022.1添加 0.2 % CGMP121.510079.565.452.042.8實驗例2向添加了 0. 2% CGMP的酸乳混合物中同時添加2%的發酵菌母(保加利亞乳桿菌 (Lactobacillus bulgaricus)禾口口譽熱鏈球菌(Streptococcus thermophilus)白勺t昆合;t音養物)和0.04%的格氏乳桿菌0LL2959株濃縮菌液QXlO^CFU/g)進行發酵，制備酸乳。另一方面，除了沒有添加CGMP其他完全同樣地制備酸乳，作為對照。將這些酸乳在5°C，于16天的評定期限保存。在所述保存期間，是否添加CGMP不引起風味、物性、乳酸酸度和PH的差別。進一步地，保存開始時(緊挨制備后)、8天后和16 天后測定格氏乳桿菌0LL2959株的細菌數。該細菌數和存活率(保存天數后的活菌數/保存開始時的活菌數(％ ))示于表2。另外，格氏乳桿菌0LL2959株的細菌數的存活率(保存天數后的活菌數/保存開始時的活菌數(％))示于圖2。[表 2]
權利要求
1.乳桿菌屬乳酸菌的增殖促進劑和/或存活性提高劑，其含有K-酪蛋白糖巨肽作為有效成分。
2.權利要求1所述的乳桿菌屬乳酸菌的增殖促進劑和/或存活性提高劑，其中乳桿菌屬乳酸菌屬于格氏乳桿菌(Lactobacillus gasseri)種。
3.權利要求1或2所述的乳桿菌屬乳酸菌的增殖促進劑和/或存活性提高劑，其中乳桿菌屬乳酸菌是選自格氏乳桿菌0LL2716株和格氏乳桿菌0LU959株的1種以上的菌種。
4.促進含有乳桿菌屬乳酸菌的組合物中的乳桿菌屬乳酸菌增殖和/或提高其存活性的方法，特征在于，將權利要求1 3中任一項所述的乳桿菌屬乳酸菌的增殖促進劑和/或存活性提高劑添加至含有乳桿菌屬乳酸菌的組合物。
5.權利要求4所述的方法，所述方法包括在發酵所述含有乳酸菌的組合物之前，將所述的乳酸菌增殖促進劑和/或存活性提高劑添加至所述含有乳酸菌的組合物。
6.食品組合物，其包含權利要求1 3中任一項所述的乳桿菌屬乳酸菌的增殖促進劑和/或存活性提高劑、以及乳桿菌屬乳酸菌。
7.κ-酪蛋白糖巨肽的用途，用于促進含有乳桿菌屬乳酸菌的組合物中的乳桿菌屬乳酸菌增殖和/或提高存活性。
全文摘要
本發明涉及乳桿菌屬乳酸菌的增殖促進劑和/或存活性提高劑，其含有κ-酪蛋白糖巨肽作為有效成分。現有的抗氧化劑等存活性提高劑對食品組合物的風味和/或物性存在不希望有的影響，且由于是通過自氧化而發揮效果的，因此缺乏效果的持續性。根據本發明，能夠預期不影響食品組合物的風味和/或物性，并且效果的持續性高的優異的乳酸菌等增殖促進和/或存活性提高的效果。
文檔編號A23C9/13GK102575223SQ20108003922
公開日2012年7月11日 申請日期2010年8月27日 優先權日2009年9月2日
發明者伊澤佳久, 大友英生 申請人:株式會社明治