專利名稱：一種煙草多酚氧化酶的分離技術(shù)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種煙草，具體涉及一種煙草多酚氧化酶的分離技術(shù)，屬化工技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
多酚氧化酶是植物中廣泛存在的一類銅蛋白物質(zhì)，通過(guò)分子氧催化酚類物質(zhì)氧化到醌，隨后發(fā)生醌的聚合而褐色化。在不同的植物中都有幾種不同的多酚氧化酶。由于多酚氧化酶的主要作用是酶棕色化反應(yīng)而導(dǎo)致水果、蔬菜的變味及營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的流失。多酚氧化酶不但在煙草的成長(zhǎng)過(guò)程中擔(dān)任重要作用，而且影響著煙葉的顏色和香味。由于多酚氧化酶潛在的應(yīng)用背景及對(duì)食物的保鮮作用，近年來(lái)，對(duì)于從煙草中提取多酚氧化酶，正處于研制階段。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為克服上述現(xiàn)有技術(shù)的不足之處，提供一種煙草多酚氧化酶的分離技術(shù)，該技術(shù)采用新鮮煙葉切碎、勻漿、冷凍，通過(guò)粗酶液的提取，經(jīng)超聲波處理，離心提取上清夜進(jìn)行層析分離，濃縮后得成品。本發(fā)明是以如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的一種煙草多酚氧化酶的分離技術(shù)，其特征是 該技術(shù)包括如下步驟(1)粗酶液的提取，將新鮮煙葉切碎，在4°C條件下勻漿，加入冷丙酮和水， 在-18 °C條件下保存24h;(2)將步驟(1)經(jīng)4層紗布過(guò)濾，用150ml冷丙酮洗滌3次，室溫下干燥池后冷凍備用；(3)在上述丙酮干粉中加入200ml的磷酸緩沖液，PH值為6. 5，超聲波處理lh，離心，上清液中加入30%摩爾濃度的硫酸銨，4°C條件下攪拌4h后離心，取上清液，取80%摩爾濃度的硫酸銨，4°C條件下攪拌24h后離心；(4)將上述溶液進(jìn)行層析分離，其中多酚氧化酶經(jīng)透析袋脫鹽濃縮后，在_18°C條件下保存?zhèn)溆谩１景l(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是該技術(shù)采用新鮮煙葉切碎、勻漿、冷凍，通過(guò)粗酶液的提取，經(jīng)超聲波處理，離心提取上清夜進(jìn)行層析分離，濃縮后得成品。該分離技術(shù)，工藝簡(jiǎn)單，流程合理，所得多酚氧化酶可廣泛用于醫(yī)藥、食品及相關(guān)領(lǐng)域。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例、一種煙草多酚氧化酶的分離技術(shù)，其特征是該技術(shù)包括如下步驟(1)粗酶液的提取，將新鮮煙葉切碎，在4°C條件下勻漿，加入冷丙酮和水， 在-18 °C條件下保存24h;
(2)將步驟⑴經(jīng)4層紗布過(guò)濾，用150ml冷丙酮洗滌3次，室溫下干燥2h后冷凍備用；(3)在上述丙酮干粉中加入200ml的磷酸緩沖液，PH值為6. 5，超聲波處理lh，離心，上清液中加入30%摩爾濃度的硫酸銨，4°C條件下攪拌4h后離心，取上清液，取80%摩爾濃度的硫酸銨，4°C條件下攪拌24h后離心；(4)將上述溶液進(jìn)行層析分離，其中多酚氧化酶經(jīng)透析袋脫鹽濃縮后，在_18°C條件下保存?zhèn)溆谩?br>
權(quán)利要求
1. 一種煙草多酚氧化酶的分離技術(shù)，其特征是該技術(shù)包括如下步驟(1)粗酶液的提取，將新鮮煙葉切碎，在4°c條件下勻漿，加入冷丙酮和水，在-18°c條件下保存Mh ；(2)將步驟(1)經(jīng)4層紗布過(guò)濾，用150ml冷丙酮洗滌3次，室溫下干燥池后冷凍備用；(3)在上述丙酮干粉中加入200ml的磷酸緩沖液，PH值為6.5，超聲波處理lh，離心，上清液中加入30%摩爾濃度的硫酸銨，4°C條件下攪拌4h后離心，取上清液，取80%摩爾濃度的硫酸銨，4°C條件下攪拌24h后離心；(4)將上述溶液進(jìn)行層析分離，其中多酚氧化酶經(jīng)透析袋脫鹽濃縮后，在_18°C條件下保存?zhèn)溆谩?br>
全文摘要
本發(fā)明涉及一種煙草，具體涉及一種煙草多酚氧化酶的分離技術(shù)，屬化工技術(shù)領(lǐng)域。該技術(shù)采用新鮮煙葉切碎、勻漿、冷凍，通過(guò)粗酶液的提取，經(jīng)超聲波處理，離心提取上清夜進(jìn)行層析分離，濃縮后得成品。該分離技術(shù)，工藝簡(jiǎn)單，流程合理，所得多酚氧化酶可廣泛用于醫(yī)藥、食品及相關(guān)領(lǐng)域。
文檔編號(hào)C12N9/02GK102477413SQ20101057181
公開(kāi)日2012年5月30日 申請(qǐng)日期2010年11月25日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月25日
發(fā)明者張曉雷 申請(qǐng)人:張曉雷