專利名稱：一種藥物粘膜局部使用的安全性評價方法
技術領域：
本發明屬傳染病預防和粘膜用藥安全性評價領域，涉及一種藥物粘膜局部使用的 安全性評價方法，尤其是一種基于Thl7樣細胞因子的粘膜炎癥反應的粘膜用藥的安全性 評價技術。
背景技術：
性傳播疾病一直以來都嚴重威脅著人類的健康，人們為此做出了不懈的努力，研 制了包括殺微生物劑在內的各種預防治療保健藥物來對抗這些經生殖道粘膜感染的病毒 或其他病原體。對于這些藥物，除了考慮有效性外，其安全性也是必須關注的問題。任何包括殺微生物劑在內的生殖道用藥候選藥物在正式進入臨床試驗前，必須在 動物身上進行安全性試驗的測試。雖然存在動物資源受限，費用昂貴，工作量大等缺點，但 是動物模型可以對完整的藥物劑型進行評價，可以從器官整體水平來觀察對外界刺激的反 應，可以動態系統地觀察所誘導的炎癥和免疫反應。因此動物模型評價往往被研究者們視 做進入臨床前必做的步驟。目前評價包括殺微生物劑在內生殖道或直腸用藥的動物模型主要有三類兔子陰 道激惹模型(Rabbit vaginal irritation，RVI)、小鼠模型和非人靈長類模型。檢測指標 主要集中在組織病理學觀察以及菌群檢測方面。非人靈長類雖然也做為安全性評價的模型 之一，但由于資源稀少、價格昂貴，再加上由于能夠被SIV或SHIV感染，因此非人靈長類模 型更多地被用于殺微生物劑候選藥物的效果評價而較少被用于安全性評價。兔子模型是用于評價陰道用藥物安全性的經典模型。兔子的陰道上皮由簡單的柱 狀上皮細胞組成，因此對外界刺激具有較高的敏感性，更利于對藥物進行安全性評價。標準 的RVI模型是用候選藥物對宮頸陰道粘膜進行刺激(每天一次，連續10天)之后，進行解 剖學和組織病理學兩方面的定性評估，用輕微(minimal)、溫和(mild)、中等(moderate)、 嚴重(severe)四個等級來表示刺激的嚴重程度，從而評估該藥物是否可以用于人體。但是 近些年來，人們卻發現傳統的RVI模型不能靈敏反映出藥物安全性的準確情況。例如，第一 代微生物殺菌劑N-9在用RVI模型中以4%的濃度給藥時，測評結果顯示安全，但是在人體 臨床試驗中卻證明它引起了明顯的粘膜損傷，增加了 HIV等病原體的感染機率。這是因為 傳統RVI模型不能靈敏地反映出粘膜給藥后可能給粘膜組織造成的病理損傷程度，而這些 不同程度的粘膜損傷對于增強HIV等病原微生物的粘膜感染至關重要。因此需要在傳統的 RVI模型的基礎上進行改進，不僅要對藥物投遞的局部粘膜進行組織病理學的觀察，同時還 要發現可預測粘膜組織病理損傷的生物學標志物，提高粘膜用藥安全性評價的靈敏度。由于兔子較少地被用于免疫病理學研究，因此缺乏相關的抗體和免疫檢測試劑， 因此兔子模型在評價粘膜用藥特的安全性方面存在很大的局限性。相比之下小鼠模型具有 其本身的一些獨特優勢價格便宜、來源和數量不受限制、可用于統計分析的樣本量大、相 關抗體和免疫學試劑豐富、實驗數據檢測方便等優勢，因此做為RVI模型的補充也得到了 一定的應用。有人曾嘗試采用一些基于檢測炎癥因子的小鼠模型來評價抗HIV殺微生物劑的安全性，但是這些模型所檢測的炎癥細胞因子較為單一，未能考慮到免疫活化和細胞因 子調控網絡的復雜性，到目前為止還沒有建立任何一種動物模型能夠準確地衡量粘膜用藥 的安全性。
發明內容
本發明所要解決的技術問題包括(1)粘膜組織病理損傷定量分析技術；(2)通過 篩選預測粘膜病理損傷的生物學標志物或其組合，建立非侵入性粘膜用藥安全性評價技 術。本發明的目的是建立一種藥物粘膜局部使用的安全性評價技術。采用實驗動物作 為模型，通過粘膜給藥，觀察組織病理損傷，并加以量化；同時測定粘膜局部炎癥因子的表 達水平，分析其與病理損傷的相關性，從而篩選出可靈敏反應粘膜損傷的生物學標志物，最 終建立非侵入性粘膜用藥的安全性評價技術。本發明能夠快速靈敏地反映粘膜用藥物誘導 粘膜產生炎癥的情況，并能夠反映粘膜局部的免疫異常活化，特別是可對潛在的組織病理 損傷進行預測。所述的實驗動物為小鼠粘膜給藥時要將小鼠分為對照組、安慰組和用藥組等，每 組小鼠的品系和周齡應當一致。所述的粘膜局部使用藥物包括但不限于化學合成藥物、生 物藥物、微生物殺菌劑與粘膜疫苗等。所述的粘膜組織病理損傷定量分析技術包括根據是否出現水腫、淋巴細胞浸潤、 上皮破損和充血情況(具體如表1所示)，粘膜用藥所造成的各項病理損傷的評分值累計 后，形成評分的總值，用以定量標定粘膜用藥的組織病理損傷(表2)。表1.粘膜組織病理損傷評分標準
權利要求
1. 一種藥物粘膜局部使用的安全性評價方法，其特征在于，該評價方法通過測定粘膜 給藥部位細胞因子表達水平，判斷藥物粘膜使用時的安全性。
2.如權利要求1所述的安全性評價方法，其特征在于，所述的細胞因子包括IL-10、 IL-17A、TNF-a、IFN- y , IL-6、IL-4、IL-2 中的一種或者一種以上的組合。
3.如權利要求1所述的安全性評價方法，其特征在于，所述的藥物包括化學合成藥物、 生物藥物、微生物殺菌劑或者粘膜疫苗。
4.如權利要求1所述的安全性評價方法，其特征在于，所述的粘膜局部是粘膜局部的 分泌物、粘膜局部灌洗液或者粘膜局部組織。
5.如權利要求1所述的安全性評價方法，其特征在于，所述的細胞因子測定方法包括 細胞因子編碼RNA或者蛋白水平的測定方法。
6.如權利要求1所述的安全性評價方法，其特征在于，所述的安全性包括藥物對直接 施用部位粘膜以及非直接施用部位的毒性、對粘膜免疫系統的激活與致病作用、以及粘膜 被致病原感染的敏感性增加作用。
全文摘要
本發明屬于傳染病預防和粘膜用藥安全性評價領域，涉及一種藥物粘膜局部使用的安全性評價方法，尤其是一種基于細胞因子的粘膜使用的藥物安全性評價方法。該評價方法通過測定給藥部位粘膜的灌洗液中細胞因子的表達水平，以判斷所用藥物粘膜使用的安全性。本發明基于免疫活化和細胞因子調控網絡的復雜性，使用了一系列細胞因子作為測定分析指標，能夠準確地衡量粘膜用藥物的粘膜毒性，可以快速靈敏地反映藥物誘導粘膜產生炎癥的情況，并能夠反映粘膜局部的免疫異常活化。本發明的評價方法可以用于粘膜用候選藥物的臨床前安全性評價。
文檔編號C12Q1/68GK102000348SQ20101015515
公開日2011年4月6日 申請日期2010年4月22日 優先權日2010年4月22日
發明者張曉燕, 徐建青, 李亮助 申請人:復旦大學