專利名稱：一種二氫槲皮素的制備方法
技術領域：
本發明涉及一種二氫槲皮素的制備方法，尤其是一種以黃杞葉為原料生物酶解制 備二氫槲皮素的方法。
背景技術：
二氫槲皮素異名花旗松素、黃杉素，黃酮類化合物，分子式=C15H12O7,分子量 304. 256，無色針狀結晶(50%乙醇)，熔點240-240°C。易溶于乙醇、乙酸、沸水，稍溶于冷 水，幾乎不溶于苯。藥理作用1.抗癌對小鼠白血病P388有活性，150和100mg/kg的生命延長率分別為40% 和 37%。2.抗菌對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、痢疾桿菌和傷寒桿菌有較強的抑菌作用。美國藥典和俄羅斯藥典都收錄有二氫槲皮素。現有天然提取二氫槲皮素有兩種途徑一種是從花旗松皮中直接提取，第二種是 有落新婦苷酸水解。花旗松樹皮二氫槲皮素含量在7%左右，但是花旗松資源有限，其他落葉松中含量 不高。限制了二氫槲皮素的產量。如專利(申請號200610035280) “一種從落葉松中提取二氫槲皮素的方法”，該專 利公開的方法是以水為提取劑，對含有二氫槲皮素的興安落葉松進行提取，對所得的水性 提取液以甲基叔丁基醚為萃取劑進行液液萃取，采活性炭或活性白土對甲基叔丁基醚萃取 液進行吸附脫色，對脫色后甲基叔丁基醚萃取液在真空條件下進行溶劑的脫除，脫除溶劑 后的膏狀物用水進行結晶純化。再如專利(申請號200610035752) “一種采用吸附法從落葉松中提取二氫槲皮素 的方法”，公開的方法是水為提取劑，對含有二氫槲皮素的興安落葉松進行提取，采用活性 炭或活性白土對提取液進行脫色，其后，對所得的水性提取液先用聚酰胺粉末為吸附劑進 行吸附，再用解吸溶劑進行解吸，所得解吸液在真空條件下進行溶劑脫除，用水進行重結晶 純化，便得到二氫槲皮素精制品。黃杞葉中落新婦苷含量在6%左右，黃杞葉也是廢棄物，生產落新婦苷也不損壞樹 木。落新婦苷落新婦苷，別名二氫槲皮素-3-0-a -L-吡喃鼠李糖苷，分子式=C21H22O11 ； 分子量450. 39。
落新婦苷二氫槲皮素再有落新婦苷水解為二氫槲皮素。如專利(申請號200710105982) “一種從黃杞葉中提取分離二氫槲皮素的方法”， 該專利方法是以黃杞葉為原料，通過提取、濃縮、大孔樹脂柱層析、結晶、酸水解等工序。再如王萍等人發表的“刺玫薔薇莖中二氫槲皮素的提取”，文獻采用以刺玫瑰薔薇 莖為原料，有機試劑提取酸水解，萃取得二氫槲皮素。如上所述，以現有工藝生產二氫槲皮素，存在以下問題1)直接從花旗松樹皮提取，原料貴而短缺。2)有落新婦苷酸水解，反應過程劇烈，污染嚴重。
發明內容
本發明要解決的技術問題是提供一種二氫槲皮素的制備方法，該方法采用生物酶 解，過程溫和，所得產品品質好，解決了原料的短缺而不能大規模生產。為了解決上述技術問題，本發明提取技術方案如下一種二氫槲皮素的制備方法，其特征在于包含以下步驟1)粉碎酶解將黃杞葉粉碎20-80目，加入10-20 % ph4_6的酸性水溶液，拌勻再 加柚苷酶，35-5°C保溫酶解；2)提取將上述酶解原料加入6-15BV50_90%乙醇回流提取1_5小時，提取1_3
次，合并得提取液；3)聚酰胺樹脂純化上述提取液加壓回收乙醇，加入聚酰胺柱吸附，水-乙醇梯度 洗脫，收集二氫槲皮素流分，減壓回收乙醇放置結晶；4)重結晶濾出結晶物，依次用去離子水、70%乙醇回流結晶，濾出低溫真空干燥 即得二氫槲皮素。所述步驟1)粉碎酶解條件為酸可選有機酸或無機酸，酶添加量1-5%。，酶解時間 不低于28小時。所述步驟3)中聚酰胺可選100-200目聚酰胺。所述步驟3)水-乙醇梯度洗脫為依次用10-15BV水一4-7BV20-40 %乙醇 —5-8BV60-80%乙醇梯度洗脫。本發明存在以下優點1)本方法采用黃杞葉為原料，解決原料資源的短缺。2)生物酶解，工序操作簡單。3)生產過程所用試劑種類少，沒有毒性試劑，產品符合食品藥品要求。下面將結合具體實施方式
進一步說明本發明，但本發明要求保護的范圍并不局限于下列實施方式。
具體實施例方式實施例1 黃杞葉去雜粉碎20目，取1kg，加入200mlph4的鹽酸水溶液 潤濕，再取Ig柚苷酶 加入攪拌均勻，放置在35°C的恒溫箱中酶解48小時，取出投入燒瓶中加入6L90 %乙醇回流 提取1小時提取3次，提取液旋轉蒸發儀回收乙醇，趁熱加入聚酰胺樹脂柱吸附，然后依次 用15BV水一4BV40%乙醇一8BV60%乙醇梯度洗脫，收集60%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇放 置結晶，濾出結晶，再用去離子水、70%乙醇回流溶解重結晶，結晶物濾出真空低溫干燥，得 二氫槲皮素32g，含量99%。實施例2 黃杞葉去雜粉碎80目，取1kg，加入100mlph5的鹽酸水溶液潤濕，再取3g柚苷酶 加入攪拌均勻，放置在35°C的恒溫箱中酶解36小時，取出投入燒瓶中加入6L50 %乙醇回流 提取1小時提取3次，提取液旋轉蒸發儀回收乙醇，趁熱加入聚酰胺樹脂柱吸附，然后依次 用IOBV水一7BV20%乙醇一5BV80%乙醇梯度洗脫，收集80%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇放 置結晶，濾出結晶，再用去離子水、70%乙醇回流溶解重結晶，結晶物濾出真空低溫干燥，得 二氫槲皮素37g，含量98%。實施例3 黃杞葉去雜粉碎40目，取1kg，加入150mlph5的鹽酸水溶液潤濕，再取5g柚苷酶 加入攪拌均勻，放置在35°C的恒溫箱中酶解28小時，取出投入燒瓶中加入15L70%乙醇回 流提取5小時提取1次，提取液旋轉蒸發儀回收乙醇，趁熱加入聚酰胺樹脂柱吸附，然后依 次用13BV水一7BV30%乙醇一6BV75%乙醇梯度洗脫，收集75%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇 放置結晶，濾出結晶，再用去離子水、70%乙醇回流溶解重結晶，結晶物濾出真空低溫干燥， 得二氫槲皮素36g，含量98%。實施例4 黃杞葉去雜粉碎60目，取2kg，加入400mlph6的鹽酸水溶液潤濕，再取7g柚苷酶 加入攪拌均勻，放置在35°C的恒溫箱中酶解48小時，取出投入燒瓶中加入15L70%乙醇回 流提取3小時提取2次，提取液旋轉蒸發儀回收乙醇，趁熱加入聚酰胺樹脂柱吸附，然后依 次用IOBV水一8BV30%乙醇一7BV70%乙醇梯度洗脫，收集70%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇
放置結晶，濾出結晶，再用去離子水、70%乙醇回流溶解重結晶，結晶物濾出真空低溫干燥， 得二氫槲皮素71g，含量98%。
權利要求
一種二氫槲皮素的制備方法，其特征在于包含以下步驟1)粉碎酶解將黃杞葉粉碎20 80目，加入10 20％ph4 6的酸性水溶液，拌勻再加柚苷酶，35 55℃保溫酶解；2)提取將上述酶解原料加入6 15BV50 90％乙醇回流提取1 5小時，提取1 3次，合并得提取液；3)聚酰胺樹脂純化上述提取液加壓回收乙醇，加入聚酰胺柱吸附，水 乙醇梯度洗脫，收集二氫槲皮素流分，減壓回收乙醇放置結晶，；4)重結晶濾出結晶物，依次用去離子水、70％乙醇回流結晶，濾出低溫真空干燥即得二氫槲皮素。
2.如權利要求1所二氫槲皮素的制備方法，其特征在于所述步驟1)粉碎酶解條件為 酸可選有機酸或無機酸，酶添加量1-5%。，酶解時間不低于28小時。
3.如權利要求1所述二氫槲皮素的制備方法，其特征在于所述步驟3)中聚酰胺可選 100-200目聚酰胺。
4.如權利要求1所述二氫槲皮素的制備方法，其特征在于所述步驟3)水-乙醇梯度洗 脫為依次用10-15BV水一4-7BV20-40%乙醇一5-8BV60_80%乙醇梯度洗脫。
全文摘要
本發明涉及一種二氫槲皮素的制備方法，方法是以黃杞葉為原料，粉碎加酸性水潤濕，再加柚苷酶保溫酶解，乙醇回流提取，濃縮液加入聚酰胺樹脂吸附，乙醇水梯度洗脫，洗脫液濃縮結晶，再用水、70％乙醇重結晶，低溫真空干燥得二氫槲皮素。本工藝所涉及試劑均無毒害，工藝流程簡單。采用本工藝生產二氫槲皮素，所得產品可以直接用做保健品和藥品的原料。
文檔編號C12P17/06GK101967505SQ20101021074
公開日2011年2月9日 申請日期2010年6月28日 優先權日2010年6月28日
發明者蘇劉花 申請人:南京澤朗農業發展有限公司