專利名稱：糞腸球菌、屎腸球菌及乳酸片球菌的培養基及其檢測方法
技術領域：
本發明涉及一種微生物菌種培養基及其檢測方法，特別是一種糞腸球菌、屎腸球菌及乳酸片球菌的培養基及其檢測方法。
背景技術：
微生物球菌特別是糞腸球菌、屎腸球菌和乳酸片球菌作為農業部批準使用的有益微生物菌種之一，已被廣泛應用于養殖業中，為減少和避免使用抗生素發揮了很大作用。但長期以來，益生菌特別是糞腸球菌、屎腸球菌和乳酸片球菌的檢測使用的是乳酸細菌培養基即MRS培養基和普通營養瓊脂粉且瓊脂粉在培養基中的含量較高，這樣檢測時培養基很容易出現凝結成塊，菌落與培養基斑點混淆不清，難以準確計數的缺點。
發明內容
本發明的目的就是要提供一種糞腸球菌、屎腸球菌及乳酸片球菌的培養基及其檢測方法，其提供了一種更為有效的檢測培養基和檢測方法，能克服上述缺點，為糞腸球菌、屎腸球菌和乳酸片球菌提供檢測的培養基不易凝結成塊，菌落與培養基斑點清楚，計數準確。本發明糞腸球菌、屎腸球菌及乳酸片球菌的檢測培養基技術方案是這樣來實現， 包括蛋白胨、牛肉膏、酵母膏、瓊脂粉、氯化鈉或磷酸二氫鉀、葡萄糖，還包括有碳酸鈣。本發明所述的糞腸球菌、屎腸球菌及乳酸片球菌的檢測培養基，其包括如下質量組份混合組成蛋白胨10-15、牛肉膏5-8、葡萄糖15-20、氯化鈉5_8、瓊脂粉10-12、碳酸鈣 10-20、和蒸餾水1000-1500，或蛋白胨10-15、牛肉膏5_8、葡萄糖15-20、酵母膏5_8、磷酸氫二鉀3-5、碳酸鈣10-20、瓊脂粉10-15、和蒸餾水1000-1500 ；亦或是由蛋白胨10-15、牛肉膏5-8、葡萄糖15-20、瓊脂粉10-12、碳酸鈣10-20、蒸餾水1000-1500、和氯化鈉5_8、酵母膏5-8、磷酸氫二鉀3-5的一種或任意幾種的組合構成。本發明所述的糞腸球菌、屎腸球菌及乳酸片球菌的檢測培養基，所述培養基由如下質量的組份混合組成蛋白胨10、牛肉膏5、葡萄糖20、氯化鈉5、瓊脂粉10、碳酸鈣10、蒸餾水1000 ；或蛋白胨10、牛肉膏5、葡萄糖20、酵母膏5、磷酸氫二鉀3、碳酸鈣10、瓊脂粉10 蒸餾水1000。本發明所述的糞腸球菌、屎腸球菌及乳酸片球菌的檢測培養基，所述的培養基中瓊脂粉的加入量為培養基總質量的0. 8-1. 4Wt%。本發明所述的糞腸球菌、屎腸球菌及乳酸片球菌的檢測培養基，所述的培養基中碳酸鈣的加入量為培養基總質量的l_2Wt%。一種糞腸球菌、屎腸球菌及乳酸片球菌的檢測方法，其是采用上面所述的檢測培養基，按下述方法步驟進行1)樣品稀釋a)將檢測樣品稱量后置于盛有無菌生理鹽水的容器中，加入玻璃珠，置于搖床震蕩30-50分鐘，得樣品液；b)將樣品液移入盛有無菌水的三角瓶中，充分振搖使樣品均勻分散，制成10-2的樣品稀釋液，再以此無菌操作制成相應適當的稀釋度；2)平板制作a)、選用2-3個上述相應適當的稀釋度，分別置于不同的培養皿內，每個稀釋度做2-3個重復；b)、將45-52°C保溫的培養基倒于培養皿中，使之均勻混合冷卻制成培養皿平板。3)培養和計數將2)步制 成的培養皿平板倒置于30-35°C恒溫箱內，培養48_72h，觀察長出的菌落，計算含有透明圈的菌落數目，選擇含有30-300個菌落的培養皿平板進行結果計算。本發明采用上述方案在糞腸球菌、屎腸球菌和乳酸片球菌的檢測培養基中加入碳酸鈣，同時控制瓊脂粉的加入量，其加入量占培養基總量的左右；與現有的乳酸細菌培養基MRS以下簡稱MRS相比，由于本發明培養基在檢測過程中產生的乳酸溶解菌落周圍的碳酸鈣形成透明圈，培養基不會凝結成塊，菌落與培養基之間斑點清晰，計數準確。
圖1為本發明檢測培養基及檢測方法檢測糞腸球菌、屎腸球菌和乳酸片球菌樣品時的結果照片圖。圖2為采用MRS培養基與采用本發明培養基檢測糞腸球菌、屎腸球菌及乳酸片球菌樣品時的結果照片對照圖。圖1中結果可以看出圖中培養基均一，菌落清晰，菌落透明圈非常明顯，容易計數。圖2中左邊為用MRS培養基所檢測的倒培養皿，倒培養皿中有很多半透明凝結物， 且顏色較深，影響準確計數；右邊為用本發明檢測培養基所檢測的倒培養皿，倒培養皿中球菌的透明圈非常明顯，菌落清晰可見，且整個倒培養皿色澤較淺，計數很容易。
具體實施例方式實施例1糞腸球菌、屎腸球菌和乳酸片球菌樣品檢測取l.OOg含糞腸球菌、屎腸球菌和乳酸片球菌的粉末樣品，采用培養基葡萄糖 20. Og蛋白胨10. 0g，牛肉膏5. Og,酵母膏5. Og,磷酸氫二鉀3. Og,碳酸鈣10. Og,瓊脂粉 10. Og蒸餾水1000克，pH自然，依次按照所述檢測過程稀釋至IO7倍倒平皿即倒培養皿，以下簡稱倒平皿，檢測結果如圖1。檢測儀器和器具10ml, Iml無菌移液管，250毫升無菌三角瓶，50毫升無菌三角瓶或試管，無菌生理鹽水，無菌培養皿，旋渦均勻器或震蕩培養器，恒溫培養箱。檢測過程和方法1)樣品稀釋準確稱量粉末狀樣品l.OOg，放于裝有99. Oml無菌生理鹽水三角瓶中，預先放 10 20粒無菌玻璃珠，置于搖床震蕩30分鐘，用無菌移液管吸取樣品Iml加入盛有99ml 無菌水的三角瓶中，在旋渦均勻器上充分振搖，務必使樣品均勻分散，即為10_2的樣品稀釋液，然后根據對樣品含菌量的估計，將用無菌操作方法樣品稀釋至適當的稀釋度。2)平板制作選用2-3個適合的稀釋度，培養皿貼上相應的標簽或用記號筆寫上編號，分別吸取不同稀釋度的稀釋液Iml置于培養皿內，每個稀釋度作2-3個重復。然后用45°C -52°C 保溫的培養基倒于培養皿，迅速轉動培養皿使之混合均勻，冷卻成平板。培養基要求 45°C-52°C保溫，倒培養皿時注意均勻，特別是沉在培養基底部的碳酸鈣要求在培養皿中使之分布均勻。3)培養和計數將培養皿倒置于30_35°C恒溫箱內培養48_72h，觀察長出的菌落，計含有透明圈的菌落數目，選擇含有30-300個菌落的培養皿進行結果計算。實施例2本發明檢測培養基與常用檢測培養基MRS對照，檢測方法、檢測儀器和器具同實施例1或按現有技術方法進行。
1、本發明檢測培養基取1. OOg含糞腸球菌、屎腸球菌、乳酸片球菌的粉末樣品， 采用本發明檢測培養基蛋白胨10. Og牛肉膏5. Og,葡萄糖20. Og,氯化鈉5. Og碳酸鈣 10. Og,瓊脂粉10. Og,蒸餾水1000克進行檢測；2、采用常用的乳酸細菌培養基MRS 蛋白胨10. Og牛肉膏10. Og酵母膏5. Og檸檬酸氫二銨2. Og葡萄糖20. Og吐溫801. OmL乙酸鈉5. Og磷酸氫二鉀2. Og硫酸鎂0. 58g硫酸錳0. 25g瓊脂18. Og蒸餾水1000克ρΗ6· 2-6. 6進行檢測依次按照所述檢測過程稀釋至IO7倍倒培養皿，檢測結果如圖2 左邊用MRS培養基所檢測的倒培養皿，倒培養皿中有很多半透明凝結物，且顏色較深，影響準確計數；右邊為用本發明檢測培養基所檢測的倒培養皿，倒培養皿中球菌的透明圈非常明顯，菌落清晰可見，且整個倒培養皿色澤較淺，計數很容易。
權利要求
1.一種糞腸球菌、屎腸球菌及乳酸片球菌的檢測培養基，包括蛋白胨、牛肉膏、酵母膏、 瓊脂粉、氯化鈉或磷酸二氫鉀、葡萄糖，其特征是還包括有碳酸鈣。
2.依據權利要求1所述的糞腸球菌、屎腸球菌及乳酸片球菌的檢測培養基，其特征是包括如下質量組份混合組成蛋白胨10 -15、牛肉膏5 -8、葡萄糖15-20、氯化鈉5-8、瓊脂粉10-12、碳酸鈣10-20、和蒸餾水1000-1500，或蛋白胨10-15、牛肉膏5_8、葡萄糖15-20、 酵母膏5-8、磷酸氫二鉀3-5、碳酸鈣10-20、瓊脂粉10-15、和蒸餾水1000-1500 ；亦或是由蛋白胨10 -15、牛肉膏5 -8、葡萄糖15-20、瓊脂粉10-12、碳酸鈣10-20、蒸餾水1000-1500、 和氯化鈉5-8、酵母膏5-8、磷酸氫二鉀3-5的一種或任意幾種的組合構成。
3.依據權利要求2所述的糞腸球菌、屎腸球菌及乳酸片球菌的檢測培養基，其特征是所述培養基由如下質量組份混合組成蛋白胨10、牛肉膏5、葡萄糖20、氯化鈉5、瓊脂粉 10、碳酸鈣10、和蒸餾水1000 ；或蛋白胨10、牛肉膏5、葡萄糖20、酵母膏5、磷酸氫二鉀3、 碳酸鈣10、瓊脂粉10、和蒸餾水 1000。
4.依據權利要求1或2所述的糞腸球菌、屎腸球菌及乳酸片球菌的檢測培養基，其特征是培養基中瓊脂粉的加入量為培養基總質量的0. 8-1. 4fft %。
5.依據權利要求1或2所述的糞腸球菌、屎腸球菌及乳酸片球菌的檢測培養基，其特征是培養基中碳酸鈣的加入量為培養基總質量的l-2Wt %。
6.一種糞腸球菌、屎腸球菌及乳酸片球菌的檢測方法，其特征是以權利要求1-3之一所述的檢測培養基為培養基，按下述方法步驟進行樣品稀釋將檢測樣品稱量后置于盛有無菌生理鹽水的容器中，加入玻璃珠，置于搖床震蕩30-50 分鐘，得樣品液；將樣品液移入盛有無菌水的三角瓶中，充分振搖使樣品均勻分散，制成10_2的樣品稀釋液，再制成相應適當的稀釋度；平板制作a)、選用2-3個上述相應適當的稀釋度，分別置于不同的培養皿內，每個稀釋度做2-3 個重復；b)、將45-52°C保溫的培養基倒于培養皿中，使之均勻混合冷卻制成培養皿平板；3)培養和計數將2)步制成的培養皿平板倒置于30-35°C恒溫箱內培養48-7池，觀察長出的菌落，計算含有透明圈的菌落數目，選擇含有30-300個菌落的培養皿平板進行結果計算。
全文摘要
本發明公開了一種糞腸球菌、屎腸球菌及乳酸片球菌的培養基及其檢測方法；包括蛋白胨、牛肉膏、酵母膏、瓊脂粉、氯化鈉或磷酸二氫鉀、葡萄糖，還包括有碳酸鈣；所述的培養基中瓊脂粉的加入量為培養基總質量的0.8-1.4Wt％；本發明為糞腸球菌、屎腸球菌和乳酸片球菌提供檢測的培養基不易凝結成塊，菌落與培養基斑點清楚，計數準確。
文檔編號C12Q1/06GK102154439SQ20101061974
公開日2011年8月17日 申請日期2010年12月31日 優先權日2010年12月31日
發明者楊林海, 鐘啟平 申請人:宜春強微生物科技有限公司