專利名稱：一株腸膜明串珠菌及其應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及一株腸膜明串珠菌及其應用。
背景技術：
乳酸菌細菌素(Bacteriocins of LAB)是指乳酸菌在代謝過程中通過核糖體合成的 一類具有抗菌活性的多肽或蛋白質類物質。它們通常可以抑制一些常見的腐敗菌和致病菌， 如金黃色葡萄球菌、藤黃微球菌、枯草芽孢桿菌、單核細胞增生李斯特氏菌等。而且大部分乳 酸菌細菌素穩定性較好，可與食品一起加熱使用，而且易被人體中的蛋白酶降解，不會在體內 蓄積引起不良反應，被認為是一種具有廣闊應用前景的天然食品防腐劑和飼料添加劑。
發明內容
本發明的目的是提供一株的產細菌素的腸膜明串珠菌及其應用，該菌株生產的細 菌素抑制常見的G+和G—腐敗菌和病原菌。本發明提供的腸膜明串珠菌為腸膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides) 2號， 其在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心的保藏編號為CGMCC No . 3697。上述腸膜明串珠菌是以一些最常見的G+和G—腐敗菌和病原菌為指示菌，篩選出產 廣譜細菌素的腸膜明串珠菌菌株，已于2010年03月26日保藏于中國微生物菌種保藏管理 委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC，地址為北京市朝陽區北辰西路1號院2號，中國科 學院微生物研究所)，保藏登記號為CGMCC No . 3697。本發明提供的應用，即腸膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides) 2號 CGMCC Na . 3698在抑制細菌中的應用，以及腸膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides) 2 號CGMCC Na . 3698在生產細菌素中的應用。上述細菌即為所述G+和G—腐敗菌和病原菌，具體可為藤黃微球菌(Micrococcus luteus)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)、沙門氏菌(Salmonella enterica)、銅綠假單孢桿菌(Pseudomonas aeruginosa)、大腸桿菌(Escherichia coli),優選為藤黃微球菌(Micrococcus luteus) 28001、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) 26003、枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis) 63501、沙門氏菌(Salmonella enterica) 50094、銅綠假單孢桿菌(Pseudomonas aeruginosa) 10104、大腸桿菌(Escherichia coli) 30105。本發明的腸膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides) 2號可以產生對多種病原 菌和腐敗菌具有抑制作用的細菌素，并且該細菌素具有很好的熱穩定性和酸穩定性，并且 對蛋白酶的敏感，抑菌譜廣等優點。可以應用為具有廣闊應用前景的天然食品防腐劑和飼 料添加劑。
圖1為細菌素對酶的敏感性檢測結果；
圖2為不同硫酸銨濃度下沉淀細菌素后，活性檢測的結果；圖3為腸膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides) 2號產細菌素對藤黃微球菌 生長曲線的影響
具體實施例方式實施例1、腸膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides) 2號的獲得一、腸膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides) 2 號的獲得菌種來源分離自青海省發酵乳制品。本發明以一些最常見的G+和G—腐敗菌和病 原菌為指示菌，篩選出產廣譜細菌素的腸膜明串珠菌菌株，具體方法為具體方法為在無 菌條件下，取乳制品材料5g，加入到45mL無菌蒸餾水中，充分震蕩5min，以10倍系列稀釋， 從10—1 10_7梯度，選合適的梯度，取100 μ L分別涂布于含有MRS培養基的培養皿，30°C靜 置培養并計數。其中，含MRS培養基培養皿為厭氧培養48h，厭氧培養設備采用三菱株式化 學社出品的厭氧包與厭氧培養盒。從含MRS培養基的培養皿中挑取單菌落，劃線純化2次， 并進行革蘭氏染色試驗，鏡檢。利用牛津杯雙層平板法含1. 5%瓊脂的指示菌培養基冷卻 至50°C左右，按每平皿15mL傾倒在無菌培養皿中，超凈工作臺中冷卻；制備含0. 8%瓊脂 的指示菌培養基，冷卻至50°C左右，按的接種量加入指示菌菌懸液作為上層培養基，傾 倒5mL上層培養基于含1. 5%瓊脂培養基的平板中冷卻，然后用無菌鑷子將牛津杯輕輕放 置于平板上，將無細胞發酵上清液加入牛津杯中于超凈工作臺上擴散5h，置于適宜的培養 條件下培養24h后觀察抑菌圈的出現，選取牛津杯周圍有明顯抑菌圈的菌株做復篩。結果 獲得一株廣泛抑制指示菌的菌株，命名為2號。二、腸膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides) 2 號的鑒定2號菌株生理生化實驗結果如表1所示；16S rRNA基因序列如序列表中序列1所 示。根據細胞顯微形態、生理生化數據和16S rRNA基因序列數據，將2號菌株鑒定為腸膜 明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides)，并于2010年03月26日保藏于中國微生物菌種 保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC，地址為北京市朝陽區北辰西路1號院2號， 中國科學院微生物研究所)，保藏登記號為CGMCC No . 3697。表1、腸膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides) 2號理化實驗結果
實驗項目結果實驗項目結果革蘭氏染色陽性碳水化合物產酸續細胞形態桿狀核糖+形成芽孢海藻糖+接觸酶木糖+
權利要求
腸膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides)2號，其在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心的保藏編號為CGMCC №.3697。
2.腸膜明串珠菌(Leuconostocmesenteroides) 2號CGMCC Ns . 3697在抑制病細菌中 的應用。
3.根據權利要求2所述的應用，其特征在于所述細菌為藤黃微球菌、金黃色葡萄球 菌、枯草芽孢桿菌、短小芽孢桿菌、銅綠假單孢桿菌、沙門氏菌和大腸桿菌。
4.根據權利要求3所述的應用，其特征在于所述指示菌為藤黃微球菌28001、金黃色 葡萄球菌26003、枯草芽孢桿菌63501、短小芽孢桿菌63202、銅綠假單孢桿菌10104、沙門氏 菌50094和大腸桿菌30105。
5.腸膜明串珠菌(Leuconostocmesenteroides) 2號CGMCC Ns . 3697在生產細菌素中 的應用。
6.腸膜明串珠菌(Leuconostocmesenteroides) 2號CGMCC Ns . 3697在制備食品或飼 料防腐劑中的應用。
7.培養腸膜明串珠菌(Leuconostocmesenteroides) 2 號 CGMCC Ns . 3697 的培養基， 由葡萄糖3%，胰蛋白胨1.5%，蛋白胨2%，酵母膏1.5%，硫酸鎂0.087%，吐溫80 0.2% 和水組成，其中百分含量為質量百分含量。
8.腸膜明串珠菌(Leuconostocmesenteroides) 2號CGMCC Ns . 3697在制備細菌抑制 劑中的應用。
9.根據權利要求8所述的應用，其特征在于所述細菌為藤黃微球菌、金黃色葡萄球 菌、枯草芽孢桿菌、短小芽孢桿菌、銅綠假單孢桿菌、沙門氏菌或大腸桿菌。
10.根據權利要求9所述的應用，其特征在于所述細菌為藤黃微球菌28001、金黃色葡 萄球菌26003、枯草芽孢桿菌63501、短小芽孢桿菌63202、銅綠假單孢桿菌10104、沙門氏菌 50094或大腸桿菌30105。
全文摘要
本發明公開了一株腸膜明串珠菌及其應用。該腸膜明串珠菌為腸膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides)2號，其在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心的保藏編號為CGMCC №.3697。腸膜明串珠菌2號可以產生對多種病原菌和腐敗菌具有抑制作用的細菌素，并且該細菌素具有很好的熱穩定性和酸穩定性，并且對蛋白酶的敏感，抑菌譜廣等優點。可以應用為具有廣闊應用前景的天然食品防腐劑和飼料添加劑。
文檔編號A23L3/3571GK101974450SQ20101028150
公開日2011年2月16日 申請日期2010年9月13日 優先權日2010年9月13日
發明者常勝合, 龐會利, 李宗偉, 楊飛飛, 焦湞, 王雁萍, 秦廣雍, 蔡義民, 談重芳 申請人:鄭州大學