專利名稱：一種富集糞鏈球菌的培養基的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種富集細菌的培養基，具體地涉及一種富集糞鏈球菌的培養基。
背景技術：
糞鏈球菌是一種對人和畜都有益的微生物菌種，也是農業部允許使用的飼料級微 生物飼料添加劑的菌種之一，屬兼性厭氧革蘭氏陽性菌，具有調節動物腸道微生態菌群平 衡，提高免疫力等功效。把它經過系列工藝可以制做成微生物制劑，能夠直接喂養畜禽，既 可以改善畜禽腸道內的微生物結構，又可以競爭性排斥腸道內的其它病原微生物，維持體 內微生態平衡，改善消化系統，促進畜禽對營養的吸收，提高機體免疫力，保證畜禽能夠更 好的生長。 糞鏈球菌的推廣和應用，關鍵在于需要合適的培養基質，但目前經典的用于富集 糞鏈球菌的常規培養基，主要配方為牛肉浸膏4. 5g，胰蛋白胨或多胨15. 0g，葡萄糖7. 5g， 氯化鈉7. 5g，疊氮化鈉(NaN3)0. 2g，用蒸餾水配成1000ml。其平均富集的時間為25 30 天，周期長，且存在培養基成分復雜，成本較高的缺點。
發明內容
為了解決上述問題，本發明提供一種富集糞鏈球菌的培養基，用本發明的培養基 培養糞鏈球菌，培養速度快，周期短，成本低。
為了實現上述目的，本發明采用的技術方案是一種富集糞鏈球菌的培養基，其特 征在于由基礎培養基、鹽溶液、葡萄糖和酵母膏組成；在基礎培養基中，每1000ml基礎培 養基加入3 7ml的鹽溶液、15 20g的葡萄糖和5 15g的酵母膏；
所述鹽溶液是將40g的MgS04 7H20， 2g的MnS04 4H20， 2g的FeS04 7H20和2g 的NaCl，用蒸餾水配成lOOOml。 優選的富集糞鏈球菌的培養基，在基礎培養基中，每lOOOml基礎培養基加入5ml 的鹽溶液、18g的葡萄糖和10g的酵母膏。 基礎培養基是糞鏈球菌的常用培養基。也就是現有技術中經常用的，并已公開的 糞鏈球菌培養基。 調節本發明培養基pH為7 9，12rC滅菌30min。將糞鏈球菌接種于培養基中， 振蕩混勻，置于恒溫培養箱中恒溫培養，溫度為30°C 。 酵母膏對糞鏈球菌的生長量的影響隨著酵母膏的濃度的增加而增加，經過22h的 培養，當酵母膏的用量為10g/L時(每lOOOml基礎培養基加入10. 0g)，其菌體繁殖速度很 快，菌液OD,達1. 5，當酵母膏的用量小于10g/L時，菌液OD,小于1. 5。因此，酵母膏的用 量以10g/L的酵母膏為宜。 葡萄糖對糞鏈球菌的生長量的影B向，隨著葡萄糖的濃度的增加而增加，經過22h 的光照培養后，當葡萄糖的用量為18g/L(每lOOOml基礎培養基加入18g)時，其菌體繁殖 速度很快，菌液0D66。達1. 5，當葡萄糖的用量小于18g/L時，菌液0D66。小于1. 5。因此，葡萄
3糖的用量以18g/L為宜。 本發明中，由于添加了鹽溶液，能加快微生物的生長，為微生物提供所需營養物 質。 本發明的有益效果是 1、富集培養速度快。由于在基礎培養基中加大了酵母膏、葡萄糖等營養成分的用 量，為糞鏈球菌創造了一個更好的營養條件，使糞鏈球菌生長速度快，培養22h后，培養其 0D腳達到1. 5左右。 2、糞鏈球菌生長期延長，最大生長量提高。隨著培養時間的增加，菌液OD,逐漸 增加，培養22h時，其0D66。為1. 5，比使用基礎培養基培養糞鏈球菌時的0D66。有所提高，糞 鏈球菌的最大值提前了 3 5小時，對其繁殖更有促進作用。 3、成本低。在常規培養基中，由于加入了疊氮化鈉，使用成本太高，而本發明用酵 母膏和鹽溶液替代了疊氮化鈉，使成本降低。
圖1是本發明與常規培養基，在培養基富集培養過程中，光密度0D66。的變化圖；
圖中，+常規培養基+本發明培養基
具體實施方式
實施例1( — )富集糞鏈球菌培養基的配制 基礎培養基取蛋白胨10g、醋酸鈉10g和瓊脂粉10g，用蒸餾水配成1000ml。
在上述基礎培養基中，加入5ml鹽溶液(鹽溶液是將40g的MgS04 7H20， 2g的 MnS04 4H20， 2g的FeS04 7H20和2g的NaCl，用蒸餾水配成1000ml) 、 18g的葡萄糖和10g 的酵母膏。 ( 二 )糞鏈球菌的培養 將上述培養基的pH調至7， 12rC滅菌30min。將糞鏈球菌按照接種濃度為3%接 種于培養基中，振蕩混勻，置于恒溫培養箱中培養，溫度30°C。 富集培養結果恒溫培養22h，菌液0D,為1. 4，光照培養26h，達到最大生長量，菌 液0D66。為1. 5，使糞鏈球菌的最大生長量提前了 4h。
實施例2( — )富集糞鏈球菌培養基的配制 基礎培養基取蛋白胨10g，醋酸鈉10g和瓊脂粉10g，用蒸餾水配成lOOOml。
在上述基礎培養基中，加入3ml鹽溶液(鹽溶液是將40g的MgS04 7H20， 2g的 MnS04 4H20，2g的FeS04 7H20和2g的NaCl，用蒸餾水配成lOOOml) 、15g的葡萄糖和5的 酵母膏。 ( 二 )糞鏈球菌的培養 將上述培養基的pH調至7， 12rC滅菌30min。將糞鏈球菌按照接種濃度為3%接 種于培養基中，振蕩混勻，置于恒溫培養箱中培養，溫度30°C。 富集培養結果恒溫培養22h，菌液0D66。為1. 35，光照培養27h，達到最大生長量，菌液0D,為1. 5，使糞鏈球菌的最大生長量提前了 3h。
實施例3( — )富集糞鏈球菌培養基的配制 基礎培養基取蛋白胨10g，醋酸鈉10g和瓊脂粉10g，用蒸餾水配成lOOOml。
在上述基礎培養基中，加入7ml鹽溶液鹽溶液(鹽溶液是將40g的MgS04 7H20， 2g的MnS04 *4H20，2g的FeS04 *7H20和2g的NaCl，用蒸餾水配成1000ml) 、20g的葡萄糖和 15g的酵母膏。 ( 二 )糞鏈球菌的培養 將上述培養基的pH調至7， 12rC滅菌30min。將糞鏈球菌按照接種濃度為3%接 種于培養基中，振蕩混勻，置于恒溫培養箱中培養，溫度30°C。 富集培養結果恒溫培養22h，菌液0D66。為1. 5，達到最大生長量，使糞鏈球菌的最 大生長量提前了 3h 5h。
對比例 分別取實施例1本發明的培養基和背景技術中介紹的常規培養基，分別調節培養 基的PH為7， 12rC滅菌30min。將糞鏈球菌按照接種濃度為3 %接種于培養基中，振蕩混 勻，置于培養箱中培養，溫度3(TC。光照培養40h，測定培養基富集培養過程中光密度0D, 變化(見圖1)。 從圖1可知，使用常規培養基培養糞鏈球菌，30h左右時菌液0D66。為1. 5 ;使用本 發明培養基培養糞鏈球菌，隨著培養時間的增加，菌液0D66。逐漸增加，培養26h，其0D66。為 1. 5，本發明的培養基使糞鏈球菌的達到最大生長量的時間提前了 3 5h，并且對其繁殖和 快速培養更有促進作用。
權利要求
一種富集糞鏈球菌的培養基，其特征在于由基礎培養基、鹽溶液、葡萄糖和酵母膏組成；在基礎培養基中，每1000ml基礎培養基加入3～7ml的鹽溶液、15～20g的葡萄糖和5～15g的酵母膏；所述的鹽溶液是將40g的MgSO4·7H2O，2g的MnSO4·4H2O，2g的FeSO4·7H2O和2g的NaCl，用蒸餾水配成1000ml。
2. 根據權利要求1所述的富集糞鏈球菌的培養基，其特征在于在基礎培養基中，每1000ml基礎培養基加入5ml的鹽溶液、18g的葡萄糖和10g的酵母膏。
全文摘要
本發明涉及一種富集糞鏈球菌的培養基。采用的技術方案是一種富集糞鏈球菌的培養基，其特征在于由基礎培養基、鹽溶液、葡萄糖和酵母膏組成；在基礎培養基中，每1000ml基礎培養基加入3～7ml的鹽溶液、15～20g的葡萄糖和5～15g的酵母膏；所述的鹽溶液是將40g的MgSO4·7H2O，2g的MnSO4·4H2O，2g的FeSO4·7H2O和2g的NaCl，用蒸餾水配成1000ml。用本發明的培養基培養糞鏈球菌，培養速度快，成本低。彌補了糞鏈球菌生長周期過慢以及成本較高方面的不足之處，提高了生長速率，使達到最大生長量的時間縮短了3～5個小時。
文檔編號C12N1/20GK101792725SQ201010124570
公開日2010年8月4日 申請日期2010年3月16日 優先權日2010年3月16日
發明者付保榮, 孟雪蓮, 徐成斌, 惠秀娟, 曹向宇, 李法云, 馬溪平 申請人:遼寧大學