專利名稱：益生菌銀杏花粉口服液的制備方法
技術領域：
本發明屬于食品飲料技術領域，尤其涉及一種可以提高人體免疫力，具有保健功 能的益生菌銀杏花粉口服液的制備方法。
背景技術：
隨著人們健康意識的提高，保健食品越來越引起人們的關注。采用藥食同源的中 草藥以及改善胃腸平衡的微生物開發的產品，成為這一食品行業的發展趨勢。銀杏樹是我 國特有的珍惜植物，被稱為植物界的“活化石”。銀杏樹渾身是寶，其果、葉、苗具有重要的食 用、藥用和觀賞價值。目前，國內外利用銀杏葉和銀杏果的提取物(如GBE761)，開發出了很 多種藥品和保健品，市場非常熱銷。但是，對于銀杏花粉的研究比較少，國內文獻僅報道了 形態特征，生長發育，化學成分，生物活性和人工授粉等方面的研究成果。目前，還沒有關于 銀杏花粉產品開發的報道，市場上也未見有銀杏花粉保健食品和藥品的銷售。銀杏花粉富 含人體所必需的氨基酸，黃酮，內酯，可溶性糖，有機酸，不飽和脂肪酸，核酸，酶，人體不可 缺少的礦物元素及維生素E，對人體有極高的營養保健和藥用價值。因此，研究開發銀杏花 粉技術和產品，具有重要意義。乳酸菌是重要的益生菌，活性乳酸菌在生長時會分泌對人體健康有益的物質，因 此對人體有較多的好處。1、飲料有促進胃液分泌、提高食欲、加強消化的功效；益生菌能將 牛奶中的乳糖和蛋白質分解，使人體更易消化和吸收；2、維護腸道菌群生態平衡，形成生物 屏障，抑制有害菌對腸道的入侵；3、乳酸菌能減少某些致癌物質的產生，因而有防癌作用； 4、能抑制腸道內腐敗菌的繁殖，并減弱腐敗菌在腸道內產生的毒素；通過產生大量的短鏈 脂肪酸促進腸道蠕動及菌體大量生長改變滲透壓而防止便秘；5、有降低膽固醇的作用，特 別適宜高血脂的人飲用；6、提高人體免疫功能，乳酸菌可以產生一些增強免疫功能的物質， 可以提高人體免疫，防止疾病。一般來說，無論是手術后，還是急性、慢性病愈后的病人，為 了治療疾病或防止感染都曾服用或注射了大量抗生素，使腸道菌從發生很大改變，甚至一 些有益的腸道菌也統統被抑制或殺死，造成菌群失調。飲料中含有大量的乳酸菌，每天喝 0. 25-0. 5千克，可以維持腸道正常菌群平衡，調節腸道有益菌群到正常水平。所以大病初愈 者多喝飲料，對身體恢復有著其它食物不能替代的作用。益生菌銀杏花粉保健產品，復合了兩種單一產品的保健功能，既含有抗癌、增強記 憶和提高免疫等功能的銀杏成分，又具有能調節胃腸內平衡的益生菌群，集保健與治療于 一體，符合當前人們預防、保健、治療與康復相結合的醫學觀點，市場前景將更為廣泛。
發明內容
本發明的目的是提供一種制作工藝簡單，方便操作，無環境污染，產品可以提高免 疫力并具有保健功能的益生菌銀杏花粉口服液的制備方法。本發明的目的可通過以下技術措施來實現本發明制作工藝步驟如下
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a.將新鮮銀杏花粉按照新鮮銀杏花粉水=1 8-10重量份配比置于水中，然后 對銀杏花粉進行破壁處理，得破壁銀杏花粉水溶液；b.將鼠李糖乳桿菌和嗜酸乳桿菌兩種益生菌分別接入MRS液體種子培養基， 30-37°C下靜置培養10-14小時，得兩益生菌種子液；C.取a步驟的破壁銀杏花粉水溶液，按照破壁銀杏花粉水溶液糖氯化鈉谷 氨酸鈉=7-10 3-5 0. 02-0. 05 0. 02-0. 05重量份配比混合，加入75-80倍量去離子 水溶解，經110-120°C高溫滅菌15-30min，得發酵培養基；d.取b步驟中的兩種益生菌種子液按1 1比例組合，再按照總接種量為1-3% 接入c步驟的發酵培養基中，然后塑料膜封口，30-37°C靜置厭氧培養40-45小時，待發酵液 培養基降至PH = 3. 0-3. 5，經紗布過濾后，無菌條件下灌裝，得產品。本發明的目的還可通過以下技術措施來實現所述的破壁處理是采用轉速為10000-15000r/min勻漿機破壁10-20分鐘，得破壁 率超過90%的破壁銀杏花粉；也可采用超微粉碎的方法對銀杏花粉進行破壁處理，得破壁 率超過95%的破壁銀杏花粉。本發明的方法以新鮮銀杏花粉為主要原料，經機械破壁處理后，由鼠李糖乳桿 菌 Lactobacillus rhamnosus (菌種編號CGMCC 1.22)和嗜酸乳桿菌 Lactobacillus acidophilus (菌種編號CGMCC 1. 1854)兩種益生菌厭氧發酵而成，兩種益生菌均購自中 國普通微生物菌種保藏管理中心。本發明方法制備的乳酸菌銀杏花粉口服液為棕色液體， 味酸，采用血球計數板法測定口服液中活菌含量達109/mL。該口服液含有豐富的八種人體 必需氨基酸，以及黃酮內酯，可用于改善消化不良、吸收不良、腹瀉、便秘等胃腸問題，并具 有提高免疫力，預防高血壓、高血脂和高血糖的功效。本發明所用的原料為銀杏花粉及具有益生特性的兩種乳酸菌，經以上過程所生產 的益生菌銀杏花粉口服液口味酸甜，乳酸菌活菌數達IO9個/毫升，含有人體所必需的八種 氨基酸，黃酮含量也較高，具有很好的保健作用。本發明復合了兩種單一產品的保健功能，既含有抗癌、增強記憶和提高免疫等功 能的銀杏成分，又具有能調節胃腸內平衡的益生菌群，集保健與治療于一體，符合當前人們 預防、保健、治療與康復相結合的醫學觀點和養生追尋目標，市場前景將更為廣泛。益生菌銀杏花粉口服液經口急性毒性試驗將本發明乳酸菌銀杏花粉口服液原液飼喂昆明種小鼠40只，體重19_20g，雌雄各 半。將小鼠隨機分為給藥組和空白對照組，每組20只，雌雄各半。給藥組按0.4ml/10g給 小鼠灌胃相應藥液，一日兩次；空白對照組給予小鼠同等體積的蒸餾水灌胃。計算一日內的 給藥量，進行急性毒性試驗觀察，連續觀察14天。觀察記錄動物的飲食、活動、大小便及有 無死亡等情況。觀察期結束，將小鼠脫白處死解剖，肉眼觀察不同臟器的改變情況；并取小 鼠胸腺、脾臟，電子天平稱重，計算胸腺系數和脾臟系數，進行統計分析。銀杏花粉乳酸菌發酵液組給藥后，小鼠全部存活，活動自如，毛發光滑，飲食正常， 呼吸道、眼及口腔等處無分泌物外，未發現明顯的中毒癥狀，體重均有增加。與空白對照組 比較，銀杏花粉乳酸菌發酵液組藥后14天雄性小鼠體重顯著增加(P < 0. 001)。藥后14天 觀察期結束，將小鼠脫日處死解剖，肉眼觀察心、肝、脾、肺、腎、腦、腸、胃、小腸等臟器均未 見明顯異常表現。另外，小鼠胸腺系數和脾臟系數結果表明，與空白對照組比較，銀杏花粉乳酸菌發酵液組雄性小鼠脾臟系數明顯增加(P < 0. 01)，提示銀杏花粉乳酸菌發酵液具有 一定的免疫增強作用。銀杏花粉乳酸菌發酵液對小鼠最大給藥量達80ml/kg，小鼠在該劑量下無明顯異 常反應，表明該藥物安全范圍較大，小鼠灌胃給藥的最大給藥量為80ml/kg。實驗中發現銀杏花粉乳酸菌發酵液能明顯增加雄性小鼠胸腺系數和脾臟系數，揭 示銀杏花粉乳酸菌發酵液具有一定的免疫增強作用。
具體實施例方式實施例1 該方法按如下步驟進行a.將新鮮銀杏花粉按照新鮮銀杏花粉水=1 8重量份配比置于水中，然后對 銀杏花粉采用轉速為15000r/min勻漿機破壁10分鐘，得破壁銀杏花粉水溶液；b.將鼠李糖乳桿菌和嗜酸乳桿菌兩種益生菌分別接入MRS液體種子培養基，370C 下靜置培養10小時，得兩益生菌種子液；c.取a步驟的破壁銀杏花粉水溶液，按照破壁銀杏花粉水溶液糖氯化鈉谷 氨酸鈉=7 5 0. 02 0.05重量份配比混合，加入75倍量去離子水溶解，經120°C高溫 滅菌15min，得發酵培養基；d.取b步驟中的兩種益生菌種子液按1 1比例組合，再按照總接種量為3%接 入c步驟的發酵培養基中，然后塑料膜封口，30°C靜置厭氧培養45小時，待發酵液培養基降 至PH = 3. 0，經紗布過濾后，無菌條件下灌裝，得產品。實施例2 該方法按如下步驟進行a.將新鮮銀杏花粉按照新鮮銀杏花粉水=1 10重量份配比置于水中，然后對 銀杏花粉采用轉速為lOOOOr/min勻漿機破壁20分鐘，得破壁銀杏花粉水溶液；b.將鼠李糖乳桿菌和嗜酸乳桿菌兩種益生菌分別接入MRS液體種子培養基，300C 下靜置培養14小時，得兩益生菌種子液；c.取a步驟的破壁銀杏花粉水溶液，按照破壁銀杏花粉水溶液糖氯化鈉谷 氨酸鈉=10 3 0.05 0.02重量份配比混合，加入80倍量去離子水溶解，經110°C高 溫滅菌30min，得發酵培養基；d.取b步驟中的兩種益生菌種子液按1 1比例組合，再按照總接種量為接 入c步驟的發酵培養基中，然后塑料膜封口，37°C靜置厭氧培養40小時，待發酵液培養基降 至PH = 3. 5，經紗布過濾后，無菌條件下灌裝，得產品。實施例3 該方法按如下步驟進行a.將新鮮銀杏花粉按照新鮮銀杏花粉水=1 9重量份配比置于水中，然后對 銀杏花粉采用轉速為12000r/min勻漿機破壁15分鐘，得破壁銀杏花粉水溶液；b.將鼠李糖乳桿菌和嗜酸乳桿菌兩種益生菌分別接入MRS液體種子培養基，350C 下靜置培養12小時，得兩益生菌種子液；c.取a步驟的破壁銀杏花粉水溶液，按照破壁銀杏花粉水溶液糖氯化鈉谷氨酸鈉=8 4 0.03 0.03重量份配比混合，加入78倍量去離子水溶解，經115°C高溫 滅菌20min，得發酵培養基；d.取b步驟中的兩種益生菌種子液按1 1比例組合，再按照總接種量為2%接 入c步驟的發酵培養基中，然后塑料膜封口，33°C靜置厭氧培養42小時，待發酵液培養基降 至PH = 3. 2，經紗布過濾后，無菌條件下灌裝，得產品。實施例4 不同的是a步驟中用超微粉碎代替勻漿機破壁，其它分別同實施例1-3。
權利要求
益生菌銀杏花粉口服液的制備方法，其特征在于a.將新鮮銀杏花粉按照新鮮銀杏花粉∶水＝1∶8 10重量份配比置于水中，然后對銀杏花粉進行破壁處理，得破壁銀杏花粉水溶液；b.將鼠李糖乳桿菌和嗜酸乳桿菌兩種益生菌分別接入MRS液體種子培養基，30 37℃下靜置培養10 14小時，得兩益生菌種子液；c.取a步驟的破壁銀杏花粉水溶液，按照破壁銀杏花粉水溶液∶糖∶氯化鈉∶谷氨酸鈉＝7 10∶3 5∶0.02 0.05∶0.02 0.05重量份配比混合，加入75 80倍量去離子水溶解，經110 120℃高溫滅菌15 30min，得發酵培養基；d.取b步驟中的兩種益生菌種子液按1∶1比例組合，再按照總接種量為1 3％接入c步驟的發酵培養基中，然后塑料膜封口，30 37℃靜置厭氧培養40 45小時，待發酵液培養基降至pH＝3.0 3.5，經紗布過濾后，無菌條件下灌裝，得產品。
2.根據權利要求1所述的益生菌銀杏花粉口服液的制備方法，其特征在于所述的破壁 處理是采用轉速為10000-15000r/min勻漿機破壁10-20分鐘或超微粉碎。
全文摘要
本發明提供一種益生菌銀杏花粉口服液的制備方法，a.將新鮮銀杏花粉置于水中，然后對銀杏花粉進行破壁處理，得破壁銀杏花粉；b.將鼠李糖乳桿菌和嗜酸乳桿菌兩種益生菌分別接入MRS液體種子培養基，30-37℃下靜置培養，得益生菌種子液；c.取a步驟的破壁銀杏花粉，與糖、氯化鈉和谷氨酸鈉混合，加入去離子水溶解，經高溫滅菌，得發酵培養基；d.將b步驟中的兩種益生菌種子液按1∶1比例組合，再按照總接種量為1-3％接入c步驟的發酵培養基中，然后塑料膜封口，靜置厭氧培養，待發酵液培養基降至pH＝3.0-3.5，經紗布過濾后，無菌條件下灌裝，得產品。
文檔編號A23L1/29GK101904499SQ20101023972
公開日2010年12月8日 申請日期2010年7月29日 優先權日2010年7月29日
發明者劉孝永, 孫欣, 杜方嶺, 王未名, 祝清俊, 裘紀瑩, 陳蕾蕾 申請人:山東省農業科學院農產品研究所