專利名稱：N-乙酰高絲氨酸內(nèi)酯酶-木聚糖酶融合蛋白及其編碼基因和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種N-乙酰高絲氨酸內(nèi)酯酶-木聚糖酶融合蛋白及其編碼基因和應(yīng) 用。
背景技術(shù)：
N-乙酰高絲氨酸內(nèi)酯(N-acyl homoserine lactones, AHLs)是一類廣泛存在于 革蘭氏陰性細(xì)菌中，調(diào)控群體感應(yīng)(quorum-sensing)系統(tǒng)中的信號(hào)分子。這些信號(hào)分子是 由病原菌本身產(chǎn)生，可自由穿透細(xì)菌的細(xì)胞壁和細(xì)胞膜同時(shí)參與許多病原菌致病基因的表 達(dá)調(diào)控，當(dāng)分子濃度達(dá)到一定閾值時(shí)，就可啟動(dòng)病原菌致病基因的表達(dá)。蘇云金芽胞桿菌 (Bacillus thuringiensis)不同亞種中廣泛存在著對(duì)AHLs分子有降解作用的非分泌性蛋 白N-乙酰高絲氨酸內(nèi)酯酶(Ai iA)，這類蛋白通過(guò)水解進(jìn)入胞內(nèi)的AHLs分子的內(nèi)酯鍵，降低 其濃度，使致病基因不能表達(dá)，從而阻止了病原菌對(duì)生物的侵染，是一類群體感應(yīng)淬滅酶。內(nèi)切-1，4_β-D-木聚糖酶，簡(jiǎn)稱木聚糖酶，能夠隨機(jī)的切割木聚糖主鏈骨架的 β-1，4-糖苷鍵，其水解產(chǎn)物主要是木二糖和木寡糖，以及少量的木糖和阿拉伯糖。木聚糖 酶作為環(huán)保型飼料添加劑廣泛應(yīng)用于畜牧業(yè)，具有改善畜禽消化道功能，降低食糜粘度和 抗?fàn)I養(yǎng)性，提高飼料利用率和減少環(huán)境污染等特點(diǎn)。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種N-乙酰高絲氨酸內(nèi)酯酶_木聚糖酶融合蛋白及其編碼 基因和應(yīng)用。本發(fā)明提供的蛋白質(zhì)，是如下(a)或(b)(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；(b)將序列1的氨基酸序列經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或 添加且同時(shí)具有N-乙酰高絲氨酸內(nèi)酯酶與木聚糖酶活性的由序列1衍生的蛋白質(zhì)。為了使(a)中的蛋白質(zhì)便于純化，可在由序列表中序列1所示的氨基酸序列組成 的蛋白質(zhì)的氨基末端或羧基末端連接上如表1所示的標(biāo)簽。表1標(biāo)簽的序列
權(quán)利要求
一種蛋白質(zhì)，是如下(a)或(b)(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；(b)將序列1的氨基酸序列經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且同時(shí)具有N 乙酰高絲氨酸內(nèi)酯酶與木聚糖酶活性的的由序列1衍生的蛋白質(zhì)。
2.編碼權(quán)利要求1所述蛋白的基因。
3.如權(quán)利要求2所述的基因，其特征在于它為如下1)或2)或3)或4)的DNA分子1)序列表中序列2自5，末端第10至1677位核苷酸所示的DNA分子；2)序列表中序列2所示的DNA分子；3)在嚴(yán)格條件下與1)或2)限定的DNA序列雜交且同時(shí)具有N-乙酰高絲氨酸內(nèi)酯酶 與木聚糖酶活性的的DNA分子；4)與1)或2)或限定的DNA序列具有90%以上同源性，且同時(shí)具有N-乙酰高絲氨酸 內(nèi)酯酶與木聚糖酶活性的DNA分子。
4.含有權(quán)利要求2或3所述基因的重組表達(dá)載體、表達(dá)盒、轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系或重組菌。
5.如權(quán)利要求4所述的重組表達(dá)載體，其特征在于所述重組表達(dá)載體為將權(quán)利要求2 或3所述基因插入pPIC9的多克隆位點(diǎn)得到的重組質(zhì)粒。
6.如權(quán)利要求4所述的重組菌，其特征在于所述重組菌為將權(quán)利要求4或5所述重 組表達(dá)載體導(dǎo)入宿主菌得到的重組菌；所述宿主菌為大腸桿菌或酵母菌；所述酵母菌優(yōu)選 為畢赤酵母。
7.如權(quán)利要求6所述的重組菌，其特征在于所述重組菌為巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)XynAS27-L2-AiiAB546(SL2B)，其保藏號(hào)為 CGMCC No. 3974。
8.生產(chǎn)權(quán)利要求1所述蛋白質(zhì)的方法，是發(fā)酵培養(yǎng)權(quán)利要求4或6所述的重組菌，得到 權(quán)利要求1所述蛋白質(zhì)。
9.權(quán)利要求1所述蛋白、權(quán)利要求2或3所述基因、權(quán)利要求4至6中任一所述的重組 表達(dá)載體、表達(dá)盒、轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系或重組菌在制備飼料添加劑中的應(yīng)用。
10.一種飼料添加劑，它的活性成分為權(quán)利要求1所述蛋白。
全文摘要
本發(fā)明公開了N-乙酰高絲氨酸內(nèi)酯酶-木聚糖酶融合蛋白及其編碼基因和應(yīng)用。本發(fā)明提供的蛋白質(zhì)是如下(a)或(b)(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；(b)將序列1的氨基酸序列經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與序列1所示蛋白具有相同功能的由序列1衍生的蛋白質(zhì)。本發(fā)明將具有淬滅酶活性的N-乙酰高絲氨酸內(nèi)酯酶基因與木聚糖酶基因融合，得到了融合蛋白(N-乙酰高絲氨酸內(nèi)酯酶-木聚糖酶融合蛋白)SL2B-6。本發(fā)明提供的融合蛋白具有適宜的作用pH值，較強(qiáng)的金屬離子和表面活性劑抗性，較強(qiáng)的蛋白酶抗性和較好的水解各種底物的能力，可作為一種新型飼料或食品添加劑應(yīng)用于飼料與食品行業(yè)。
文檔編號(hào)C12N9/00GK101948818SQ20101025145
公開日2011年1月19日 申請(qǐng)日期2010年8月11日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月11日
發(fā)明者何夙旭, 劉玉春, 周志剛, 姚斌, 孟昆, 張美超, 曹雅男, 楊培龍 申請(qǐng)人:中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院飼料研究所