屬于舟形藻屬的微藻、通過培養(yǎng)該微藻而制造油分的方法以及從該微藻中所采集的油分的制作方法

專利名稱：屬于舟形藻屬的微藻、通過培養(yǎng)該微藻而制造油分的方法以及從該微藻中所采集的油分的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及屬于舟形藻屬(Navicula)的微藻、包括培養(yǎng)該微藻的步驟的油分制造方法以及從該微藻中所采集的油分。具體而言，本發(fā)明涉及屬于舟形藻屬(Navicula) 的、具有產(chǎn)生碳原子數(shù)16至沈的脂肪烴的能力的微藻；包括培養(yǎng)該微藻的步驟的油分制造方法；從該微藻所采集的油分；將該微藻干燥而得到的干燥藻體；由該微藻得到的燃料；以及包括培養(yǎng)該微藻的步驟的二氧化碳固定方法。
背景技術：
已報道了幾種通過對微藻進行培養(yǎng)而制備被稱為“生物燃料”的重油類或輕油類烴的方法。作為具有生產(chǎn)重油類烴的能力的藻類，已知的有具有生產(chǎn)碳原子數(shù)36的烴的能力的微藻布朗葡萄藻(Botryococcus braimii)(參考非專利文獻1)以及具有生產(chǎn)碳原子數(shù)33的烴的能力的微藻布朗葡萄藻A小種(Botryococcusbraunii A race)(參考專利文獻1) ο此外，作為具有生產(chǎn)輕油類烴的能力的藻類，已知的有具有生產(chǎn)碳原子數(shù)17的烴的能力的微藻苔蘚念珠藻(Nostoc muscorum)、紅海束毛藻(Trichodesmium erythraeum)、 鉆孔織線藻(Plectonema terebrans)等(參考非專利文獻1)、具有生產(chǎn)碳原子數(shù)19的烴的能力的微藻Coccochloris elabens等(參考非專利文獻1)、具有生產(chǎn)碳原子數(shù)17、18、19 以及20的烴的能力的微藻I^seudochoricystis ellipsoidea MBIC11204株(參考專利文獻2)、具有生產(chǎn)碳原子數(shù)17、19、21以及23的烴的能力的微藻Choricystis minorSAG17. 98 株(參考專利文獻2)。微藻能產(chǎn)生的輕油類烴作為柴油燃料在工業(yè)上是有用的，并且作為意圖于防止全球溫暖化的碳中和(carbon-neutral)燃料而倍受期待。但是，在將所述微藻干燥而得到的干燥藻體中，輕油類烴的含有率通常為0.025 至0. 12質量％左右(參考非專利文獻1)，而其生產(chǎn)烴的能力未必是很充分的。現(xiàn)有技術文獻專利文獻1 日本專利特開平9-234055號公報專利文獻2 國際公開第2006/109588號小冊子非專禾丨J 文獻 1 :R. Raja, S. Hemaiswarya, N. Ashok Kumar, S. Sridhar andR. Rengasamy(2008)A Perspective on the Biotechnological Potential ofMicroalgae. Critical Reviews in Microbiology,34 :77-88.

發(fā)明內容
發(fā)明要解決的問題本發(fā)明是鑒于上述情況而進行的。本發(fā)明的課題在于提供具有對于碳原子數(shù)16至26的脂肪族烴的高生產(chǎn)能力的微藻、包括培養(yǎng)該微藻的步驟的油分制造方法、從該微藻采集的油分、將該微藻干燥而得到的干燥藻體、從該微藻得到的燃料以及包括培養(yǎng)該微藻的步驟的二氧化碳固定方法。解決問題的手段為了解決所述課題，本發(fā)明采用如下的方式。(1) 一種屬于舟形藻屬(Navicula)的微藻，其具有產(chǎn)生碳原子數(shù)16至沈的脂肪烴的能力。(2)具有生產(chǎn)碳原子數(shù)16至沈的脂肪烴的能力的微藻舟形藻屬Oiliticus種。(3)微藻舟形藻屬 oiliticus 種 JPCCDA0580 株(FERM BP-11201)。(4) 一種油分制造方法，其包括對(1)至C3)中的任意一項所述的微藻進行培養(yǎng)的步驟。(5)所述中的油分制造方法，其包括在所述培養(yǎng)步驟之后，使用比在該培養(yǎng)步驟中使用的培養(yǎng)基的營養(yǎng)鹽類濃度低的其他培養(yǎng)基進一步對所述微藻進行培養(yǎng)的步驟。(6)所述(4)或(5)中的油分制造方法，其中，所述油分含有中性脂質。(7)所述(4)至(6)中任意一項中的油分制造方法，其中，所述油分含有鯊烯。(8)所述(4)至(7)中任意一項的油分制造方法，其包括在所述培養(yǎng)步驟之后用有機溶劑將油分提取出來的步驟，所述有機溶劑選自由正己烷組成的溶劑、由正己烷和甲醇組成的溶劑、或者由正己烷和乙醇組成的溶劑。(9)由所述(4)至(8)中任意一項的油分制造方法所制備的油分。(10)將(1)至(3)中任意一項的微藻干燥而得的干燥藻體。(11)由⑴至(3)中任意一項所述的微藻得到的燃料。(12) 一種二氧化碳固定方法，其包括對(1)至(3)中任意一項的微藻進行培養(yǎng)的步驟。此外，在本申請的權利要求書和說明書中，“具有生產(chǎn)碳原子數(shù)16至沈的脂肪族烴的能力”是指主要具有生產(chǎn)碳原子數(shù)16、18、20、22、M以及沈的脂肪族烴的能力。此外， “油分”是指主要由疏水性有機化合物所構成的液體成分。作為該疏水性有機化合物，可以列舉脂肪族烴、中性脂肪等。發(fā)明的效果根據(jù)本發(fā)明，能夠提供具有生產(chǎn)碳原子數(shù)16至沈的脂肪族烴的能力的微藻、具有該微藻的培養(yǎng)工序的制油方法、從該微藻所采集的油分、將該微藻干燥而得到的干燥藻體、 從該微藻所得到的燃料以及具有該微藻的培養(yǎng)工序的二氧化碳固定方法。


圖1是使用JPCC DA0580株的18S rDNA堿基序列所得到的分子系統(tǒng)樹的圖。圖2是JPCC DA0580株的增殖曲線。圖3是改變海水成分濃度而對JPCC DA0580株進行培養(yǎng)時的增殖曲線。圖 4 是舟形藻屬(Navicula)oiliticus 種 JPCC DA0580 株(FERM BP-11201)的電子顯微鏡像(左圖為倍率10000倍，右圖為倍率15000倍)。圖5是用尼羅紅(Nile red)染色的舟形藻屬(Navicula)oiliticus種JPCCDA0580株(FERM BP-11201)的熒光顯微鏡像(顯現(xiàn)出明亮的熒光發(fā)色的區(qū)域是通過尼羅紅發(fā)色的藻體內部的油脂，稍暗的區(qū)域是通過自身熒光發(fā)色的光合色素等)。
具體實施例方式以下對本發(fā)明進行詳細說明。(屬于舟形藻屬的微藻)本發(fā)明中的屬于舟形藻屬(Navicula)的微藻具有生產(chǎn)碳原子數(shù)16至沈的脂肪族烴的能力。在這里，所述碳原子數(shù)16至沈的脂肪族烴，主要是指碳原子數(shù)16、18、20、22、 24以及沈的脂肪族烴。作為該微藻，特別是從藻體中的碳原子數(shù)16至沈的脂肪族烴的含有率高、容易培養(yǎng)的觀點來看，優(yōu)選微藻舟形藻屬(Naviculdoiliticus種，進一步優(yōu)選舟形藻屬 (Navicula) oiliticus 種 JPCC DA0580 株(FERM BP-11201)(以下簡稱為 JPCC DA0580 株)。JPCC DA0580株除了具有生產(chǎn)碳原子數(shù)16至沈的脂肪族烴的能力，從具有高的生產(chǎn)中性脂質和鯊烯的能力的觀點來看，也是本發(fā)明中進一步優(yōu)選的微藻。對中性脂質的說明如下文所述。JPCC DA0580株是發(fā)明人從半咸水(brackish water)域的海水中分離出來的，是屬于金藻門(Chrysophyta)硅藻綱羽狀目有縱溝亞目舟形藻科的海洋微藻的新種的新株。在下文中，對于該微藻的分離方法以及將該藻類的JPCC DA0580株判斷為新種的新株的過程進行說明。(培養(yǎng)基的制備方法)如下調制成f/2培養(yǎng)基。將硝酸鈉75.0mg/l、磷酸氫二鈉5.0mg/l、九水合偏硅酸鈉30. Omg/1, f/2微量金屬溶液1. 0ml、f/2維生素溶液0. 5ml、人工海水(artificial seawater)(產(chǎn)品名MARINE ART· SF-I,日本千壽制藥株式會社制造)37g/l按所述規(guī)定的濃度溶解在蒸餾水中，得到液體培養(yǎng)基。所述的f/2微量金屬溶液，是按組成為二水合Na2EDTA 4. 36g/l、六水合三氯化鐵 3. 15g/l、四水合氯化錳(II) 180mg/l、七水合硫酸鋅22. Omg/1、六水合氯化鈷(II) 10. Omg/ 1、二水合鉬(VI)酸鈉6. :3mg/l、五水合硫酸銅(II)9.8mg/l制備而成的水溶液。所述f/2維生素溶液，是按組成為硫胺素200. Omg/1、生物素0. lmg/Ι、維生素 (B 12) 1. Omg/1制備而成的水溶液。此外，除所述f/2培養(yǎng)基的組成成分外，進一步添加瓊脂使其濃度為1. 2% (w/v)， 制備成瓊脂f/2培養(yǎng)基。此外，所述人工海水是一種模擬天然海水中所含鹽類的鹽類。通過將所述人工海水按規(guī)定量(37g/l)溶解在蒸餾水中，能夠制備出模擬天然海水的海水成分的水溶液。(分離方法)向含有2ml所述f/2培養(yǎng)基的M孔微量滴定板(Microtiter plate)中，適量添加了泥沙樣品，該泥沙樣品于2005年7月取自于位于日本鹿兒島縣奄美市住用川和役勝川的交匯處的紅樹(Mangrove)林。接下來，在1000勒克司(Ix)的光照射下進行靜置培養(yǎng)， 從確認到有微藻生長的孔中將培養(yǎng)液的一部分取出。將取出的培養(yǎng)液接種到所述的f/2瓊脂培養(yǎng)基上，通過在所述的光照條件下進行培養(yǎng)，得到了茶色的單細胞藻類JPCC DA0580株的單菌化(分離)后的微藻菌落(colony)。(形態(tài)學性質)在所述瓊脂培養(yǎng)基上，在25°C下培養(yǎng)了 7天，得到了直徑為2. Omm至5. Omm左右的茶色的JPCC DA0580株菌落。菌落的形狀是點狀的，呈無隆起的半透鏡狀。其外緣平滑，表面呈圓滑的形狀。此外，沒有發(fā)現(xiàn)變異所引起的菌落形態(tài)變化，也未見因培養(yǎng)條件和生理狀態(tài)所引起的菌落形態(tài)變化。所述菌落中的海洋微藻，是大小平均為ΙΟμπι至20μπι左右的單細胞藻類，有時形成群體，營養(yǎng)細胞不具有眼點和收縮泡，細胞形狀為菱形。不具有浮游性，具有玻璃質的殼，殼(putamen)上具有縱溝，細胞表面光滑。營養(yǎng)細胞不具有鞭毛，不顯示運動性。JPCC DA0580株的電子顯微鏡圖像如圖4所示。(繁殖方式)JPCC DA0580株進行有性繁殖和無性繁殖這兩種繁殖方式。無性繁殖是通過二分裂進行無性的增殖。細胞分裂在殼內部進行，兩個子細胞在母細胞的外殼和內殼的內側分別形成新的半殼。母細胞的半殼被分別一個一個地分配給子細胞。其結果，子細胞中的一個和母細胞相同大小(具有相同大小的殼)，另一個子細胞將內殼作為外殼使用。其結果， 會比母細胞變得小一圖。變小到一定程度的細胞進行有性繁殖。在這個細胞中，通過減數(shù)分裂形成同形配子(isogamete)。接合子以殼為中介而相互接近，使原生質變化為阿米巴形而相互結合，形成復大胞子(auxospore)，成長并體積增大，變回應有大小的通常細胞。(生理學特性與生物化學特性)培養(yǎng)液在以海水作為基本組成的培養(yǎng)液中生長。在淡水中無法生長。光合作用可以通過光合作用進行光能自養(yǎng)生長。沒有確認到異養(yǎng)生長。含有的色素葉綠素a、Cl、c2、巖藻黃質以及以巖藻黃質衍生物為中心的類胡蘿卜素色素類貯藏物質淀粉生長溫度20°C至:35°C (最適宜溫度為25°C )生長ρΗ:7·0 至 9.0(最適宜為 ρΗ8·0)在細胞內蓄積了大量的油分，該油分可以被尼羅紅染色，包括碳原子數(shù)16至沈的脂肪族烴、中性脂質以及鯊烯。生長期間一周(混濁度(0D750)從0. 05達到1. 2所需要的時間)如圖5所示，用熒光顯微鏡觀察被尼羅紅染色的JPCC DA0580株時，在熒光視野下的藻體中，可以觀察到有明亮的熒光發(fā)色的區(qū)域存在，這就是通過尼羅紅發(fā)色的油分。該油分可以以油滴的形式被蓄積在藻體細胞內。此外，該油分包括碳原子數(shù)16至沈的脂肪族烴、中性脂質以及鯊烯。從所述形態(tài)學性質、繁殖方式、以及生理學、生物化學特性來看，JPCCDA0580株被推定是為屬于金藻門硅藻綱羽狀目有縱溝亞目舟形藻科的藻類。并且，按照迄今公知的方法，使用DNA提取試劑盒(產(chǎn)品名=QIAampDNA探針迷你試劑盒50 (日本株式會社QIAGEN社制)，從該JPCC DA0580株中提取出DNA，通過PCR法對18S rDNA區(qū)域進行擴增而進行了序列解析，確定了 18S rDNA區(qū)域的堿基序列。將得到的18S rDNA堿基序列表示在序列表的序列號1中。將得到的18S rDNA的堿基序列與公共的數(shù)據(jù)庫-日本DNA數(shù)據(jù)庫(DNA databank of Japan, DDBJ)進行比對，進行同源性檢索(Blast檢索)，用分析軟件ClustalW以及表示軟件Treeview進行了系統(tǒng)分析。將由其得到的系統(tǒng)樹顯示在圖1中。分離出的JPCC DA0580株在所述系統(tǒng)樹中被分類為舟形藻科(Navicula)，與舟形藻屬(Navicula)的硅藻形成簇(cluster)。但是，我們確認到在基因水平上JPCC DA0580 株與已確認的舟形藻屬(Navicula)的已知種之間存在分歧，從而將本發(fā)明人分離出來的 JPCC DA0580株認定為是屬于舟形藻屬(Navicula)的新種的藻類。在這里，我們將該株命名為舟形藻屬(Navicula)oiliticus 種 JPCC DA0580 株。JPCC DA0580株于2009年3月16日以保藏號FERM BP-11201保藏于日本獨立行政法人產(chǎn)業(yè)技術綜合研究所專利生物保藏中心(日本國茨城縣筑波市東1丁目1番地1 中央第6 (郵政編碼305-8566))。(是由2009年3月16日保藏的日本國內保藏號FERM P-21788移交的。)JPCC DA0580株可以在藻體中蓄積包括碳原子數(shù)16至沈的脂肪族烴、中性脂質以及鯊烯在內的油分。并且，在JPCC DA0580株的干燥藻體中，該碳原子數(shù)16至沈的脂肪族烴的含有率可以達到0.2質量％以上。此外，在JPCC DA0580株的干燥藻體中的中性脂質的含有率可以達到36質量％以上。并且，在JPCC DA0580株的干燥藻體中的鯊烯的含有率可以達到0.3質量％以上。此外，該油分中除了所述碳原子數(shù)16至沈的脂肪族烴、中性脂質以及鯊烯之外， 還可能含有碳原子數(shù)27以上的脂肪族烴、磷脂、游離脂肪酸、類固醇化合物、以及巖藻黃質和含有巖藻黃質衍生物等的類胡蘿卜素等的光合色素等。所述碳原子數(shù)16至沈的脂肪族烴，主要指碳原子數(shù)16、18、20、22、M以及沈的脂肪族烴，具體而言，主要是碳原子數(shù)16、18、20、22、M以及沈的直鏈脂肪族飽和烴。所述中性脂質，如后所述，主要是指以十四?；?肉豆蔻酰基)、十六酰基(棕櫚酰基)、十六碳烯酰(Hexadecenoyl)基(棕櫚油酰(Palmitoleoyl)基)、十八烯酰 (octadecenoyl)基(油酰基)以及二十碳五酰(eicosapentaenoyl)基作為酰基的中性脂質，主要是具有這些酰基的甘油三酯(triglyceride)。所述鯊烯，是2，6，10，15，19，23-六甲基-2，6，10，14，18，22- 二十四碳六烯。所述碳原子數(shù)27以上的脂肪族烴，是鯊烯之外的脂肪族烴。使用正己烷作為溶劑提取JPCC DA0580株的油分時，通常，在提取出的油分中，約 80質量％是所述甘油三酯等中性脂質，這可以達到JPCCDA0580株的干燥藻體的約36質量％以上。但是，這些值是將所述甘油三酯作為油酸甘油三酯而計算時得到的。此外，在該提取的油分中所含有的，所述碳原子數(shù)16至沈的脂肪族烴的量以及所述鯊烯的量，可以分別達到JPCC DA0580株的干燥藻體的約0. 2質量％以上以及約0. 3質量％以上。但是，該提取出的油分的組成，是使用前述的m培養(yǎng)基按后述的通氣培養(yǎng)的方法，對JPCC DA0580株進行培養(yǎng)時通常所得到的，改變該微藻的培養(yǎng)方法時，該提取出的油分的組成可能發(fā)生變化。構成所述甘油三酯等中性脂質的脂肪酸，主要是十四酸(肉豆蔻酸(碳原子數(shù)14， 雙鍵數(shù)0)、十六酸{棕櫚酸(碳原子數(shù)16，雙鍵數(shù)0)、十六烯酸{棕櫚油酸(碳原子數(shù)16， 雙鍵數(shù)1)}、十八烯酸{油酸(碳原子數(shù)18，雙鍵數(shù)1)}、以及二十碳五烯酸{EPA (碳原子數(shù)20，雙鍵數(shù)幻}。JPCC DA0580株的單位干燥藻體中的構成這些甘油三酯等中性脂質的脂肪酸的含量，依次為約1.0質量％、約12. 7質量％、約17.0質量％、約0.8質量(％、及約1.4 質量％。也就是說，構成所述的甘油三酯等中性脂質的脂肪酸，占該干燥藻體的約32. 9質量％。此外，在干燥藻體中的構成所述甘油三酯等的中性脂質的脂肪酸的含有率，是將該脂肪酸進行甲酯化時，其脂肪酸甲酯的質量在所述干燥藻體中所占的比例。(油分的制備方法)本發(fā)明中的制油方法，包括對本發(fā)明涉及的所述屬于舟形藻屬的微藻進行培養(yǎng)的步驟。通過對本發(fā)明所涉及的微藻進行培養(yǎng)，從培養(yǎng)基中回收通過該培養(yǎng)步驟生長的該微藻，再從得到的微藻中將所含有的油分采集出來，就可以制造出該油分。屬于該舟形藻屬的微藻，特別是從藻體中碳原子數(shù)16至沈的脂肪族烴的含有率高、容易培養(yǎng)的觀點來看，優(yōu)選微藻舟形藻屬oiliticus種，進一步優(yōu)選JPCC DA0580株。除了 JPCC DA0580株對所述碳原子數(shù)16至沈的脂肪族烴的生產(chǎn)能力高，從對中性脂質和鯊烯的也具有高生產(chǎn)能力的角度來看，JPCC DA0580株也是更加優(yōu)選作為本發(fā)明的微藻的。作為培養(yǎng)該微藻的步驟，可以適用公知的能夠培養(yǎng)屬于舟形藻屬的微藻的方法。 例如，可以向放入了液體培養(yǎng)基的扁平燒瓶等培養(yǎng)容器中接種該微藻，一邊以使藻體不會沉淀的程度緩慢攪拌，一邊在光照射下進行通氣培養(yǎng)。作為所述液體培養(yǎng)基，只要是能夠培養(yǎng)該微藻的液體培養(yǎng)基即可，并無特殊限制， 可以使用公知的培養(yǎng)基。例如，在分離所述JPCC DA0580株時使用的f/2培養(yǎng)基，從藻類能夠良好生長的觀點來看，可以作為優(yōu)選的培養(yǎng)基。所述液體培養(yǎng)基中的人工海水(產(chǎn)品名MARINE ART · SF-I (日本千壽制藥株式會社制)的濃度，以添加37g/l作為100% (w/v)時，優(yōu)選為30至100% (w/v)、進一步優(yōu)選為50至100% (w/v)、更加優(yōu)選為70至100% (w/v)、特別優(yōu)選為90至100 (w/v)、最優(yōu)選為 95至100% (w/v) 0在這里，將所述人工海水的規(guī)定量(37g/l)溶解在蒸餾水中的水溶液， 可以認為其與天然海水的鹽濃度是基本相等的。作為所述光照的條件，依照培養(yǎng)液中的藻體濃度適當調整即可，例如優(yōu)選為500 勒克司以上(Ix)、進一步優(yōu)選為1000 30000勒克司(Ix)，更加優(yōu)選為1000 10000勒克司(Ix)，特別優(yōu)選為1000 6000勒克司(Ix)，最優(yōu)選為1000 3000勒克司(Ix)。作為所述通氣培養(yǎng)中使用的通氣用氣體，可以使用適合該微藻生長的公知的通氣用氣體，例如，可以使用通常的空氣或添加了(X)2的空氣等。在此之中，從可以使該微藻生長更良好、縮短生長期間的角度來講，優(yōu)選使用添加了(X)2的空氣。在所述添加了 (X)2的空氣中的(X)2濃度，優(yōu)選為0. 05 10% (ν/ν)，進一步優(yōu)選為 0. 05 5. 0% (ν/ν)，最優(yōu)選為 1. 0 3. 0% (ν/ν)。作為在所述通氣培養(yǎng)中的通氣量，可以適用公知的適合該藻類生長的通氣量，例如，優(yōu)選0. 5 5vvm、進一步優(yōu)選0. 5 3. Ovvm、更加優(yōu)選0. 5 2. Ovvm。作為在所述通氣培養(yǎng)中的培養(yǎng)溫度，可以適用適合該藻類生長的公知的培養(yǎng)溫度，通常，優(yōu)選在20 35°C進行，進一步優(yōu)選為在25 30°C進行。就所述通氣培養(yǎng)期的長短而言，只要該藻類在生長就可以繼續(xù)培養(yǎng)，通常優(yōu)選進行1 4周，進一步優(yōu)選進行1 3周，更加優(yōu)選進行1 2周。在本發(fā)明的油分制造方法中，可以在該微藻的所述通氣培養(yǎng)期之后，在營養(yǎng)限制條件下進一步培養(yǎng)。通過在營養(yǎng)限制條件下培養(yǎng)，藻體中所含油分的含有率(在干燥藻體中所含油分的質量％)能夠得到提高。因此，可以在所述通氣培養(yǎng)期內，用沒有營養(yǎng)限制的培養(yǎng)基(營養(yǎng)培養(yǎng)基)進行培養(yǎng)使該微藻生長而得到所希望的量后，轉換為營養(yǎng)限制條件下的培養(yǎng)，而提高藻類中的油分含有率，從而提高該油分的制備效率。在這里，所述的營養(yǎng)限制條件下的培養(yǎng)，是指在培養(yǎng)基中所含的包括維生素等的營養(yǎng)鹽類比通常少的培養(yǎng)基(營養(yǎng)限制培養(yǎng)基)中進行的培養(yǎng)。例如，將在分離所述JPCC DA05800株時使用的f/2培養(yǎng)基(營養(yǎng)液體培養(yǎng)基)中包含維生素等的營養(yǎng)鹽類(硝酸鈉、 磷酸氫二鈉、偏硅酸鈉、f/2微量金屬溶液、以及f/2維生素溶液)的含量定為100%時，使用該含有率不足100%的f/2培養(yǎng)基(營養(yǎng)限制液體培養(yǎng)基)進行培養(yǎng)，就相當于在營養(yǎng)限制條件下進行培養(yǎng)。關于在所述營養(yǎng)限制液體培養(yǎng)基中所含有的維生素等的營養(yǎng)鹽類的含量，從提高該微藻中的油分的含有率的觀點來考慮，優(yōu)選0 60%、進一步優(yōu)選0 30%、更加優(yōu)選 0 20%、特別優(yōu)選0 10%、最優(yōu)選0%。所述的從營養(yǎng)培養(yǎng)基向營養(yǎng)限制培養(yǎng)基轉換的方法沒有特別限制，可以一次性地轉換為營養(yǎng)限制培養(yǎng)基，也可以逐漸轉換。所述一次性轉換的方法，可以列舉例如使用離心等使藻體沉淀，將作為上清液的營養(yǎng)液體培養(yǎng)基去除，再加入營養(yǎng)限制液體培養(yǎng)基的方法。 此外，作為逐漸轉換的方法，可以列舉例如向用半透膜隔開的一側放入含有藻體的營養(yǎng)液體培養(yǎng)基，在另一側放入營養(yǎng)限制液體培養(yǎng)基，從而利用滲透壓的原理使得含有藻體的液體培養(yǎng)基中的包含維生素等的營養(yǎng)鹽類的含有濃度逐漸降低，使之成為營養(yǎng)限制液體培養(yǎng)基。關于所述在營養(yǎng)限制下進行培養(yǎng)的期間，在不損害本發(fā)明的效果的范圍內沒有特別限制，只要是能夠提高該微藻的油分含有率的期間即可。該期間優(yōu)選進行3 20日、進一步優(yōu)選3 10日、更加優(yōu)選3 7日。關于將培養(yǎng)的微藻回收的方法可以適用公知的方法，可以列舉如將培養(yǎng)液進行離心而使藻體沉降，將藻體作為離心沉淀回收的方法、或者使營養(yǎng)液通過帶有該微藻無法通過的孔的過濾器，然后將殘留在過濾器上的藻體進行回收的方法等。關于提取在所述培養(yǎng)方法以及回收方法中所得的藻體中所含油分的方法，只要是不損害本發(fā)明的效果的方法即可，沒有特殊限制。例如可以將回收的藻體懸浮 (suspension)在有機溶劑中從而將藻體中所含的油分提取到該有機溶劑中。該有機溶劑只要是不損害本發(fā)明的效果，能夠溶解藻體中所含油分的有機溶劑即可，沒有特殊限制。例如，可以列舉正己烷(以下稱為己烷)、丙酮、乙腈、甲醇、乙醇、丁醇、 氯仿等。在此之中，從對油分的提取效率的觀點來看，優(yōu)選己烷。此外，這些有機溶劑，可以單獨使用一種，也可以將兩種以上組合使用。此外，為了提高該油分的提取效率，優(yōu)選將懸浮有該藻體的有機溶劑用超聲波均質機(ultrasonic homogenizer)等進行處理，對該藻體進行物理性的破壞。作為將所述油分從所述微藻的藻體中提取的優(yōu)選溶劑在前面提過的己烷，可以作為單獨的單相溶劑加以使用，也可以作為與甲醇和/或乙醇混合而成的兩相溶劑使用。
在與甲醇混合而作為兩相溶劑使用時，優(yōu)選以己烷甲醇=10 0 5 5(體積比)的比例混合，進一步優(yōu)選以己烷甲醇=10 0.5 8 2的比例混合，更加優(yōu)選以己烷甲醇=10 1 9 1的比例混合。在與乙醇混合而作為兩相溶劑使用時，優(yōu)選以己烷乙醇=10 0 5 5(體積比)的比例混合，進一步優(yōu)選以己烷乙醇=10 0.5 8 2的比例混合，更加優(yōu)選以己烷乙醇=10 1 9 1的比例混合。將乙醇和甲醇混入己烷中而形成兩相溶劑時，可以將乙醇和甲醇以任意比例(體積比)混合而作為單相溶劑使用。此時，優(yōu)選以己烷甲醇和乙醇=10 0 5 5(體積比)的比例混合，進一步優(yōu)選以己烷甲醇和乙醇=10 0.5 8 2的比例混合，更加優(yōu)選以為己烷甲醇和乙醇=10 1 9 1的比例混合。此外，從提高溶劑的安全性以及油分提取量的觀點來看，與甲醇相比更優(yōu)選使用乙醇。使用有機溶劑從所述藻體中將油分提取出來時，可以在將該藻體干燥后使用有機溶劑將油分提取出來，也可以在該藻體中含有水分的未干燥狀態(tài)下使用有機溶劑將油分提取出來。從本發(fā)明的微藻的藻體中使用有機溶劑將油分提取出來時，不預先將藻體干燥， 對未干燥狀態(tài)藻體使用有機溶劑將油分提取出來時，可以提高油分提取量，因此是優(yōu)選的。從公知的微藻的藻體中使用有機溶劑將油分提取出來時，預先將該藻體進行干燥，從處于干燥狀態(tài)的藻體中使用有機溶劑將油分提取出來，一般來說可以提高油分提取量。但是，預先對藻體進行干燥，從干燥處理所需時間、能耗方面來看是不利的。在這一點上，本發(fā)明所涉及的微藻的藻體可以從未干燥狀態(tài)的藻體中高效率地提取出油分，可以說是個非常優(yōu)異的性質。這個優(yōu)點可以令使用本發(fā)明的微藻的生物燃料等的制造過程實現(xiàn)低耗能化。從未干燥狀態(tài)的所述藻體中使用有機溶劑將油分提取出來時，使用己烷和甲醇以及/或者乙醇所組成的兩相溶劑時，可以提高提取量。此這個兩相溶劑特別優(yōu)選以己烷 甲醇=10 1的比例(體積比)混合的兩相溶劑或以己烷乙醇=10 1的比例(體積比)混合的兩相溶劑。從干燥狀態(tài)的所述藻體中使用有機溶劑將油分提取出來時，使用由己烷組成的單相溶劑，其提取效率更高。所述有機溶劑比該油分的沸點低，因此可以通過吹入氮氣氣流、減壓蒸餾等的方法去除。此外，也可以循環(huán)使用。此外，可以根據(jù)需要對由所述有機溶劑提取出來的油分進行進一步的純化。純化方法可以使用公知的方法，例如可以列舉通過使用硅膠的固相萃取法、液相色譜法、蒸餾法等將該油分中所含的各成分分級的方法。通過本發(fā)明的油分制造方法所制造的油分包括將該微藻用尼羅紅進行染色時所觀察到的油分。該油分包含碳原子數(shù)16至沈的脂肪族烴。所述碳原子數(shù)16至沈的脂肪族烴，主要是碳原子數(shù)16、18、20、22、24、以及沈的脂肪族烴。此外，該油分除了所述碳原子數(shù)16至沈的脂肪族烴之外，還可能包含中性脂質、 鯊烯、碳原子數(shù)27以上的脂肪族烴、磷脂、游離脂肪酸、類固醇化合物以及類胡蘿卜素等的光合成色素等。在本發(fā)明的油分制造方法中，使用JPCC DA0580株作為該微藻時，對于由其制造的油分的說明，與所述的JPCC DA0580株可在其藻體中蓄積的油分的說明是一樣的。(油分)本發(fā)明中的油分，是由本發(fā)明的油分制造方法所制造的。對于該油分的說明，與所述的油分制造方法中的油分的說明是一樣的。此外，也可以從該油分中純化出碳原子數(shù)16至沈的脂肪族烴。并且，在該油分中含有中性脂質以及/或者鯊烯時，可以從該油分中純化出中性脂質以及/或者鯊烯。該純化方法沒有特殊限制，可以使用公知的方法進行。例如，可以將從該微藻中用己烷提取出來的油分溶解在己烷等的有機溶劑中，向該溶劑中投入硅膠，使得除脂肪族烴之外的物質被硅膠吸附、使只有該脂肪族烴洗脫出來而得到純化。此外，可以將吸附在硅膠上的中性脂質用有機溶劑等洗脫出來而進行純化。此外，可以對洗脫出來的脂肪族烴通過蒸餾、色譜等的公知的純化方法進行純化，使碳原子數(shù)16至沈的脂肪族烴和鯊烯分離開來。需要指出的是，作為溶解該油分的有機溶劑，可以列舉與在前述的油分制造方法中的關于有機溶劑的說明中所舉出的有機溶劑一樣的溶劑。(干燥藻體)本發(fā)明中的干燥藻體，是將本發(fā)明的屬于舟形藻屬的微藻進行干燥而得到的。關于該微藻，可以列舉與本發(fā)明的所述屬于舟形藻屬的微藻的說明中所舉出的一樣的微藻。關于將該微藻進行干燥的方法，只要是能夠去除藻體中的水分的方法即可，沒有特殊限制。例如，可以列舉將藻體在陽光下曬的方法、向藻體吹干燥的空氣的方法、將藻體冷凍干燥(freeze-drying)的方法等。在此之中，從能夠抑制藻體中所含成分的分解的觀點來看，優(yōu)選使用借助冷凍干燥的干燥方法。(燃料)本發(fā)明中的燃料，是從本發(fā)明的所述屬于舟形藻屬的微藻中所得到的燃料。作為該微藻，可以列舉在本發(fā)明的所述屬于舟形藻屬的微藻的說明中舉出的一樣的微藻。作為將該微藻作為燃料使用的方法，可以列舉如燃燒該微藻的方法、燃燒從該微藻中采集的油分的方法、燃燒從該微藻中采集的油分中純化出的碳原子數(shù)16至沈的脂肪族烴、中性脂質以及/或者鯊烯的方法等。燃燒該微藻時，從提高燃燒效率的觀點來看，優(yōu)選使用將該微藻干燥而得到的干燥藻體。該干燥藻體與本發(fā)明所涉及的前文所述的干燥藻體是相同的。該微藻為JPCC DA0580時，該干燥藻體擁有的熱量可以達到煤炭擁有的熱量(約6000kcal/kg)的同等程度以上。燃燒從該微藻提取出的油分時，該油分與本發(fā)明的所述油分是一樣的。從該微藻所提取的油分是可燃性的，例如可以作為鍋爐等的燃料加以使用。該藻類為JPCC DA0580 株時，其己烷提取物(油分)擁有的熱量，可能達到8700kcal/kg以上。燃燒從該微藻中提取的油分中純化得到的碳原子數(shù)16至沈的脂肪族烴、中性脂質以及/或者鯊烯時，該碳原子數(shù)16至沈的脂肪族烴、中性脂質以及鯊烯與本發(fā)明之前所述的油分中的碳原子數(shù)16至沈的脂肪族烴、中性脂質以及鯊烯是一樣的。該碳原子數(shù)16 至26脂肪族烴適合作為柴油發(fā)動機的燃料加以使用。此外，該中性脂質可以通過公知的酯交換法等變成柴油燃料(也就是生物柴油燃料)。(二氧化碳的固定方法)本發(fā)明的二氧化碳的固定方法包括對本發(fā)明的所述屬于舟形藻屬的微藻進行培養(yǎng)的培養(yǎng)步驟。在該微藻生長過程中進行的光合作用具有將培養(yǎng)液中(大氣中)的二氧化碳同化的作用。也就是說，通過培養(yǎng)該微藻，能夠固定二氧化碳。作為該微藻，可以列舉于在本發(fā)明的所述屬于舟形藻屬的微藻的說明中所舉例的同樣的微藻。培養(yǎng)該微藻的步驟，與本發(fā)明的所述油分制造方法中的該微藻的培養(yǎng)方法是相同的。接下來給出實施例對本發(fā)明進行詳細的說明，但本發(fā)明不局限于以下的實施例。實施例1(JPCC DA0580株的烴生產(chǎn)能力)在M孔微量滴定板中對JPCC DA0580株培養(yǎng)12周以后，使用尼羅紅對其藻體進行染色，確認到藻體中產(chǎn)生并蓄積了油分。具體來講，向含有2ml所述f/2培養(yǎng)基的M孔微量滴定板中接種JPCCDA0580株， 在1000勒克司(Ix)的光照射下進行12周的靜置培養(yǎng)。接下來，將培養(yǎng)液移入1. 5ml容量的微型管(microtube)中，在13000rpm條件下進行離心，將藻體作為離心沉淀回收。為了除去該離心沉淀中含有的培養(yǎng)基，將其懸浮在0. 5ml的生理鹽水中，在13000rpm條件下離心5分鐘，將藻體作為離心沉淀回收。接下來，將此離心沉淀再懸浮在450 μ 1的生理鹽水中，再加入50 μ 1的尼羅紅溶液后進行混合，然后在室溫下溫育10分鐘。在此之后，在13000rpm條件下離心5分鐘，回收離心沉淀。為了洗去多余的尼羅紅溶液，將該離心沉淀懸浮在0. 5ml的生理鹽水中，然后再次進行離心，將藻體作為離心沉淀回收。將該藻體懸浮在50 μ 1的生理鹽水中，在熒光顯微鏡下進行觀察。其結果，確認到了發(fā)出黃色熒光的區(qū)域，該黃色熒光顯示藻體中被尼羅紅染色的油分的存在區(qū)域。在該熒光顯微鏡像中，觀察到了藻體中大量油分呈油滴狀蓄積的情況(圖5)。此外，所述尼羅紅溶液是將Img的尼羅紅溶解在IOml的丙酮中，再用生理鹽水稀釋4倍而得到的溶液。實施例2(對于蓄積在JPCCDA0580株中的烴的鑒定)向放入500ml所述f/2培養(yǎng)基的500ml容量的扁平燒瓶中接種JPCCDA0580株，在 3000勒克司(Ix)的光照射下，在通氣量Ivvm條件下進行了一周的通氣培養(yǎng)。之后，將通過離心回收的藻體離心沉淀冷凍干燥處理過夜。向得到的干燥藻體0. Ig中加入己烷6ml使其懸浮，用超聲波均質機在室溫下對藻體一邊粉碎一邊進行30分鐘的提取。接下來，對己烷提取液進行離心使得藻體殘渣沉淀，回收作為上清的己烷提取液約6ml。向作為沉淀殘留的藻體的殘渣中再加入6ml新的己烷， 將同樣的提取操作再進行了兩次(一共進行了 3次的提取操作)。接下來，將回收的己烷提取液約 18ml，通過 S印-pak cartridge (6cc/lg) (Waters Corporation 公司制造)硅膠柱， 除去中性脂質、游離脂肪酸、色素等，得到了脂肪族烴級分16ml。用氮氣氣流使其干燥，再溶解于己烷0. 5ml中，由此作為樣本。通過氣相色譜質譜聯(lián)用分析(GCMQ對該樣本進行分析，鑒定了該樣本中所含的烴。所用的氣相色譜質譜聯(lián)用分析儀為日本株式會社島津制作所制的GC2010，使用的柱為DB-I (柱長30m、柱內徑0.25mm)，氣相色譜是在測定條件(升溫100°C (0分) 3300C (10°C/分、保持)，進樣溫度300°C、進樣模式不分流(splitless)、載氣He、進樣量1.0 μ 1)下進行的。質量分析儀使用了通過電子沖擊(EI)法進行離子化的、日本株式會社島津制作所制造的 GCMS-QP5050A。GCMS分析的結果明確了 JPCC DA0580株產(chǎn)生了碳原子數(shù)16至沈的脂肪族烴。更具體而言，確認到其主成分為碳原子數(shù)16、18、20、22、Μ以及沈的直鏈脂肪族飽和烴。此外，將輕油0. 溶解于己烷中的樣本作為定量用樣本，從GCMS圖中的該烴的面積比來對JPCC DA0580株產(chǎn)生的烴進行了定量，發(fā)現(xiàn)JPCCDA0580株的干燥藻體中的該碳原子數(shù)16、18、20、22、Μ以及沈的直鏈脂肪族飽和烴的含有率為約0. 2質量％。該含有率比至今為止公知的、能夠生產(chǎn)輕油類脂肪族烴的藻類的含有率更高。此外，該公知的藻類如非專利文獻1的表2所記載的，輕油類脂肪族烴在其干燥藻體中所占的比例為0. 025 0. 12質量％。并且，所述GCMS圖中的具有最大面積的峰被鑒定為是鯊烯。從其峰的面積計算得出，該JPCC DA0580株的單位干燥藻體中的鯊烯含有率為約0. 3質量％。此外，在使用所述硅膠柱進行純化前的己烷提取液約18ml中，取出微量的樣本， 通過前述GCMS在相同條件下進行了分析。其結果，確認了由己烷提取出來的油分在JPCC 0々0580株的干燥藻體中占45.5質量％以上。此外還確認，對于在同一條件下培養(yǎng)得到的其他培養(yǎng)批次(lot)中得到的JPCC DA0580株的藻體，在其干燥藻體中前述由己烷提取出的油分最大可以占到58質量％。實施例3(對于構成JPCCDA0580株中蓄積的甘油三酯的脂肪酸的鑒定)將通過和實施例2相同的方法培養(yǎng)得到的JPCC DA0580株的藻體離心沉淀進行冷凍干燥過夜。以該干燥藻體20mg作為樣本，除了每次提取操作使用的己烷為7ml以外，其他使用和實施例2相同的方法，得到了己烷提取液約20ml。通過氮氣氣流使該己烷提取液的溶劑己烷蒸發(fā)而加以去除，得到了 9. Img的己烷提取物(油分)。因此，確認到己烷提取物(油分)所占的比例為該干燥藻體的45. 5質量％。在所述己烷提取物(油分)中加入5%鹽酸-甲醇溶液，在密封的試管中在90°C 下反應2小時，對所述己烷提取物中所含的甘油三酯等中性脂質的脂肪酸進行甲酯化。之后，用氯仿提取，取出氯仿相作為樣本。將所述樣本用下述的GCMS裝置進行分析，使用油酸甲酯作為標準物質進行了定量。使用的氣相色譜分析儀是Agilent Technologies International株式會社制造的GC6890N (型號)，使用的柱是J&W制的DB-WAX (柱長30m、柱內徑0. 25mm、膜厚 0. 25mm)，氣相色譜分析是在測定條件(升溫50°C (0分) 250°C (10°C /分，保持15分鐘)，進樣溫度230°C、進樣模式分流進樣(分流比10 1)、載氣徹(1.^11/分)、檢測器FID(250°C)、進樣量0.6μ1)下進行的。質量分析儀使用了通過電子沖擊(EI)法進行離子化的、日本電子株式會社制造的 JMS-GCmate-II 型。GCMS分析的結果，構成所述甘油三酯等中性脂質的脂肪酸主要是十四酸{肉豆蔻酸(C14:0)}、十六酸{棕櫚酸(C16:0)}、十六烯酸{棕櫚油酸(C16:l)}、十八烯酸{油酸 (C18:l)}、和二十碳五烯酸{EPA(C20:5)}。這些脂肪酸在JPCC DA0580株的單位干燥藻體中的含有量依次為約1.0質量％、約12. 7質量％、約17.0質量％、約0.8質量(％、和約1.4 質量％。也就是說，構成所述甘油三酯等中性脂質的脂肪酸，占了該干燥藻體的約32. 9質量％。假定構成所述甘油三酯等中性脂質的脂肪酸都是油酸時，計算出該干燥藻體的約 3. 8質量％為構成所述甘油三酯等中性脂質的甘油，得出該干燥藻體的約36. 7質量％為所述甘油三酯等中性脂質的結論。實施例4(JPCC DAO58O株的生長速度)用和實施例2相同的方法對JPCC DA0580株進行了培養(yǎng)。此外，除了將液體培養(yǎng)基變成下述的IMK培養(yǎng)基之外，其他用與實施例2相同的方法培養(yǎng)了 JPCC DA0580株。為了對在各個培養(yǎng)基中的JPCC DA0580株的生長進行評價，對各培養(yǎng)液的濁度(0D750)進行了跟蹤檢測。其結果如圖2所示。所述IMK培養(yǎng)基是如下進行制備的。將包括維生素等的營養(yǎng)鹽類{硝酸鈉200mg/l、磷酸氫二鈉1. %ig/l、磷酸二氫鈉 5. Omg/1、氯化銨 68mg/l、硫胺素 0. 2mg/l、生物素 0. 0015mg/l、維生素(B12)0. 0015mg/l、 Na2EDTA 37. 2mg/l、FeEDTA 5. 2mg/l、MnEDTAO. 3332mg/l、四水合氯化猛(11)0. 18mg/l、七水合硫酸鋅0.02%ig/l、六水合氯化鈷(II)0.0Hmg/l、二水合鉬(VI)酸鈉0. 0072mg/l、 五水合硫酸銅(11)0. 002%ig/l、五水合亞硒酸0.0016mg/l}和人工海水(產(chǎn)品名=MARINE ART · SF-K日本千壽制藥股份公司制造)37g/l)按照上述規(guī)定濃度溶解在蒸餾水中，調制成液體培養(yǎng)基作為IMK培養(yǎng)基。從得到的結果可以確認，JPCC DA0580株在前述f/2培養(yǎng)基中，經(jīng)過一周的培養(yǎng)期間，0D750變?yōu)?. 05 0. 9，其生長達到了穩(wěn)定狀態(tài)。將達到穩(wěn)定狀態(tài)的藻體回收后進行冷凍干燥，對其干燥藻體的回收量進行調查，結果是每IL培養(yǎng)液為0. 46g。如前文實施例2所述，JPCC DA0580株的單位干燥藻體的己烷提取物(油分)的含量可以達到占55質量％以上，因而確認了 JPCC DA0580株的每一周的油分生產(chǎn)率是每IL 培養(yǎng)規(guī)模0. ^g以上。另一方面，JPCC DA0580株在所述IMK培養(yǎng)基中，經(jīng)過1周的培養(yǎng)期，其生長沒有達到穩(wěn)定狀態(tài)。
實施例5(JPCC DA0580株的海水要求性)在實施例2中使用的f/2培養(yǎng)基的組分中改變人工海水(產(chǎn)品名MARINE ART · SF-I,日本千壽制藥株式會社制)濃度，制備了 5種營養(yǎng)液體培養(yǎng)基。該人工海水的濃度，以 Og/Ι 添加時為 0%，以下同樣為 11. lg/1 (30% )、18· 5g/l (50% )、29· 8g/l (80%), 37g/l(100% )。將這些培養(yǎng)基500ml放入500ml容量的扁平燒瓶內，向其中接種JPCCDA0580株， 在與實施例2相同的培養(yǎng)條件下進行了一周的靜置培養(yǎng)。為了對生長進行評價，對培養(yǎng)液的混濁度(0D750)進行了跟蹤檢測。將其結果顯示在圖3中。從得到的結果中可以確認到，在一周的生長期中，JPCC DA0580株在含有人工海水 (海水成分)100%條件下生長狀況最好。此外確認到，其生長隨著人工海水(海水成分) 濃度的降低而減少，在人工海水(海水成分)為0%時無法生長。由此可以確認JPCC DA0580株是海洋性的微藻。實施例6(JPCC DA0580株的干燥藻體的發(fā)熱量)用和實施例2相同的培養(yǎng)方法將JPCC DA0580株進行了一周的培養(yǎng)。之后，將培養(yǎng)液離心而回收得到的藻體離心沉淀進行了冷凍干燥處理。將得到的干燥藻體作為樣本，用彈式量熱器(Bomb-type calorimeter)(日本股份公司吉田制造所制，型號1013-J，熱量的測量范圍4000 33500J)測量發(fā)熱量，結果為 6730kcal/kg。也就是說，確認了 JPCC DA0580株的干燥藻體具有和煤炭同等以上的發(fā)熱量。此外，以所得到的干燥藻體作為樣本，采用和實施例2 —樣的方法將己烷提取液用氮氣氣流進行干燥，得到了己烷提取物(油分)。以此作為樣本，用前述的彈式量熱器對熱值進行了測量，該己烷提取物(油分)的熱值為8780kcal/kg。實施例7(對從JPCCDA0580株藻體提取油分時的有機溶劑的探討1)用與實施例2—樣的方法對JPCC DA0580株進行了一周的培養(yǎng)。之后，對培養(yǎng)液進行離心，回收藻體離心沉淀。對處于未干燥狀態(tài)的所述藻體離心沉淀(干燥時的質量為0. Ig)，加入由己烷/甲醇組成的兩相溶劑(混合比(體積比)為己烷甲醇=10 l)6ml而使其懸浮，使用超聲波均質機在室溫下對藻體一邊粉碎一邊進行了 30分鐘的提取。接下來，對該提取液進行離心，使藻體殘渣沉淀，回收了上清提取液約6ml。向作為沉淀殘留的藻體殘渣中再次添加所述兩相溶劑6ml而使其懸浮，將同樣的提取操作再進行了兩次(一共進行了 3次的提取操作)。使用氮氣氣流對得到的提取液(共18ml)進行干燥，用與實施例2 —樣的方法通過 GCMS進行了定量分析。其結果，確認了用所述由兩相溶劑提取出的油分在JPCC DA0580株藻體的干燥時質量中占到51. 8質量％。將其結果一并寫入表1中。接下來，將從所述培養(yǎng)液中經(jīng)離心回收得到的藻體離心沉淀經(jīng)冷凍干燥過夜而得到的干燥藻體0. lg，使用由己烷構成的單相溶劑代替所述兩相溶劑，用同樣的方法提取了油分。用氮氣氣流對得到的提取液(共18ml)進行干燥，用與實施例2 —樣的方法用GCMS進行了定量分析。其結果，確認了用所述由己烷組成的單相溶劑提取出來的油分在JPCCDA0580株藻體的干燥時質量中占46. 2質量％。將其結果一并寫入表1中。此外，對由所述培養(yǎng)液通過離心而回收的藻體離心沉淀經(jīng)過冷凍干燥過夜后所得到的干燥藻體0. lg，使用所述兩相溶劑(己烷甲醇(混合比(體積比)10 1)用同樣的方法提取了油分。對所得到的提取液(共18ml)通過氮氣氣流而使其干燥，用與實施例 2相同的方法通過GCMS進行了定量分析。其結果，確認到用所述由己烷所構成的單相溶劑提取出的油分在JPCCDA0580株的藻體干燥時的質量中占45. 3質量％。將此結果一并寄寫入表1中。(表1)
藻類未干燥狀態(tài)干燥狀態(tài)干燥狀態(tài)兩相溶劑(質量％)單相溶劑(質量％)兩相溶劑(質量％)JPCC DA0580 林51.846.245.3如上所述，從JPCC DA0580株的未干燥狀態(tài)的藻體使用有機溶劑提取油分時，使用由己烷和甲醇組成的兩相溶劑時，獲得了高提取效率。對所述結果進行比較可見，從JPCC DA0580株提取油分時，相對于未干燥狀態(tài)的藻體離心沉淀，使用由己烷/甲醇組成的兩相溶劑進行提取是優(yōu)選的。實施例8(對從JPCCDA0580株的藻體提取油分時所用的有機溶劑的探討2)使用與實施例2相同的方法對于JPCC DA0580株進行了一周的培養(yǎng)。之后，從培養(yǎng)液中通過離心回收了藻體離心沉淀。對處于未干燥狀態(tài)的所述藻體離心沉淀(干燥時的質量為0. lg)，加入由己烷/乙醇組成的兩相溶劑(混合比(體積比)己烷乙醇=10 l)6ml使其懸浮，利用超聲波均質機在室溫下對藻體一邊粉碎一邊進行了 30分鐘的提取。接下來，對其提取液進行離心使藻體殘渣沉淀，回收上清的提取液6ml。對于所得到的提取液(共6ml)通過氮氣氣流使其干燥，用與實施例2同樣的方法使用GCMS進行了定量。其結果，確認到了用所述兩相溶劑提取出的油分在JPCC DA0580株藻體的干燥時的質量中占31. 5質量％。將其結果一并記入表2中。接下來，使用由己烷/甲醇所構成的兩相溶劑(混合比(體積比)己烷甲醇= 10 1)代替由己烷/乙醇組成的兩相溶劑，同樣地將處于為未干燥狀態(tài)的所述藻體離心沉淀(干燥時的質量為0. Ig)中的油分提取出來，用GCMS進行了定量。其結果，確認到了由所述兩相溶劑提取出來的油分在JPCC DA0580株藻體的干燥時質量中占30. 7質量％。將其結果一并寫入表2中。此外，與實施例7中的油分提取量相比實施例8中的提取量較少的原因，是因為將有機溶劑提取的次數(shù)從3次(實施例7)減少到了 1次(實施例8)。(表 2)
權利要求
1.一種屬于舟形藻屬的微藻，其具有生產(chǎn)碳原子數(shù)16至沈的脂肪烴的能力。
2.具有生產(chǎn)碳原子數(shù)16至沈的脂肪烴的能力的微藻舟形藻屬Oiliticus種。
3.微藻舟形藻屬oiliticus 種 JPCCDA0580 株(FERM BP-11201)。
4.一種油分制造方法，其包括對權利要求1至3中的任意一項所述的微藻進行培養(yǎng)的步驟。
5.權利要求4所述的油分制造方法，其包括在所述培養(yǎng)步驟之后，使用比在該培養(yǎng)步驟中使用的培養(yǎng)基的營養(yǎng)鹽類濃度低的其他培養(yǎng)基進一步對所述微藻進行培養(yǎng)的步驟。
6.權利要求4或5所述的油分制造方法，其中，所述油分含有中性脂質。
7.權利要求4至6中任意一項所述的油分制造方法，其中，所述油分含有鯊烯。
8.權利要求4至7中任意一項所述的油分制造方法，其包括在所述培養(yǎng)步驟之后用有機溶劑將油分提取出來的步驟，所述有機溶劑選自由正己烷組成的溶劑、由正己烷和甲醇組成的溶劑、或者由正己烷和乙醇組成的溶劑。
9.由權利要求4至8中任意一項所述的油分制造方法所制造的油分。
10.將權利要求1至3中任意一項所述的微藻干燥而得到的干燥藻體。
11.由權利要求1至3中任意一項所述的微藻得到的燃料。
12.—種二氧化碳固定方法，其包括對權利要求1至3中任意一項所述的微藻進行培養(yǎng)的步驟。
全文摘要
本發(fā)明的目的在于提供具有對碳原子數(shù)16至26的脂肪族烴的高生產(chǎn)能力的微藻、具有該微藻的培養(yǎng)工序的制油方法、從該微藻所采集的油分、從該微藻所得到的燃料以及具有該微藻的培養(yǎng)工序的二氧化碳固定方法。本發(fā)明涉及屬于舟形藻屬(Navicula)的微藻，其具有生產(chǎn)碳原子數(shù)16至26的脂肪族烴的能力。本發(fā)明提供微藻舟形藻屬(Navicula)oiliticus種JPCCDA0580株(FERM BP-11201)。
文檔編號C12N1/12GK102388126SQ20108001542
公開日2012年3月21日 申請日期2010年3月10日 優(yōu)先權日2009年4月10日
發(fā)明者松本光史 申請人:電源開發(fā)株式會社