專利名稱：一種用于稻米的抗性淀粉含量測定方法
技術領域：
本發明涉及測定方法的技術領域，具體地說是一種用于稻米的抗性淀粉含量測定方法。
背景技術：
抗性淀粉(Resistant starch, RS)的概念最早由恩格里斯特(Englyst)提出，指不能在健康人體小腸中消化吸收的淀粉及其降解物的總稱。抗性淀粉具有非常重要的生理功能，降低糖尿病患者飯后血糖值、降血脂以及控制體重、能預防腸道疾病、促進微量元素的吸收。目前關于RS的測定方法主要有酶-直接法(Englyst法、Champ法)、超聲波-酶法(Berry法)、微波-酶法(Goni法)、體外測定法(McCleary法)等。其中體外測定法 (McCleary)法已經獲得美國官方分析化學師協會(AOAC)首選方法，并獲得了美國谷物化學家協會(AACC)的承認。該方法測定原理為，37°C恒溫震蕩16h，水解快消化淀粉和慢消化淀粉，經過離心洗滌，氫氧化鉀溶解抗性淀粉后，再使用糖化酶(AGM)水解已被破壞的抗性淀粉，最后測定水解液中葡萄糖的濃度以計算抗性淀粉的含量。體外測定法(McCleary 法)是在詳細研究各種參數的基礎上制定的，與其他方法比較，該方法簡便可靠、重復性好的優點，是目前最為可靠、常用的一種測定抗性淀粉含量的方法。但該方法使用胰α-淀粉酶在1 搖床孵育期間，淀粉水解液出現不同程度的發酵，而抗性淀粉不能被淀粉酶水解， 卻可以被細菌發酵，影響測定結果的準確性。
發明內容
本發明的目的在于提供一種改進的用于稻米的抗性淀粉含量測定方法，它可克服現有技術中因淀粉水解過程中雜菌干擾，影響測定結果的準確性的一些不足。為了實現上述目的，本發明的技術方案是一種用于稻米的抗性淀粉含量測定方法，其特征在于所述的測定方法包括如下步驟a、稱取0. IOOOg米粉，加入40mg α -淀粉酶(Sigma A-3176)，攪拌均勻；b、再加入4mL馬來酸鈉緩沖溶液和10 μ L淀粉葡萄糖糖苷酶(AGM)，混合后配置成淀粉水解混合液；C、在4 μ L淀粉水解混合液中加入15-35 μ L抗生素溶液或抗生素混合液；d、在常溫條件下酶解8小時以上，然后檢測葡萄糖含量。使用時，本發明在淀粉水解液中加入不同類型的抗生素，探討抗生素對淀粉水解效果，以及對抗性淀粉含量測定結果的影響，為準確、客觀測定稻米中抗性淀粉含量提供有效的方法。通過比較抗生素對淀粉水解效果和被檢測樣品抗性淀粉含量的影響，結果表明抗生素能有效抑制淀粉水解過程中的雜菌的發酵作用，而不影響影響淀粉酶的活性； 最有效的抗生素為混合抗生素(O. 40-0. 52mg/mL青霉素、15000-1700UI/mL硫酸慶大霉素、 0.8-1. 2mg/mL頭孢氨芐、0.85-1. 30mg/mL乳糖酸紅霉素4種抗生素按1.2 1 1. 2 1 比例混合)，其最佳劑量為35 μ L。本研究為高抗性淀粉含量的水稻品種育種和基礎研究奠定實驗技術基礎。
具體實施例方式下面結合表格和實施例對本發明作進一步的描述。本發明所述的測定方法包括如下步驟a、稱取0. IOOOg米粉，加入40mg α -淀粉酶(SigmaA-3176)，攪拌均勻；b、再加入4mL馬來酸鈉緩沖溶液和10 μ L淀粉葡萄糖糖苷酶 (AGM)，混合后配置成淀粉水解混合液；C、在4 μ L淀粉水解混合液中加入15-35 μ L抗生素溶液或抗生素混合液；d、在常溫條件下酶解8小時以上，然后檢測葡萄糖含量。常溫條件是指溫度35-38°C，酶解時間為8-16小時。b步驟中，在4 μ L淀粉水解混合液中加入35 μ L抗生素溶液或抗生素混合液。b步驟中，抗生素溶液是指下列溶液中的一種0. 48mg/mL的青霉素、1600UI/mL的硫酸慶大霉素、1. Omg/mL的乳糖酸紅霉素、1. Omg/mL的頭孢氨芐、1. Omg/mL的頭孢曲松鈉或0. 5mg/mL 的氯霉素。b步驟中，抗生素混合液是指青霉素、硫酸慶大霉素、頭孢氨芐和乳糖酸紅霉素混合液，上述各成分的混合比為1 :1:1: 1、1.2 1 1.2 1或1.5 :1:1: 1。抗生素混合液中采用0. 40-0. 52mg/mL的青霉素、15000_1700UI/mL的硫酸慶大霉素、0. 8-1. 2mg/ mL的頭孢氨芐和0. 85-1. 30mg/mL的乳糖酸紅霉素這4種抗生素。實施例1A、抗生素對慢消化淀粉水解的影響。從表1可以看出，在α -淀粉酶的37°C水解體系中，處理及對照組水解液中的葡萄糖濃度均隨水解時間延長而呈增大趨勢。處理組反應16小時均高于8小時。在相同的水解時間下，加入抗生素組的水解液葡萄糖含量，均明顯高于對照組。同時發現，在水解反應16小時，頭孢氨芐組的水解液葡萄糖含量最高，其次青霉素G組，第三高的是乳糖酸紅霉素組，硫酸慶大霉素組葡萄糖含量最低。另外，不同劑量的抗生素濃度，對水解液葡萄糖含量有明顯的差異。不同種類的抗生素淀粉水解中葡萄糖濃度(mg/mL)CN 102533938 A
說
權利要求
1.一種用于稻米的抗性淀粉含量測定方法，其特征在于所述的測定方法包括如下步驟a、稱取0. IOOOg米粉，加入40mg α -淀粉酶(Sigma A-3176)，攪拌均勻；b、再加入4mL 馬來酸鈉緩沖溶液和10 μ L淀粉葡萄糖糖苷酶(AGM)，混合后配置成淀粉水解混合液；C、在 4 μ L淀粉水解混合液中加入15-35 μ L抗生素溶液或抗生素混合液；d、在常溫條件下酶解8 小時以上，然后檢測葡萄糖含量。
2.根據權利要求1所述的一種用于稻米的抗性淀粉含量測定方法，其特征在于a步驟中，米粉的顆粒大小為80-150目。
3.根據權利要求1所述的一種用于稻米的抗性淀粉含量測定方法，其特征在于b步驟中，馬來酸鈉緩沖溶液的濃度為0. 1 mol/L，pH值為6. 0，淀粉葡萄糖糖苷酶(AGM)的濃度為 3300UI/mL。
4.根據權利要求1所述的一種用于稻米的抗性淀粉含量測定方法，其特征在于c步驟中，在4 μ L淀粉水解混合液中加入35 μ L抗生素溶液或抗生素混合液。
5.根據權利要求1所述的一種用于稻米的抗性淀粉含量測定方法，其特征在于c步驟中，抗生素溶液是指下列溶液中的一種0. 48mg/mL的青霉素、1600UI/mL的硫酸慶大霉素、 1. Omg/mL的乳糖酸紅霉素、1. Omg/mL的頭孢氨芐、1. Omg/mL的頭孢曲松鈉或0. 5mg/mL的氯霄素。
6.根據權利要求1所述的一種用于稻米的抗性淀粉含量測定方法，其特征在于c步驟中，抗生素混合液是指青霉素、硫酸慶大霉素、頭孢氨芐和乳糖酸紅霉素混合液，上述各成分的混合比為 1 1 1 :1、1· 2 1 1. 2 :1 或 1. 5 :1 1 :1。
7.根據權利要求6所述的一種用于稻米的抗性淀粉含量測定方法，其特征在于 抗生素混合液中采用0. 40-0. 52mg/mL的青霉素、15000_1700UI/mL的硫酸慶大霉素、 0. 8-1. 2mg/mL的頭孢氨芐和0. 85-1. 30 mg/mL的乳糖酸紅霉素這4種抗生素。
8.根據權利要求1所述的一種用于稻米的抗性淀粉含量測定方法，其特征在于d步驟中，常溫條件是指溫度35-38°C，酶解時間為8-16小時。
全文摘要
本發明在淀粉水解液中加入不同類型的抗生素，探討抗生素對淀粉水解效果，以及對抗性淀粉含量測定結果的影響，為準確、客觀測定稻米中抗性淀粉含量提供有效的方法。通過比較抗生素對淀粉水解效果和被檢測樣品抗性淀粉含量的影響，結果表明抗生素能有效抑制淀粉水解過程中的雜菌的發酵作用，而不影響影響淀粉酶的活性；最有效的抗生素為混合抗生素(0.40-0.52mg/mL青霉素、15000-1700UI/mL硫酸慶大霉素、0.8-1.2mg/mL頭孢氨芐、0.85-1.30mg/mL乳糖酸紅霉素4種抗生素按1.2∶1∶1.2∶1比例混合)，其最佳劑量為35μL。
文檔編號C12Q1/40GK102533938SQ20101059135
公開日2012年7月4日 申請日期2010年12月16日 優先權日2010年12月16日
發明者朱輝明, 樸鐘澤, 白建江 申請人:上海市農業科學院